ISO 6341:1996
(Main)Water quality — Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) — Acute toxicity test
Water quality — Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) — Acute toxicity test
Describes a method for the determination of the acute toxicity to Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) of chemical substances which are soluble under the conditions of test or can be maintained as a stable suspension or dispersion, treated or untreated sewage effluents, surface or ground waters. Replaces the second edition.
Qualité de l'eau — Détermination de l'inhibition de la mobilité de Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) — Essai de toxicité aiguë
La présente Norme internationale prescrit une méthode pour la détermination de la toxicité aiguë vis-à-vis de Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) a) des substances chimiques solubles dans les conditions de l'essai ou pouvant être maintenues en suspension ou en dispersion stable dans les conditions de l'essai; b) des effluents industriels et urbains, épurés ou non, s'il y a lieu après décantation, filtration ou centrifugation; c) des eaux de surface et des eaux souterraines.
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL IS0
STANDARD
6341
Third edition
1996-04-o 1
Water quality - Determination of the
inhibition of the mobility of Daphnia
magna Straus (Cladocera, Crustacea) -
Acute toxicity test
Qua/it6 de I’eau - Dktermination de /‘inhibition de la mobilit de Daphnia
magna Straus (Cladocera, Crustacea) - Essai de toxicit aigu6
Reference number
IS0 6341 :I 996(E)
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IS0 6341:1996(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(I EC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard IS0 6341 was prepared by Technical Committee
lSO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5, Biologica/ methods.
This third edition cancels and replaces the second edition
(IS0 6341:1989), of which it constitutes a technical revision.
Annex A forms an in tegral part of this Inter al Standard. Annex B is
for information only.
0 IS0 1996
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopyrng and
m icrofilm, publisher.
without permi ssion in writing from the
International Organization fo r Standa rdization
Case Postale 56 l CH-121 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
ii
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IS0 6341:1996(E)
INTERNATIONAL STANDARD 0 ISO
Water quality - Determination of the inhibition of the
mobility of Daphnia magna Straus (Cladocera,
Crustacea) - Acute toxicity test
IS0 5813:1983, Water quality - Determination of
1 Scope
dissolved oxygen - lodome tic method.
This International Standard describes a method for the
IS0 5814:1990, Water quality - Determination of
determination of the acute toxicity to Daphnia magna
dissolved oxygen - Electrochemical probe method.
Straus (Cladocera, Crustacea) of
chemical substances which are soluble under the
a)
conditions of the test, or can be maintained as a
stable suspension or dispersion under the con- 3 Principle
ditions of the test;
Determination of the initial concentration (that is, the
industrial or sewage effluents, treated or un-
b) concentration present at the beginning of the test)
treated, after decantation, filtration or
which, in 24 h, immobilizes 50 % of exposed Daphnia
centrifugation if necessary;
magna, under the conditions defined in this Inter-
national Standard.
d surface or ground waters.
This concentration, known as the effective initial
inhibitory concentration, is designated 24 h - EC50i.
2
Normative references
If possible and if necessary, the initial concentration
The following standards contain provisions which,
which immobilizes 50 % of the exposed Daphnia
through reference in this text, constitute provisions
magna in 48 h can also be determined. This concen-
of this International Standard. At the time of publi-
tration is designated 48 h - EC50i.
cation, the editions indicated were valid. All standards
are subject to revision, and parties to agreements
An indication of the lowest concentration tested
based on this International Standard are encouraged which immobilizes all the Daphnia magna and the
to investigate the possibility of applying the most re-
highest concentration tested which does not
cent editions of the standards indicated below.
immobilize any of the Daphnia magna is desirable and
Members of IEC and IS0 maintain registers of cur-
provides useful information in cases where the
rently valid International Standards. 24 h - EC50i and, where appropriate, the 48 h -
EC50i cannot be determined.
IS0 5667-2: 1991, Water quality - Sampling -
Part 2: Guidance on sampling techniques. The test is carried out in one or two stages:
- a preliminary test which determines the range of
IS0 5725-2: 1994, Accuracy (trueness and precision)
concentrations to be tested in the final toxicity test
of measurement methods and results - Part 2: Basic
and gives an approximate value of the 24 h -
method for the determination of repeatability and
EC50i and, where appropriate, the 48 h - EC50,;
reproducibility of a standard measurement method.
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0 IS0
IS0 6341:1996(E)
The dilution water thus prepared shall have a pH of
- a definitive test, conducted when the approximate
value given by the preliminary test is not sufficient, 7,8 + 0,2, a hardness of 250 mg/l + 25 mg/l (ex-
which permits calculation of the 24 h - EC50i and pressed as CaCO,), a molar Ca/Mg ratio close to 4: 1
48 h - EC50, and determines concentrations cor- and a dissolved oxygen concentration above 7 mg/l.
responding to 0 % and 100 % immobilization.
Natural waters with pH and hardness characterist its
If the method described in this International Standard
similar to dilution water may be used for culturing.
is used for chemical substances, a limit test can be
performed at 100 mg/l or at a lower concentration, at
As an example, the preparation of water meeting
which the substance is soluble or is in stable disper-
these requirements is described below:
sion under the conditions of the test (see 8.5).
a) Prepare the following solutions:
Analysis of these substances should be conducted as
soon as possible. If these analyses show that, for
1) Calcium chloride solution
each concentration tested, the standard deviation of
the concentrations measured during the test, ran-
Dissolve II,76 g of calcium chloride dihydrate
domly varying, is not greater than 20 % of the mean,
(CaCI,.2H,O) in distilled or deionized water and
the median inhibitory concentrations may be calcu-
dilute to 1 litre.
lated from the means of the measurements rather
than from the initial concentrations; they are then
Magnesium sulfate solution
2)
designated 24 h - EC50 and, where appropriate,
48 h - EC50.
Dissolve 4,93 g of magnesium sulfate
hepta hydrate (MgSO,.7H,O) in distilled or
deionized water and dilute to 1 Iitre.
4 Test environment
Sodium bicarbonate solution
3)
The storage of the solutions and the exposure of
organisms as described in this International Standard
Dissolve 2,59 g of sodium bicarbonate (NaHCO,)
shall be carried out either in the dark or under a
in distilled or deionized water and dilute to 1 Iitre.
16 h/8 h light/dark photoperiod. The testing atmos-
phere shall be at 20 “C + 2 “C and free from vapours
Potassium chloride solution
4)
or dusts toxic to Da&& magna. Photo-degradable
chemicals shall be tested in the dark.
Dissolve 0,23 g of potassium chloride (KCI) in dis-
tilled or deionized water and dilute to 1 Iitre.
5 Reagents and materials
b) Mix 25 ml of each of the four solutions 1) to 4)
and complete the total volume to 1 litre with dis-
5.1 Test organism: Daphnia magna Straus
tilled or deionized water.
(Cladocera, Crustacea), at least third generation, ob-
tained by acyclical parthenogenesis under specified
The dilution water shall be aerated until the dissolved
breeding conditions.
oxygen concentration has reached saturation and the
pH has stabilized. If necessary, adjust the pH to
The animals used for the test shall be less than 24 h
7,8 + 0,2 by adding sodium hydroxide (NaOH) sol-
-
old. Transfer gravid females to vessels with fresh di-
ution or hydrochloric acid (HCI) solution. The dilution
lution water and collect newly released neonates
water prepared in this way shall not be further aerated
within 24 h.
before use.
Since the sensitivity of Daphnia magna to toxicants is
age-dependent and source-dependent, the age and
NOTE 1 If the test is performed for purposes necessitat-
source of the Daphnia magna culture shall be indi-
ing the use of a dilution water with characteristics differing
cated in the test report.
from those described above, mention should be made in the
test report of the main characteristics of the synthetic di-
lution water used.
5.2 Dilution water
Dissolve known quantities of reagents of recognized
analytical grade in ground water, distilled water or
deionized water of at least equivalent purity, having a 5.3 Potassium dichromate (K,Cr,O,), of recognized
maximum conductance of 10 pS/cm. analytical grade
2
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0 IS0 IS0 6341:1996(E)
a solvent is used, the concentration of the solvent in
6 Apparatus
the final test solution shall not exceed 0,l ml/l, and
two control solutions, one with no solvent, the other
Ordinary laboratory apparatus, and in particular the
with the maximum concentration of solvent, shall be
following.
included in the test.
61 . Dissolved-oxygen measuring apparatus.
No single procedure for the preparation of stock sol-
utions of poorly soluble substances can be recom-
6.2 Test containers, of chemically inert material and mended due to the differing nature of chemicals.
of sufficient capacity (for example glass test tubes or
beakers).
7.2.2 Preparation of test solutions
Before use, the test containers shall be carefully
The test solutions shall be prepared (see 8.1) by add-
washed then rinsed, first with distilled water and then
ing the stock solutions or effluent samples (7.2.1) to
with the dilution water (5.2). At the end of the test,
the dilution water (5.2) in specified quantities.
the containers shall be emptied, rinsed with water to
eliminate any trace of the test solution and then dried.
If the stock solutions are prepared in deionized or
distilled water, it is recommended not to add more
than 10 ml of stock solution per litre of dilution water.
7 Treatment and preparation of samples
7.1 Special precautions for sampling and
8 Procedure
transportation of samples of water or effluent
8.1 General
For the sampling of water or effluent, refer to the
general procedure specified in IS0 5667-2. Bottles
Place increasing volumes of the test solution (7.2.2),
shall be completely filled to exclude air.
or effluent or water sample (7.1), in a series of test
containers (6.2) and add the dilution water (5.2) so as
The toxicity test shall be carried out as soon as poss-
to obtain the desired concentrations for the test. Place
ible, within 6 h of collection. If this time interval can-
the Daphnia magna in the test containers so that the
not be observed, cool the sample (+ 4 “C) at the place
total number of Daphnia magna per container does
of collection. In this case, the sample shall be ana-
not exceed 20, and the density of Daphnia magna per
lysed within 48 h after collection.
container does not exceed 5 Daphnia magna per
NOTE 2 If testing cannot be carried out within 48 h, the 10 ml of solution.
sample may be frozen for testing within 2 months of col-
lection. For each series of tests, prepare a control having a
volume of dilution water (5.2) equal to the volume of
the test solutions and introduce the same number of
7.2 Preparation of solutions of substances
Daphnia magna as in the test solutions. If a solvent is
to be tested
used to solubilize or disperse substances, prepare a
second control with the dilution water containing the
7.2.1 Preparation of stock solutions
solvent at the maximum concentration used (i.e. not
greater than 0,l ml/l).
The stock solutions of the substances to be tested
shall be prepared by dissolving a known quantity of
Animals must not be fed during the test and vessels
the substance to be tested in a specified vo
...
NORME INTERNATIONALE ISO 6341:1996
RECTIFICATIF TECHNIQUE 1
Publié 1998-06-l 5
INTERNATlONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION . MEXJJYHAPOflHM OPfAHM3AUMJl fl0 CTAHJlAPTM3AUMM. ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Qualité de l’eau - Détermination de l’inhibition de la
mobilité de Daphnia magna Straus (Cladocera,
Crustacea) -
Essai de toxicité aiguë
RECTIFICATIF TECHNIQUE 1
Water quality - Detennination of the inhibition of the mobi/ity of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) -
Acute toxicity test
TECHNICAL CORRIGENDUM 1
Le Rectificatif technique 1 à la Norme internationale ISO 6341:1996 a été élaboré par le comité technique
ISOKC 147, Qualité de l’eau, sous-comité SC 5, Méthodes biologiques.
Page 4
Paragraphe 8.4
Dans le deuxième alinéa, troisième ligne, remplacer le texte et.
comprise entre 0,6 mg/1 et 1,7 mg/l, . .>> par le texte
« . . . comprise entre 0,6 mg/l et 2,l mg/l, . . . ».
Page 5
Paragraphe 9.2
Dans la deuxième ligne du terme c), remplacer le texte <<. comprise entre 0,6 mg/1 et 1,7 mg/l.>s par le texte
«. comprise entre 0,6 mg/1 et 2,l mg/l.>B.
ICS 13.060.01 Réf. no ISO 6341:1996/Cor.l:1998(F)
Descripteurs: eau, qualit& pollution de l’eau, essai, essai des eaux, essai biologique, ddtermination, toxicit6, daphnie.
@ Is01998
Imprimé en Suisse
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Page blanche
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NORME Iso
INTERNATIONALE 6341
TroisiGme Adition
1996-04-01
- Détermination de
Qualité de l’eau
l’inhibition de la mobilité de Daphnia
magna Straus (Cladocera, Crustacea) -
Essai de toxicité aiguë
Water quality - Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia
magna Straus (Cladocera, Crustacea) - Acute toxicity test
Numéro de référence
ISO 6341:1996(F)
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ISO 6341:1996(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne; .la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 6341 a été élaborée par le comité technique
lSO/lC 147, Qualité de l’eau, sous-comité SC 5, Méthodes biologiques.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition
(ISO 6341:1989), dont elle constitue une révision technique.
L’annexe A fait partie intégrante de la présente Norme internationale.
L’annexe B est donnée uniquement à titre d’information.
0 ISO 1996
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-121 1 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
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ISO 6341:1996(F)
NORME INTERNATIONALE Q ISO
Qualité de l’eau - Détermination de l’inhibition de la
mobilité de Daphnia magna Straus (Cladocera,
- Essai de toxicité aiguë
Crustacea)
thode de base pour la détermination de la répétabilité
1 Domaine d’application
et de la reproductibilité d’une méthode de mesure
normalisée.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode pour la détermination de la toxicité aiguë vis-
ISO 5813:1983, Qualité de l’eau - Dosage de
à-vis de Daphnia magna Straus (Cladocera,
l’oxygène dissous - Méthode iodométrique.
Crus tacea)
ISO 5814:1990, Qualité de l’eau - Dosage de
des substances chimiques solubles dans les
a)
l’oxygène dissous - Méthode électrochimique à la
conditions de l’essai ou pouvant être maintenues
sonde.
en suspension ou en dispersion stable dans les
conditions de l’essai;
3 Principe
des effluents industriels et urbains, épurés ou
b)
non, s’il y a lieu après décantation, filtration ou
Détermination, dans les conditions définies par la
centrifugation;
présente Norme internationale, de la concentration
initiale (c’est-à-dire la concentration présente au début
des eaux de surface et des eaux souterraines.
cl
de l’essai) qui, en 24 h, immobilise 50 % de Daphnia
magna mises en expérimentation.
2 Références normatives
Cette concentration, dite concentration efficace ini-
tiale inhibitrice, est désignée par CE50i - 24 h.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite, consti-
Si possible et si nécessaire, la concentration initiale
tuent des dispositions valables pour la présente
qui, en 48 h, immobilise 50 % de Daphnia magna mi-
Norme internationale. Au moment de la publication,
ses en expérimentation peut être également déter-
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
minée. Cette concentration est désignée par
norme est sujette à révision et les parties prenantes
CE50i - 48 h.
des accords fondés sur la présente Norme internatio-
nale sont invitées à rechercher la possibilité d’appli-
Dans les cas où il est impossible de déterminer la
quer les éditions les plus récentes des normes
CE50i - 24 h et éventuellement la CE50, - 48 h,
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO
l’indication de la plus faible concentration testée qui
possèdent le registre des Normes internationales en
immobilise toutes les Daphnia magna et de la plus
vigueur à un moment donné.
forte concentration testée qui n’immobilise aucune
Daphnia magna est souhaitable et constitue une in-
ISO 5667-2: 1991, Qualité de l’eau - Échantillonnage
formation utile.
- Partie 2: Guide général sur les techniques
L’essai est conduit en une ou deux étapes:
d’échantillonnage.
- un essai préliminaire qui sert à déterminer la
ISO 5725-2:1994, Exactitude (justesse et fidélité) des
gamme des concentrations pour l’essai définitif et
résultats et méthodes de mesure - Partie 2: Mé-
1
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0 ISO
ISO 6341:1996(F)
qui donne une indication approximative de la provenance de l’élevage de Daphnia magna doivent
CE50i - 24 h et éventuellement de la CE50i - être mentionnés dans le rapport d’essai.
48 h;
5.2 Eau de dilution
- un essai définitif, effectué lorsque la valeur ap-
proximative fournie par l’essai préliminaire ne peut
Dissoudre des quantités connues de réactifs de qua-
suffire, qui permet de calculer la CE50, - 24 h et
lité analytique reconnue dans de l’eau souterraine, de
la CE50i - 48 h et qui sert à déterminer les
l’eau distillée ou de l’eau déionisée de pureté au
concentrations correspondant à 0 % et à 100 %
moins équivalente et de conductivité au plus égale à
d’immobilisation.
10 pS/cm.
Lorsque la méthode décrite dans la présente Norme
L’eau de dilution ainsi préparée doit avoir un pH de
internationale est appliquée aux substances chimi-
7,8 + 0,2, une dureté totale de 250 mg/1 + 25 mg/1
ques, un essai limite peut être effectué à 100 mg/1
(exprimée en CaCO,), un rapport molaire Ca/Mg voisin
ou à une concentration inférieure à laquelle la subs-
de 4: 1 et une concentration en oxygène dissous su-
tance est soluble ou en suspension stable, dans les
périeure à 7 mg/l.
conditions de l’essai (voir 8.5).
Les eaux naturelles de pH et de caractéristiques de
II est recommandé d’effectuer des analyses de ces
dureté similaires à l’eau de dilution peuvent être utili-
substances dès que possible. Si ces analyses mon-
sées pour les cultures.
trent que, pour chaque concentration expérimentée,
À titre d’exemple, la préparation d’une eau répondant
l’écart-type des concentrations mesurées au cours de
à ces caractéristiques est décrite ci-après.
l’essai, variant de façon aléatoire, ne s’écarte pas de
+ 20 % de la moyenne, les concentrations inhibitrices
-
a) Préparer les solutions suivantes:
médianes peuvent être calculées à partir des moyen-
nes des mesures plutôt qu’à partir des concentrations
1) Solution de chlorure de calcium
initiales; elles sont alors désignées par CE50 - 24 h
et éventuellement, CE50 - 48 h.
Dissoudre Il,76 g de chlorure de calcium
dihydraté (CaCl,,2H,O) dans de l’eau distillée ou
déionisée et compléter à 1 litre.
4 Environnement de l’essai
2) Solution de sulfate de magnésium
La conservation des solutions et la mise en expéri-
mentation des organismes comme décrites dans la
Dissoudre 4,93 g de sulfate de magnésium
présente Norme internationale doivent être effec-
heptahydraté (MgSO,,7H,O) dans de l’eau distil-
tuées soit dans l’obscurité, soit sous un cycle
lée ou déionisée et compléter à 1 litre.
jour/nuit de 16 h/8 h. L’enceinte d’essai doit être
maintenue à 20 “C + 2 “C et être exempte de pous-
3) Solution d’hydrogénocarbonate de sodium
sières ou de vapeurs toxiques vis-à-vis de Daphnia
magna. Les substances chimiques photodégradables
Dissoudre 2,59 g d’hydrogénocarbonate de so-
doivent être testées dans l’obscurité.
dium (NaHCO,) dans de l’eau distillée ou
déionisée et compléter à 1 litre.
5 Réactifs et produits
4) Solution de chlorure de potassium
Dissoudre 0,23 g de chlorure de potassium (KCI)
5.1 Organismes pour essai: Daphnia magna Straus
dans de l’eau distillée ou déionisée et compléter
(Cladocera, Crustacea) de troisième génération au
à 1 litre.
moins, obtenue par parthénogenèse acyclique dans
des conditions d’élevage définies.
b) Mélanger 25 ml de chacune des quatre solutions
Les animaux utilisés pour l’essai doivent être âgés de 1) à 4) et amener le volume total à 1 litre avec de
moins de 24 h. Transférer les femelles porteuses l’eau distillée ou déionisée.
dans des récipients contenant de l’eau de dilution
L’eau de dilution doit être aérée jusqu’à ce que la
fraîche et recueillir les nouveau-nés juste libérés dans
concentration en oxygène dissous ait atteint la valeur
les 24 h.
de saturation dans l’air et jusqu’à stabilisation du pH.
La sensibilité des Daphnia magna aux toxiques étant
Si nécessaire, ajuster le pH à 7,8 & 0,2 par ajout
fonction de leur âge et de leur provenance, l’âge et la d’une solution d’hydroxyde de sodium (NaOH) ou
2
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ISO 6341:1996(F)
0 ISO
d’acide chlorhydrique (HCI). L’eau de dilution ainsi
7.2 Préparation des solutions des
préparée ne doit plus être aérée avant emploi.
substances à expérimenter
NOTE 1 Si l’essai est conduit en vue de besoins qui im-
7.2.1 Préparation des solutions mères
pliquent l’utilisation d’une eau de dilution dont les caracté-
ristiques different de celles décrites ci-dessus, il convient
Les solutions mères des substances à expérimenter
de mentionner dans le rapport d’essai les principales carac-
doivent être préparées par dissolution d’une quantité
téristiques de l’eau de dilution synthétique utilisée.
connue de la substance à expérimenter dans un vo-
lume défini d’eau de dilution (5.2) d’eau déionisée ou
d’eau distillée dans un récipient en verre. Elles doivent
5.3 Dichromate de potassium (K,Cr,O,), de qualité
être préparées au moment de l’emploi à moins que la
analytique reconnue.
substance en solution soit connue pour être stable,
auquel cas la solution mère peut être préparée jusqu’à
2 jours avant l’essai.
6 Appareillage
Les solutions mères de substances de faible solubilité
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce
aqueuse peuvent être solubilisées ou dispersées di-
qui suit.
rectement dans le milieu par des moyens adéquats,
incluant des dispositifs à ultrasons ou des solvants de
faible toxicité vis-à-vis de Daphnia magna. II convient
6.1 Appareil de mesurage de l’oxygène dissous.
d’utiliser des solvants seulement si la CE50 est su-
périeure à la solubilité de la substance d’essai. Si un
solvant est utilisé, la concentration du solvant dans la
6.2 Récipients pour essai, en matériau chimi-
solution d’essai finale ne doit pas dépasser 0,l ml/l
quement inerte et de capacité suffisante (par exem-
et deux essais témoins, l’un ne contenant aucun sol-
ple: tubes à essais ou béchers en verre).
vant, l’autre contenant la concentration maximale en
solvant, doivent être inclus dans l’essai.
Avant utilisation, les récipients pour essai doivent être
soigneusement lavés puis rincés successivement
En raison des différences de nature des substances
avec de l’eau distillée et de l’eau de dilution (5.2). À
chimiques, aucune procédure unique ne peut être
la fin de l’essai, les récipients doivent être vidés, rin-
conseillée pour la préparation des solutions mères de
cés avec de l’eau pour éliminer toute trace de la so-
substances de faible solubilité aqueuse.
lution d’essai, puis séchés.
7.2.2 Préparation des solutions d’essai
7 Traitement et préparation des
Les solutions d’essai doivent être préparées (voir
échantillons 8.1) par ajout des solutions mères ou des échantillons
d’effluents (7.2.1) à l’eau de dilution (5.2) en quantités
définies.
7.1 Précautions particulières concernant le
Lors
...
NORME INTERNATIONALE ISO 6341:1996
RECTIFICATIF TECHNIQUE 1
Publié 1998-06-l 5
INTERNATlONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION . MEXJJYHAPOflHM OPfAHM3AUMJl fl0 CTAHJlAPTM3AUMM. ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Qualité de l’eau - Détermination de l’inhibition de la
mobilité de Daphnia magna Straus (Cladocera,
Crustacea) -
Essai de toxicité aiguë
RECTIFICATIF TECHNIQUE 1
Water quality - Detennination of the inhibition of the mobi/ity of Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) -
Acute toxicity test
TECHNICAL CORRIGENDUM 1
Le Rectificatif technique 1 à la Norme internationale ISO 6341:1996 a été élaboré par le comité technique
ISOKC 147, Qualité de l’eau, sous-comité SC 5, Méthodes biologiques.
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Paragraphe 8.4
Dans le deuxième alinéa, troisième ligne, remplacer le texte et.
comprise entre 0,6 mg/1 et 1,7 mg/l, . .>> par le texte
« . . . comprise entre 0,6 mg/l et 2,l mg/l, . . . ».
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Paragraphe 9.2
Dans la deuxième ligne du terme c), remplacer le texte <<. comprise entre 0,6 mg/1 et 1,7 mg/l.>s par le texte
«. comprise entre 0,6 mg/1 et 2,l mg/l.>B.
ICS 13.060.01 Réf. no ISO 6341:1996/Cor.l:1998(F)
Descripteurs: eau, qualit& pollution de l’eau, essai, essai des eaux, essai biologique, ddtermination, toxicit6, daphnie.
@ Is01998
Imprimé en Suisse
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NORME Iso
INTERNATIONALE 6341
TroisiGme Adition
1996-04-01
- Détermination de
Qualité de l’eau
l’inhibition de la mobilité de Daphnia
magna Straus (Cladocera, Crustacea) -
Essai de toxicité aiguë
Water quality - Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia
magna Straus (Cladocera, Crustacea) - Acute toxicity test
Numéro de référence
ISO 6341:1996(F)
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ISO 6341:1996(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne; .la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 6341 a été élaborée par le comité technique
lSO/lC 147, Qualité de l’eau, sous-comité SC 5, Méthodes biologiques.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition
(ISO 6341:1989), dont elle constitue une révision technique.
L’annexe A fait partie intégrante de la présente Norme internationale.
L’annexe B est donnée uniquement à titre d’information.
0 ISO 1996
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-121 1 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
ii
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ISO 6341:1996(F)
NORME INTERNATIONALE Q ISO
Qualité de l’eau - Détermination de l’inhibition de la
mobilité de Daphnia magna Straus (Cladocera,
- Essai de toxicité aiguë
Crustacea)
thode de base pour la détermination de la répétabilité
1 Domaine d’application
et de la reproductibilité d’une méthode de mesure
normalisée.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode pour la détermination de la toxicité aiguë vis-
ISO 5813:1983, Qualité de l’eau - Dosage de
à-vis de Daphnia magna Straus (Cladocera,
l’oxygène dissous - Méthode iodométrique.
Crus tacea)
ISO 5814:1990, Qualité de l’eau - Dosage de
des substances chimiques solubles dans les
a)
l’oxygène dissous - Méthode électrochimique à la
conditions de l’essai ou pouvant être maintenues
sonde.
en suspension ou en dispersion stable dans les
conditions de l’essai;
3 Principe
des effluents industriels et urbains, épurés ou
b)
non, s’il y a lieu après décantation, filtration ou
Détermination, dans les conditions définies par la
centrifugation;
présente Norme internationale, de la concentration
initiale (c’est-à-dire la concentration présente au début
des eaux de surface et des eaux souterraines.
cl
de l’essai) qui, en 24 h, immobilise 50 % de Daphnia
magna mises en expérimentation.
2 Références normatives
Cette concentration, dite concentration efficace ini-
tiale inhibitrice, est désignée par CE50i - 24 h.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite, consti-
Si possible et si nécessaire, la concentration initiale
tuent des dispositions valables pour la présente
qui, en 48 h, immobilise 50 % de Daphnia magna mi-
Norme internationale. Au moment de la publication,
ses en expérimentation peut être également déter-
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
minée. Cette concentration est désignée par
norme est sujette à révision et les parties prenantes
CE50i - 48 h.
des accords fondés sur la présente Norme internatio-
nale sont invitées à rechercher la possibilité d’appli-
Dans les cas où il est impossible de déterminer la
quer les éditions les plus récentes des normes
CE50i - 24 h et éventuellement la CE50, - 48 h,
indiquées ci-après. Les membres de la CEI et de I’ISO
l’indication de la plus faible concentration testée qui
possèdent le registre des Normes internationales en
immobilise toutes les Daphnia magna et de la plus
vigueur à un moment donné.
forte concentration testée qui n’immobilise aucune
Daphnia magna est souhaitable et constitue une in-
ISO 5667-2: 1991, Qualité de l’eau - Échantillonnage
formation utile.
- Partie 2: Guide général sur les techniques
L’essai est conduit en une ou deux étapes:
d’échantillonnage.
- un essai préliminaire qui sert à déterminer la
ISO 5725-2:1994, Exactitude (justesse et fidélité) des
gamme des concentrations pour l’essai définitif et
résultats et méthodes de mesure - Partie 2: Mé-
1
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0 ISO
ISO 6341:1996(F)
qui donne une indication approximative de la provenance de l’élevage de Daphnia magna doivent
CE50i - 24 h et éventuellement de la CE50i - être mentionnés dans le rapport d’essai.
48 h;
5.2 Eau de dilution
- un essai définitif, effectué lorsque la valeur ap-
proximative fournie par l’essai préliminaire ne peut
Dissoudre des quantités connues de réactifs de qua-
suffire, qui permet de calculer la CE50, - 24 h et
lité analytique reconnue dans de l’eau souterraine, de
la CE50i - 48 h et qui sert à déterminer les
l’eau distillée ou de l’eau déionisée de pureté au
concentrations correspondant à 0 % et à 100 %
moins équivalente et de conductivité au plus égale à
d’immobilisation.
10 pS/cm.
Lorsque la méthode décrite dans la présente Norme
L’eau de dilution ainsi préparée doit avoir un pH de
internationale est appliquée aux substances chimi-
7,8 + 0,2, une dureté totale de 250 mg/1 + 25 mg/1
ques, un essai limite peut être effectué à 100 mg/1
(exprimée en CaCO,), un rapport molaire Ca/Mg voisin
ou à une concentration inférieure à laquelle la subs-
de 4: 1 et une concentration en oxygène dissous su-
tance est soluble ou en suspension stable, dans les
périeure à 7 mg/l.
conditions de l’essai (voir 8.5).
Les eaux naturelles de pH et de caractéristiques de
II est recommandé d’effectuer des analyses de ces
dureté similaires à l’eau de dilution peuvent être utili-
substances dès que possible. Si ces analyses mon-
sées pour les cultures.
trent que, pour chaque concentration expérimentée,
À titre d’exemple, la préparation d’une eau répondant
l’écart-type des concentrations mesurées au cours de
à ces caractéristiques est décrite ci-après.
l’essai, variant de façon aléatoire, ne s’écarte pas de
+ 20 % de la moyenne, les concentrations inhibitrices
-
a) Préparer les solutions suivantes:
médianes peuvent être calculées à partir des moyen-
nes des mesures plutôt qu’à partir des concentrations
1) Solution de chlorure de calcium
initiales; elles sont alors désignées par CE50 - 24 h
et éventuellement, CE50 - 48 h.
Dissoudre Il,76 g de chlorure de calcium
dihydraté (CaCl,,2H,O) dans de l’eau distillée ou
déionisée et compléter à 1 litre.
4 Environnement de l’essai
2) Solution de sulfate de magnésium
La conservation des solutions et la mise en expéri-
mentation des organismes comme décrites dans la
Dissoudre 4,93 g de sulfate de magnésium
présente Norme internationale doivent être effec-
heptahydraté (MgSO,,7H,O) dans de l’eau distil-
tuées soit dans l’obscurité, soit sous un cycle
lée ou déionisée et compléter à 1 litre.
jour/nuit de 16 h/8 h. L’enceinte d’essai doit être
maintenue à 20 “C + 2 “C et être exempte de pous-
3) Solution d’hydrogénocarbonate de sodium
sières ou de vapeurs toxiques vis-à-vis de Daphnia
magna. Les substances chimiques photodégradables
Dissoudre 2,59 g d’hydrogénocarbonate de so-
doivent être testées dans l’obscurité.
dium (NaHCO,) dans de l’eau distillée ou
déionisée et compléter à 1 litre.
5 Réactifs et produits
4) Solution de chlorure de potassium
Dissoudre 0,23 g de chlorure de potassium (KCI)
5.1 Organismes pour essai: Daphnia magna Straus
dans de l’eau distillée ou déionisée et compléter
(Cladocera, Crustacea) de troisième génération au
à 1 litre.
moins, obtenue par parthénogenèse acyclique dans
des conditions d’élevage définies.
b) Mélanger 25 ml de chacune des quatre solutions
Les animaux utilisés pour l’essai doivent être âgés de 1) à 4) et amener le volume total à 1 litre avec de
moins de 24 h. Transférer les femelles porteuses l’eau distillée ou déionisée.
dans des récipients contenant de l’eau de dilution
L’eau de dilution doit être aérée jusqu’à ce que la
fraîche et recueillir les nouveau-nés juste libérés dans
concentration en oxygène dissous ait atteint la valeur
les 24 h.
de saturation dans l’air et jusqu’à stabilisation du pH.
La sensibilité des Daphnia magna aux toxiques étant
Si nécessaire, ajuster le pH à 7,8 & 0,2 par ajout
fonction de leur âge et de leur provenance, l’âge et la d’une solution d’hydroxyde de sodium (NaOH) ou
2
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ISO 6341:1996(F)
0 ISO
d’acide chlorhydrique (HCI). L’eau de dilution ainsi
7.2 Préparation des solutions des
préparée ne doit plus être aérée avant emploi.
substances à expérimenter
NOTE 1 Si l’essai est conduit en vue de besoins qui im-
7.2.1 Préparation des solutions mères
pliquent l’utilisation d’une eau de dilution dont les caracté-
ristiques different de celles décrites ci-dessus, il convient
Les solutions mères des substances à expérimenter
de mentionner dans le rapport d’essai les principales carac-
doivent être préparées par dissolution d’une quantité
téristiques de l’eau de dilution synthétique utilisée.
connue de la substance à expérimenter dans un vo-
lume défini d’eau de dilution (5.2) d’eau déionisée ou
d’eau distillée dans un récipient en verre. Elles doivent
5.3 Dichromate de potassium (K,Cr,O,), de qualité
être préparées au moment de l’emploi à moins que la
analytique reconnue.
substance en solution soit connue pour être stable,
auquel cas la solution mère peut être préparée jusqu’à
2 jours avant l’essai.
6 Appareillage
Les solutions mères de substances de faible solubilité
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce
aqueuse peuvent être solubilisées ou dispersées di-
qui suit.
rectement dans le milieu par des moyens adéquats,
incluant des dispositifs à ultrasons ou des solvants de
faible toxicité vis-à-vis de Daphnia magna. II convient
6.1 Appareil de mesurage de l’oxygène dissous.
d’utiliser des solvants seulement si la CE50 est su-
périeure à la solubilité de la substance d’essai. Si un
solvant est utilisé, la concentration du solvant dans la
6.2 Récipients pour essai, en matériau chimi-
solution d’essai finale ne doit pas dépasser 0,l ml/l
quement inerte et de capacité suffisante (par exem-
et deux essais témoins, l’un ne contenant aucun sol-
ple: tubes à essais ou béchers en verre).
vant, l’autre contenant la concentration maximale en
solvant, doivent être inclus dans l’essai.
Avant utilisation, les récipients pour essai doivent être
soigneusement lavés puis rincés successivement
En raison des différences de nature des substances
avec de l’eau distillée et de l’eau de dilution (5.2). À
chimiques, aucune procédure unique ne peut être
la fin de l’essai, les récipients doivent être vidés, rin-
conseillée pour la préparation des solutions mères de
cés avec de l’eau pour éliminer toute trace de la so-
substances de faible solubilité aqueuse.
lution d’essai, puis séchés.
7.2.2 Préparation des solutions d’essai
7 Traitement et préparation des
Les solutions d’essai doivent être préparées (voir
échantillons 8.1) par ajout des solutions mères ou des échantillons
d’effluents (7.2.1) à l’eau de dilution (5.2) en quantités
définies.
7.1 Précautions particulières concernant le
Lors
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.