ISO 12872:2022
(Main)Olive oils and olive-pomace oils — Determination of the 2-glyceryl monopalmitate content
Olive oils and olive-pomace oils — Determination of the 2-glyceryl monopalmitate content
This document specifies a procedure for the determination of the content, as a percentage mass fraction, of 2-glyceryl monopalmitate in olive oils and olive-pomace oils that are liquid at ambient temperature (20 °C). NOTE This document is based on COI/T.20/Doc. No 23/Rev.1:2017[7].
Huiles d'olive et huiles de grignons d'olive — Détermination de la teneur en 2-glycéryl monopalmitate
Le présent document spécifie une méthode pour la détermination de la teneur, sous forme de fraction massique en pourcentage, en 2-glycéryl monopalmitate des huiles d’olive et des huiles de grignons d’olive liquides à température ambiante (20 °C). NOTE Le présent document est fondé sur la COI/T.20/Doc. 23/Rév. 1:2017[7].
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 12872
Second edition
2022-08
Olive oils and olive-pomace oils —
Determination of the 2-glyceryl
monopalmitate content
Huiles d'olive et huiles de grignons d'olive — Détermination de la
teneur en 2-glycéryl monopalmitate
Reference number
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be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
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CH-1214 Vernier, Geneva
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Published in Switzerland
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ISO 12872:2022(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of the test sample. 4
9 Procedure .4
9.1 Preparatory steps . 4
9.2 Column chromatography . 5
9.2.1 Conventional procedure . 5
9.2.2 Procedure when ready-to-use silica SPE cartridges are employed . 5
9.3 Hydrolysis with pancreatic lipase . 5
9.4 Preparation of the silylated derivatives and gas chromatography . 5
9.5 Gas chromatography . 5
9.5.1 Operating conditions . 5
9.5.2 Identification of peaks . 6
9.5.3 Quantitative evaluation . 6
10 Expression of results . 6
11 Precision . 6
11.1 Interlaboratory test . . 6
11.2 Repeatability . 6
11.3 Reproducibility . 6
12 Test report . 7
Annex A (informative) Chromatograms . 8
Annex B (informative) Results of interlaboratory test and comparison study .11
Annex C (informative) Preparation and activity of the lipase .13
Bibliography .15
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ISO 12872:2022(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils, in collaboration with the European Committee for Standardization
(CEN) Technical Committee CEN/TC 307, Oilseeds, vegetable and animal fats and oils and their by-products
— Methods of sampling and analysis, in accordance with the Agreement on technical cooperation
between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 12872:2010), which has been technically
revised.
The main changes are as follows:
— the use of iso-octane as an alternative to hexane has been added;
— precision data of the method using iso-octane compared with hexane have been added.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
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ISO 12872:2022(E)
Introduction
As part of the Trade standard applying to olive oils and olive-pomace oils, the International Olive Council
[6]
(IOC) published COI/T.20/Doc. No 23:2006 .
COI/T.20/Doc. No 23 was applicable to olive and olive-pomace oils and was used to distinguish between
lampante virgin olive oils and crude olive-pomace oils. Olive pomace is the residual paste which still
contains a variable amount of water and oil after pressing or centrifuging.
In 2008, the IOC submitted the document to ISO/TC 34/SC 11 for adoption as an International Standard.
[7]
In 2017, the IOC published a revision of COI/T.20/Doc. No 23/Rev.1 , and this revised document is an
adoption of the IOC revised method.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 12872:2022(E)
Olive oils and olive-pomace oils — Determination of the
2-glyceryl monopalmitate content
1 Scope
This document specifies a procedure for the determination of the content, as a percentage mass fraction,
of 2-glyceryl monopalmitate in olive oils and olive-pomace oils that are liquid at ambient temperature
(20 °C).
[7]
NOTE This document is based on COI/T.20/Doc. No 23/Rev.1:2017 .
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
2-glyceryl monopalmitate content
mass fraction of 2-glyceryl monopalmitate in the monoacylglycerol fraction
Note 1 to entry: This is determined according to the method specified in this document.
Note 2 to entry: The 2-glyceryl monopalmitate content is expressed as a percentage.
4 Principle
The oil, after suitable preparation, is subjected to the action of pancreatic lipase. A partial
hydrolysis takes place that is specific for positions 1 and 3 of the triacylglycerol molecule so that
2-monoacylglycerols are obtained as reaction products. The percentage of 2-glyceryl monopalmitate in
the monoacylglycerol fraction is determined, after silylation, by capillary gas chromatography.
5 Reagents
WARNING — Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade, and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
1
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5.1 Silica gel, with a particle size of 0,063 mm to 0,200 mm (70/280 mesh), prepared as follows:
— put the silica gel into a porcelain cup, dry in an oven at 160 °C for 4 h, then cool at ambient temperature
in a desiccator;
— add a volume of water equivalent to 5 % of the mass of the silica gel as follows:
— weigh 152 g of silica gel into a 500 ml Erlenmeyer flask, add 8 g of water, stopper and homogenize
carefully;
— leave to settle for at least 12 h before using.
5.2 n-Hexane, chromatography grade.
Hexane may be replaced by iso-octane (2,2,4-trimethylpentane of chromatography grade), provided
that comparable precision values are achieved (see the precision values of the method with the use of
iso-octane in Annex B).
5.3 Isopropanol.
5.4 Isopropanol-water mixture, volume fractions 50 ml/100 ml.
5.5 Pancreatic lipase, activity between 2,0 and 10 lipase units per milligram (see Annex C).
NOTE Pancreatic lipase with an activity between 2 and 10 units per mg of enzyme is available commercially.
5.6 Buffer solution of tris(hydroxymethyl)aminomethane: prepare an aqueous solution (1 mol/l)
with pH 8 and mix with concentrated HCl, volume fractions 50 ml/100 ml.
5.7 Sodium cholate, special enzyme grade, aqueous solution, mass fraction 0,1 g/100 g.
Use this solution within 15 days of preparation.
5.8 Calcium chloride, aqueous solution, mass fraction 22 g/100 g.
5.9 Diethyl ether, chromatography grade.
5.10 Elution solvent 1: mixture of n-hexane-diethyl ether, volume fraction of n-hexane 87 ml/100 ml
and of diethyl ether 13 ml/100 ml.
5.11 Sodium hydroxide, aqueous solution, mass fraction 12 g/100 g.
5.12 Phenolphthalein, ethanolic solution, mass concentration 1 g/100 ml.
5.13 Carrier gas: hydrogen or helium, gas chromatography grade.
5.14 Auxiliary gases: hydrogen, free from moisture and organic substances, and synthetic air, gas
chromatography grade.
5.15 Silylation reagent: mixture of pyridine, hexamethyldisilazane (HMDS) and trimethylchlorosilane
(TMCS); volume fractions: 9 ml/13 ml, 3 ml/13 ml, and 1 ml/13 ml, respectively.
NOTE Ready-to-use solutions are available commercially. Other silylation reagents can be used, e.g. bis
trimethylsilyl trifluoracetamide + 1 % trimethylchlorosilane, diluted with an identical volume of anhydrous
pyridine.
2
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5.16 Reference samples: pure monoacylglycerols and mixtures of monoacylglycerols with a known
composition similar to that of the sample.
5.17 Elution solvent 2: mixture of n-hexane-diethyl ether, volume fraction of n-hexane 90 ml/100 ml
and of diethyl ether 10 ml/100 ml.
6 Apparatus
The usual laboratory equipment and, in particular, the following shall be used.
6.1 Erlenmeyer flasks, of capacity 25 ml.
6.2 Beakers, of capacities 100 ml, 250 ml and 300 ml.
6.3 Glass chromatography column, 21 mm to 23 mm internal diameter, 400 mm in length, with
septum and stopcock.
[2]
6.4 Measuring cylinders, of capacities 10 ml, 50 ml, 100 ml and 200 ml, ISO 4788 class A.
6.5 Round-bottomed flasks, of capacities 100 ml and 250 ml.
6.6 Rotary evaporator.
6.7 Centrifuge tubes, conical bottom, of capacity 10 ml, with ground-glass stopper.
6.8 Centrifuge, suitable for 10 ml and 100 ml tubes.
6.9 Water bath, capable of maintaining a temperature of (40 ± 0,5) °C.
[1]
6.10 Graduated pipettes, of capacities 1 ml and 2 ml, ISO 835 class A.
6.11 Hypodermic syringe, 1 ml.
6.12 Microsyringe, 100 µl.
6.13 Separating funnel, 1 000 ml.
6.14 Gas chromatograph, suitable for use with capillary columns, equipped with the components
specified in 6.14.1 to 6.14.5.
6.14.1 Cold on-column injector.
6.14.2 Flame ionization detector.
6.14.3 Column oven, capable of maintaining the temperature to within ± 1 °C.
6.14.4 Computer-based integration system.
6.14.5 Fused silica capillary column, of length 8 m to 12 m and internal diameter 0,25 mm to
0,32 mm, coated with methylpolysiloxane or 5 % phenyl methylpolysiloxane, with a film thickness of
0,10 µm to 0,30 µm, suitable for use at 370 °C.
3
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6.15
...
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ISO/TC 34/SC 11
Date : 2022
ISO 12872:2022(F)
Date: 2022-08
ISO/TC 34/SC 11
Secrétariat: BSI
Huiles d’olive et huiles de grignons d’olive — Détermination de la teneur en
2-glycéryl monopalmitate
Olive oils and olive-pomace oils — Determination of the 2-glyceryl monopalmitate content
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Droits de reproductionTous droits réservés. Sauf indication contraireprescription différente ou
nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni
utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la
photocopie, l’affichageou la diffusion sur l’internet ou sur un Intranetintranet, sans autorisation écrite
préalable. Les demandes d’autorisation peuventUne autorisation peut être adresséesdemandée à l’ISO
à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Publié en Suisse.
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Sommaire Page
Avant-propos . iv
Introduction . v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 3
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire . 5
9.1 Étapes préparatoires . 5
9.2 Chromatographie sur colonne . 5
9.2.1 Mode opératoire classique . 5
9.2.2 Mode opératoire avec utilisation de cartouches de silice SPE prêtes à l’emploi . 5
9.3 Hydrolyse par la lipase pancréatique . 6
9.4 Préparation des dérivés silylés et de la chromatographie en phase gazeuse . 6
9.5 Chromatographie en phase gazeuse . 6
9.5.1 Conditions opératoires . 6
9.5.2 Identification des pics . 6
9.5.3 Évaluation quantitative . 7
10 Expression des résultats . 7
11 Fidélité . 7
11.1 Essai interlaboratoires . 7
11.2 Répétabilité . 7
11.3 Reproductibilité . 7
12 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Chromatogrammes . 9
Annexe B (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires . 12
Annexe C (informative) Préparation et activité de la lipase . 14
Bibliographie . 16
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ISO 12872:2022(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en
général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit
de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales
et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la
normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’attention est appeléeattirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire
l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour
responsable de ne pas avoir identifié de tels droits de brevetspropriété et averti de ne pas avoir signalé
leur existence. Les détails concernant les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits
analogues identifiés lors de l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la
liste des déclarations de brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (TBTOTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous--
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale, en collaboration avec le comité technique
CEN/TC 307, Graines oléagineuses, corps gras d’origines végétale et animale et leurs sous-produits —
Méthodes d’échantillonnage et d’analyse, du Comité européen de normalisation (CEN),) conformément à
l’accordl’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette secondedeuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 12872:2010), qui a fait
l’objet d’une révision technique.
Les principales modifications sont les suivantes:
— ajout de l’utilisation de l’isooctane comme alternative à l’hexane;
— ajout des résultats de fidélité de la méthode utilisant l’isooctane par rapport à celle utilisant l’hexane.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv © ISO 2022 – Tous droits réservés
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ISO 12872:2022(F)
Introduction
Dans le cadre de la Norme commerciale applicable aux huiles d’olive et aux huiles de grignons d’olive, le
[6]
Conseil oléicole international (COI) a publié la COI/T.20/Doc. 23:2006 .
La COI/T.20/Doc. 23 était applicable aux huiles d’olive et aux huiles de grignons d’olive et était utilisée
pour faire la distinction entre les huiles d’olive vierges lampantes et les huiles de grignons d’olive brutes.
Les grignons d’olive constituent la pâte résiduelle qui contient encore une quantité variable d’eau et
d’huile après pressage ou centrifugation.
En 2008, le COI a soumis le document à l’ISO/TC 34/SC 11 en vue de son adoption en tant que Norme
internationale.
[7]
En 2017, le COI a publié une révision de la COI/T.20/Doc. 23/Rév. 1 et ce document révisé constitue
l’adoption de la méthode COI révisée.
© ISO 2022 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 12872:2022(F)
Huiles d’olive et huiles de grignons d’olive — Détermination de la
teneur en 2-glycéryl monopalmitate
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode pour la détermination de la teneur, sous forme de fraction
massique en pourcentage, en 2-glycéryl monopalmitate des huiles d’olive et des huiles de grignons d’olive
liquides à température ambiante (20 °C).
[7]
NOTE Le présent document est fondé sur la COI/T.20/Doc. 23/Rév. 1:2017 .
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation de l’échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https://www.electropedia.org/
3.1
teneur en 2-glycéryl monopalmitate
fraction massique de 2-glycéryl monopalmitate dans la fraction monoglycéridique
Note 1 à l’article: Cette valeur est déterminée selon la méthode spécifiée dans le présent document.
Note 2 à l’article: teneur en 2-glycéryl monopalmitate est exprimée en pourcentage.
4 Principe
Après une préparation adaptée, l’huile est soumise à l’action de la lipase pancréatique. Une hydrolyse
partielle et spécifique aux positions 1 et 3 de la molécule de triglycéride entraîne la formation de 2-
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ISO 12872:2022(F)
monoglycérides. Le pourcentage de 2-glycéryl monopalmitate dans la fraction monoglycéridique est
déterminé, après silylation, par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — Des mesures de sécurité technique, organisationnelle et applicables aux personnes
doivent être observées.
Au cours de l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de pureté équivalente.
5.1 Gel de silice, avec une granulométrie comprise entre 0,063 mm et 0,200 mm (70/280 mesh),
préparé comme suit:
— mettre le gel de silice dans une capsule de porcelaine, sécher à l’étuve à 160 °C pendant 4 h, puis
laisser refroidir à température ambiante dans un dessiccateur;
— ajouter un volume d’eau équivalent à 5 % de la masse de gel de silice, comme suit:
— dans une fiole conique de 500 ml, peser 152 g de gel de silice, ajouter 8 g d’eau, boucher et agiter
délicatement pour homogénéiser;
— laisser reposer au moins 12 h avant l’emploi.
5.2 n-Hexane, de qualité pour chromatographie.
L’hexane peut être remplacé par de l’isooctane (2,2,4-triméthylpentane de qualité pour
chromatographie), sous réserve que des valeurs de fidélité comparables soient atteintes (voir les valeurs
de fidélité de la méthode en cas d’emploi d’isooctane à l’Annexe B).
5.3 Isopropanol.
5.4 Mélange isopropanol-eau, fractions volumiques 50 ml/100 ml.
5.5 Lipase pancréatique, activité comprise entre 2,0 unités et 10 unités de lipase par milligramme
(voir Annexe C).
NOTE La lipase pancréatique avec une activité comprise entre 2 unités et 10 unités par milligramme d’enzyme
est disponible sur le marché.
5.6 Solution tampon de tris(hydroxyméthyl)aminométhane: préparer une solution aqueuse
(1 mol/l) de pH 8 et mélanger avec du HCl concentré, fractions volumiques 50 ml/100 ml.
5.7 Cholate de sodium, de qualité enzymatique, solution aqueuse, fraction massique 0,1 g/100 g.
Utiliser cette solution dans les 15 jours suivant sa préparation.
5.8 Chlorure de calcium, solution aqueuse, fraction massique 22 g/100 g.
5.9 Éther diéthylique, de qualité pour chromatographie.
5.10 Solvant d’élution 1: mélange de n-hexane-éther diéthylique, fraction volumique de n-
hexane 87 ml/100 ml et fraction volumique d’éther diéthylique 13 ml/100 ml.
2 © ISO 2022 – Tous droits réservés
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ISO 12872:2022(F)
5.11 Hydroxyde de sodium, solution aqueuse, fraction massique 12 g/100 g.
5.12 Phénolphtaléine, solution éthanolique, concentration en masse 1 g/100 ml.
5.13 Gaz vecteur: hydrogène ou hélium, de qualité pour chromatographie en phase gazeuse.
5.14 Gaz auxiliaires: hydrogène, exempt d’humidité et de substances organiques, et air synthétique, de
qualité pour chromatographie en phase gazeuse.
5.15 Réactif de silylation: mélange de pyridine, d’hexaméthyldisilazane (HMDS) et de
triméthylchlorosilane (TMCS), fractions volumiques: 9 ml/13 ml, 3 ml/13 ml et 1 ml/13 ml,
respectivement.
NOTE Des solutions prêtes à l’emploi sont disponibles sur le marché. D’autres réactifs de silylation peuvent être
utilisés, tels que le bis(triméthylsilyl)trifluoroacétamide + 1 % de triméthylchlorosilane, dilués dans un volume
identique de pyridine anhydre.
5.16 Échantillons de référence: monoglycérides purs et mélanges de monoglycérides ayant une
composition connue similaire à celle de l’échantillon.
5.17 Solvant d’élution 2: mélange de n-hexane-éther diéthylique, fraction volumique de n-
hexane 90 ml/100 ml et fraction volumique d’éther diéthylique 10 ml/100 ml.
6 Appareillage
Utiliser le matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Fioles coniques, d’une capacité de 25 ml.
6.2 Béchers, de capacités 100 ml, 250 ml et 300 ml.
6.3 Colonne de chromatographie, en verre, ayant un diamètre intérieur de 21 mm à 23 mm et une
longueur de 400 mm, équipée d’un septum et d’un robinet.
[2]
6.4 Éprouvettes graduées, de capacités 10 ml, 50 ml, 100 ml et 200 ml, ISO 4788 classe A.
6.5 Ballons à fond rond, de capacités 100 ml et 250 ml.
6.6 Évaporateur rotatif.
6.7 Tubes à centrifuger, à fond conique, d’une capacité de 10 ml, avec bouchon rodé.
6.8 Centrifugeuse, pour tubes de 10 ml et 100 ml.
6.9 Bain-marie, permettant de maintenir une température de (40 ± 0,5) °C.
[1]
6.10 Pipettes graduées, de capacité 1 ml et 2 ml, ISO 835 classe A.
6.11 Seringue hypodermique, de 1 ml.
6.12 Microseringue, de 100 µl.
6.13 Ampoule à décanter, de 1 000 ml.
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ISO 12872:2022(F)
6.14 Chromatographe en phase gazeuse, approprié au fonctionnement avec colonnes capillaires,
équipé des éléments spécifiés en 6.14.1 à 6.14.5.
6.14.1 Injecteur «on column» à froid.
6.14.2 Détecteur à ionisation de flamme.
6.14.3 Four pour colonne, capable de maintenir la température à ±1 °C.
6.14.4 Système informatique d’intégration.
6.14.5 Colonne capillaire en silice fondue, de 8 m à 12 m de long, d’un diamètre intérieur de 0,25 mm
à 0,32 mm, recouverte d’un film de méthylpolysiloxane ou de phényl méthylpolysiloxane 5 %, d’une
épaisseur de 0,10 µm à 0,30 µm, pouvant être utilisée à 370 °C.
6.15 Microseringue, de 10 µl, munie d’une aiguille en acier trempé, d’une longueur minimale de 7,5 cm,
pour injection directe sur colonne.
7 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans le présent document. Une méthode
[3]
d’échantillonnage recommandée est indiquée dans l’ISO 5555 .
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou
modifié lors du transport ou de l’entreposage.
8 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à l’ISO 661. Les huiles ayant une acidité libre supérieure
à 3 % nécessitent une étape de neutralisation comme spécifié ici.
Dans une ampoule à décanter de 1 000 ml (6.13), i
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 12872
Deuxième édition
2022-08
Huiles d'olive et huiles de grignons
d'olive — Détermination de la teneur
en 2-glycéryl monopalmitate
Olive oils and olive-pomace oils — Determination of the 2-glyceryl
monopalmitate content
Numéro de référence
ISO 12872:2022(F)
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ISO 12872:2022(F)
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Publié en Suisse
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ISO 12872:2022(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 1
5 Réactifs . 1
6 Appareillage . 3
7 Échantillonnage .4
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire . 4
9.1 Étapes préparatoires. 4
9.2 Chromatographie sur colonne . 5
9.2.1 Mode opératoire classique . 5
9.2.2 Mode opératoire avec utilisation de cartouches de silice SPE prêtes à
l’emploi . 5
9.3 Hydrolyse par la lipase pancréatique . 5
9.4 Préparation des dérivés silylés et de la chromatographie en phase gazeuse. 5
9.5 Chromatographie en phase gazeuse . 6
9.5.1 Conditions opératoires . 6
9.5.2 Identification des pics . 6
9.5.3 Évaluation quantitative . 6
10 Expression des résultats . 6
11 Fidélité . 6
11.1 Essai interlaboratoires . 6
11.2 Répétabilité . 7
11.3 Reproductibilité . . 7
12 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Chromatogrammes . 8
Annexe B (informative) Résultats de l'essai interlaboratoires et de l'étude comparative .11
Annexe C (informative) Préparation et activité de la lipase .13
Bibliographie .15
iii
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ISO 12872:2022(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale, en collaboration avec le comité technique CEN/
TC 307, Graines oléagineuses, corps gras d’origines végétale et animale et leurs sous-produits — Méthodes
d’échantillonnage et d’analyse, du Comité européen de normalisation (CEN) conformément à l’Accord de
coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 12872:2010), qui a fait l’objet d’une
révision technique.
Les principales modifications sont les suivantes:
— ajout de l’utilisation de l’isooctane comme alternative à l’hexane;
— ajout des résultats de fidélité de la méthode utilisant l’isooctane par rapport à celle utilisant l’hexane.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
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ISO 12872:2022(F)
Introduction
Dans le cadre de la Norme commerciale applicable aux huiles d’olive et aux huiles de grignons d’olive, le
[6]
Conseil oléicole international (COI) a publié la COI/T.20/Doc. 23:2006 .
La COI/T.20/Doc. 23 était applicable aux huiles d’olive et aux huiles de grignons d’olive et était utilisée
pour faire la distinction entre les huiles d’olive vierges lampantes et les huiles de grignons d’olive brutes.
Les grignons d’olive constituent la pâte résiduelle qui contient encore une quantité variable d’eau et
d’huile après pressage ou centrifugation.
En 2008, le COI a soumis le document à l’ISO/TC 34/SC 11 en vue de son adoption en tant que Norme
internationale.
[7]
En 2017, le COI a publié une révision de la COI/T.20/Doc. 23/Rév. 1 et ce document révisé constitue
l’adoption de la méthode COI révisée.
v
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NORME INTERNATIONALE ISO 12872:2022(F)
Huiles d'olive et huiles de grignons d'olive —
Détermination de la teneur en 2-glycéryl monopalmitate
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode pour la détermination de la teneur, sous forme de fraction
massique en pourcentage, en 2-glycéryl monopalmitate des huiles d’olive et des huiles de grignons
d’olive liquides à température ambiante (20 °C).
[7]
NOTE Le présent document est fondé sur la COI/T.20/Doc. 23/Rév. 1:2017 .
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation de l’échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
teneur en 2-glycéryl monopalmitate
fraction massique de 2-glycéryl monopalmitate dans la fraction monoglycéridique
Note 1 à l'article: Cette valeur est déterminée selon la méthode spécifiée dans le présent document.
Note 2 à l'article: teneur en 2-glycéryl monopalmitate est exprimée en pourcentage.
4 Principe
Après une préparation adaptée, l’huile est soumise à l’action de la lipase pancréatique. Une hydrolyse
partielle et spécifique aux positions 1 et 3 de la molécule de triglycéride entraîne la formation
de 2-monoglycérides. Le pourcentage de 2-glycéryl monopalmitate dans la fraction monoglycéridique
est déterminé, après silylation, par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — Des mesures de sécurité technique, organisationnelle et applicables aux
personnes doivent être observées.
Au cours de l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de pureté équivalente.
1
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ISO 12872:2022(F)
5.1 Gel de silice, avec une granulométrie comprise entre 0,063 mm et 0,200 mm (70/280 mesh),
préparé comme suit:
— mettre le gel de silice dans une capsule de porcelaine, sécher à l’étuve à 160 °C pendant 4 h, puis
laisser refroidir à température ambiante dans un dessiccateur;
— ajouter un volume d’eau équivalent à 5 % de la masse de gel de silice, comme suit:
— dans une fiole conique de 500 ml, peser 152 g de gel de silice, ajouter 8 g d’eau, boucher et agiter
délicatement pour homogénéiser;
— laisser reposer au moins 12 h avant l’emploi.
5.2 n-Hexane, de qualité pour chromatographie.
L’hexane peut être remplacé par de l’isooctane (2,2,4-triméthylpentane de qualité pour
chromatographie), sous réserve que des valeurs de fidélité comparables soient atteintes (voir les
valeurs de fidélité de la méthode en cas d’emploi d’isooctane à l’Annexe B).
5.3 Isopropanol.
5.4 Mélange isopropanol-eau, fractions volumiques 50 ml/100 ml.
5.5 Lipase pancréatique, activité comprise entre 2,0 unités et 10 unités de lipase par milligramme
(voir Annexe C).
NOTE La lipase pancréatique avec une activité comprise entre 2 unités et 10 unités par milligramme
d’enzyme est disponible sur le marché.
5.6 Solution tampon de tris(hydroxyméthyl)aminométhane: préparer une solution aqueuse
(1 mol/l) de pH 8 et mélanger avec du HCl concentré, fractions volumiques 50 ml/100 ml.
5.7 Cholate de sodium, de qualité enzymatique, solution aqueuse, fraction massique 0,1 g/100 g.
Utiliser cette solution dans les 15 jours suivant sa préparation.
5.8 Chlorure de calcium, solution aqueuse, fraction massique 22 g/100 g.
5.9 Éther diéthylique, de qualité pour chromatographie.
5.10 Solvant d’élution 1: mélange de n-hexane-éther diéthylique, fraction volumique
de n-hexane 87 ml/100 ml et fraction volumique d’éther diéthylique 13 ml/100 ml.
5.11 Hydroxyde de sodium, solution aqueuse, fraction massique 12 g/100 g.
5.12 Phénolphtaléine, solution éthanolique, concentration en masse 1 g/100 ml.
5.13 Gaz vecteur: hydrogène ou hélium, de qualité pour chromatographie en phase gazeuse.
5.14 Gaz auxiliaires: hydrogène, exempt d’humidité et de substances organiques, et air synthétique,
de qualité pour chromatographie en phase gazeuse.
5.15 Réactif de silylation: mélange de pyridine, d’hexaméthyldisilazane (HMDS) et de
triméthylchlorosilane (TMCS), fractions volumiques: 9 ml/13 ml, 3 ml/13 ml et 1 ml/13 ml,
respectivement.
2
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ISO 12872:2022(F)
NOTE Des solutions prêtes à l’emploi sont disponibles sur le marché. D’autres réactifs de silylation peuvent
être utilisés, tels que le bis(triméthylsilyl)trifluoroacétamide + 1 % de triméthylchlorosilane, dilués dans un
volume identique de pyridine anhydre.
5.16 Échantillons de référence: monoglycérides purs et mélanges de monoglycérides ayant une
composition connue similaire à celle de l’échantillon.
5.17 Solvant d’élution 2: mélange de n-hexane-éther diéthylique, fraction volumique
de n-hexane 90 ml/100 ml et fraction volumique d’éther diéthylique 10 ml/100 ml.
6 Appareillage
Utiliser le matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Fioles coniques, d’une capacité de 25 ml.
6.2 Béchers, de capacités 100 ml, 250 ml et 300 ml.
6.3 Colonne de chromatographie, en verre, ayant un diamètre intérieur de 21 mm à 23 mm et une
longueur de 400 mm, équipée d’un septum et d’un robinet.
[2]
6.4 Éprouvettes graduées, de capacités 10 ml, 50 ml, 100 ml et 200 ml, ISO 4788 classe A.
6.5 Ballons à fond rond, de capacités 100 ml et 250 ml.
6.6 Évaporateur rotatif.
6.7 Tubes à centrifuger, à fond conique, d’une capacité de 10 ml, avec bouchon rodé.
6.8 Centrifugeuse, pour tubes de 10 ml et 100 ml.
6.9 Bain-marie, permettant de maintenir une température de (40 ± 0,5) °C.
[1]
6.10 Pipettes graduées, de capacité 1 ml et 2 ml, ISO 835 classe A.
6.11 Seringue hypodermique, de 1 ml.
6.12 Microseringue, de 100 µl.
6.13 Ampoule à décanter, de 1 000 ml.
6.14 Chromatographe en phase gazeuse, approprié au fonctionnement avec colonnes capillaires,
équipé des éléments spécifiés en 6.14.1 à 6.14.5.
6.14.1 Injecteur «on column» à froid.
6.14.2 Détecteur à ionisation de flamme.
6.14.3 Four pour colonne, capable de maintenir la température à ±1 °C.
6.14.4 Système informatique d’intégration.
3
© ISO 2022 – Tous droits réservés
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ISO 12872:2022(F)
6.14.5 Colonne capillaire en silice fondue, de 8 m à 12 m de long, d’un diamètre intérieur de 0,25 mm
à 0,32 mm, recouverte d’un film de méthylpolysiloxane ou de phényl méthylpolysiloxane 5 %, d’une
épaisseur de 0,10 µm à 0,30 µm, pouvant être utilisée à 370 °C.
6.15 Microseringue, de 10 µl, munie d’une aiguille en acier trempé, d’une longueur minimale de 7,5 cm,
pour injection directe sur colonne.
7 Échantillonnage
L’échantillonnage ne fait pas p
...
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ISO/DIS 12872:2022(E)
Date: 2022-07-0111
ISO/TC 34/SC 11
Secretariat: BSI
Olive oils and olive-pomace oils — Determination of the 2-glyceryl
monopalmitate content
Huiles d’olive et huiles de grignons d’olive — Détermination de la teneur en 2-glycéryl
monopalmitate
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ISO 12872:2022(E)
© ISO 2022
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of
this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or
mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior written
permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO's member body in the
country of the requester.
ISO Copyright Office
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Phone: + 41 22 749 01 11
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Published in Switzerland.
ii © ISO 2022 – All rights reserved
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ISO 12872:2022(E)
Contents
Foreword . iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of the test sample . 4
9 Procedure . 4
9.1 Preparatory steps . 4
9.2 Column chromatography . 5
9.2.1 Conventional procedure . 5
9.2.2 Procedure when ready-to-use silica SPE cartridges are employed . 5
9.3 Hydrolysis with pancreatic lipase . 5
9.4 Preparation of the silylated derivatives and gas chromatography . 5
9.5 Gas chromatography . 5
9.5.1 Operating conditions . 5
9.5.2 Identification of peaks . 6
9.5.3 Quantitative evaluation . 6
10 Expression of results . 6
11 Precision . 6
11.1 Interlaboratory test . 6
11.2 Repeatability . 6
11.3 Reproducibility . 6
12 Test report . 7
Annex A (informative) Chromatograms . 8
Annex B (informative) Results of an interlaboratory test . 11
Annex C (informative) Preparation and activity of the lipase . 13
Bibliography . 15
© ISO 2022 – All rights reserved iii
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ISO 12872:2022(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World
Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils, in collaboration with the European Committee for Standardization
(CEN) Technical Committee CEN/TC 307, Oilseeds, vegetable and animal fats and oils and their by-products
— Methods of sampling and analysis, in accordance with the Agreement on technical cooperation between
ISO and CEN (Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 12872:2010), which has been technically
revised.
The main changes are as follows:
To allow for — the use of iso-octane as an alternative to hexane has been added;
To include — precision data of the method using iso-octane compared with hexane have been added.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv © ISO 2022 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 12872:2022(E)
Introduction
As part of the Trade standard applying to olive oils and olive-pomace oils, the International Olive Council
[6]
(IOC) published COI/T.20/Doc. No 23:2006 .
COI/T.20/Doc. No 23 was applicable to olive and olive-pomace oils and was used to distinguish between
lampante virgin olive oils and crude olive-pomace oils. Olive pomace is the residual paste which still
contains a variable amount of water and oil after pressing or centrifuging.
In 2008, the IOC submitted the document to ISO/TC 34/SC 11 for adoption as an International Standard.
[7]
In 2017, the IOC published a revision of COI/T.20/Doc. No 23/Rev.1 , and this revised document is an
adoption of the IOC revised method.
© ISO 2022 – All rights reserved v
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 12872:2022(E)
Olive oils and olive-pomace oils — Determination of the 2-glyceryl
monopalmitate content
1 Scope
This document specifies a procedure for the determination of the content, as a percentage mass fraction,
of 2-glyceryl monopalmitate in olive oils and olive-pomace oils that are liquid at ambient temperature
(20 °C).
[7]
NOTE This document is based on COI/T.20/Doc. No 23/Rev.1:2017 .
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: available at https://www.electropedia.org/
3.1
2-glyceryl monopalmitate content
mass fraction of 2-glyceryl monopalmitate in the monoacylglycerol fraction
Note 1 to entry: This is determined according to the method specified in this document.
Note 2 to entry: The 2-glyceryl monopalmitate content is expressed as a percentage.
4 Principle
The oil, after suitable preparation, is subjected to the action of pancreatic lipase. A partial hydrolysis takes
place that is specific for positions 1 and 3 of the triacylglycerol molecule so that 2-monoacylglycerols are
obtained as reaction products. The percentage of 2-glyceryl monopalmitate in the monoacylglycerol
fraction is determined, after silylation, by capillary gas chromatography.
© ISO 2022 – All rights reserved 1
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ISO 12872:2022(E)
5 Reagents
WARNING — Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade, and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Silica gel, with a particle size of 0,063 mm to 0,200 mm (70/280 mesh), prepared as follows:
— put the silica gel into a porcelain cup, dry in an oven at 160 °C for 4 h, then cool at ambient
temperature in a desiccator;
— add a volume of water equivalent to 5 % of the mass of the silica gel as follows:
— weigh 152 g of silica gel into a 500 ml Erlenmeyer flask, add 8 g of water, stopper and
homogenize carefully;
— leave to settle for at least 12 h before using.
5.2 n-Hexane, chromatography grade.
Hexane may be replaced by iso-octane (2,2,4- trimethylpentane in chromatography grade), provided that
comparable precision values are achieved (see the precision values of the method with the use of iso-
octane in Annex B).
5.3 Isopropanol.
5.4 Isopropanol-water mixture, volume fractions 50 ml/100 ml.
5.5 Pancreatic lipase, activity between 2,0 and 10 lipase units per milligram (see Annex C).
NOTE Pancreatic lipase with an activity between 2 and 10 units per mg of enzyme is available commercially.
5.6 Buffer solution of tris(hydroxymethyl)aminomethane: prepare an aqueous solution (1 mol/l)
with pH 8 and mix with concentrated HCl, volume fractions 50 ml/100 ml.
5.7 Sodium cholate, special enzyme grade, aqueous solution, mass fraction 0,1 g/100 g.
Use this solution within 15 days of preparation.
5.8 Calcium chloride, aqueous solution, mass fraction 22 g/100 g.
5.9 Diethyl ether, chromatography grade.
5.10 Elution solvent 1: mixture of n-hexane-diethyl ether, volume fraction of n-hexane 87 ml/100 ml
and of diethyl ether 13 ml/100 ml.
5.11 Sodium hydroxide, aqueous solution, mass fraction 12 g/100 g.
5.12 Phenolphthalein, ethanolic solution, mass concentration 1 g/100 ml.
5.13 Carrier gas: hydrogen or helium, gas chromatography grade.
5.14 Auxiliary gases: hydrogen, free from moisture and organic substances, and synthetic air, gas
chromatography grade.
2 © ISO 2022 – All rights reserved
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ISO 12872:2022(E)
5.15 Silylation reagent: mixture of pyridine, hexamethyldisilazane (HMDS) and trimethylchlorosilane
(TMCS); volume fractions: 9 ml/13 ml, 3 ml/13 ml, and 1 ml/13 ml, respectively.
NOTE Ready-to-use solutions are available commercially. Other silylation reagents can be used, e.g. bis
trimethylsilyl trifluoracetamide + 1 % trimethylchlorosilane, diluted with an identical volume of anhydrous
pyridine.
5.16 Reference samples: pure monoacylglycerols and mixtures of monoacylglycerols with a known
composition similar to that of the sample.
5.17 Elution solvent 2: mixture of n-hexane-diethyl ether, volume fraction of n-hexane 90 ml/100 ml
and of diethyl ether 10 ml/100 ml.
6 Apparatus
The usual laboratory equipment and, in particular, the following shall be used.
6.1 Erlenmeyer flasks, of capacity 25 ml.
6.2 Beakers, of capacities 100 ml, 250 ml and 300 ml.
6.3 Glass chromatography column, 21 mm to 23 mm internal diameter, 400 mm in length, with septum
and stopcock.
[2]
6.4 Measuring cylinders, of capacities 10 ml, 50 ml, 100 ml and 200 ml, ISO 4788 class A.
6.5 Round-bottomed flasks, of capacities 100 ml and 250 ml.
6.6 Rotary evaporator.
6.7 Centrifuge tubes, conical bottom, of capacity 10 ml, with ground-glass stopper.
6.8 Centrifuge, suitable for 10 ml and 100 ml tubes.
6.9 Water bath, capable of maintaining a temperature of (40 ± 0,5) °C.
[1]
6.10 Graduated pipettes, of capacities 1 ml and 2 ml, ISO 835 class A.
6.11 Hypodermic syringe, 1 ml.
6.12 Microsyringe, 100 µl.
6.13 Separating funnel, 1 000 ml.
6.14 Gas chromatograph, suitable for use with capillary columns, equipped with the components
specified in 6.14.1 to 6.14.5.
6.14.1 Cold on-column injector.
6.14.2 Flame ionization detector.
6.14.3 Column oven, capable of maintaining the temperature to within ± 1 °C.
6.14.4 Computer-based integration system.
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ISO 12872:2022(E)
6.14.5 Fused silica capillary column, of length 8 m to 12 m and internal diameter 0,25 mm to 0,32 mm,
coated with methylpolysiloxane or 5 % phenyl methylpolysiloxane, with a film thickness of 0,10 µm to
0,30 µm, suitable for use at 370 °C.
6.15 Microsyringe, 10 µl, with hardened needle, of minimum length 7,5 cm in length, suitable for on-
column injection.
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this document. A recommended sampling method is given
[3]
in ISO 5555 .
It is important that the laboratory receive a truly representative sample which has not been damaged or
changed during transport or storage.
8 Preparation of the test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 661. Oils with a free acidity greater than 3 % require a
neutralization step as speci
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 12872
Second edition
Olive oils and olive-pomace oils —
Determination of the 2-glyceryl
monopalmitate content
Huiles d'olive et huiles de grignons d'olive — Détermination de la
teneur en 2-glycéryl monopalmitate
PROOF/ÉPREUVE
Reference number
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All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
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Website: www.iso.org
Published in Switzerland
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ISO 12872:2022(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of the test sample. 4
9 Procedure .4
9.1 Preparatory steps . 4
9.2 Column chromatography . 5
9.2.1 Conventional procedure . 5
9.2.2 Procedure when ready-to-use silica SPE cartridges are employed . 5
9.3 Hydrolysis with pancreatic lipase . 5
9.4 Preparation of the silylated derivatives and gas chromatography . 5
9.5 Gas chromatography . 5
9.5.1 Operating conditions . 5
9.5.2 Identification of peaks . 6
9.5.3 Quantitative evaluation . 6
10 Expression of results . 6
11 Precision . 6
11.1 Interlaboratory test . . 6
11.2 Repeatability . 6
11.3 Reproducibility . 6
12 Test report . 7
Annex A (informative) Chromatograms . 8
Annex B (informative) Results of an interlaboratory test .11
Annex C (informative) Preparation and activity of the lipase .13
Bibliography .15
iii
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ISO 12872:2022(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/
iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils, in collaboration with the European Committee for Standardization
(CEN) Technical Committee CEN/TC 307, Oilseeds, vegetable and animal fats and oils and their by-products
— Methods of sampling and analysis, in accordance with the Agreement on technical cooperation
between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 12872:2010), which has been technically
revised.
The main changes are as follows:
— the use of iso-octane as an alternative to hexane has been added;
— precision data of the method using iso-octane compared with hexane have been added.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
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ISO 12872:2022(E)
Introduction
As part of the Trade standard applying to olive oils and olive-pomace oils, the International Olive Council
[6]
(IOC) published COI/T.20/Doc. No 23:2006 .
COI/T.20/Doc. No 23 was applicable to olive and olive-pomace oils and was used to distinguish between
lampante virgin olive oils and crude olive-pomace oils. Olive pomace is the residual paste which still
contains a variable amount of water and oil after pressing or centrifuging.
In 2008, the IOC submitted the document to ISO/TC 34/SC 11 for adoption as an International Standard.
[7]
In 2017, the IOC published a revision of COI/T.20/Doc. No 23/Rev.1 , and this revised document is an
adoption of the IOC revised method.
v
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 12872:2022(E)
Olive oils and olive-pomace oils — Determination of the
2-glyceryl monopalmitate content
1 Scope
This document specifies a procedure for the determination of the content, as a percentage mass fraction,
of 2-glyceryl monopalmitate in olive oils and olive-pomace oils that are liquid at ambient temperature
(20 °C).
[7]
NOTE This document is based on COI/T.20/Doc. No 23/Rev.1:2017 .
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
2-glyceryl monopalmitate content
mass fraction of 2-glyceryl monopalmitate in the monoacylglycerol fraction
Note 1 to entry: This is determined according to the method specified in this document.
Note 2 to entry: The 2-glyceryl monopalmitate content is expressed as a percentage.
4 Principle
The oil, after suitable preparation, is subjected to the action of pancreatic lipase. A partial
hydrolysis takes place that is specific for positions 1 and 3 of the triacylglycerol molecule so that
2-monoacylglycerols are obtained as reaction products. The percentage of 2-glyceryl monopalmitate in
the monoacylglycerol fraction is determined, after silylation, by capillary gas chromatography.
5 Reagents
WARNING — Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade, and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
1
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ISO 12872:2022(E)
5.1 Silica gel, with a particle size of 0,063 mm to 0,200 mm (70/280 mesh), prepared as follows:
— put the silica gel into a porcelain cup, dry in an oven at 160 °C for 4 h, then cool at ambient temperature
in a desiccator;
— add a volume of water equivalent to 5 % of the mass of the silica gel as follows:
— weigh 152 g of silica gel into a 500 ml Erlenmeyer flask, add 8 g of water, stopper and homogenize
carefully;
— leave to settle for at least 12 h before using.
5.2 n-Hexane, chromatography grade.
Hexane may be replaced by iso-octane (2,2,4- trimethylpentane in chromatography grade), provided
that comparable precision values are achieved (see the precision values of the method with the use of
iso-octane in Annex B).
5.3 Isopropanol.
5.4 Isopropanol-water mixture, volume fractions 50 ml/100 ml.
5.5 Pancreatic lipase, activity between 2,0 and 10 lipase units per milligram (see Annex C).
NOTE Pancreatic lipase with an activity between 2 and 10 units per mg of enzyme is available commercially.
5.6 Buffer solution of tris(hydroxymethyl)aminomethane: prepare an aqueous solution (1 mol/l)
with pH 8 and mix with concentrated HCl, volume fractions 50 ml/100 ml.
5.7 Sodium cholate, special enzyme grade, aqueous solution, mass fraction 0,1 g/100 g.
Use this solution within 15 days of preparation.
5.8 Calcium chloride, aqueous solution, mass fraction 22 g/100 g.
5.9 Diethyl ether, chromatography grade.
5.10 Elution solvent 1: mixture of n-hexane-diethyl ether, volume fraction of n-hexane 87 ml/100 ml
and of diethyl ether 13 ml/100 ml.
5.11 Sodium hydroxide, aqueous solution, mass fraction 12 g/100 g.
5.12 Phenolphthalein, ethanolic solution, mass concentration 1 g/100 ml.
5.13 Carrier gas: hydrogen or helium, gas chromatography grade.
5.14 Auxiliary gases: hydrogen, free from moisture and organic substances, and synthetic air, gas
chromatography grade.
5.15 Silylation reagent: mixture of pyridine, hexamethyldisilazane (HMDS) and trimethylchlorosilane
(TMCS); volume fractions: 9 ml/13 ml, 3 ml/13 ml, and 1 ml/13 ml, respectively.
NOTE Ready-to-use solutions are available commercially. Other silylation reagents can be used, e.g. bis
trimethylsilyl trifluoracetamide + 1 % trimethylchlorosilane, diluted with an identical volume of anhydrous
pyridine.
2
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5.16 Reference samples: pure monoacylglycerols and mixtures of monoacylglycerols with a known
composition similar to that of the sample.
5.17 Elution solvent 2: mixture of n-hexane-diethyl ether, volume fraction of n-hexane 90 ml/100 ml
and of diethyl ether 10 ml/100 ml.
6 Apparatus
The usual laboratory equipment and, in particular, the following shall be used.
6.1 Erlenmeyer flasks, of capacity 25 ml.
6.2 Beakers, of capacities 100 ml, 250 ml and 300 ml.
6.3 Glass chromatography column, 21 mm to 23 mm internal diameter, 400 mm in length, with
septum and stopcock.
[2]
6.4 Measuring cylinders, of capacities 10 ml, 50 ml, 100 ml and 200 ml, ISO 4788 class A.
6.5 Round-bottomed flasks, of capacities 100 ml and 250 ml.
6.6 Rotary evaporator.
6.7 Centrifuge tubes, conical bottom, of capacity 10 ml, with ground-glass stopper.
6.8 Centrifuge, suitable for 10 ml and 100 ml tubes.
6.9 Water bath, capable of maintaining a temperature of (40 ± 0,5) °C.
[1]
6.10 Graduated pipettes, of capacities 1 ml and 2 ml, ISO 835 class A.
6.11 Hypodermic syringe, 1 ml.
6.12 Microsyringe, 100 µl.
6.13 Separating funnel, 1 000 ml.
6.14 Gas chromatograph, suitable for use with capillary columns, equipped with the components
specified in 6.14.1 to 6.14.5.
6.14.1 Cold on-column injector.
6.14.2 Flame ionization detector.
6.14.3 Column oven, capable of maintaining the temperature to within ± 1 °C.
6.14.4 Computer-based integration system.
6.14.5 Fused silica capillary column, of length 8 m to 12 m and internal diameter 0,25 mm to
0,32 mm, coated with methylpolysiloxane or 5 % phenyl methylpolysiloxane, with a film thickness of
0,10 µm to 0,30 µm, suitable for use at 370 °C.
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6.15 Microsyri
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.