ISO 7704:1985
(Main)Water quality — Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses
Water quality — Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses
Gives a procedure for the evaluation and comparison of water-testing filters intended for the enumeration of specific organisms and mixed microbial populations. The procedure provides general guidelines for comparative testing of the recoveries of bacteria, yeasts and other fungi on membrane filters, as compared to recoveries by the spread plate and pour plate techniques.
Qualité de l'eau — Évaluation des membranes filtrantes utilisées pour des analyses microbiologiques
Kakovost vode - Vrednotenje membranskih filtrov, ki se uporabljajo za mikrobiološke analize
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATlON.ME>K~YHAPOflHAR OPTAHM3AL&lR I-IO CTAH~APTM3AL(MM*ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Water quality - Evaluation of membrane filters used
for microbiological analyses
Qua/it6 de l’eau - Evaha tion des membranes filtran tes u tifis&es pour des analyses microbiologiques
First edition - 1985-03-15
UDC 628.163.067 : 579.68.08 Ref. No. IS0 7704-1985 (E)
Descriptors : water, quality, microbiological analysis, membranes, filters, tests.
Prrce based on 4 pages
Preisgr. C
---------------------- Page: 1 ----------------------
Foreword
IS0 (the international Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 7704 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147,
Water quality.
0 International Organization for Standardization, 1985
Printed in Switzerland
---------------------- Page: 2 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD IS0 77044985 (E)
Water quality - Evaluation of membrane filters used
for microbiological analyses
0 introduction 4 Principle
Many membrane filter comparison studies which have been 4.1 Filtration of aqueous or pure cultures in liquid suspension
reported in the literature indicate that there are significant dif- through test membrane filters, using conventional procedures.
ferences between various chemical compositions, brands and Five replicates are minimum sample requirements; a total of
batches of membranes in their ability to recover bacteria from 200 colonies is considered the minimum number for statistical
water samples. comparison.
Thus, it is very important that one of the basic tools of aquatic
4.2 Evaluation of the efficiency of each type of membrane
microbiology, the membrane filter, be standardized as much as
filter by
possible, not only to provide consistent results, but also to
enable the development of standardized procedures for
a) counts obtained on non-selective medium using spread
enumerating specific micro-organisms.
or pour plate technique versus membrane filtration tech-
nique counts on the same medium (experience indicates
that under these conditions the best membrane filter counts
1 Scope
are 80 to 90 % of those obtained by plate counts) ;
1.1 This International Standard specifies a method for the
b) results for specific organisms obtained on selective
evaluation and comparison of water-testing membrane filters
membrane filter medium using spread or pour plate tech-
intended for the enumeration of specific organisms and mixed
niques versus membrane filtration technique on the same
microbial populations.
medium.
1.2 The method provides general guidelines for comparative
NOTE - Pour plate control may provide fewer colonies than spread
testing of the recoveries of bacteria, yeasts and other fungi on
plate control.
membrane filters, as compared to recoveries by the spread
plate and pour plate techniques.
5 Diluent, culture media and reagent
2 Field of application
2.1 This method is applicable to the user’s evaluation of any
5.1 Basic material
microporous filter intended for use with aquatic samples. Its
range covers any pore size filter which may be useful in a
In order to improve the reproducibility of the results, it is
specific application.
recommended that, for the preparation of the diluents and cul-
ture media, dehydrated basic components or complete dehy-
2.2 For specific applications, it is expected that suitable drated media be used. The manufacturer’s instructions shall be
media, incubation temperature, incubation duration, incu- rigorously followed.
bation atmosphere and controls (spread or pour plate) will be
used. Results obtained from one species or group of micro- The chemical products used for the preparation of the culture
organisms may not be valid for other groups.
media and the reagents shall be of recognized analytical quality.
The water used shall be distilled or deionized water, free from
3 Definition
substances that might inhibit the growth of micro-organisms
under the test conditions.
For the purpose of this International Standard, the following
definition applies.
Measurements of pH shall be made using a pH meter, measure-
ments being referred to room temperature.
membrane filter : A thin non-fibrous filtration medium for
liquids and gases, having a mean pore size larger than 0,Ol pm
If the prepared culture media are not used immediately, they
in diameter, on which particles larger than the rated pore size shall, unless otherwise stated, be stored in the dark at
are retained at or near the delivery surface when suction or
4 + - 2 OC, for no longer than 1 month, in conditions which do
pressure is applied. not produce any change in their composition.
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 77044985 (E)
6.5 Colony counting apparatus, with suitable illumination
5.2 Diluent
and magnification.
Any appropriate sterile diluent may be used. Use of peptone
a
[O,l % bnlm)l water has been found to be suitable. This mini-
6.6 Hand tally counter.
mizes the shock to the organisms of pure water.
6.7 Autoclave, or other sterilizing equipment.
5.3 Agar media
53.1 Non-selective medium.
68 . Turntable (optional) and glass spreading rod.
Tryptone soya agar o ra similar medium may be used as the
non-selective medium this test. 6.9 Sterile vented Petri dishes, appropriate sizes.
Prepare the medium and dispense a measured amount of
Sterile calibrated pipettes, of capacities 0,l; 1 ,O; and
6.10
medium into Petri dishes (in the case of membrane filter counts
10 ml.
and spread plate counts) or into suitable tubes (in the case of
pour plate counts). The depth of agar in the Petri dishes should
be at least 3 mm. All media used for each test should be
7 Preparation of cultures for testing
prepared from the same batch and prepared at the same time.
5.3.2 Selective medium.
7.1 Whether natural water, effluent samples or pure cultures
are being used to evaluate the membranes, they should be
The media used shou d be appropriate for the organisms being
analysed prior to the test in order to obtain the dilution to be
used, either in mixed culture or pure culture.
used (9.2.1). At all stages mix the samples or cultures
thoroughly (6.2) to obtain homogeneous distribution.
Prepare the medium and dispense a measured amount of
medium into Petri dishes (in the case of membrane filter counts
7.2 If pure cultures in stressed or unstressed state are used,
and spread plate counts) or into suitable tubes (in the case of
establish the concentration of the test organism on an ap-
pour plate counts). The depth of agar in the Petri dishes should
propriate medium to ensure that the correct dilution factor is
be at least 3 mm. All media used for each test should be
used to obtain the proper counting range (9.2.1).
prepared from the same batch and prepared at the same time.
6 Apparatus and glassware 7.3 The samples used to establish proper dilutions and
counting ranges may be used in the formal test if refrigerated
Clean all glassware and filtration equipment thoroughly, using a immediately after testing and not held for an excessively long
suitable detergent in hot water, rinse with hot water, and then period (maximum 48 h). Mix samples thoroughly to obtain
rinse with distilled water. maximum homogeneity.
Follow standard microbiological laboratory practices for prepar-
ing glassware and filtration equipment prior to sterilization in
8 Membrane filters
the autoclave. Autoclave at 121 OC for 20 min for wet steriliz-
ation or for dry sterilization heat at 170 OC for at least 60
...
SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 7704:1997
01-september-1997
Kakovost vode - Vrednotenje membranskih filtrov, ki se uporabljajo za
mikrobiološke analize
Water quality -- Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses
Qualité de l'eau -- Évaluation des membranes filtrantes utilisées pour des analyses
microbiologiques
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 7704:1985
ICS:
07.100.20 Mikrobiologija vode Microbiology of water
SIST ISO 7704:1997 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
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SIST ISO 7704:1997
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SIST ISO 7704:1997
International Standard
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Water quality - Evaluation of membrane filters used
for microbiological analyses
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First edition - 1985-03-15
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Descriptors : water, quality, microbiological analysis, membranes, filters, tests.
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Foreword
IS0 (the international Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 7704 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147,
Water quality.
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SIST ISO 7704:1997
INTERNATIONAL STANDARD IS0 77044985 (E)
Water quality - Evaluation of membrane filters used
for microbiological analyses
0 introduction 4 Principle
Many membrane filter comparison studies which have been 4.1 Filtration of aqueous or pure cultures in liquid suspension
reported in the literature indicate that there are significant dif- through test membrane filters, using conventional procedures.
ferences between various chemical compositions, brands and Five replicates are minimum sample requirements; a total of
batches of membranes in their ability to recover bacteria from 200 colonies is considered the minimum number for statistical
water samples. comparison.
Thus, it is very important that one of the basic tools of aquatic
4.2 Evaluation of the efficiency of each type of membrane
microbiology, the membrane filter, be standardized as much as
filter by
possible, not only to provide consistent results, but also to
enable the development of standardized procedures for
a) counts obtained on non-selective medium using spread
enumerating specific micro-organisms.
or pour plate technique versus membrane filtration tech-
nique counts on the same medium (experience indicates
that under these conditions the best membrane filter counts
1 Scope
are 80 to 90 % of those obtained by plate counts) ;
1.1 This International Standard specifies a method for the
b) results for specific organisms obtained on selective
evaluation and comparison of water-testing membrane filters
membrane filter medium using spread or pour plate tech-
intended for the enumeration of specific organisms and mixed
niques versus membrane filtration technique on the same
microbial populations.
medium.
1.2 The method provides general guidelines for comparative
NOTE - Pour plate control may provide fewer colonies than spread
testing of the recoveries of bacteria, yeasts and other fungi on
plate control.
membrane filters, as compared to recoveries by the spread
plate and pour plate techniques.
5 Diluent, culture media and reagent
2 Field of application
2.1 This method is applicable to the user’s evaluation of any
5.1 Basic material
microporous filter intended for use with aquatic samples. Its
range covers any pore size filter which may be useful in a
In order to improve the reproducibility of the results, it is
specific application.
recommended that, for the preparation of the diluents and cul-
ture media, dehydrated basic components or complete dehy-
2.2 For specific applications, it is expected that suitable drated media be used. The manufacturer’s instructions shall be
media, incubation temperature, incubation duration, incu- rigorously followed.
bation atmosphere and controls (spread or pour plate) will be
used. Results obtained from one species or group of micro- The chemical products used for the preparation of the culture
organisms may not be valid for other groups.
media and the reagents shall be of recognized analytical quality.
The water used shall be distilled or deionized water, free from
3 Definition
substances that might inhibit the growth of micro-organisms
under the test conditions.
For the purpose of this International Standard, the following
definition applies.
Measurements of pH shall be made using a pH meter, measure-
ments being referred to room temperature.
membrane filter : A thin non-fibrous filtration medium for
liquids and gases, having a mean pore size larger than 0,Ol pm
If the prepared culture media are not used immediately, they
in diameter, on which particles larger than the rated pore size shall, unless otherwise stated, be stored in the dark at
are retained at or near the delivery surface when suction or
4 + - 2 OC, for no longer than 1 month, in conditions which do
pressure is applied. not produce any change in their composition.
1
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SIST ISO 7704:1997
IS0 77044985 (E)
6.5 Colony counting apparatus, with suitable illumination
5.2 Diluent
and magnification.
Any appropriate sterile diluent may be used. Use of peptone
a
[O,l % bnlm)l water has been found to be suitable. This mini-
6.6 Hand tally counter.
mizes the shock to the organisms of pure water.
6.7 Autoclave, or other sterilizing equipment.
5.3 Agar media
53.1 Non-selective medium.
68 . Turntable (optional) and glass spreading rod.
Tryptone soya agar o ra similar medium may be used as the
non-selective medium this test. 6.9 Sterile vented Petri dishes, appropriate sizes.
Prepare the medium and dispense a measured amount of
Sterile calibrated pipettes, of capacities 0,l; 1 ,O; and
6.10
medium into Petri dishes (in the case of membrane filter counts
10 ml.
and spread plate counts) or into suitable tubes (in the case of
pour plate counts). The depth of agar in the Petri dishes should
be at least 3 mm. All media used for each test should be
7 Preparation of cultures for testing
prepared from the same batch and prepared at the same time.
5.3.2 Selective medium.
7.1 Whether natural water, effluent samples or pure cultures
are being used to evaluate the membranes, they should be
The media used shou d be appropriate for the organisms being
analysed prior to the test in order to obtain the dilution to be
used, either in mixed culture or pure culture.
used (9.2.1). At all stages mix the samples or cultures
thoroughly (6.2) to obtain homogeneous distribution.
Prepare the medium and dispense a measured amount of
medium into Petri dishes (in the case of membrane filter counts
7.2 If pure cultures in stressed or unstressed state are used,
and spread plate counts) or into suitable tubes (in the case of
establish the concentration of the test organism on an ap-
pour plate counts). The depth of agar in the Petri dishes should
propriate medium to ensure that the correct dilution factor is
be at least 3 mm. All media used for each test should be
used to obtain the proper counting range (9.2.1).
prepared from the same batch and prepared at the same time.
6 Apparatus and glassware 7.3 The samples used to establish proper dilutions and
counting ranges may be used in the formal test if refrigerated
Clean all glassware and filtration equipment thoroughly, using a immediately after testing and not held for an excessively long
suitable detergent in hot water, rinse with hot water, and then period (ma
...
Norme internationale
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Qualité de l’eau - Évaluation des membranes filtrantes
utilisées pour des analyses microbiologiques
Water quality - Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses
Première édition - 1985-03-15
CDU 628.163.067 : 579.68.08 Réf. no : ISO 77044985 (t)
ïz
Y
eau, qualité, analyse microbiologique, membrane, filtre, essai.
Descripteurs :
Prix basé sur 4 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptes par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 7704 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147,
Qualité de l’eau.
0 Organisation internationale de normalisation, 1985
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE
ISO 7704-1985 (F)
Qualité de l’eau - Évaluation des membranes filtrantes
utilisées pour des analyses microbiologiques
que la grandeur des pores sont retenues à la surface ou près de
0 Introduction
la surface lorsqu’on applique une aspiration ou une pression.
De nombreuses études comparatives effectuées sur des mem-
branes filtrantes font état de différences importantes entre les
diverses compositions chimiques, les diverses sortes et les dif- 4 Principe
férents lots de membranes, en ce qui concerne leur capacité à
retenir les bactéries des échantillons d’eau. 4.1 Filtration d’échantillons aqueux ou de cultures pures en
suspension liquide au travers des membranes filtrantes d’essai,
II est donc très important que l’un des outils de base de la à l’aide de techniques conventionnelles. Au minimum, cinq
microbiologie aquatique, en l’occurrence la membrane filtrante, répétitions par échantillon sont nécessaires. On considére
soit normalisé autant que possible, non seulement pour obtenir qu’un total de 200 colonies est le nombre minimal permettant
des résultats homogènes mais aussi pour permettre I’élabora- d’effectuer des comparaisons statistiques.
tion de procédures normalisées pour la numération de micro-
organismes spécifiques.
4.2 Évaluation de l’efficacité de chaque type de membrane fil-
trante
1 Objet
a) par comparaison des numérations obtenues sur un
milieu non sélectif à l’aide des méthodes par étalement en
1 .l La présente Norme internationale spécifie des méthodes
surface ou par incorporation en gélose et de celles obtenues
d’évaluation et de comparaison de membranes filtrantes con-
à l’aide de la méthode par filtration sur membrane sur le
tues pour la numération d’organismes spécifiques et de popu-
même milieu (dans ces conditions, les meilleurs résultats
lations microbiennes mixtes.
obtenus expérimentalement par filtration sur membrane ne
représentent que 80 à 90 % de ceux obtenus par étalement
en surface);
1.2 Les méthodes fournissent une ligne de conduite générale
pour la comparaison du taux de rétention des bactéries, des
b) par comparaison des résultats obtenus pour des orga-
levures et d’autres champignons sur les membranes filtrantes
nismes spécifiques, sur un milieu sélectif des membranes fil-
par rapport aux taux obtenus par les techniques d’étalement en
trantes, à l’aide des méthodes par étalement en surface ou
surface et d’incorporation en gélose.
par incorporation en gélose, et de ceux obtenus à l’aide de la
méthode par filtration sur membrane sur le même milieu.
2 Domaine d’application
NOTE - II se peut que la méthode par incorporation en géiose four-
nisse moins de colonies que la méthode par étalement en surface.
2.1 La présente méthode est applicable pour l’évaluation, par
les utilisateurs, de tout filtre microporeux destiné à l’analyse
d’échantillons d’eau. Elle s’applique aux filtres de toute porosité
5 Diluants, milieux de culture et réactifs
pouvant être utilisés dans les conditions décrites.
5.1 Composants de base
2.2 Pour certaines applications particulieres, il est possible
que des milieux, une température et une durée d’incubation,
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est recom-
une atmosphère de même que des témoins (technique par éta-
mandé d’utiliser, pour la préparation des diluants et des milieux
lement en surface ou par incorporation en gelose) appropriés
de culture, des composants de base déshydratés ou des milieux
soient à employer. Les résultats obtenus pour une espéce ou un
complets déshydratés. Les prescriptions du fabricant doivent
groupe de micro-organismes peuvent ne pas être valables pour
être suivies scrupuleusement.
d’autres groupes.
Les produits chimiques utilisés pour la préparation des milieux
de culture et des réactifs doivent être de qualité analytique
reconnue.
3 Définition
L’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou déminéralisée,
membrane filtrante : Milieu de filtration mince, non fibreux,
exempte de substances susceptibles d’inhiber la croissance des
pour les liquides et les gaz, dont le diamètre moyen des pores
micro-organismes dans les conditions de l’essai.
est supérieur à 0,Ol prn et sur lequel les particules plus grandes
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 77044985 (F)
Les mesurages du pH doivent être effectués au pH-mètre, les 6.1 Unités de filtration sous vide pour membranes fil-
mesures étant rapportées à la température ambiante. trantes, munies d’une fiole à filtrer sous vide, de tubes et d’un
flacon destiné à retenir l’humidité.
Si les milieux de culture préparés ne sont pas utilisés extem-
poranément, ils doivent, sauf spécification contraire, être con-
6.2 Agitateur Vortex ou équipe
ment semblable, pour
servés à l’obscurité à 4 + 2 OC pendant 1 mois au maximum,
mélanger les échantillons (facultatif).
dans des conditions évitant toute modification de leur composi-
tien.
6.3 Pinces à mors plats (sans griffes).
5.2 Diluant
6.4 Incubateur, bain d’eau ou cuve chauffante, réglables
à diverses températures.
Tout diluant stérile approprié peut être utilisé. L’emploi d’eau
peptonée à 0,l % (mlm) est recommandé pour la filtration sur
L’incubateur approprié doit être fréquemment contrôlé afin de
membranes afin de réduire au minimum l’effet de choc que s’assurer que la température désirée y règne bien pendant au
pourrait produire le contact de l’eau pure sur les micro- moins 24 h. Pour cela, un thermomètre dont la précision a
organismes.
préalablement été vérifiée doit être placé à l’intérieur de I’incu-
bateur, sur la tablette où seront placées les boîtes.
5.3 Milieu gélosé 6.5 Compteur de colonies, à grossissement et éclairage
appropriés.
5.3.1 Milieu non sélectif
66 . Compteur manuel de colonies.
La gél ose tryptone soja ou tout autre milieu semblable peut être
utilisé dans le présent essai.
. Autoclave ou autre équipement de stérilisation.
67
Préparer le milieu et verser une quantité déterminée de milieu
68 . Table rotative (facultative) et tige d’étalem ent en
soit dans des boîtes de Petri (dans le cas de numérations sur
membranes filtrantes et de numérations par les techniques verre.
d’étalement en surface), soit dans des tubes appropriés (dans le
6.9 Boîtes de Petri stériles, munies d’un couvercle percé
cas d’incorporation en gélose). La couche de gélose dans les
boîtes de Petri doit être d’au moins 3 mm. Tous les milieux utili- de taille appropriée.
sés pour chaque essai doivent être préparés à partir du même
lot et en même temps.
6.10 Pipettes jaugées stériles, de OJ; 1,O et 10 ml de capa-
cités.
5.3.2 Milieu sélectif
7 Préparation des échantillons
Les milieux utilisés doivent convenir aux organismes utilisés
, en
cultures, mixtes ou pures.
7.1 Qu’il s’agisse d’eau naturelle, d’échantillons d’eau de sur-
face ou de cultures pures diluées pour évaluer les membranes
Préparer le milieu et verser une quantité déterminée de milieu
filtrantes, il y aura lieu de procéder à une analyse avant l’essai,
soit dans des boîtes de Petri (dans le cas de numérations sur
afin d’obtenir la dilution à utiliser (9.2.1). À tous les stades, bien
membranes filtrantes et de numérations par les techniques
mélanger (6.2) les échantillons ou les cultures afin d’obtenir une
d’étalement en surface), soit dans des tubes appropriés (dans le
répartition homogène.
cas d’incorporation en gélose). La couche de gélose dans les
boîtes de Petri doit être d’au moins 3 mm. Tous les milieux utili-
sés pour chaque essai doivent être préparés à partir du même
7.2 Si l’on utilise des cultures pures en état de stress ou non,
lot et en même temps.
établir la concentration des organismes d’essai sur un milieu
approprié afin de s’assurer que l’on utilise bien le bon facteur de
dilution pour obtenir la gamme de numérations appropriée
(9.2.1).
6 Appareillage et verrerie
7.3 Les échantillons utilisés pour établir les dilutions appro-
Nettoyer soigneusement toute la verrerie et l’équipement de fil-
priées et les gammes de numérations adéquates peuvent servir
tration, en utilisant un détergent approprié dans de l’eau
au cours de l’essai définitif s’ils sont réfrigérés immédiatement
chaude; rincer à l’eau chaude puis avec de l’eau distillée.
après l’essai et s’ils ne sont pas conservés trop longtemps (pas
plus de 48 h). Bien mélanger les échantillo
...
Norme internationale
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Première édition - 1985-03-15
CDU 628.163.067 : 579.68.08 Réf. no : ISO 77044985 (t)
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eau, qualité, analyse microbiologique, membrane, filtre, essai.
Descripteurs :
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Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptes par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 7704 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147,
Qualité de l’eau.
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Qualité de l’eau - Évaluation des membranes filtrantes
utilisées pour des analyses microbiologiques
que la grandeur des pores sont retenues à la surface ou près de
0 Introduction
la surface lorsqu’on applique une aspiration ou une pression.
De nombreuses études comparatives effectuées sur des mem-
branes filtrantes font état de différences importantes entre les
diverses compositions chimiques, les diverses sortes et les dif- 4 Principe
férents lots de membranes, en ce qui concerne leur capacité à
retenir les bactéries des échantillons d’eau. 4.1 Filtration d’échantillons aqueux ou de cultures pures en
suspension liquide au travers des membranes filtrantes d’essai,
II est donc très important que l’un des outils de base de la à l’aide de techniques conventionnelles. Au minimum, cinq
microbiologie aquatique, en l’occurrence la membrane filtrante, répétitions par échantillon sont nécessaires. On considére
soit normalisé autant que possible, non seulement pour obtenir qu’un total de 200 colonies est le nombre minimal permettant
des résultats homogènes mais aussi pour permettre I’élabora- d’effectuer des comparaisons statistiques.
tion de procédures normalisées pour la numération de micro-
organismes spécifiques.
4.2 Évaluation de l’efficacité de chaque type de membrane fil-
trante
1 Objet
a) par comparaison des numérations obtenues sur un
milieu non sélectif à l’aide des méthodes par étalement en
1 .l La présente Norme internationale spécifie des méthodes
surface ou par incorporation en gélose et de celles obtenues
d’évaluation et de comparaison de membranes filtrantes con-
à l’aide de la méthode par filtration sur membrane sur le
tues pour la numération d’organismes spécifiques et de popu-
même milieu (dans ces conditions, les meilleurs résultats
lations microbiennes mixtes.
obtenus expérimentalement par filtration sur membrane ne
représentent que 80 à 90 % de ceux obtenus par étalement
en surface);
1.2 Les méthodes fournissent une ligne de conduite générale
pour la comparaison du taux de rétention des bactéries, des
b) par comparaison des résultats obtenus pour des orga-
levures et d’autres champignons sur les membranes filtrantes
nismes spécifiques, sur un milieu sélectif des membranes fil-
par rapport aux taux obtenus par les techniques d’étalement en
trantes, à l’aide des méthodes par étalement en surface ou
surface et d’incorporation en gélose.
par incorporation en gélose, et de ceux obtenus à l’aide de la
méthode par filtration sur membrane sur le même milieu.
2 Domaine d’application
NOTE - II se peut que la méthode par incorporation en géiose four-
nisse moins de colonies que la méthode par étalement en surface.
2.1 La présente méthode est applicable pour l’évaluation, par
les utilisateurs, de tout filtre microporeux destiné à l’analyse
d’échantillons d’eau. Elle s’applique aux filtres de toute porosité
5 Diluants, milieux de culture et réactifs
pouvant être utilisés dans les conditions décrites.
5.1 Composants de base
2.2 Pour certaines applications particulieres, il est possible
que des milieux, une température et une durée d’incubation,
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est recom-
une atmosphère de même que des témoins (technique par éta-
mandé d’utiliser, pour la préparation des diluants et des milieux
lement en surface ou par incorporation en gelose) appropriés
de culture, des composants de base déshydratés ou des milieux
soient à employer. Les résultats obtenus pour une espéce ou un
complets déshydratés. Les prescriptions du fabricant doivent
groupe de micro-organismes peuvent ne pas être valables pour
être suivies scrupuleusement.
d’autres groupes.
Les produits chimiques utilisés pour la préparation des milieux
de culture et des réactifs doivent être de qualité analytique
reconnue.
3 Définition
L’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou déminéralisée,
membrane filtrante : Milieu de filtration mince, non fibreux,
exempte de substances susceptibles d’inhiber la croissance des
pour les liquides et les gaz, dont le diamètre moyen des pores
micro-organismes dans les conditions de l’essai.
est supérieur à 0,Ol prn et sur lequel les particules plus grandes
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ISO 77044985 (F)
Les mesurages du pH doivent être effectués au pH-mètre, les 6.1 Unités de filtration sous vide pour membranes fil-
mesures étant rapportées à la température ambiante. trantes, munies d’une fiole à filtrer sous vide, de tubes et d’un
flacon destiné à retenir l’humidité.
Si les milieux de culture préparés ne sont pas utilisés extem-
poranément, ils doivent, sauf spécification contraire, être con-
6.2 Agitateur Vortex ou équipe
ment semblable, pour
servés à l’obscurité à 4 + 2 OC pendant 1 mois au maximum,
mélanger les échantillons (facultatif).
dans des conditions évitant toute modification de leur composi-
tien.
6.3 Pinces à mors plats (sans griffes).
5.2 Diluant
6.4 Incubateur, bain d’eau ou cuve chauffante, réglables
à diverses températures.
Tout diluant stérile approprié peut être utilisé. L’emploi d’eau
peptonée à 0,l % (mlm) est recommandé pour la filtration sur
L’incubateur approprié doit être fréquemment contrôlé afin de
membranes afin de réduire au minimum l’effet de choc que s’assurer que la température désirée y règne bien pendant au
pourrait produire le contact de l’eau pure sur les micro- moins 24 h. Pour cela, un thermomètre dont la précision a
organismes.
préalablement été vérifiée doit être placé à l’intérieur de I’incu-
bateur, sur la tablette où seront placées les boîtes.
5.3 Milieu gélosé 6.5 Compteur de colonies, à grossissement et éclairage
appropriés.
5.3.1 Milieu non sélectif
66 . Compteur manuel de colonies.
La gél ose tryptone soja ou tout autre milieu semblable peut être
utilisé dans le présent essai.
. Autoclave ou autre équipement de stérilisation.
67
Préparer le milieu et verser une quantité déterminée de milieu
68 . Table rotative (facultative) et tige d’étalem ent en
soit dans des boîtes de Petri (dans le cas de numérations sur
membranes filtrantes et de numérations par les techniques verre.
d’étalement en surface), soit dans des tubes appropriés (dans le
6.9 Boîtes de Petri stériles, munies d’un couvercle percé
cas d’incorporation en gélose). La couche de gélose dans les
boîtes de Petri doit être d’au moins 3 mm. Tous les milieux utili- de taille appropriée.
sés pour chaque essai doivent être préparés à partir du même
lot et en même temps.
6.10 Pipettes jaugées stériles, de OJ; 1,O et 10 ml de capa-
cités.
5.3.2 Milieu sélectif
7 Préparation des échantillons
Les milieux utilisés doivent convenir aux organismes utilisés
, en
cultures, mixtes ou pures.
7.1 Qu’il s’agisse d’eau naturelle, d’échantillons d’eau de sur-
face ou de cultures pures diluées pour évaluer les membranes
Préparer le milieu et verser une quantité déterminée de milieu
filtrantes, il y aura lieu de procéder à une analyse avant l’essai,
soit dans des boîtes de Petri (dans le cas de numérations sur
afin d’obtenir la dilution à utiliser (9.2.1). À tous les stades, bien
membranes filtrantes et de numérations par les techniques
mélanger (6.2) les échantillons ou les cultures afin d’obtenir une
d’étalement en surface), soit dans des tubes appropriés (dans le
répartition homogène.
cas d’incorporation en gélose). La couche de gélose dans les
boîtes de Petri doit être d’au moins 3 mm. Tous les milieux utili-
sés pour chaque essai doivent être préparés à partir du même
7.2 Si l’on utilise des cultures pures en état de stress ou non,
lot et en même temps.
établir la concentration des organismes d’essai sur un milieu
approprié afin de s’assurer que l’on utilise bien le bon facteur de
dilution pour obtenir la gamme de numérations appropriée
(9.2.1).
6 Appareillage et verrerie
7.3 Les échantillons utilisés pour établir les dilutions appro-
Nettoyer soigneusement toute la verrerie et l’équipement de fil-
priées et les gammes de numérations adéquates peuvent servir
tration, en utilisant un détergent approprié dans de l’eau
au cours de l’essai définitif s’ils sont réfrigérés immédiatement
chaude; rincer à l’eau chaude puis avec de l’eau distillée.
après l’essai et s’ils ne sont pas conservés trop longtemps (pas
plus de 48 h). Bien mélanger les échantillo
...
Questions, Comments and Discussion
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