ISO 7932:1993/DAmd 1

Inclusion of precision data and limitation of confirmatory tests

Inclusion de données de fidélité et limitation des essais de confirmation

Standards Content (sample)

DRAFT AMENDMENT ISO 7932:1993/DAM 1
ISO/TC 34/SC 9 Secretariat: AFNOR
Voting begins on Voting terminates on
2001-12-20 2002-05-20

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION • МЕЖДУНАРОДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ • ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION

Microbiology — General guidance for the enumeration of
Bacillus cereus — Colony-count technique at 30 °C
AMENDMENT 1: Inclusion of precision data and limitation of
confirmatory tests

Microbiologie — Directives générales pour le dénombrement de Bacillus cereus — Méthode par comptage des

colonies à 30 °C

AMENDEMENT 1: Inclusion de données de fidélité et limitation des essais de confirmation

ICS 07.100.01
ISO/CEN PARALLEL ENQUIRY

The CEN Secretary-General has advised the ISO Secretary-General that this ISO/DIS covers a

subject of interest to European standardization. In accordance with subclause 5.1 of the Vienna

Agreement, consultation on this ISO/DIS has the same effect for CEN members as would a CEN

enquiry on a draft European Standard. Should this draft be accepted, a final draft, established on

the basis of comments received, will be submitted to a parallel two-month FDIS vote in ISO and formal

vote in CEN.

To expedite distribution, this document is circulated as received from the committee

secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text composition will be undertaken at

publication stage.

Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu'il est parvenu du

secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de texte sera effectué au

Secrétariat central de l'ISO au stade de publication.

THIS DOCUMENT IS A DRAFT CIRCULATED FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY NOT BE REFERRED TO

AS AN INTERNATIONAL STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.

IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES, DRAFT

INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STANDARDS TO WHICH

REFERENCE MAY BE MADE IN NATIONAL REGULATIONS.
© International Organization for Standardization, 2001
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ISO 7932:1993/DAM 1
Copyright notice

This ISO document is a Draft International Standard and is copyright-protected by ISO. Except as permitted

under the applicable laws of the user’s country, neither this ISO draft nor any extract from it may be

reproduced, stored in a retrieval system or transmitted in any form or by any means, electronic,

photocopying, recording or otherwise, without prior written permission being secured.

Requests for permission to reproduce should be addressed to ISO at the address below or ISO’s member

body in the country of the requester.
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fax + 41 22 749 0947
internet: [e-mail]
Reproduction may be subject to royalty payments or a licensing agreement.
Violators may be prosecuted.
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ISO 7932:1993/DAM 1
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO

member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical

committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has

the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in

liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical

Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.

Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.

Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this Amendment may be the subject of patent

rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

Amendment 1 to International Standard ISO 7932:1993 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food

products, Subcommittee SC 9, Microbiology.
© ISO 2001 – All rights reserved iii
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DRAFT AMENDMENT ISO 7932:1993/DAM 1
Microbiology — General guidance for the enumeration of
Bacillus cereus — Colony-count technique at 30 °C
AMENDMENT 1: Inclusion of precision data and limitation of
confirmatory tests
Title
Change the title to include the word presumptive :

“Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus

cereus – Colony-count technique at 30 °C.”
Page 1, change subclause 3.1 to
3.1
Presumptive Bacillus cereus

microorganism that forms colonies on the surface of a selective culture medium and which gives positive

confirmation reactions under the conditions specified in this International Standard

Page 1, change subclause 4.3 to

Calculation of the number of presumptive B. cereus per gram or per millilitre of sample from the number of

confirmed colonies obtained on plates at dilutions levels chosen as to give a significant result, and confirmation

according to the tests specified.
Page 3, change subclause 5.4 to
5.4 Sheep blood agar
5.4.1 Base medium
5.4.1.1 Composition
Sheep blood agar base n° 2 :
proteose peptone or equivalent peptone 15 g
liver hydrolysat 2,5 g
yeast extract 5 g
sodium chloride (NaCl) 5 g
agar 12 to 18 g
water 1 000 ml
Depending on the gel strength of the agar.
5.4.1.2 Preparation

Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by boiling.

Adjust the pH, if necessary, so that after sterilisation it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.

© ISO 2001 – All rights reserved 1
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ISO 7932:1993/DAM 1
Dispense into flasks and sterilise for 15 min at 121 °C.
5.4.2 Sheep blood without fibrin
5.4.3 Complete medium
5.4.3.1 Composition
Base medium (5.4.1) 100 ml
Sheep blood without fibrin 5 to 7 ml
5.4.3.2 Preparation

After cooling at 44°C to 47°C, add to the base medium (5.4.1) the sheep blood without fibrin. Mix.

Pour 12 ml to 20 ml portions of the complete medium (5.4.3) into sterile Petri dishes (6.8) and allow to solidify.

Pages 3 and 4, delete subclauses 5.5, 5.6, 5.7, 5.8 and 5.9

This subclause should be deleted since the confirmation tests are replace by haemolysis test on sheep blood agar.

Pages 4, delete subclauses 6.5, 6.7 and 6.11
Pages 6, delete subclauses 9.4.2, 9.4.3, 9.4.4 and change to
9.4.2 Haemolysis test on sheep blood agar

Streak the selected colonies (9.4.1) onto the surface of sheep blood agar (5.4) in a manner which allows well-

separated colonies to develop.
Incubate at 30°C for 24h and read haemolysis reaction.
Pages 6, change subclause 9.4.5 to
9.4.3 Biochemical interpretation
See table 1.
Table 1 — Result of tests
Tests Result confirming presumptive
Bacillus cereus
MYP agar (9.4.1) Formation of pink colonies surrounded
by precipitate (see note in 9.3)
Haemolysis (9.4.2) positive reaction
Pages 6 and 7, subclause 10
See ISO 7218/A1 for calculation.
B.cereus has to be change to "presumptive B. cereus".
2 © ISO 2001 – All rights reserved
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ISO 7932:1993/DAM 1
Page 7, change subclause 10.3.1 to
10.3.1 Precision data
10.3.1.1 General

Details of the interlaboratory test of the method are published (see references [6] and [7] in annex B) and are

summarized in annex C. Repeatability and reproducibility values were determined using three types of food

contaminated at various levels and for reference materials. These values are presented in annex C. All values were

calculated without the use of the Voges-Proskauer (VP) test results. (The values derived from the interlaboratory

test may not be applicable to other analyte concentration ranges and matrices than given in annex C.)

10.3.1.2 Repeatablility

The absolute difference between two single (log -transformed) test results (number of B. cereus per gram or ml) or

the absolute ratio between two test results on the normal scale found on identical test mater

...

PROJET D'AMENDEMENT ISO 7932.1993/DAM 1
ISO/TC 34/SC 9 Secrétariat: AFNORr
Début du vote Vote clos le
2001-12-20 2002-05-20

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION • МЕЖДУНАРОДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ • ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION

Microbiologie — Directives générales pour le
dénombrement de Bacillus cereus — Méthode par
comptage des colonies à 30 °C
AMENDEMENT 1: Inclusion de données de fidélité et limitation
des essais de confirmation

Microbiology — General guidance for the enumeration of Bacillus cereus — Colony-count technique at 30 °C

AMENDMENT 1: Inclusion of precision data and limitation of confirmatory tests
ICS 07.100.01
ENQUÊTE PARALLÈLE ISO/CEN

Le Secrétaire général du CEN a informé le Secrétaire général de l'ISO que le présent ISO/DIS couvre

un sujet présentant un intérêt pour la normalisation européenne. Conformément au paragraphe 5.1

de l'Accord de Vienne, une consultation sur cet ISO/DIS a la même portée pour les membres du

CEN qu'une enquête au sein du CEN sur un projet de Norme européenne. En cas d'acceptation

de ce projet, un projet final, établi sur la base des observations reçues, sera soumis en parallèle à un

vote de deux mois sur le FDIS au sein de l'ISO et à un vote formel au sein du CEN.

To expedite distribution, this document is circulated as received from the committee

secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text composition will be undertaken at

publication stage.

Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu'il est parvenu du

secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de texte sera effectué au

Secrétariat central de l'ISO au stade de publication.

CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE PEUT ÊTRE

CITÉ COMME NORME INTERNATIONALE AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.

OUTRE LE FAIT D'ÊTRE EXAMINÉS POUR ÉTABLIR S'ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COMMERCIALES,

AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE CONSIDÉRÉS DU POINT

DE VUE DE LEUR POSSIBILITÉ DE DEVENIR DES NORMES POUVANT SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTATION NATIONALE.

© Organisation internationale de normalisation, 2001
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ISO 7932:1993/DAM 1
Notice de droits d’auteur

Ce document de l’ISO est un projet de Norme internationale qui est protégé par les droits d’auteur de l’ISO.

Sauf autorisé par les lois en matière de droits d’auteur du pays utilisateur, aucune partie de ce projet ISO ne

peut être reproduite, enregistrée dans un système d’extraction ou transmise sous quelque forme que ce soit

et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, les enregistrements ou autres,

sans autorisation écrite préalable.

Les demandes d’autorisation de reproduction doivent être envoyées à l’ISO à l’adresse ci-après ou au

comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
Responsable des droits d’auteur
Secrétariat central de l’ISO
1 rue de Varembé
1211 Genève 20 Suisse
tél. + 41 22 749 0111
fax + 41 22 749 0947
internet [e-mail]
Toute reproduction est soumise au paiement de droits ou à un contrat de licence.
Les contrevenants pourront être poursuivis.
ii © ISO 2001 – Tous droits réservés
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ISO 7932:1993/DAM 1
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de

normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux

comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité

technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en

liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission

électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.

Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,

Partie 3.

Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour

vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités

membres votants.

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent Amendement peuvent faire l’objet de droits

de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir

identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.

L’Amendement 1 à la/au Norme internationale ISO 7932:1993 a été élaboré par le comité technique mixte

ISO/TC 34, Food products, sous-comité SC 9, Microbiology.
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PROJET D'AMENDEMENT ISO 7932:1993/DAM 1
Microbiologie — Directives générales pour le
dénombrement de Bacillus cereus — Méthode par
comptage des colonies à 30 °C
AMENDEMENT 1: Inclusion de données de fidélité et limitation
des essais de confirmation
Titre
Remplacer le titre afin d'inclure le terme présumé :

"Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour le dénombrement de Bacillus cereus présumé - Technique

par comptage des colonies à 30°C"
Page 1, modifier le chapitre 3.1 pour :
3.1
Bacillus cereus présumé

microorganisme qui forme des colonies à la surface d’un milieu de culture sélectif et qui donne des réactions de

confirmation positives quand les essais sont exécutés selon la méthode spécifiée dans la présente norme

internationale
Page 1, modifier le chapitre 4.3 pour :

Calcul du nombre de B. cereus présumés, par millilitre ou par gramme d’échantillon, à partir du nombre de colonies

caractéristiques obtenues dans des boîtes choisies aux niveau de dilution donnant un résultat significatif et

confirmées selon les essais spécifiés.
Page 3, modifier le chapitre 5.4 pour :
5.4 Gélose au sang de mouton
5.4.1 Milieu de base
5.4.1.1 Composition
Sang de mouton base n°2 :
Proteose peptone ou peptone équivalente 15 g
Hydrolysat de foie 2,5 g
Extrait de levure 5 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Agar 12 g à 18 g
Eau 1 000 ml
Selon le pouvoir gélifiant de l’agar
5.4.1.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l’eau bouillante.
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ISO 7932:1993/DAM 1

Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après stérilisation, il soit de 7,0 ± 0,2 à 25°C.

Répartir le milieu dans des flacons et stériliser à 121°C pendant 15 min.
5.4.2 Sang de mouton sans fibrine
5.4.2.1 Composition
Milieu de base (5.4.1) 100 ml
Sang de mouton sans fibrine 5 ml à 7 ml
5.4.2.2 Préparation

Refroidir le milieu de base (5.4.1) à un température entre 44°C et 47°C puis ajouter le sang de mouton sans fibrine.

Mélanger.

Verser 12 ml à 20 ml de milieu complet (5.4.3) dans les boîtes de Petri stériles (6.8) et laisser solidifier.

Page 3 et 4, supprimer les chapitres 5.5, 5.6, 5.7, 5.8 et 5.9 :

Ces chapitres sont ôtés puisque les tests de confirmation sont remplacés par le test à l’hémolyse utilisant la gélose

au sang de mouton.
Page 4, supprimer les chapitres 6.5, 6.7 et 6.11
Page 6, supprimer les chapitres 9.4.2, 9.4.3 et 9.4.4 et changer 9.4.3 pour :
9.4.2 Test de l’hémolyse avec la gélose au sang de mouton

Ensemencer les colonies sélectionnées (9.4.1) sur la gélose au sang de mouton (5.4) de manière à permettre la

croissance de colonies bien séparées.
Incuber à 30°C pendant 24h et lire la réaction hémolytique.
Page 6, modifier le chapitre 9.4.5 pour :
9.4.3 Interprétation biochimique
Voir tableau 1.
Tableau 1 — Résultat des tests
Tests Résultat confirmant B. cereus
présumé
Gélose MYP (9.4.1) Formation de colonies roses, entourées
d’un précipité (voir note en 9.3)
Hémolyse (9.4.2) réaction positive
2 © ISO 2001 – Tous droits réservés
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ISO 7932:1993/DAM 1
Page 6 et 7, modifier le chapitre 10 pour :
Voir l’ISO 7218/A1 pour les calculs.
B. cereus doit être changé pour « B. cereus présumé ».
Page 7, modifier le chapitre 10.3.1 pour :
10.3.1 Données de fidélité
10.3.1.1 Généralités

Les détails de l’essai interlaboratoire mené selon cette méthode ont été publiés (voir les références [6], [7] et [8] en

annexe B) et sont résumés en annexe C. Les répétabilités et reproductibilités ont été déterminées en utilisant 3

types de matrices contaminées à différents niveaux et en utilisant un matériel de référence. Ces valeurs sont

présentées en annexe C. Toutes les valeurs ont été calculées sans l’utilisation du test de confirmation Voges-

Proskauer (VP). (Les valeurs issues de l’essai interlaboratoire peuvent ne pas être applicables à d’autres

concentrations en analyte ainsi qu’à d’autres matrices que celles données en annexe C.)

10.
...