Cigarettes — Determination of tobacco specific nitrosamines in mainstream cigarette smoke — Method using LC-MS/MS

This document specifies a method for the quantification of four tobacco specific nitrosamines (TSNAs) in the total particulate matter of mainstream cigarette smoke by using reversed phase high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The quantified TSNAs are: N-nitrosonornicotine (NNN), N-nitrosoanatabine (NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) and 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK).

Cigarettes — Dosage des nitrosamines spécifiques du tabac dans le courant principal de fumée de cigarette — Méthode par CL-SM/SM

Le présent document spécifie une méthode de quantification de quatre nitrosamines spécifiques du tabac (TSNAs) dans la matière particulaire totale du courant principal de la fumée de cigarette par chromatographie liquide haute performance en phase inverse avec détection par spectrométrie de masse en tandem (CL-SM/SM). Les TSNAs quantifiées sont les suivantes: N-nitrosonornicotine (NNN), N‑nitrosoanatabine (NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) et 4-(méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK).

General Information

Status
Published
Publication Date
02-Feb-2021
Current Stage
6060 - International Standard published
Start Date
03-Feb-2021
Completion Date
03-Feb-2021
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ISO 19290:2021 - Cigarettes -- Determination of tobacco specific nitrosamines in mainstream cigarette smoke -- Method using LC-MS/MS
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ISO 19290:2021 - Cigarettes -- Dosage des nitrosamines spécifiques du tabac dans le courant principal de fumée de cigarette -- Méthode par CL-SM/SM
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ISO/FDIS 19290 - Cigarettes -- Determination of tobacco specific nitrosamines in mainstream cigarette smoke -- Method using LC-MS/MS
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ISO/FDIS 19290 - Cigarettes -- Dosage des nitrosamines spécifiques du tabac dans le courant principal de fumée de cigarette -- Méthode par CL-SM/SM
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Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 19290
Second edition
2021-02
Cigarettes — Determination of
tobacco specific nitrosamines in
mainstream cigarette smoke —
Method using LC-MS/MS
Cigarettes — Dosage des nitrosamines spécifiques du tabac dans le
courant principal de fumée de cigarette — Méthode par CL-SM/SM
Reference number
ISO 19290:2021(E)
ISO 2021
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 19290:2021(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2021

All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may

be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting

on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address

below or ISO’s member body in the country of the requester.
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Phone: +41 22 749 01 11
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Published in Switzerland
ii © ISO 2021 – All rights reserved
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ISO 19290:2021(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 2

5 Apparatus ..................................................................................................................................................................................................................... 2

6 Reagents ........................................................................................................................................................................................................................ 2

7 Preparation ................................................................................................................................................................................................................ 3

7.1 Preparation of glassware................................................................................................................................................................ 3

7.2 Preparation of solutions ................................................................................................................................................................. 3

7.3 Preparation of standards................................................................................................................................................................ 4

7.3.1 General...................................................................................................................................................................................... 4

7.3.2 Preparation of internal standard solutions .............................................................................................. 4

7.3.3 Preparation of calibration standard solutions ....................................................................................... 4

8 Sampling ........................................................................................................................................................................................................................ 6

9 Tobacco product preparation ................................................................................................................................................................. 6

10 Sample generation — Smoking of cigarettes .......................................................................................................................... 6

10.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 6

10.2 Linear smoking ....................................................................................................................................................................................... 6

10.3 Rotary smoking ...................................................................................................................................................................................... 6

11 Sample analysis ...................................................................................................................................................................................................... 6

11.1 Preparation of sample....................................................................................................................................................................... 6

11.1.1 General...................................................................................................................................................................................... 6

11.1.2 Extraction for linear smoking (44 mm pad) ............................................................................................ 6

11.1.3 Extraction for rotary smoking (92 mm pad) ........................................................................................... 6

11.1.4 Final sample preparation ......................................................................................................................................... 6

11.2 Reversed phase high performance liquid chromatography ............................................................................. 7

11.2.1 General...................................................................................................................................................................................... 7

11.2.2 HPLC set-up parameters (Example) ............................................................................................................... 7

11.2.3 Mobile phase (Example) ........................................................................................................................................... . 7

11.2.4 Mobile phase: Gradient (Example) ................................................................................................................... 7

11.2.5 MS/MS Set-up parameters (Example) .......................................................................................................... 7

11.3 Calculation .................................................................................................................................................................................................. 8

11.3.1 Calibration curve ............................................................................................................................................................. 8

11.3.2 Determination of the TSNAs concentrations ........................................................................................... 9

11.3.3 Sample quantification ........................................................................................................................................... ....... 9

11.3.4 Determination of mainstream smoke TSNA deliveries .................................................................. 9

12 Repeatability and reproducibility ...................................................................................................................................................... 9

13 Test report ................................................................................................................................................................................................................11

Annex A (informative) Example of typical chromatograms .......................................................................................................12

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................14

© ISO 2021 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 19290:2021(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/

iso/ foreword .html.

This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 126, Tobacco and tobacco products.

This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 19290:2016), of which it constitutes a

minor revision.
The main changes compared to the previous edition are as follows:
— the title and CAS number for NNK-d4 (see 6.8) has been updated;

— the nomenclature of the deuterated nitrosamines in 6.1 to 6.8 has been harmonized.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2021 – All rights reserved
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ISO 19290:2021(E)
Introduction

Between 1999 and 2005, the CORESTA (www .coresta .org) Special Analytes Task Force studied

the existing methodologies for the determination of Tobacco Specific Nitrosamines (TSNAs) in the

mainstream smoke of cigarettes. Two main types of analytical methodologies had been proposed for

this determination: GC-TEA (gas chromatography with a thermal energy analyser) and LC-MS/MS

(liquid chromatography- tandem mass spectrometry). The Task Force decided in the first instance to

develop a method using GC-TEA, because this methodology was the most widely used in laboratories at

that time.

However, by 2009, it was ascertained that most laboratories applied an LC-MS/MS technique to measure

yields of TSNAs. The Sub-Group (changed from Task Force) then investigated an LC-MS/MS method to

complement the GC-TEA technique already available as CORESTA Recommended Method N° 63. Several

such methods have been described in the literature and are referenced herein. A joint experiment was

carried out in which 14 laboratories participated, using their in-house LC-MS/MS methodologies. The

reproducibility data was better for LC-MS/MS than for GC-TEA and methodology was very similar

across laboratories. In summary, cigarette mainstream smoke was collected on a Cambridge filter

(CF) pad, an internal standard solution was added and, after extraction, an aliquot was separated and

quantitatively analysed by LC-MS/MS. A general methodology was agreed, incorporating key learnings

from the joint experiment.

This document was produced through a final collaborative experiment involving 20 laboratories from

12 countries. The method includes some notes to inform other laboratories that might wish to adopt it

about some of the main features that need to be well controlled to provide data as robust and consistent

as the repeatability and reproducibility data provided. Cigarettes were smoked using the smoking

regime parameters given in ISO 3308 and statistical evaluations were made according to ISO 5725-2

recommendations.
No machine smoking regime can represent all human smoking behaviour:

— it is recommended that cigarettes also be tested under conditions of a different intensity of machine

smoking than those specified in this document;

— machine smoking testing is useful to characterize cigarette emissions for design and regulatory

purposes, but communication of machine measurements to smokers can result in misunderstandings

about differences in exposure and risk across brands;

— smoke emission data from machine measurements may be used as inputs for product hazard

assessment, but they are not intended to be nor are they valid as measures of human exposure or

risks. Communicating differences between products in machine measurements as differences in

exposure or risk is a misuse of testing using ISO standards.
© ISO 2021 – All rights reserved v
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 19290:2021(E)
Cigarettes — Determination of tobacco specific
nitrosamines in mainstream cigarette smoke — Method
using LC-MS/MS

WARNING — The use of this document can involve hazardous materials, operations and

equipment. This document does not purport to address all the safety problems associated with

its use. It is the responsibility of the user of this document to establish appropriate safety and

health practices and determine the applicability of regulatory limitations prior to use.

1 Scope

This document specifies a method for the quantification of four tobacco specific nitrosamines

(TSNAs) in the total particulate matter of mainstream cigarette smoke by using reversed phase high

performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The quantified

TSNAs are: N-nitrosonornicotine (NNN), N-nitrosoanatabine (NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) and

4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK).
2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 3308, Routine analytical cigarette-smoking machine — Definitions and standard conditions

ISO 3402, Tobacco and tobacco products — Atmosphere for conditioning and testing

ISO 4387, Cigarettes — Determination of total and nicotine-free dry particulate matter using a routine

analytical smoking machine
ISO 8243, Cigarettes — Sampling
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
tobacco specific nitrosamines
TSNAs

four nitrosamines found predominantly in tobacco: N-nitrosonornicotine (NNN), N-nitrosoanatabine

(NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) and 4-(N-Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK)

[SOURCE: ISO 22303:2008, 3.1]
© ISO 2021 – All rights reserved 1
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ISO 19290:2021(E)
4 Principle

Cigarettes are smoked on a standard smoking machine. The mainstream smoke is trapped on a glass-

fibre filter pad. After addition of an internal standard, the total particulate matter collected on the

glass-fibre filter pad is extracted with 100 mM ammonium acetate solution using a shaker.

The extract is syringe filtered through a 0,45 μm PTFE column directly into an auto sampler vial.

The samples are subjected to reversed phase high performance liquid chromatography (HPLC) and

quantified via tandem mass spectrometry (MS/MS).
5 Apparatus

Usual laboratory apparatus and equipment for use in preparation of samples and standards and in

particular the following items. All glassware shall be cleaned before use to avoid any contamination.

5.1 Equipment needed to perform conditioning of cigarettes, in accordance with ISO 3402.

5.2 Equipment needed to perform marking for butt length of cigarettes.

5.3 Equipment needed to perform smoking of cigarettes, in accordance with ISO 3308.

5.4 Analytical balance, capable of measuring to at least four decimal places.
5.5 Centrifuge tubes, 50 ml.
5.6 Dispenser, of capacity 20 ml for extraction solution.
5.7 Gas-tight syringes, of capacity 250 μl.
5.8 Automated volumetric pipette.
5.9 Shaker.

5.10 High performance liquid chromatograph coupled to tandem mass spectrometer (LC-MS/

MS), consisting of:
5.10.1 Binary pump.
5.10.2 Autosampler.
5.10.3 Ta
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 19290
Deuxième édition
2021-02
Cigarettes — Dosage des nitrosamines
spécifiques du tabac dans le courant
principal de fumée de cigarette —
Méthode par CL-SM/SM
Cigarettes — Determination of tobacco specific nitrosamines in
mainstream cigarette smoke — Method using LC-MS/MS
Numéro de référence
ISO 19290:2021(F)
ISO 2021
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ISO 19290:2021(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2021

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2021 – Tous droits réservés
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ISO 19290:2021(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 2

5 Appareillage .............................................................................................................................................................................................................. 2

6 Réactifs ........................................................................................................................................................................................................................... 3

7 Préparation ................................................................................................................................................................................................................ 3

7.1 Préparation de la verrerie ............................................................................................................................................................. 3

7.2 Préparation des solutions .............................................................................................................................................................. 4

7.3 Préparations des étalons ................................................................................................................................................................ 4

7.3.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 4

7.3.2 Préparation des solutions d’étalons internes ......................................................................................... 4

7.3.3 Préparation des solutions d’étalonnage ...................................................................................................... 4

8 Échantillonnage ..................................................................................................................................................................................................... 6

9 Préparation du produit du tabac ......................................................................................................................................................... 6

10 Production de l’échantillon — Fumage de cigarettes..................................................................................................... 6

10.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 6

10.2 Fumage linéaire ...................................................................................................................................................................................... 6

10.3 Fumage rotatif ......................................................................................................................................................................................... 6

11 Analyse de l’échantillon ................................................................................................................................................................................ 6

11.1 Préparation de l’échantillon ........................................................................................................................................................ 6

11.1.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 6

11.1.2 Extraction pour le fumage linéaire (filtre de 44 mm) ...................................................................... 7

11.1.3 Extraction pour le fumage rotatif (filtre de 92 mm) ......................................................................... 7

11.1.4 Préparation de l’échantillon final ...................................................................................................................... 7

11.2 Chromatographie liquide haute performance en phase inverse .................................................................. 7

11.2.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 7

11.2.2 Paramètres de configuration CLHP (exemple) ...................................................................................... 7

11.2.3 Phase mobile (exemple) ............................................................................................................................................ 7

11.2.4 Gradient de la phase mobile (exemple) ....................................................................................................... 7

11.2.5 Paramètres de configuration SM/SM (exemple) .................................................................................. 8

11.3 Calcul ............................................................................................................................................................................................................... 9

11.3.1 Courbe d’étalonnage ..................................................................................................................................................... 9

11.3.2 Détermination des concentrations de TSNAs ......................................................................................... 9

11.3.3 Quantification de l’échantillon ............................................................................................................................. 9

11.3.4 Détermination des teneurs en TSNA dans la fumée du courant principal ..................10

12 Répétabilité et reproductibilité .........................................................................................................................................................10

13 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................12

Annexe A (informative) Exemples de chromatogrammes types ...........................................................................................13

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................15

© ISO 2021 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 19290:2021(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/ directives).

L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion

de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant -propos .html.

Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac.

Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 19290:2016), dont elle constitue

une révision mineure.
Les modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— la désignation et le numéro CAS de la NNK-d4 (voir 6.8) ont été mis à jour;

— la nomenclature des nitrosamines deutérées indiquées de 6.1 à 6.8 a été harmonisée.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2021 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 19290:2021(F)
Introduction

Entre 1999 et 2005, le Groupe d’étude « Analytes spéciaux » du CORESTA (www .coresta .org) a étudié

les méthodologies existantes pour le dosage des nitrosamines spécifiques du tabac (TSNAs) dans le

courant principal de fumée de cigarette. Deux types principaux de méthodologies d’analyse ont

été proposés pour ce dosage: la CG-AET (chromatographie en phase gazeuse couplée à un analyseur

d’énergie thermique) et la CL-SM/SM (chromatographie liquide avec détection par spectrométrie

de masse en tandem). Le groupe d’étude a décidé dans un premier temps de concevoir une méthode

utilisant la CG-AET, car cette méthodologie était la plus largement utilisée dans les laboratoires à ce

moment-là.

Cependant, en 2009, il a été confirmé que la plupart des laboratoires appliquaient une technique

de CL-SM/SM pour mesurer les teneurs en TSNAs. Le sous-groupe (anciennement « groupe d’étude »)

a alors orienté ses recherches sur une méthode CL-SM/SM pour venir compléter la technique CG-AET

déjà disponible en tant que méthode N° 63 recommandée par le CORESTA. Plusieurs de ces

méthodes ont été décrites dans la littérature scientifique et sont citées ici. Un essai d’aptitude a été

mené avec 14 laboratoires, qui utilisaient leurs propres méthodologies CL-SM/SM. Les données de

reproductibilité étaient meilleures pour la CL-SM/SM que pour la CG-AET et la méthodologie était

très similaire d’un laboratoire à l’autre. Pour résumer, la fumée du courant principal de cigarette était

recueillie sur un filtre Cambridge (FC), une solution d’étalons internes était ajoutée et, après extraction,

une partie aliquote était séparée et analysée quantitativement par CL-SM/SM. Suite aux principaux

enseignements tirés de cet essai d’aptitude, une méthodologie générale a été convenue.

Ce document a été élaboré à partir d’une dernière étude collaborative impliquant la participation

de 20 laboratoires de 12 pays. La méthode inclut des notes pour informer d’autres laboratoires qui

pourraient souhaiter l’adopter sur les principaux aspects qui nécessitent d’être bien contrôlés pour

fournir des données aussi robustes et cohérentes que les données de répétabilité et de reproductibilité

fournies. Les cigarettes ont été fumées selon les paramètres du régime de fumage indiqués dans

l’ISO 3308 et les évaluations statistiques ont été réalisées conformément aux recommandations de

l’ISO 5725-2.

Aucun régime de fumage mécanique ne peut reproduire parfaitement le comportement des fumeurs:

— il est recommandé que les cigarettes soient aussi soumises à essai dans des conditions d’intensité de

fumage mécanique différentes de celles spécifiées dans le présent document;

— l’essai de fumage mécanique permet de caractériser les émissions des cigarettes pour des besoins

de conception et de réglementation, mais communiquer aux fumeurs les résultats de mesures sur

machine peut susciter des malentendus sur les niveaux d’exposition et de risque selon les marques;

— les données concernant l’émission de fumées obtenues par des mesures mécaniques peuvent

être utilisées comme des données de base pour l’évaluation des dangers du produit, mais elles ne

constituent pas des mesures valables de l’exposition des individus ou des risques et ce n’est pas

leur but. C’est faire un usage impropre des essais réalisés conformément aux normes ISO que de

communiquer que les différences de mesures mécaniques entre différents produits correspondent

à des différences de niveaux d’exposition ou de risque.
© ISO 2021 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 19290:2021(F)
Cigarettes — Dosage des nitrosamines spécifiques du tabac
dans le courant principal de fumée de cigarette — Méthode
par CL-SM/SM

AVERTISSEMENT — L’utilisation du présent document peut impliquer des réactifs, manipulations

ou matériels dangereux. Le présent document n’a pas pour but de traiter tous les problèmes de

sécurité qui sont liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur du présent document d’établir des

pratiques d’hygiène et de sécurité appropriées et de déterminer l’applicabilité des restrictions

réglementaires avant son utilisation.
1 Domaine d’application

Le présent document spécifie une méthode de quantification de quatre nitrosamines spécifiques du

tabac (TSNAs) dans la matière particulaire totale du courant principal de la fumée de cigarette par

chromatographie liquide haute performance en phase inverse avec détection par spectrométrie de

masse en tandem (CL-SM/SM). Les TSNAs quantifiées sont les suivantes: N-nitrosonornicotine (NNN),

N-nitrosoanatabine (NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) et 4-(méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-

butanone (NNK).
2 Références normatives

Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur

contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.

Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les

éventuels amendements).

ISO 3308, Machine à fumer analytique de routine pour cigarettes — Définitions et conditions normalisées

ISO 3402, Tabac et produits du tabac — Atmosphère de conditionnement et d'essai

ISO 4387, Cigarettes — Détermination de la teneur en matière particulaire totale et en matière particulaire

anhydre et exempte de nicotine au moyen d'une machine à fumer analytique de routine

ISO 8243, Cigarettes — Échantillonnage
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp

— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
3.1
nitrosamines spécifiques du tabac
TSNAs

quatre nitrosamines sont prédominantes dans le tabac: la N-nitrosonornicotine (NNN),

la N-nitrosoanatabine (NAT), la N-nitrosoanabasine (NAB) et la 4-(N-Méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-

1 but a none ( N N K )
[SOURCE: ISO 22303:2008, 3.1]
© ISO 2021 – Tous droits réservés 1
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ISO 19290:2021(F)
4 Principe

Les cigarettes sont fumées sur une machine à fumer standard. La fumée du courant principal est piégée

sur un filtre en fibre de verre. Après ajout d’un étalon interne, la matière particulaire totale retenue sur

le filtre en fibre de verre est extraite avec une solution d’acétate d’ammonium à 100 mM au moyen d’un

agitateur.

L’extrait est prélevé au moyen d’une seringue et filtré sur un filtre à seringue en PTFE de 0,45 μm,

directement dans un flacon pour passeur d’échantillons.

Les échantillons sont soumis à une chromatographie liquide haute performance (CLHP) en phase

inverse, puis ils sont quantifiés par spectrométrie de masse en tandem (SM/SM).
5 Appareillage

Appareillage courant de laboratoire et équipement utilisé pour la préparation d’échantillons et d’étalons

et, en particulier, ce qui suit. Toute la verrerie doit être nettoyée avant utilisation pour éviter toute

contamination.

5.1 Équipement nécessaire pour réaliser le conditionnement des cigarettes, conformément

à l’ISO 3402.

5.2 Équipement nécessaire pour réaliser le marquage de la longueur de mégot des cigarettes.

5.3 Équipement nécessaire pour réaliser le fumage des cigarettes, conformément à l’ISO 3308.

5.4 Balance analytique, capable de peser avec une précision d’au moins quatre décimales.

5.5 Tubes à centrifuger, de 50 ml.
5.6 Distributeur, d’une contenance de 20 ml pour les solutions d’extraction.
5.7 Seringues étanches aux gaz, d’une contenance de 250 μl.
5.8 Pipette automatique.
5.9 Agitateur.

5.10 Chromatographe liquide haute performance couplé à un spectromètre de masse en tandem

(CL-SM/SM), composé des éléments suivants:
5.10.1 Pompe binaire.
5.10.2 Passeur d’échantillons.
5.10.3 Spectromètre de masse en tandem.
5.10.4 Système d’acquisition de données.
®1)
5.10.5 Colonne CL: XTerra MS C18 , 2,5 μm, 2,1 mm × 50 mm ou équivalent.

1) XTerra MS C18 est un exemple de produit approprié disponible dans le commerce. Cette information est donnée

à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l’ISO approuve ou recommande

l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
2 © ISO 2021 – Tous droits rése
...

FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 19290
ISO/TC 126
Cigarettes — Determination of
Secretariat: DIN
tobacco specific nitrosamines in
Voting begins on:
2020­10­29 mainstream cigarette smoke —
Method using LC-MS/MS
Voting terminates on:
2020­12­24
Cigarettes — Dosage des nitrosamines spécifiques du tabac dans le
courant principal de fumée de cigarette — Méthode par CL-SM/SM
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO­
ISO/FDIS 19290:2020(E)
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN­
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
NATIONAL REGULATIONS. ISO 2020
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ISO/FDIS 19290:2020(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2020

All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may

be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting

on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address

below or ISO’s member body in the country of the requester.
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ii © ISO 2020 – All rights reserved
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ISO/FDIS 19290:2020(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 2

5 Apparatus ..................................................................................................................................................................................................................... 2

6 Reagents ........................................................................................................................................................................................................................ 2

7 Preparation ................................................................................................................................................................................................................ 3

7.1 Preparation of glassware................................................................................................................................................................ 3

7.2 Preparation of solutions ................................................................................................................................................................. 3

7.3 Preparation of standards................................................................................................................................................................ 4

7.3.1 General...................................................................................................................................................................................... 4

7.3.2 Preparation of internal standard solutions .............................................................................................. 4

7.3.3 Preparation of calibration standard solutions ....................................................................................... 4

8 Sampling ........................................................................................................................................................................................................................ 6

9 Tobacco product preparation ................................................................................................................................................................. 6

10 Sample generation — Smoking of cigarettes .......................................................................................................................... 6

10.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 6

10.2 Linear smoking ....................................................................................................................................................................................... 6

10.3 Rotary smoking ...................................................................................................................................................................................... 6

11 Sample analysis ...................................................................................................................................................................................................... 6

11.1 Preparation of sample....................................................................................................................................................................... 6

11.1.1 General...................................................................................................................................................................................... 6

11.1.2 Extraction for linear smoking (44 mm pad) ............................................................................................ 6

11.1.3 Extraction for rotary smoking (92 mm pad) ........................................................................................... 6

11.1.4 Final sample preparation ......................................................................................................................................... 6

11.2 Reversed phase high performance liquid chromatography ............................................................................. 7

11.2.1 General...................................................................................................................................................................................... 7

11.2.2 HPLC set-up parameters (Example) ............................................................................................................... 7

11.2.3 Mobile phase (Example) ........................................................................................................................................... . 7

11.2.4 Mobile phase: Gradient (Example) ................................................................................................................... 7

11.2.5 MS/MS Set-up parameters (Example) .......................................................................................................... 7

11.3 Calculation .................................................................................................................................................................................................. 8

11.3.1 Calibration curve ............................................................................................................................................................. 8

11.3.2 Determination of the TSNAs concentrations ........................................................................................... 9

11.3.3 Sample quantification ........................................................................................................................................... ....... 9

11.3.4 Determination of mainstream smoke TSNA deliveries .................................................................. 9

12 Repeatability and reproducibility ...................................................................................................................................................... 9

13 Test report ................................................................................................................................................................................................................11

Annex A (informative) Example of typical chromatograms .......................................................................................................12

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................14

© ISO 2020 – All rights reserved iii
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ISO/FDIS 19290:2020(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non­governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/

iso/ foreword .html.

This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 126, Tobacco and tobacco products.

This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 19290:2016), of which it constitutes a

minor revision.
The main changes compared to the previous edition are as follows:
— the title and CAS number for NNK­d4 (see 6.8) has been updated updated;

— the nomenclature of the deuterated nitrosamines in 6.1 to 6.8 has been harmonized.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2020 – All rights reserved
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ISO/FDIS 19290:2020(E)
Introduction

Between 1999 and 2005, the CORESTA (www .coresta .org) Special Analytes Task Force studied

the existing methodologies for the determination of Tobacco Specific Nitrosamines (TSNAs) in the

mainstream smoke of cigarettes. Two main types of analytical methodologies had been proposed for

this determination: GC-TEA (gas chromatography with a thermal energy analyser) and LC-MS/MS

(liquid chromatography- tandem mass spectrometry). The Task Force decided in the first instance to

develop a method using GC-TEA, because this methodology was the most widely used in laboratories at

that time.

However, by 2009, it was ascertained that most laboratories applied an LC-MS/MS technique to measure

yields of TSNAs. The Sub-Group (changed from Task Force) then investigated an LC-MS/MS method to

complement the GC-TEA technique already available as CORESTA Recommended Method N° 63. Several

such methods have been described in the literature and are referenced herein. A joint experiment was

carried out in which 14 laboratories participated, using their in­house LC­MS/MS methodologies. The

reproducibility data was better for LC-MS/MS than for GC-TEA and methodology was very similar

across laboratories. In summary, cigarette mainstream smoke was collected on a Cambridge filter

(CF) pad, an internal standard solution was added and, after extraction, an aliquot was separated and

quantitatively analysed by LC-MS/MS. A general methodology was agreed, incorporating key learnings

from the joint experiment.

This document was produced through a final collaborative experiment involving 20 laboratories from

12 countries. The method includes some notes to inform other laboratories that might wish to adopt it

about some of the main features that need to be well controlled to provide data as robust and consistent

as the repeatability and reproducibility data provided. Cigarettes were smoked using the smoking

regime parameters given in ISO 3308 and statistical evaluations were made according to ISO 5725­2

recommendations.
No machine smoking regime can represent all human smoking behaviour:

— it is recommended that cigarettes also be tested under conditions of a different intensity of machine

smoking than those specified in this document;

— machine smoking testing is useful to characterize cigarette emissions for design and regulatory

purposes, but communication of machine measurements to smokers can result in misunderstandings

about differences in exposure and risk across brands;

— smoke emission data from machine measurements may be used as inputs for product hazard

assessment, but they are not intended to be nor are they valid as measures of human exposure or

risks. Communicating differences between products in machine measurements as differences in

exposure or risk is a misuse of testing using ISO standards.
© ISO 2020 – All rights reserved v
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FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 19290:2020(E)
Cigarettes — Determination of tobacco specific
nitrosamines in mainstream cigarette smoke — Method
using LC-MS/MS

WARNING — The use of this document can involve hazardous materials, operations and

equipment. This document does not purport to address all the safety problems associated with

its use. It is the responsibility of the user of this document to establish appropriate safety and

health practices and determine the applicability of regulatory limitations prior to use.

1 Scope

This document specifies a method for the quantification of four tobacco specific nitrosamines

(TSNAs) in the total particulate matter of mainstream cigarette smoke by using reversed phase high

performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The quantified

TSNAs are: N­nitrosonornicotine (NNN), N­nitrosoanatabine (NAT), N­nitrosoanabasine (NAB) and

4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK).
2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 3308, Routine analytical cigarette-smoking machine — Definitions and standard conditions

ISO 3402, Tobacco and tobacco products — Atmosphere for conditioning and testing

ISO 4387, Cigarettes — Determination of total and nicotine-free dry particulate matter using a routine

analytical smoking machine
ISO 8243, Cigarettes — Sampling
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
tobacco specific nitrosamines
TSNAs

four nitrosamines found predominantly in tobacco: N-nitrosonornicotine (NNN), N-nitrosoanatabine

(NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) and 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK)

[SOURCE: ISO 22303:2008, 3.1]
© ISO 2020 – All rights reserved 1
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ISO/FDIS 19290:2020(E)
4 Principle

Cigarettes are smoked on a standard smoking machine. The mainstream smoke is trapped on a glass­

fibre filter pad. After addition of an internal standard, the total particulate matter collected on the

glass-fibre filter pad is extracted with 100 mM ammonium acetate solution using a shaker.

The extract is syringe filtered through a 0,45 μm PTFE column directly into an auto sampler vial.

The samples are subjected to reversed phase high performance liquid chromatography (HPLC) and

quantified via tandem mass spectrometry (MS/MS).
5 Apparatus

Usual laboratory apparatus and equipment for use in preparation of samples and standards and in

particular the following items. All glassware shall be cleaned before use to avoid any contamination.

5.1 Equipment needed to perform conditioning of cigarettes, in accordance with ISO 3402.

5.2 Equipment needed to perform marking for butt length of cigarettes.
5.3 Equipment needed to perform smoking of
...

PROJET
NORME ISO/FDIS
FINAL
INTERNATIONALE 19290
ISO/TC 126
Cigarettes — Dosage des nitrosamines
Secrétariat: DIN
spécifiques du tabac dans le courant
Début de vote:
2020-10-29 principal de fumée de cigarette —
Méthode par CL-SM/SM
Vote clos le:
2020-12-24
Cigarettes — Determination of tobacco specific nitrosamines in
mainstream cigarette smoke — Method using LC-MS/MS
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSER-
VATIONS, NOTIFICATION DES DROITS DE PRO-
PRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT ÉVENTUELLEMENT
CONNAISSANCE ET À FOURNIR UNE DOCUMEN-
TATION EXPLICATIVE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COM-
Numéro de référence
MERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE
ISO/FDIS 19290:2020(F)
DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE
CONSIDÉRÉS DU POINT DE VUE DE LEUR POSSI-
BILITÉ DE DEVENIR DES NORMES POUVANT
SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTA-
TION NATIONALE. ISO 2020
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/FDIS 19290:2020(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2020

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

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Publié en Suisse
ii © ISO 2020 – Tous droits réservés
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ISO/FDIS 19290:2020(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 2

5 Appareillage .............................................................................................................................................................................................................. 2

6 Réactifs ........................................................................................................................................................................................................................... 3

7 Préparation ................................................................................................................................................................................................................ 3

7.1 Préparation de la verrerie ............................................................................................................................................................. 3

7.2 Préparation des solutions .............................................................................................................................................................. 4

7.3 Préparations des étalons ................................................................................................................................................................ 4

7.3.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 4

7.3.2 Préparation des solutions d’étalons internes ......................................................................................... 4

7.3.3 Préparation des solutions d’étalonnage ...................................................................................................... 4

8 Échantillonnage ..................................................................................................................................................................................................... 6

9 Préparation du produit du tabac ......................................................................................................................................................... 6

10 Production de l’échantillon — Fumage de cigarettes..................................................................................................... 6

10.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 6

10.2 Fumage linéaire ...................................................................................................................................................................................... 6

10.3 Fumage rotatif ......................................................................................................................................................................................... 6

11 Analyse de l’échantillon ................................................................................................................................................................................ 6

11.1 Préparation de l’échantillon ........................................................................................................................................................ 6

11.1.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 6

11.1.2 Extraction pour le fumage linéaire (filtre de 44 mm) ...................................................................... 7

11.1.3 Extraction pour le fumage rotatif (filtre de 92 mm) ......................................................................... 7

11.1.4 Préparation de l’échantillon final ...................................................................................................................... 7

11.2 Chromatographie liquide haute performance en phase inverse .................................................................. 7

11.2.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 7

11.2.2 Paramètres de configuration CLHP (exemple) ...................................................................................... 7

11.2.3 Phase mobile (exemple) ............................................................................................................................................ 7

11.2.4 Gradient de la phase mobile (exemple) ....................................................................................................... 7

11.2.5 Paramètres de configuration SM/SM (exemple) .................................................................................. 8

11.3 Calcul ............................................................................................................................................................................................................... 9

11.3.1 Courbe d’étalonnage ..................................................................................................................................................... 9

11.3.2 Détermination des concentrations de TSNAs ......................................................................................... 9

11.3.3 Quantification de l’échantillon ............................................................................................................................. 9

11.3.4 Détermination des teneurs en TSNA dans la fumée du courant principal ..................... 9

12 Répétabilité et reproductibilité .........................................................................................................................................................10

13 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................12

Annexe A (informative) Exemples de chromatogrammes types ...........................................................................................13

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................15

© ISO 2020 – Tous droits réservés iii
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ISO/FDIS 19290:2020(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/ directives).

L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion

de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant -propos .html.

Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac.

Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 19290:2016), dont elle constitue

une révision mineure.

Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:

— la désignation et le numéro CAS de la NNK-d4 (voir 6.8) ont été mis à jour;

— la nomenclature des nitrosamines deutérées indiquées de 6.1 à 6.8 a été harmonisée.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2020 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/FDIS 19290:2020(F)
Introduction

Entre 1999 et 2005, le Groupe d’étude « Analytes spéciaux » du CORESTA (www .coresta .org) a étudié

les méthodologies existantes pour le dosage des nitrosamines spécifiques du tabac (TSNAs) dans le

courant principal de fumée de cigarette. Deux types principaux de méthodologies d’analyse ont

été proposés pour ce dosage: la CG-AET (chromatographie en phase gazeuse couplée à un analyseur

d’énergie thermique) et la CL-SM/SM (chromatographie liquide avec détection par spectrométrie

de masse en tandem). Le groupe d’étude a décidé dans un premier temps de concevoir une méthode

utilisant la CG-AET, car cette méthodologie était la plus largement utilisée dans les laboratoires à ce

moment-là.

Cependant, en 2009, il a été confirmé que la plupart des laboratoires appliquaient une technique

de CL-SM/SM pour mesurer les teneurs en TSNAs. Le sous-groupe (anciennement « groupe d’étude »)

a alors orienté ses recherches sur une méthode CL-SM/SM pour venir compléter la technique CG-AET

déjà disponible en tant que méthode N° 63 recommandée par le CORESTA. Plusieurs de ces

méthodes ont été décrites dans la littérature scientifique et sont citées ici. Un essai d’aptitude a été

mené avec 14 laboratoires, qui utilisaient leurs propres méthodologies CL-SM/SM. Les données de

reproductibilité étaient meilleures pour la CL-SM/SM que pour la CG-AET et la méthodologie était

très similaire d’un laboratoire à l’autre. Pour résumer, la fumée du courant principal de cigarette était

recueillie sur un filtre Cambridge (FC), une solution d’étalons internes était ajoutée et, après extraction,

une partie aliquote était séparée et analysée quantitativement par CL-SM/SM. Suite aux principaux

enseignements tirés de cet essai d’aptitude, une méthodologie générale a été convenue.

Ce document a été élaboré à partir d’une dernière étude collaborative impliquant la participation

de 20 laboratoires de 12 pays. La méthode inclut des notes pour informer d’autres laboratoires qui

pourraient souhaiter l’adopter sur les principaux aspects qui nécessitent d’être bien contrôlés pour

fournir des données aussi robustes et cohérentes que les données de répétabilité et de reproductibilité

fournies. Les cigarettes ont été fumées selon les paramètres du régime de fumage indiqués dans

l’ISO 3308 et les évaluations statistiques ont été réalisées conformément aux recommandations de

l’ISO 5725-2.

Aucun régime de fumage mécanique ne peut reproduire parfaitement le comportement des fumeurs:

— il est recommandé que les cigarettes soient aussi soumises à essai dans des conditions d’intensité de

fumage mécanique différentes de celles spécifiées dans le présent document;

— l’essai de fumage mécanique permet de caractériser les émissions des cigarettes pour des besoins

de conception et de réglementation, mais communiquer aux fumeurs les résultats de mesures sur

machine peut susciter des malentendus sur les niveaux d’exposition et de risque selon les marques;

— les données concernant l’émission de fumées obtenues par des mesures mécaniques peuvent

être utilisées comme des données de base pour l’évaluation des dangers du produit, mais elles ne

constituent pas des mesures valables de l’exposition des individus ou des risques et ce n’est pas

leur but. C’est faire un usage impropre des essais réalisés conformément aux normes ISO que de

communiquer que les différences de mesures mécaniques entre différents produits correspondent

à des différences de niveaux d’exposition ou de risque.
© ISO 2020 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
PROJET FINAL DE NORME INTERNATIONALE ISO/FDIS 19290:2020(F)
Cigarettes — Dosage des nitrosamines spécifiques du tabac
dans le courant principal de fumée de cigarette — Méthode
par CL-SM/SM

AVERTISSEMENT — L’utilisation du présent document peut impliquer des réactifs, manipulations

ou matériels dangereux. Le présent document n’a pas pour but de traiter tous les problèmes de

sécurité qui sont liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur du présent document d’établir des

pratiques d’hygiène et de sécurité appropriées et de déterminer l’applicabilité des restrictions

réglementaires avant son utilisation.
1 Domaine d’application

Le présent document spécifie une méthode de quantification de quatre nitrosamines spécifiques du

tabac (TSNAs) dans la matière particulaire totale du courant principal de la fumée de cigarette par

chromatographie liquide haute performance en phase inverse avec détection par spectrométrie de

masse en tandem (CL-SM/SM). Les TSNAs quantifiées sont les suivantes: N-nitrosonornicotine (NNN),

N-nitrosoanatabine (NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) et 4-(méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-

butanone (NNK).
2 Références normatives

Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur

contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.

Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les

éventuels amendements).

ISO 3308, Machine à fumer analytique de routine pour cigarettes — Définitions et conditions normalisées

ISO 3402, Tabac et produits du tabac — Atmosphère de conditionnement et d'essai

ISO 4387, Cigarettes — Détermination de la teneur en matière particulaire totale et en matière particulaire

anhydre et exempte de nicotine au moyen d'une machine à fumer analytique de routine

ISO 8243, Cigarettes — Échantillonnage
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp

— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
3.1
nitrosamines spécifiques du tabac
TSNAs

quatre nitrosamines sont prédominantes dans le tabac: la N-nitrosonornicotine (NNN),

la N-nitrosoanatabine (NAT), la N-nitrosoanabasine (NAB) et la 4-(méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-

butanone (NNK)
[SOURCE: ISO 22303:2008, 3.1]
© ISO 2020 – Tous droits réservés 1
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ISO/FDIS 19290:2020(F)
4 Principe

Les cigarettes sont fumées sur une machine à fumer standard. La fumée du courant principal est piégée

sur un filtre en fibre de verre. Après ajout d’un étalon interne, la matière particulaire totale retenue sur

le filtre en fibre de verre est extraite avec une solution d’acétate d’ammonium à 100 mM au moyen d’un

agitateur.

L’extrait est prélevé au moyen d’une seringue et filtré sur un filtre à seringue en PTFE de 0,45 μm,

directement dans un flacon pour passeur d’échantillons.

Les échantillons sont soumis à une chromatographie liquide haute performance (CLHP) en phase

inverse, puis ils sont quantifiés par spectrométrie de masse en tandem (SM/SM).
5 Appareillage

Appareillage courant de laboratoire et équipement utilisé pour la préparation d’échantillons et d’étalons

et, en particulier, ce qui suit. Toute la verrerie doit être nettoyée avant utilisation pour éviter toute

contamination.

5.1 Équipement nécessaire pour réaliser le conditionnement des cigarettes, conformément

à l’ISO 3402.

5.2 Équipement nécessaire pour réaliser le marquage de la longueur de mégot des cigarettes.

5.3 Équipement nécessaire pour réaliser le fumage des cigarettes, conformément à l’ISO 3308.

5.4 Balance analytique, capable de peser avec une précision d’au moins quatre décimales.

5.5 Tubes à centrifuger, de 50 ml.
5.6 Distributeur, d’une contenance de 20 ml pour les solutions d’extraction.
5.7 Seringues étanches aux gaz, d’une contenance de 250 μl.
5.8 Pipette automatique.
5.9 Agitateur.

5.10 Chromatographe liquide haute performance couplé à un spectromètre de masse en tandem

(CL-SM/SM), composé des éléments suivants:
5.10.1 Pompe binaire.
5.10.2 Passeur d’échantillons.
5.10.3 Spectromètre de masse en tandem.
5.10.4 Système d’acquisition de données.
®1)
5.10.5 Colonne CL: XTerra MS C1
...

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