ISO 14673-1:2001
(Main)Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite contents — Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite contents — Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites — Partie 1: Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 14673-1
IDF
189-1
First edition
2001-11-01
Milk and milk products — Determination
of nitrate and nitrite contents —
Part 1:
Method using cadmium reduction and
spectrometry
Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites —
Partie 1: Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
Reference numbers
ISO 14673-1:2001(E)
IDF 189-1:2001(E)
©
ISO and IDF 2001
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 14673-1:2001(E)
IDF 189-1:2001(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but shall not
be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In downloading this
file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. Neither the ISO Central Secretariat nor the IDF accepts
any liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation parameters
were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies and IDF national
committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the address given below.
© ISO and IDF 2001
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means, electronic
or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective address below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 � CH-1211 Geneva 20 41 Square Vergote
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.ch E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.ch Web www.fil-idf.org
Printed in Switzerland
ii © ISO and IDF 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 14673-1:2001(E)
IDF 189-1:2001(E)
Contents Page
Foreword.iv
1 Scope .1
2 Normative references .1
3 Terms and definitions .2
4 Principle.2
5 Reagents.2
6 Apparatus .4
7 Sampling.5
8 Preparation of test sample.5
8.1 Dried milk and dried whey .5
8.2 Caseins and caseinates .5
8.3 Cheese .5
8.4 Whey cheese .6
9 Procedure .6
9.1 Preparation of the copperized cadmium column .6
9.2 Checking the reducing capacity of the column.6
9.3 Regeneration of the column .7
9.4 Preparation of test portion.7
9.5 Extraction and deproteination.8
9.6 Reduction of nitrate to nitrite .8
9.7 Blank test.8
9.8 Determination.9
9.9 Preparation of calibration graph .9
10 Calculation and expression of results.9
10.1 Nitrite content.9
10.2 Nitrate content.10
11 Precision.10
11.1 General.10
11.2 Repeatability.10
12 Test report .11
Bibliography.13
© ISO and IDF 2001 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 14673-1:2001(E)
IDF 189-1:2001(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this part of ISO 14673�IDF 189 may be the subject
of patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
International Standard ISO 14673-1�IDF 189-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with
AOAC International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
This first edition of ISO 14673-1�IDF 189-1, together with ISO 14673-2�IDF 189-2 and ISO 14673-3�IDF 189-3,
cancels and replaces ISO 4099:1984, ISO 6736:1982, ISO 6739:1988, ISO 6740:1985 and ISO 8195:1987, which
have been technically revised.
ISO 14673�IDF 189 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products — Determination
of nitrate and nitrite contents:
— Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
— Part 2: Method using segmented flow analysis (Routine method)
— Part 3: Method using cadmium reduction and flow injection analysis with in-line dialysis (Routine method)
iv © ISO and IDF 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 14673-1:2001(E)
IDF 189-1:2001(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National Committee in
every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF Standing Committees
carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in the development of standard
methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the National
Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of National
Committees casting a vote.
International Standard ISO 14673-1�IDF 189-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with
AOAC International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Action Team, Minerals and minor compounds,of the
Standing Committee on Minor components characterization of physical properties, under the aegis of its project
leader Mr G. Bråthen (NO).
© ISO and IDF 2001 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 14673-1:2001(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 189-1:2001(E)
Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite
contents —
Part 1:
Method using cadmium reduction and spectrometry
WARNING — The use of this International Standard may involve hazardous materials, operations and
equipment. This standard does not purport to address all the safety problems associated with its use. It is
the responsibility of the user of this standard to establish safety and health practices and determine the
applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of ISO 14673�IDF 189 specifies a method for the determination of the nitrate and nitrite contents of milk
and milk products by cadmium reduction and spectrometry. The method is applicable to
� whole and partly skimmed and skimmed dried milk;
� hard, semi-hard and soft cheeses;
� processed cheese;
� whey cheese, caseins and caseinates and dried whey.
The method may be performed using automatic equipment, in particular by segmented flow analysis (SFA) or flow
injection analysis (FIA), thus reducing cadmium contamination in laboratory work places and waste water.
NOTE These methods are described in ISO 14673-2�IDF 189-2 and ISO 14673-3�IDF 189-3, respectively.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this part of ISO 14673�IDF 189. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this part of ISO 14673�IDF 189 are
encouraged to investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated
below. For undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO
and IEC maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 565, Test sieves — Metal wire cloth, perforated metal plate and electroformed sheet — Nominal sizes of
openings
ISO 648, Laboratory glassware — One-mark pipettes
ISO 835-1, Laboratory glassware — Graduated pipettes — Part 1: General requirements
ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks
© ISO and IDF 2001 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 14673-1:2001(E)
IDF 189-1:2001(E)
3 Terms and definitions
For the purposes of this part of ISO 14673�IDF 189, the following terms and definitions apply.
3.1
nitrate content
mass fraction of nitrate determined by the procedure specified in this part of ISO 14673�IDF 189
–
NOTE The nitrate content is expressed as the mass in milligrams of nitrate ions (NO ) per kilogram of product.
3
3.2
nitrite content
mass fraction of nitrite determined by the procedure specified in this part of ISO 14673�IDF 189
–
NOTE The nitrite content is expressed as the mass in milligrams of nitrite ions (NO ) per kilogram of product.
2
4Principle
A test portion is dispersed in warm water, with precipitation of the fat and proteins, then filtration. The nitrate ions
are reduced to nitrite ions in a portion of the filtrate by means of copperized cadmium.
A red colour is developed in portions of both unreduced filtrate and the reduced solution, by addition of
sulfanilamide and N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride. Spectrometric measurements are carried out at a
wavelength of 538 nm.
The nitrite content of the sample and the total nitrite content after reduction of nitrate ions are calculated by
comparing the measured absorbances with those of a set of sodium nitrite calibration solutions. The nitrate content
is calculated from the difference between these two contents.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade unless otherwise specified.
5.1 Water, distilled or deionized, or water of equivalent purity, free from nitrate and nitrite ions.
To avoid the possible inclusion of small gas bubbles in the copperized cadmium column (9.1.6), freshly boil the
distilled or deionized water and cool to room temperature. Use the thus-prepared water for the preparation of the
column (9.1), to check the reducing capacity of the column (9.2), and to regenerate the column (9.3).
5.2 Cadmium granules, of diameter 0,3 mm to 0,8 mm.
Prepare cadmium granules, if not available commercially, as follows.
Place a suitable number of zinc rods in a beaker. Cover the rods with cadmium sulfate solution (5.3). Scrape the
cadmium sponge from the rods from time to time over a period of 24 h. Remove the zinc rods and decant the liquid
until only sufficient remains to cover the cadmium sponge. Wash the sponge two or three times with water. Transfer
the cadmium sponge to a laboratory blender together with 400 mm of the hydrochloric acid working solution (5.7)
and blend for a few seconds to obtain granules of the required size. Return the contents of the blender to the
beaker and leave to stand for several hours, while stirring occasionally to remove bubbles. Decant most of the
liquid and immediately copperize the granules as described in 9.1.
WARNING — Because of its toxicity, the used cadmium should be delivered as chemical waste to the
relevant authorities.
2 © ISO and IDF 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 14673-1:2001(E)
IDF 189-1:2001(E)
5.3 Cadmium sulfate solution, c(CdSO ·8H O) = 40 g/l.
4 2
Dissolve 40 g of cadmium sulfate solution in water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water
and mix.
5.4 Copper(II) sulfate solution, c(CuSO ·5H O) = 20 g/l.
4 2
Dissolve 20 g of copper(II) sulfate in water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and
mix.
5.5 Hydrochloric acid (HCl), (� = 1,19 g/ml).
20
5.6 Dilute hydrochloric acid, c(HCl)�2mol/l.
Carefully add 160 ml of hydrochloric acid (5.5) to about 700 ml of water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4) while
regularly swirling the contents. Cool the contents to room temperature. Dilute to the mark with water and mix
carefully.
5.7 Hydrochloric acid working solution, c(HCl)� 0,1 mol/l.
Add 50 ml of dilute hydrochloric acid (5.6) to a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and
mix.
5.8 Zinc sulfate solution, c(ZnSO ·7H O) = 535 g/l.
4 2
Dissolve 53,5 g of zinc sulfate in water in a 100 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and mix.
5.9 Potassium hexacyanoferrate(II) solution, c(K [Fe(CN) ]·3H O) = 172 g/l.
4 6 2
Dissolve 17,2 g of potassium hexacyanoferrate(II) trihydrate in water in a 100 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the
mark with water and mix.
5.10 Disodium ethylenediaminetetraacetate dihydrate (EDTA) solution (Na C H N O ·2H O).
2 10 14 2 8 2
Dissolve 33,5 g of EDTA in about 900 ml water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water
and mix.
5.11 Solution I.
Carefully add 450 ml of hydrochloric acid (5.5) to a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water
and mix.
5.12 Solution II.
Dissolve by heating on a water bath (6.15) 0,5 g of sulfanilamide (NH C H SO NH ) in a mixture of 75 ml of water
2 6 4 2 2
and 5 ml of hydrochloric acid (5.5) in a 100 ml volumetric flask (6.4). Cool to room temperature. Dilute to the mark
with water and mix. Filter the obtained solution, if necessary.
5.13 Solution III.
Dissolve 0,1 g of N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride (C H NHCH CH NH ·2HCl) in water in a 100 ml
10 7 2 2 2
volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and mix. Filter the obtained solution, if necessary.
The solution may be stored for up to 1 week in a well-stoppered brown bottle in a refrigerator.
5.14 Sodium nitrite stock solution (NaNO ).
2
Dry a few grams of sodium nitrite in an oven (6.16) at 110 °Cto 120 °C to constant mass (i.e. until the difference
between two successive weighings does not exceed 1 mg). Dissolve 0,150 g of the sodium nitrite in water in a
1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and mix.
© ISO and IDF 2001 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 14673-1:2001(E)
IDF 189-1:2001(E)
5.15 Sodium nitrite standard working solution.
Prepare the sodium nitrite standard working solution on the day of use. Transfer with a pipette (6.5), 10 ml of the
stock solution (5.14) and 20 ml of the buffer solution (5.19) to a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark
with water and mix. The nitrite content of the sodium nitrite standard working solution is 1�g/ml.
5.16 Potassium nitrate stock solution (KNO ).
3
Dry a few grams of potassium nitrate in an oven (6.16) at 110 °Cto 120 °C to constant mass (i.e. until the
difference between two successive weighings does not exceed 1 mg). Dissolve 1,468 g of the potassium nitrate in
water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and mix.
5.17 Potassium nitrate working standard solution.
Prepare the potassium nitrate working standard solution on the day of use. Transfer with a pipette (6.5), 5 ml of the
potassium nitrate stock solution (5.16) and 20 ml of the buffer solution (5.19) to a 1 000 ml volumetric flask (6.4).
Dilute to the mark with water and mix. The nitrate content of the potassium nitrate working standard solution is
4,50�g/l.
5.18 Ammonia solution (NH ), (� =0,91g/ml).
3 20
If an ammonia solution of above-mentioned concentration is not available, an equivalent amount of a more
concentrated ammonia solution may be used in 5.19 [e.g. 103 ml of a 35 % (mass fraction) ammonia solution
(� = 1,19 g/ml)].
20
5.19 Buffer solution, pH 9,6 to 9,7.
Dilute 50 ml of hydrochloric acid (5.5) with 600 ml of water in a conical flask (6.3) and mix. Add 135 ml of the
ammonia solution (5.18) and dilute to 1 000 ml with 215 ml of water and mix. Adjust the pH, if necessary, to
between 9,6 to 9,7.
6 Apparatus
Clean all glassware thoroughly and rinse with distilled water to ensure that it is free from nitrate and nitrite ions.
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 1 mg, with a readability of 0,1 mg.
6.2 Sample container, provided with an airtight lid.
6.3 Conical flasks, of capacity 250 ml, 500 ml and 1 000 ml.
6
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 14673-1
FIL
189-1
Première édition
2001-11-01
Lait et produits laitiers — Détermination
des teneurs en nitrates et en nitrites —
Partie 1:
Méthode par réduction au cadmium et
spectrométrie
Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite contents —
Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
Numéros de référence
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
©
ISO et FIL 2001
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier peut
être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifiéà moins que l'ordinateur employéà cet effet ne bénéficie d'une licence autorisant
l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées acceptent de fait la
responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO et la FIL déclinent toute responsabilité
en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la créationduprésent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du
fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir l'exploitation de
ce fichier par les comités membres de l'ISO et les comités nationaux de la FIL. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème
d'utilisation, veuillez en informer le Secrétariat central de l'ISO à l'adresse donnée ci-dessous.
© ISO et FIL 2001
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque
forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit soit de l'ISO
soit de la FIL à l’adresse respective ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
Case postale 56 � CH-1211 Geneva 20 41 Square Vergote � B-1030 Bruxelles
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.ch E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.ch Web www.fil-idf.org
Imprimé en Suisse
ii © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
Sommaire Page
Avant-propos.iv
1 Domaine d'application.1
2Références normatives .1
3Termesetdéfinitions.2
4 Principe.2
5Réactifs .2
6 Appareillage .4
7 Échantillonnage .5
8Préparation de l'échantillon pour essai.5
8.1 Lait sec et lactosérum sec .5
8.2 Caséines et caséinates .5
8.3 Fromage.6
8.4 Lactosérum.6
9 Mode opératoire.6
9.1 Préparation de la colonne de cadmium cuivré.6
9.2 Contrôle du pouvoir réducteur de la colonne.7
9.3 Régénération de la colonne.7
9.4 Préparation de la prise d'essai.7
9.5 Extraction et déprotéinisation.8
9.6 Réduction des nitrates en nitrites.9
9.7 Essai à blanc .9
9.8 Détermination.9
9.9 Préparation de la courbe de l'étalonnage .9
10 Calcul et expression des résultats.10
10.1 Teneur en nitrites.10
10.2 Teneur en nitrates.10
11 Fidélité .11
11.1 Généralités .11
11.2 Répétabilité.11
12 Rapport d'essai .12
Bibliographie .14
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiéeaux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude aledroit de fairepartie ducomité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments delaprésente partie de l'ISO 14673�FIL 189 peuvent
faire l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour
responsable de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
La Norme internationale ISO 14673�FIL 189 a étéélaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers,et laFédération internationale de laiterie (FIL), en
collaboration avec l’AOAC International. Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par
l’AOAC International.
Cette première édition de l'ISO 14673-1�FIL 189-1, ainsi que l'ISO 14673-2�FIL 189-2 et l'ISO 14673-3�FIL 189-3,
annule et remplace l'ISO 4099:1984, l'ISO 6736:1982, l'ISO 6739:1988, l'ISO 6740:1985 et l'ISO 8195:1987, dont
elle constitue une révision technique.
L'ISO 14673�FIL 189 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits laitiers —
Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites:
— Partie 1: Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
— Partie 2: Méthode par analyse d'écoulement segmentée(Méthode de routine)
— Partie 3: Méthode par réduction au cadmium et d'analyse par injection avec dialyse en ligne (Méthode de
routine)
iv © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l’ISO et avec l’AOAC
International pour l’élaboration de méthodes normalisées d’analyse et d’échantillonnage pour le lait et les produits
laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d’Action et les Comités permanents sont soumis
aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 50 %
au moins des Comités Nationaux votants.
La Norme internationale ISO 14673-1�FIL 189-1 a étéélaboréepar le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers,et laFédération internationale de laiterie (FIL), en
collaboration avec l’AOAC International. Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par
l’AOAC International.
L’ensemble des travaux a été confiéà l’Équipe d’Action mixte ISO/FIL/AOAC, Composants azotés dans le lait et
lesproduitslaitiers,du Comité permanent chargé des Composants mineurs du lait et de la caractérisation des
propriétés physiques, sous la conduite de son chef de projet, Monsieur G. Bråthen (NO).
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 189-1:2001(F)
Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates
et en nitrites —
Partie 1:
Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
AVERTISSEMENT — L’utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer l’intervention de
produits, d’opérations et d’équipements à caractère dangereux. La présente norme n’apas la prétention
d’aborder tous les problèmes de sécurité concernés par son usage. Il est de la responsabilité de
l’utilisateur de la présente norme d’établir des règles de sécurité et d’hygiène et de déterminer l’application
des restrictions réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 14673�FIL 189 décrit une méthodededétermination des teneurs en nitrates et en
nitrites dans les produits laitiers par réduction au cadmium et spectrométrie. La méthode s'applique au
� lait entier, au lait demi-écrémé et au lait écrémé sec;
� aux fromages à pâte dure, semi-dure et aux fromages à pâte molle;
� aux fromages fondus;
� au lactosérum, aux caséines, aux caséinates et au lactosérum sec.
Cette méthode peut être réalisée à l'aide d'un appareil automatisé, en particulier par analyse de fluide segmentée
(SFA) ou par analyse par injection (FIA), ce qui permet de réduire la contamination par le cadmium des
laboratoires et des eaux usées.
NOTE Ces deux méthodes sont décrites respectivement dans l'ISO 14673-2�FIL 189-2 et l'ISO 14673-3�FIL 189-3.
2Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente partie de l'ISO 14673�FIL 189. Pour les références datées,
les amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties
prenantes aux accords fondés sur la présente partie de l'ISO 14673�FIL 189 sont invitées à rechercher la
possibilité d'appliquer les éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les
références non datées, la dernière édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et
de la CEI possèdent le registre des Normes internationales en vigueur.
ISO 565, Tamis de contrôle — Tissus métalliques, tôles métalliques perforées et feuilles électroformées —
Dimensions nominales des ouvertures
ISO 648, Verrerie de laboratoire — Pipettes à un trait
ISO 835-1, Verrerie de laboratoire — Pipettes graduées — Partie 1: Spécifications générales
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente partie de l'ISO 14673�FIL189,lestermesetdéfinitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en nitrates
fraction massique de nitrate, déterminée par le mode opératoire décrit dans la présente partie de
l'ISO 14673�FIL 189
–
NOTE La teneur en nitrates est expriméesous formedemasse, enmilligrammes d'ionnitrate (NO ) par kilogramme de
3
produit.
3.2
teneur en nitrites
fraction massique de nitrite, déterminée par le mode opératoire décrit dans la présente partie de
l'ISO 14673�FIL 189
–
NOTE La teneur en nitrites est exprimée sous forme de masse, en milligrammes d'ion nitrite (NO ) par kilogramme de
2
produit.
4Principe
Une prise d'essai est dispersée dans de l'eau chaude, avec précipitation de la matière grasse et des protéines, et
ensuite filtration. Sur une portion du filtrat, les ions nitrate sont réduits en ions nitrite à l'aide de cadmium cuivré.
Une coloration rouge se développe dans des portions de filtrat non réduit et de solution réduite, par addition de
sulfanilamide et de dihydrochlorure de N-(naphtyl-1)-éthylènediamine. Les mesurages spectrométriques se font à
une longueur d'onde de 538 nm.
La teneur en nitrites de l'échantillon et la teneur totale en nitrites aprèsréduction des ions nitrate sont calculées par
comparaison des absorbances mesurées avec celles d'une série de solutions étalons de nitrite de sodium. La
teneur en nitrates est calculée à partirdeladifférence entre ces deux teneurs.
5Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1 Eau, distilléeoudéionisée, ou eau de puretééquivalente, exempte d'ions nitrate et nitrite.
Dans le but d'éviter l'inclusion de petites bulles de gaz dans la colonne de cadmium cuivré (9.1.6), faire bouillir de
l'eau distilléeou déionisée et la refroidir à température ambiante. Utiliser l'eau ainsi obtenue pour la préparation de
la colonne (9.1), pour le contrôle du pouvoir réducteur de la colonne (9.2) et pour la régénération de la colonne
(9.3).
5.2 Cadmium sous forme de granulés,diamètrede0,3mm à 0,8 mm.
S'il n'est pas possible de se procurer dans le commerce des granulés de cadmium, ceux-ci peuvent être préparés
de la manière suivante.
Placer dans un bécher un nombre convenable de baguettes de zinc. Recouvrir ces baguettes avec une solution de
sulfate de cadmium (5.3). Au cours des 24 h suivantes, gratter de temps en temps le cadmium spongieux déposé
sur les baguettes. Retirer les baguettes de zinc et décanter le liquide jusqu'à ce qu'il en reste une quantité
minimale suffisante pour recouvrir le cadmium spongieux. Laver deux ou trois fois le cadmium spongieux avec de
l'eau. Transférer le cadmium spongieux dans un broyeur de laboratoire avec 400 ml de solution d'acide
chlorhydrique, solution de travail (5.7) et broyer pendant quelques secondes afin d'obtenir des granulésdela
dimension requise. Replacer le contenu du broyeur dans le bécher et l'y maintenir pendant plusieurs heures en
2 © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
agitant de temps en temps pour chasser les bulles. Décanter la majeure partie du liquide et procéder
immédiatement au cuivrage des granuléscommedécrit en 9.1.
AVERTISSEMENT — Du fait de sa toxicité, le cadmium usagé doit être déclaré auprès des autorités
compétentes comme déchet chimique.
5.3 Sulfate de cadmium, solution, c(CdSO ,8H O) = 40 g/l.
4 2
Dissoudre 40 g de sulfate de cadmium dans de l'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à 1 000 ml
avec de l'eau et mélanger.
5.4 Sulfate de cuivre(II), solution, c(CuSO ,5H O) = 20 g/l.
4 2
Dissoudre 20 g de sulfate de cuivre (II) dans de l'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.5 Acide chlorhydrique (HCl), (� =1,19g/ml).
20
5.6 Acide chlorhydrique dilué, c(HCl)� 2mol/l.
Ajouter avec précaution 160 ml d'acide chlorhydrique (5.5) dans environ 700 ml d'eau dans une fiole jaugéede
1 000 ml (6.4) tout en agitant régulièrement le contenu. Refroidir à température ambiante. Compléter à 1 000 ml
avec de l'eau et mélanger avec soin.
5.7 Acide chlorhydrique, solution de travail, c(HCl)� 0,1 mol/l.
Ajouter 50 ml de solution d'acide chlorhydrique (5.6) dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à 1 000 ml
avec de l'eau et mélanger.
5.8 Sulfate de zinc, solution, c(ZnSO ,7H O) = 535 g/l.
4 2
Dissoudre 53,5 g de sulfate de zinc dans de l'eau dans une fiole jaugée de 100 ml (6.4). Compléter à 100 ml avec
de l'eau et mélanger.
5.9 Hexacyanoferrate(II) de potassium, solution, c(K [Fe(CN) ],3H O) = 172 g/l.
4 6 2
Dissoudre 17,2 g d'hexacyanoferrate(II) de potassium trihydraté dans de l'eau dans une fiole jaugéede100ml
(6.4). Compléter à 100 ml avec de l'eau et mélanger.
5.10 Éthylènedinitrilotétraacétate disodique dihydraté (EDTA), solution,(Na C H N O ,2H O).
2 10 14 2 8 2
Dissoudre 33,5 g d'EDTA dans environ 900 ml d'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à 1 000 ml
avec de l'eau et mélanger.
5.11 Solution I.
Ajouter avec précaution 450 ml d'acide chlorhydrique (5.5) dans une fiole jaugéede1000ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.12 Solution II.
Dissoudre en chauffant au bain d'eau (6.15) 0,5 g de sulfanilamide (NH C H SO NH ) dans un mélange constitué
2 6 4 2 2
par 75 ml d'eau et 5 ml d'acide chlorhydrique (5.5) dans une fiole jaugéede100ml (6.4). Refroidir à température
ambiante. Compléter à 100 ml avec de l'eau et mélanger. Filtrer la solution ainsi obtenue, si nécessaire.
5.13 Solution III.
Dissoudre 0,1 g de dihydrochlorure de N-(naphtyl-1)-éthylènediamine (C H NHCH CH NH ,2HCl) dans de l'eau
10 7 2 2 2
dans une fiole jaugée de 100 ml (6.4). Compléter à 100 ml avec de l'eau et mélanger. Filtrer la solution ainsi
obtenue, si nécessaire.
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
La solution peut être conservée au maximum pendant 1 semaine au réfrigérateur, dans un récipient en verre brun
bien bouché.
5.14 Nitrite de sodium (NaNO ), solution mère.
2
Sécher jusqu'à masse constante (c'est-à-dire jusqu'à ce que la différence entre deux pesages consécutifs soit
inférieure à 1 mg) quelques grammes de nitrite de sodium dans un four (6.16) entre 110 °C et 120 °C. Dissoudre
0,150 g de nitrite de sodium dans de l'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à 1 000 ml avec de
l'eau et mélanger.
5.15 Nitrite de sodium, solution étalon de travail.
Préparer la solution étalon de travail de nitrite de sodium le jour de l'utilisation. Transférer, à l'aide d'une pipette
(6.5), 10 ml de solution mère (5.14) et 20 ml de solution tampon (5.19) dans une fiole jaugéede1000ml (6.4).
Compléter à 1 000 ml avec de l'eau et mélanger. La teneur en nitrites de la solution étalondetravail de nitritede
sodium est de 1�g/ml.
5.16 Nitrate de potassium (KNO ), solution mère.
3
Sécher jusqu'à masse constante (c'est-à-dire jusqu'à ce que la différence entre deux pesages consécutifs soit
inférieure à 1 mg) quelques grammes de nitrate de potassium dans un four (6.16) entre 110 °C et 120 °C.
Dissoudre 1,468 g de nitrate de potassium dans de l'eau dans une fiole jaugéede1000ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.17 Nitrate de potassium, solution étalon de travail.
Préparer cette solution le jour de l'utilisation. Transférer, à l'aide d'une pipette (6.5), 5 ml de solution mère (5.16) et
20 ml de solution tampon (5.19) dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à 1 000 ml avec de l'eau et
mélanger. La teneur en nitrates de la solution étalondetravail denitratedepotassium estde4,50�g/ml.
5.18 Solution d'ammoniaque (NH ), (� =0,91g/ml).
3 20
Si une solution d'ammoniaque à la concentration mentionnée ci-dessus n'est pas disponible, une quantité
équivalente d'une solution plus concentrée peut être utiliséeen 5.19[par exemple,103ml d’une solution à 35 % en
fraction massique (� = 1,19 g/ml)].
20
5.19 Solution tampon, pH entre 9,6 et 9,7.
Diluer 50 ml d'acide chlorhydrique (5.5) dans 600 ml d'eau dans une fiole conique (6.3) et mélanger. Ajouter 135 ml
de solution d'ammoniaque (5.18) et compléter à 1 000 ml avec 215 ml d'eau et mélanger. Ajuster le pH entre 9,6
et 9,7, si nécessaire.
6 Appareillage
Toute la verrerie doit être soigneusement lavéeet rincée avec de l'eau distillée pour la rendre exempte d'ions
nitrate et nitrite.
Matériel courant de laboratoire et, en particulier:
6.1 Balance analytique,d'uneprécision de 1 mg, permettant de lire jusqu’à 0,1 mg.
6.2 Récipient pour échantillon, muni d'un couvercle étanche à l'air.
6.3 Fioles coniques, de 250 ml, de 500 ml et de 1 000 ml de capacité.
6.4 Fioles jaugées, respectivement de 100 ml, de 500 ml et de 1 000 ml de capacité, conformes aux exigences
de l'ISO 1042, classe B.
4 © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
6.5 Pipettes, permettant de délivrer respectivement 2 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 8 ml, 10 ml, 12 ml, 20 ml et 25 ml,
conformes aux exigences de l'ISO 648, classe A, ou de l'ISO 835-1. Le cas échéant, des burettes peuvent être
utilisées à la place des pipettes.
6.6 Éprouvettes graduées, respectivement de 5 ml, 10 ml, 25 ml, 100 ml, 250 ml, 500 ml et 1 000 ml de
capacité.
6.7 Entonnoirs en verre, d'environ 7 cm de diamètre, à tige courte.
6.8 Papier-filtre, pour filtration moyenne, d'environ 15 cm de diamètre, exempt d'ions nitrate et nitrite.
6.9 Colonne de réduction, en verre, par exemple celle représentée sur la Figure 1.
6.10 Spectromètre, permettant d'effectuer des mesurages de l'absorbance à une longueur d'onde de 538 nm,
muni de cellules de 1 cm à 2 cm de parcours optique.
6.11 Broyeur, permettant de broyer l'échantillon de laboratoire, si nécessaire. Afin d'éviter toute perte d'humidité,
il convient que l'appareil ne dégage pas trop de chaleur. Ne pas utiliser de broyeur à marteau.
6.12 Agitateur de laboratoire ou homogénéisateur,avec des récipients en verre, de 250 ml ou de 400 ml de
capacité, permettant de préparer des suspensions de prises d'essai de fromage et de petit-lait.
6.13 Tamis d'essai, en toile de câble tissé, de 200 mm de diamètre, d'une granulométrie nominale de 500�met
muni d'un réceptacle conforme aux exigences de l'ISO 565.
6.14 Agitateur magnétique.
6.15 Bain d'eau, permettant de faire bouillir l'eau.
6.16 Four, permettant de maintenir la température entre 110 °Cet120 °C.
7 Échantillonnage
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 14673�FIL 189. Une
méthode d'échantillonnage recommandée est donnée dans l'ISO 707.
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon véritablement représentatif qui n'a pas été endommagé
pendant le transport ou l'entreposage.
Conserver l'échantillon pour essai de manière àéviter sa détérioration ou toute modification de sa composition.
8Préparation de l'échantillon pour essai
8.1 Lait sec et lactosérum sec
Transférer l'échantillon pour essai dans un récipient pour échantillon (6.2) dont la capacité est égale à environ le
double du volume de l'échantillon pour essai. Fermer immédiatement le récipient. Bien mélanger l'échantillon pour
essai par agitations et retournements successifs jusqu’à l’obtention d’un échantillon homogène.
8.2 Caséines et caséinates
8.2.1 Bien mélanger l'échantillon pour essai, si nécessaire après l'avoir transvasé en totalité dans un récipient
pour essai (6.2) de capacité appropriée, par agitations et retournements successifs.
8.2.2 Transvaser 50 g de l'échantillon pour essai dans le tamis d'essai (6.13). Si les 50 g passent complètement
ou presque complètement à travers le tamis, passer au tamis tout l'échantillon pour essai mélangé (8.2.1).
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés 5
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
8.2.3 Si l'échantillon pour essai ne passe pas complètement à travers le tamis, utiliser le broyeur (6.11) jusqu'à
obtention du résultat souhaité. Transférer immédiatement tout l'échantillon pour essai tamisé dans le récipient pour
échantillon (6.2) et bien mélanger après avoir bouché le récipient. Pendant l'exécution de ces opérations, veiller à
ne pas provoquer de modification de la teneur en eau du produit.
8.2.4 Une fois l'échantillon pour essai préparé,procéder à la préparation de la prise d'essai (9.4) le plus
rapidement possible.
8.3 Fromage
8.3.1 Avant l'analyse, enlever la croûte ou la surface moisie du fromage, de manière que l'échantillon pour essai
préparé soit représentatif du fromage tel qu'il est généralement consommé.
8.3.2 Broyer l'échantillon pour essai à l'aide d'un dispositif approprié (6.11). Mélanger rapidement la masse
broyée et, si possible, broyer une seconde fois et mélanger de nouveau. Nettoyer l'appareil après chaque broyage
d'échantillon. Si l'échantillon pour essai ne peut pas être broyé, le mixer en le mélangeant et en le malaxant avec
force.
8.3.3 Aussitôt que possible après le broyage, transvaser l'échantillon pour essai dans un récipient étanche à l'air
(6.2) avant l'analyse. Il convient que l'analyse soit effectuée le plus rapidement possible aprèslebroyage. Si
l'analyse doit être repoussée, prendre toutes les précautions nécessaires pour garantir la bonne conservation de
l'échantillon pour essai et empêcher la condensation de l'humidité sur la surface intérieure du récipient.
8.3.4 Ne pas analyser le fromage broyé présentant une formation de moisissure non souhaitéeou commençant
à se détériorer.
8.4 Lactosérum
Préparer l'échantillon pour essai conformément aux instructions en 8.3.2.
9 Mode opératoire
9.1 Préparation de la colonne de cadmium cuivré
9.1.1 Introduire les granulés de cadmium (5.2) (de 40 g à 60 g par colonne) dans une fiole conique de 250 ml
(6.3). Ajouter une quantité suffisante de solution de travail d'acide chlorhydrique (5.7) pour couvrir le cadmium.
Agiter pendant quelques minutes.
9.1.2 Décanter la solution (9.1.1), puis laver le cadmium dans la fiole conique avec de l'eau jusqu'à ce qu'il soit
exempt d'ions chlorure (c'est-à-dire jusqu'à ce que la réaction avec le nitrate d'argent soit négative).
9.1.3 Cuivrer les granulés de cadmium par addition de la solution de sulfate de cuivre (II) (5.4) (environ 2,5 ml
par gramme de cadmium sont nécessaires). Agiter pendant 1 min.
9.1.4 Aussitôt après, décanter la solution (9.1.3), puis laver immédiatement le cadmium cuivré avec de l'eau, en
prenant soin que le cadmium soit continuellement couvert d'eau. Arrêter le lavage lorsque l'eau de lavage est
exempte de cuivre précipité.
9.1.5 Placer un tampon de laine de verre à la base de la colonne en verre (6.9) destinéà contenir le cadmium
cuivré (voir la Figure 1). Remplir la colonne en verre avec de l'eau.
9.1.6 Transférer le cadmium cuivré dans la colonne en verre en réduisant au minimum l'exposition à l'air. La
hauteur de cadmium cuivré doit êtrede15cm à 20 cm. Éviter d'enfermer des bulles d'air entre les granulésde
cadmium cuivré. Le niveau de liquide ne doit pas descendre au-dessous du niveau de cadmium cuivré.
9.1.7 Conditionner la colonne qui vient d'être préparée en y faisant circuler un mélange constitué de 750 ml
d'eau, de 225 ml de la solution étalon de nitrate de potassium (5.17), de 20 ml de la solution tampon (5.19) et de
20 ml de la solution d'EDTA (5.10), à un débit ne dépassant pas 6 ml/min. Laver ensuite la colonne avec 50 ml
d'eau.
6 © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO 14673-1:2001(F)
FIL 189-1:2001(F)
9.2 Contrôle du pouvoir réducteur
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.