Food authenticity - Quantitation of equine DNA relative to mammalian DNA in raw beef (meat)

This document specifies a real-time PCR procedure for the quantitation of the amount of equine DNA relative to total mammalian DNA in a raw meat sample.
Results of this equine assay are expressed in terms of equine (Equus genus) haploid genome copy numbers relative to total mammalian haploid genome copy numbers. This assay is specific for representatives of the genus Equus and therefore detects horse, mule, donkey and zebra DNA.
The method has been previously validated in a collaborative trial and applied to DNA extracted from samples that consist of raw horse meat in a raw beef (meat) background.
The limit of detection has been determined experimentally to be at least 9 genomic equivalent copies (~ 17 haploid target gene copies) for both the horse genome (E. caballus) and mammalian genome (raw meat samples) based on the lowest dilution on the respective calibration curves through single laboratory validation. The lowest relative horse content of the target sequence included in the collaborative trial was a mass fraction of 0,1 % based on gravimetrically prepared raw horse muscle tissue in a raw beef muscle tissue background.
The compliance assessment process is not part of this document.

Lebensmittelauthentizität - Quantifizierung von Equiden-DNA im Verhältnis zu Säugetier-DNA in rohem Rindfleisch

Dieses Dokument legt ein Real-time-PCR-Verfahren für die Quantifizierung der Menge an Equiden-DNA im Verhältnis zur gesamten Säugetier-DNA in einer Probe von rohem Fleisch fest.
Die Ergebnisse dieser Untersuchung auf Equiden (Equiden-Assay) werden in Form von Kopienzahlen des haploiden Genoms von Equiden (Gattung Equus) im Verhältnis zu den Kopienzahlen des haploiden Genoms von Säugetieren insgesamt ausgedrückt. Diese Untersuchung ist spezifisch für Vertreter der Gattung Equus und weist daher DNA von Pferden, Maultieren, Eseln und Zebras nach.
Das Verfahren wurde zuvor in einem Ringversuch validiert und auf DNA angewendet, die aus Proben extrahiert wurde, die aus rohem Pferdefleisch in rohem Rindfleisch als Hintergrund bestehen.
Die Nachweisgrenze wurde experimentell auf mindestens 9 Kopien von Genomäquivalenten (~ 17 haploide Zielgenkopien) sowohl für das Pferdegenom (E. caballus) als auch für das Säugetiergenom (Proben von rohem Fleisch) auf der Grundlage der niedrigsten Verdünnung auf den jeweiligen Kalibrierkurven durch Einzellaborvalidierung bestimmt. Der niedrigste relative Pferdeanteil der in den Ringversuch einbezogenen Zielsequenz war ein Massenanteil von 0,1 % auf der Grundlage von gravimetrisch vorbereitetem rohem Pferde-Muskelgewebe in rohem Rinder-Muskelgewebe als Hintergrund.
Der Prozess der Konformitätsbewertung ist nicht Teil dieses Dokuments.

Authenticité des aliments - Quantification de l’ADN équin par rapport à l’ADN mammalien dans la viande de bœuf crue

Le présent document spécifie un protocole de PCR en temps réel pour quantifier l’ADN équin par rapport à l’ADN mammalien total dans un échantillon de viande crue.
Les résultats de cet essai équin sont exprimés comme le rapport du nombre de copies de génomes haploïdes équins (genre Equus) sur le nombre total de copies de génomes haploïdes mammaliens. Cet essai est spécifique des représentants du genre Equus et détecte donc l’ADN de cheval, de mulet, d’âne et de zèbre.
La méthode a déjà été validée par un essai interlaboratoires et appliquée à de l’ADN extrait d’échantillons constitués de viande crue de cheval sur une base de viande crue de bœuf.
La limite de détection a été déterminée par expérimentation comme étant égale à au moins 9 copies d’équivalents génome (environ 17 copies de gène cible haploïde), à la fois pour le génome du cheval (E. caballus) et pour le génome mammalien (échantillons de viande crue), sur la base de la dilution la plus faible des courbes d’étalonnage respectives et par validation intralaboratoire. La plus petite quantité relative de viande de cheval de la séquence cible de l’essai interlaboratoires était une fraction massique de 0,1 % correspondant à des tissus musculaires crus de cheval préparés par gravimétrie sur une base de tissus musculaires crus de bœuf.
Le présent document ne traite pas du processus d’évaluation de la conformité.

Pristnost živil - Kvantitativno določanje DNK kopitarjev glede na DNK sesalcev v surovem govejem mesu (meso)

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Avtentičnost živil - Kvantitativno določanje DNK kopitarjev glede na
DNK sesalcev v surovem govejem mesu (meso)
Food authenticity - Quantitation of equine DNA relative to mammalian DNA in raw beef
Lebensmittelauthentizität - Quantifizierung von Equiden-DNA im Verhältnis zu Säugetier-
DNA in rohem Rindfleisch
Authenticité des aliments - Quantification de l’ADN équin par rapport à l’ADN mammalien
dans la viande de bœuf crue
Ta slovenski standard je istoveten z: prEN 18033
07.100.30 Mikrobiologija živil Food microbiology
67.120.10 Meso in mesni proizvodi Meat and meat products
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November 2023
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Food authenticity - Quantitation of equine DNA relative to
mammalian DNA in raw beef (meat)
Authenticité des aliments - Quantification de l'ADN Lebensmittelauthentizität - Quantifizierung von
équin par rapport à l'ADN mammalien dans des Equiden-DNA im Verhältnis zu Säugetier-DNA in
échantillons de viande de boeuf crue rohem Rindfleisch
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European foreword . 3
Introduction . 4
1 Scope . 5
2 Normative references . 5
3 Terms and definitions . 5
4 Principle . 5
5 Reagents and materials . 6
6 Apparatus . 7
7 Procedure . 7
7.1 Preparation of the test portion/sample .

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