ISO 8360-1:1988

Water quality — Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa — Part 1: Method by enrichment in liquid medium

Qualité de l'eau — Recherche et dénombrement de Pseudomonas aeruginosa — Partie 1: Méthode par enrichissement en milieu liquide

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 28-Dec-1988
• Withdrawal Date: 28-Dec-1988
• ICS: 07.100.20 - Microbiology of water
• Technical Committee: ISO/TC 147/SC 4 - Microbiological methods
• Drafting Committee: ISO/TC 147/SC 4 - Microbiological methods
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 23-Feb-1995

Standards Content (Sample)

IS0
INTERNATIONAL STANDARD
8360-1
First edition
1988-12-1 5
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXAYHAPOAHAR OPrAHM3AL(MR il0 CTAHAAPTM3AuMM
Water quality - Detection and enumeration of
Pseudomonas aeruginosa -
Part 1:
Method by enrichment in liquid medium
Qualité de l'eau - Recherche et dénombrement de Pseudornonas aeruginosa -
Partie 1 : Méthode par enrichissement en milieu liquide
Reference number
IS0 8360-1 : 1988 (E)

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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all
matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
the
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 8360-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147,
Water quality.
IS0 8360 consists of the following parts, under the general title Water quality - Detec-
tion and enumeration of Pseudomonas aeruginosa :
Part 7: Method by enrichment in liquid medium
Part 2: Membrane filtration method
Annex A of this part of IS0 8360 is for information only.
O International Organization for Standardization, 1988
Printed in Switzerland
ii

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IS0 8360-1 : 1988 (E)
Introduction
Pseudornonas aeruginosa7) may occur in water for a variety of reasons and from a
variety of sources, but it cannot be used as an indicator of faecal pollution and the
significance of its presence cannot always be precisely defined. However, since in
certain circumstances it may be the cause of some opportunist infections in man,
especially in debilitated patients, its presence in drinking water, bottled waters, swim-
ming pools and hospital water supplies is considered undesirable.
If it is considered important to enumerate non-pigmented strains, the addition of a pre-
enrichment stage with a non-selective medium might increase the number of
organisms yielded by this technique.
1) See annex A for further information.
iii

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IS0 8360-1 : 1988 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Water quality - Detection and enumeration of
Pseudomonas aeruginosa -
Part 1 :
medium
Method by enrichment in liquid
1 Scope IS0 8199 : 1988, Water quality - General guide to the
enumeration of micro-organisms by culture.
This part of IS0 8360 presents a method for the isolation of
Pseudomonas aeruginosa and the estimation of the numbers of
this organism in water samples by enrichment in a liquid 3 Definition
medium.
For the purposes of this part of IS0 8360, the following defi-
nition applies.
This method is applicable to all types of water and associated
materials.
Pseudomonas aeruginosa: Micro-organisms capable of growth
and producing a water soluble, fluorescent pigment in media
It is recommended for use with waters where the expected
containing asparagine and ethanol. They also produce
number of Pseudomonas aeruginosa is low, e.g. bottled
characteristic colonies when grown on an agar medium con-
waters, or the water contains a relatively high level of residual
taining milk at 42 OC. Some strains are non-pigmented.
disinfectant (e.g. swimming pools).
4 Principle
2 Normative references
Measured volumes of the water sample, or a dilution of the
sample, are added to a selective medium in containers and
The following standards contain provisions which, through
incubated under the conditions given for the medium.
reference in this text, constitute provisions of this part of
IS0 8360. At the time of publication, the editions indicated
were valid. All standards are subject to revision, and parties to
4.1 Enumeration
agreements based on this part of IS0 8360 are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent editions
Examination of the containers for either the presence of a
of the standards listed below. Members of IEC and IS0 main-
water-soluble fluorescing pigment under ultraviolet irradiation,
tain registers of currently valid International Standards.
or for growth.
IS0 3696 : 1987, Water for analytical laboratory use -
4.2 Confirmation
Specification and test methods.
Subcultures are made from each container showing growth or
IS0 5667-1 : 1980, Water quality - Sampling - Part I:
fluorescence onto plates of milk agar medium. After incu-
Guidance on the design of sampling programmes.
bation, the plates are examined for typical colonies of
Pseudomonas aeruginosa.
IS0 5667-2 : 1982, Water quality - Sampling - Part2:
Guidance on sampling techniques.
4.2.1 Non-pigmented and atypical strains
IS0 "67-3 : 1985, Water quality - Sampling - Part 3:
Subcultures are made from each container onto the surface of
Guidance on the preservation and handling of sampies.
a solid agar plate and incubated. Pure cultures are obtained by
further subculture onto plates of the same agar medium as
IS0 6887 : 1983, Microbiology - General guidance for the
required. Each pure culture is finally tested for certain bio-
preparation of dilutions for microbiological examination. chemical characteristics (see annex A).
1

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IS0 8360-1 : 1988 (E)
5.3 Confirmatory medium I
5 Diluents, culture media and reagents
Use reagents of analytical reagent quality in the preparation of
5.3. Milk agar with cetrimide
culture media and diluents, unless otherwise specified. Prepare
media using glass-distilled water, or water of equivalent quality,
complying with IS0 3696 grade 3.
5.3.1.1 Composition
Skim milk powder 100 g
Alternatively, commercially available dehydrated media can be
Yeast extract broth (see below) 250 ml
used. The media shall be prepared according to the manufac-
turer's instructions and selective agents added, as supplements Agar 15 g
Hexadecyltrimethylammonium
at the given concentrations.
bromide (cetrimide) 03 g
Water to 750 ml
5.1 Dilution fluids
Yeast extract broth :
Use one of the diluents given in IS0 8199.
Bacteriological yeast extract 39
Bacteriological peptone 10 cl
Sodium chloride 5g
5.2 Culture media
Water to I 000 mi 1)
It is essential that the culture medium used be suitable for the
type of water to be analysed and the purpose of the analysis.
5.3.1.2 Preparation of medium
Use the following medium for the determination of presumed
Pseudornonas aeruginosa.
Prepare the yeast extract broth by dissolving all the consti-
tuents in the distilled water by steaming. Adjust the pH to
between 7,2 and 7.4. Sterilize by autoclaving at 121 OC f 1 OC
5.2.1 Asparagine broth with ethanol
for 20 min.
(Drake's medium IO)
Mix the sterile yeast extract broth, cetrimide and agar, and
steam this mixture until the agar has dissolved. In a separate
5.2.1.1 Composition
glass container, add the skim milk powder to the distilled water
Concentrated
and mix, preferably with a magnetic stirrer, until the powder
strength
has completely dissolved. Autoclave both solutions separately
DL-asparagine 2g 32 g
at 121 OC f 1 OC for 5 min. To prevent caramelization of the
L-proline lg 1.6 g
milk, take care to foll
...

[SO
NORME INTERNATIONALE
8360-1
Première édition
1988-12-1 5
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXAYHAPOAHAR OPrAHMSAI@lFI Il0 CTAHAAPTMSAI#lM
Qualité de l'eau - Recherche et dénombrement de
Pseudomonas aeruginosa -
Partie 1 :
Méthode par enrichissement en milieu liquide
Water quality - Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa -
Part 1 : Method by enrichment in liquid medium
Numéro de référence
IS0 8360-1 : 1988 (F)

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IS0 8360-1 : 1988 (FI
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalkation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
des Normes internationales est en général confiée aux comités techniques de I'ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'lS0 participent également aux travaux. L'ISO col-
labore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I'ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I'ISO qui requièrent l'approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale IS0 8360-1 a été élaborée par le comité technique
ISOITC 147, Qualité de l'eau.
L'ISO 8360 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre générai Qualité de
l'eau - Recherche et dénombrement de Pseudomonas aeruginosa :
-
Partie I: Méthode par enrichissement en milieu liquide
-
Partie 2: Méthode par filtration sur membrane
L'annexe A de la présente partie de 1'60 8360 est donnée uniquement à titre d'infor-
mation.
, O Organisation internationale de normalisation, 1988
Imprimé en Suisse
ii

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IS0 8360-1 : 1988 (FI
Introduction
Pseudomonas aeruginosa 1) peut apparaître dans l'eau pour des raisons multiples et
être de diverses origines, mais il ne peut pas être utilisé comme indicateur de pollution
fécale et la signification de sa présence ne peut pas toujours être définie avec précision.
il peut être à l'origine d'infections occasionnelles
Dans certaines conditions, par contre,
chez l'homme, en particulier chez des sujets en état de faiblesse, et sa présence dans
a
l'eau potable, l'eau en bouteille, l'eau de piscine et l'eau distribuée aux hôpitaux est
considérée comme indésirable.
Lorsqu'on juge important de dénombrer les cellules des souches non pigmentées,
l'addition d'un stade de pré-enrichissement avec un milieu non sélectif est susceptible
d'accroître le nombre de micro-organismes obtenus avec cette technique.
e
1) Voir l'annexe A pour des informations complémentaires.

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IS0 8360-1 : 1988 (FI
NORME INTERNATIONALE
Qualité de l'eau - Recherche et dénombrement de
Pseudomonas aeruginosa -
Partie 1 :
Méthode par enrichissement en milieu liquide
IS0 8199 : 1988, Qualité de l'eau - Guide général pour le
1 Domaine d'application
dénombrement des micro-organismes sur milieu de culture.
La présente partie de I'ISO 8360 prescrit une méthode permet-
tant d'isoler Pseudornonas aeruginosa et d'estimer le nombre
3 Définition
de ces organismes contenus dans des échantillons d'eau par
enrichissement en milieu liquide.
Pour les besoins de la présente partie de I'ISO 8360, la définition
suivante s'applique.
Cette méthode est applicable à toutes les eaux et matières asso-
ciées.
Pseudomonas aeruginosa: Micro-organismes pouvant croître
et capables de produire un pigment fluorescent soluble dans
Elle est recommandée pour l'application à des eaux dans les-
l'eau dans un milieu contenant de l'asparagine et de l'éthanol.
quelles le nombre prévu de Pseudomonas aeruginosa est faible,
Ils donnent également des colonies caractéristiques lorsqu'ils
par exemple l'eau en bouteille, et dans le cas où l'eau renferme
sont cultivés sur une gélose lactée à 42 OC. Certaines souches
une teneur relativement élevée en désinfectant résiduel (par
sont non pigmentées.
exemple, eau de piscine).
4 Principe
2 Références normatives
Addition, à un milieu sélectif dans des récipients, de volumes
Les normes suivantes contiennent des dispositions qui, par
mesurés de l'échantillon d'eau, ou d'une dilution de I'échantil-
suite de la référence qui en est faite, constituent des disposi-
Ion, et incubation dans des conditions données pour le milieu.
tions valables pour la présente partie de I'ISO 8360. Au moment
de la publication de cette partie de I'ISO 8360, les éditions indi-
4.1 Dénombrement
à révision et
quées étaient en vigueur. Toute norme est sujette
les parties prenantes des accords fondés sur cette partie de
Examen des récipients pour déterminer soit la présence d'un
I'ISO 8360 sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer
pigment fluorescent soluble dans l'eau SOUS un rayonnement
les éditions les plus récentes des normes indiquées ci-après.
ultraviolet, soit une croissance.
Les membres de la CE1 et de I'ISO possèdent le registre des
Normes internationales en vigueur à un moment donné.
4.2 Confirmation
IS0 3696 : 1987, €au pour laboratoire à usage analytique -
Des repiquages sont effectués à partir de chaque récipient don-
Spécification et méthodes d'essai.
nant lieu à une croissance ou à une fluorescence sur des boîtes
d'un milieu gélosé lacté.
IS0 5667-1 : 1980, Quaiité de l'eau - Échantillonnage -
Partie 1 : Guide général pour l'établissement des programmes
Après l'incubation, les boîtes sont examinées pour la recherche
d'échantillonnage.
des colonies typiques de Pseudornonas aeruginosa.
IS0 5667-2 : 1982, Qualité de l'eau - Échantillonnage -
Partie 2: Guide général sur les techniques d'échantillonnage.
4.2.1 Souches non pigmentées et atypiques
IS0 5667-3 : 1985, Qualité de l'eau - Échantillonnage - Des repiquages en surface sur une boîte de milieu gélosé solide
Partie 3: Guide général pour la conservation et la manipulation sont effectués à partir de chaque récipient, puis incubés. Des
des échantillons. cultures pures sont obtenues par des repiquages supplémentai-
res sur des boîtes du même milieu gélosé. Chaque culture pure
IS0 6887 : 1983, Microbiologie - Directives générales pour la est finalement étudiée pour certaines caractéristiques biochimi-
préparation des dilutions en vue de l'examen microbiologique. ques (voir l'annexe A).
1

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IS0 8360-1 : 1988 (FI
5.3 Milieu confirmatif
5 Diluants, milieux de culture et réactifs
Utiliser des réactifs de qualité analytique pour la préparation
5.3.1 Gélose lactée à la cétrimide
des milieux de culture et des diluants, sauf spécification con-
traire. Préparer les milieux en utilisant de l'eau distillée sur
5.3.1.1 Composition
verre, ou de l'eau d'une qualité équivalente conforme à
I'ISO 3696, grade 3.
Poudre de lait écrémé 100 g
Bouillon d'extrait de levure (voir ci-après) 250 ml
Des milieux déshydratés existant dans le commerce peuvent
Gélose 15 9
aussi être utilisés. Les milieux doivent être préparés conformé-
Bromure d'hexadécyltriméthyl ammonium
ment aux instructions du fabricant et les adjonctions d'agents
(cétrimide) 0,3 g
sélectifs doivent être faites à la concentration donnée.
Eau à 750 ml
5.1 Liquides de dilution Bouillon d'extrait de levure :
Extrait de levure
Utiliser l'un des diluants de I'ISO 8199.
39
Peptone bactériologique
10 9
Chlorure de sodium
5g
5.2 Milieux de culture
Eau à 1ooomi
e
II est très important que le milieu de culture soit approprié au
5.3.1.2 Préparation du milieu
type d'eau à analyser et au but recherché dans l'analyse. Pour
la mise en évidence de Pseudornonas aeruginosa présumé, utili-
Préparer un volume approprié de bouillon d'extrait de levure en
ser le milieu suivant.
dissolvant tous les composants dans de l'eau distillée à I'ébulli-
20 min à
tion. Ajuster le pH entre 7,2 et 7,4. Stériliser pendant
5.2.1 Bouillon à l'asparagine à l'éthanol
l'autoclave à une température de 121 OC f 1 OC.
(milieu de Drake 10)
Mélanger le bouillon d'extrait de levure stérile, la cétrimide et la
gélose, et porter à ébullition jusqu'à ce que la gélose soit dis-
5.2.1 .I Composition
soute. Introduire la poudre de lait écrémé dans un récipient en
Milieu simple
verre, à part, contenant de l'eau et agiter, de préférence à l'aide
concentration
d'un agitateur magnétique, jusqu'à ce que la poudre soit com-
DL-asparagine
29 plètement dissoute. Traiter les deux solutions séparément à
L-proline
Ig l'autoclave pendant 5 min à une température de 121 OC f 1 OC.
Monohydrogénophosphate de
Éviter la caramélisation du lait en suivant les instructions don-
potassium anhydre
1g nées. Laisser refroidir les soluti
...