ISO 8195:1987
(Main)Caseins and caseinates — Determination of nitrate and nitrite contents — Method by cadmium reduction and spectrometry
Caseins and caseinates — Determination of nitrate and nitrite contents — Method by cadmium reduction and spectrometry
The principle of determination consists in dispersing the casein or caseinate in warm water, precipitating the fat and proteins, filtering and reducing the nitrate to nitrite in a portion of the filtrate by means of copperized cadmium. A figure shows the apparatus for nitrate reduction.
Caséines et caséinates — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites — Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
ISO
INTERNATIONAL STANDARD
8195
First edition
1987-03-15
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEX,QYHAPOAHAfl OPTAHM3A~Mfl fl0 CTAH~APTM3A~MM
Caseins and caseinates - Determination of nitrate and
nitrite contents - Method by Cadmium reduction and
spectrometry
Cas&ines et casbinates - DG termina tion des teneurs en nitra tes et en nitrites - Mk thode par
rbduction au Cadmium et spectromt!trie
Reference number
ISO 8195: 1987 (E)
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Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through ISO technical committees. Esch member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council. They are approved in accordance with ISO procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard ISO 8195 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
NOTE - The method specified in this International Standard has been developed jointly with the
International Dairy Federation (IDF) and the Association of Official Analytical Chemists (AOAC)
and will also be published by these Organkations.
Users should note that all International Standards undergo revision from time to time
and that any reference made herein to any other International Standard implies its
Jatest edition, unless otherwise stated.
0 International Organkation for Standardkation, 1987 0
Printed in Switzerland
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ISO 8195 : 1987 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Caseins and caseinates - Determination of nitrate and
- Method by Cadmium reduction and
nitrite contents
spectrometry
capacity of the column (8.21, and for regeneration of the column (8.3)
1 Scope and field of application
should preferably be freshly boiled and afterwards cooled to room
temperature.
This International Standard specifies a method by Cadmium
reduction and spectrometry for the determination of the nitrate
and nitrite contents of caseins and caseinates.
5.1 Cadmium, granules, diameter 0,3 to 0,8 mm.
If Cadmium granules are not available commercially, they may
be prepared as follows.
2 Reference
Place a suitable number of zinc rods in a beaker and cover
ISO 707, Milk and milk products - Methods of sampling.
with a 40 g/l Solution of Cadmium sulfate octahydrate
KdS04.8H20). From time to time scrape the Cadmium sponge
from the rods over a period of 24 h. Remove the zinc rods and
3 Definition decant the liquid until only sufficient remains to cover the cad-
mium. Wash the sponge two or three times with watet=.
nitrate and nitrite contents of caseins and caseinates: Transfer the Cadmium to a laboratory blender together with
The contents of substances determined by the procedure 400 ml of hydrochloric acid Solution, c(HCI) = 0,l mol/l, and
specified in this International Standard and expressed respec- blend for a few seconds to obtain granules of the required size.
tively as milligrams of nitrate ion (NO3 ) and of nitrite ion (NO, ) Return the contents of the blender to the beaker and leave to
per kilogram. stand for several hours, occasionally stirring to remove
bubbles. Decant most of the liquid and immediately copperize
as described in 8.1 .l to 8.15.
4 Principle
5.2 CopperW sulfate Solution.
Dispersion of the casein or caseinate in warm water, precipita-
tion of the fat and Proteins, and filtration. Dissolve 20 g of copper(ll) sulfate pentahydrate KuS04*5H20)
in water and dilute to 1 000 ml.
Reduction of the nitrate to nitrite in a Portion of the filtrate by
means of copperized Cadmium.
5.3 Hydrochlorit acid Solution, c(HCI) = 2 mol/l.
Development of a red colour, in portions of both unreduced
Dilute 160 ml of concentrated hydrochloric acid (~2~ 1,19 g/ml)
filtrate and of the reduced Solution, by addition of sulfanilamide
to 1 000 ml with water.
and N-l -naphthyl ethylenediamine dihydrochloride, and spec-
trometric measurement at a wavelength of 538 nm.
Hydrochlorit acid Solution, c( HCI) = 0,l mol/l.
5.4
Calculation of the nitrite content of the Sample and of the total
nitrite content after reduction of nitrate, by comparing the
Dilute 50 ml of the hydrochloric acid (5.3) to 1 000 ml with
measured absorbances with those of a set of sodium nitrite
water.
calibration solutions; calculation of the nitrate content from the
differente between these two contents.
5.5 Solutions for precipitation of Proteins and fat.
5.5.1 Zinc sulfate Solution.
5 Reagents
Dissolve 53,5 g of zinc sulfate heptahydrate (ZnSOJ.7H20) in
All reagents shall be of recognized analytical grade. The water
water and dilute to 100 ml.
used shall be distilled or deionized water, free from nitrate and
nitrite.
5.5.2 Potassium hexacyanoferrate(II) Solution.
NOTE - In Order to avoid possible inclusion of small gas bubbles in the
Dissolve 17,2 g of potassium hexacyanoferrate(ll) trihydrate
copperized Cadmium column (6.10), the distilled or deionized water
(K4FeKN)61 .3H20) in water and dilute to 100 ml.
used for the preparation of the column (8.1), for checking the reducing
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ISO 8195: 1987 (E)
5.6 EDTA Solution. 5.9.2 Preparation of Standard solution.
Dissolve 33,5 g of disodium ethylenediaminetetraacetate Transfer, by means of pipettes, 5 ml of the stock solution
(5.9.1) and 20 ml of the buffer Solution (5.10) to a 1 000 ml one-
dihydrate (Na,C10H14N~082H20) in water and dilute to
1 000 ml. mark volumetric flask. Dilute to the mark with water and mix.
Prepare this Solution on the day of use.
5.7 Solutions for colour development.
1 ml of this Standard Solution contains 4,50 pg of N03.
57.1 Solution 1.
5.10 Buffer Solution, pH 9,6 to 9,7.
Dilute 450 ml of concentrated hydrochloric acid (ezO 1,19 g/ml)
to 1 000 ml with watet-. Dilute 50 ml of concentrated hydrochloric acid [ezO 1,19 g/ml;
about 38 % (mlm) HC! solutionl with 600 ml of water. After
mixing, add 135 ml of ammonia Solution [ezO 0,91 g/ml; about
5.7.2 Solution II.
25 % (mlm) NH, solutionl. Dilute to 1 000 ml with water and
mix.
Dissolve, by heating on a water-bath, 0,5 g of sulfanilamide
(NH$GH&02NH$ in a mixture of 75 ml of water and 5 ml of
Adjust the pH to 9,6 to 9,7 if necessary.
concentrated hydrochloric acid (ezO 1,19 g/ml). Cool to room
temperature and dilute to 100 ml with water. Filter if necessary.
NOTE - If ammonia Solution of this concentration is not available, an
equivalent amount of a more concentrated Solution may be used, for
example 100 ml of 35 % (mlm) Solution (ezO 0,88 g/ml).
5.7.3 Solution Ill.
Dissolve 0,l g of N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride
6 Apparatus
(CIOH7NHCH2CH2NH2.2HCI) in water. Dilute to 100 ml. Filter if
necessary.
NOTE ON THE PREPARATION OF GLASSWARE
The Solution may be stored for uptol in a weil-stoppered
All glassware shall be thoroughly cleaned and rinsed with dis-
refrigerator.
brown bottle in a
tilled water to ensure that it is free from nitrate and nitrite.
Usual laboratory equipment and in particular
5.8 Sodium nitrite, Standard Solution corresponding to
0,001 g of NO, per Iitre.
6.1 Analytical balance.
5.8.1 Stock Solution.
6.2 Sample Container, provided with an airtight lid.
Dry a few grams of sodium nitrite (NaNO$ at 110 to 120 OC to
constant mass, i.e. until the differente between two successive
6.3 Magnetit stirrer.
weighings does not exceed 1 mg. Dissolve 0,150 g of the
sodium nitrite in water in a 1 000 ml one-mark volumetric flask.
6.4 Conical flasks, of capacities 250 and 500 ml.
Dilute to the mark with water and mix.
6.5 One-mark volumetric flasks, of capacities 100; 500;
Prepare this Solution on the day of use.
and 1 000 ml, complying with the requirements of ISO 1042,
class B.
5.8.2 Preparation of Standard Solution.
6.6 Pipettes, to deliver 2; 4; 5; 6; 8; 10; 12; 20; and 25 ml,
Transfer, by means of pipettes, 10 ml of the stock Solution
compiying with the requirements of ISO 648, class A, or
(5.8.1) and 20 ml of the buffer Solution (5.10) to a 1 000 ml one-
ISO 835/1.
mark volumetric flask. Dilute to the mark with water and mix.
NOTE - Where appropriate, burettes may be used instead of pipettes.
1 ml of this Standard Solution contains 1,00 pg of NOT.
6.7 Measuring cylinders, of capacities 5; 10; 25; 100; 250;
5.9 Potassium nitrate, Standard Solution corresponding to
500; and 1 000 ml.
0,004 5 g of NO3 per litre.
6.8 Glass funnels, of diameter 7 cm, with short Stern.
5.9.1 Stock Solution.
Filter Paper, medium grade, of about 15 cm,
69 diameter
Dry a few grams of potassium nitrate (KNO,) at 110 to 120 OC
free from ni trate and nitrite.
to constant mass, i.e. until the differente between two suc-
cessive weighings does not exceed 1 mg. Dissolve 1,468 g of
6.10 Reduction column (for example as shown in the
the potassium nitrate in water in a 1 006 ml one-mark
volumetric flask. Dilute to the mark with water and mix. figure).
2
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ISO 8195: 1987 (El
suitable for measuring absorbance at a (5.10) and 20 ml of the EDTA Solution (5.6), at a flow rate not
6.11 Spectrometer,
with cells of Optical path length 1 to exceeding 6 ml/min, then wash the column with 50 ml of
wavelength of 538 nm,
2 cm. water.
6.12 Test sieve, of woven wire cloth, diameter 200 mm, 8.2 Checking the reducing capacity of the
nominal size of openings 500 pm, with receiver, complying
column
with the requirements of ISO 565.
Carry out this check at least twice a day, at the beginning and
at the end of a series of determinations.
6.13 Grinding device, for grinding the laboratory Sample if
necessary. This device should be such that no undue heat will
be developed and no loss of moisture occurs. (A hammer mill
8.2.1 Pipette 20 ml of the Standard potassium nitrate solution
shall not be used.)
(5.9) into the reservoir on top of the column. Immediately add
5 ml of the buffer Solution (5.10) to the contents of the reser-
voir. Collect the eluate in a 100 ml one-mark volumetric flask.
The flow rate shall not exceed 6 ml/min.
7 Sampling
See ISO 707.
8.2.2 When the reservoir has nearly run
...
ISO
NORME INTERNATIONALE
8195
Première édition
1987-03-15
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
MEXAYHAPOAHAÇi OPTAHM3A~MR Il0 CTAHflAPTM3A~MM
Caséines et caséinates - Détermination des teneurs en
- Méthode par réduction au
nitrates et en nitrites
cadmium et spectrométrie
Caseins and caseinates - De termina tion of nitrate and nitrite contents - Method b y cadmium
reduction and spectrometry
Numéro de référence
. ISO 8195: 1987 (F)
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Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est normalement confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8195 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée
conjointement avec la Fédération internationale de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes
analytiques officiels (AOAC) et sera également publiée par ces organisations.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
Organisation internationale de normalisation, 1987 0
0
Imprimé en Suisse
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NORME INTERNATIONALE ISO 8195 : 1987 (F)
Détermination des teneurs en
Caséines et caséinates -
nitrates et en nitrites - Méthode par réduction au
cadmium et spectrométrie
NOTE - Dans le but d’éviter l’inclusion de petites bulles de gaz dans la
1 Objet et domaine d’application
colonne de cadmium cuivré (6.101, l’eau distillée ou déionisée, utilisée
pour la préparation de la colonne (8.11, pour la vérification du pouvoir
La présente Norme internationale spécifie une méthode par
réducteur de la colonne (8.2) et pour la régénération de la colonne
réduction au cadmium et spectrométrie, pour la détermination
(8.3), doit être de préférence récemment bouillie puis refroidie à la tem-
des teneurs en nitrates et en nitrites des caséines et caséinates.
pérature ambiante.
2 Référence
5.1 Cadmium, sous forme de granules, diamétre des parti-
cules 0,3 à 0,8 mm.
I S 0 707, Lait et produits laitiers - M& thodes d’échantillon-
nage.
S’il n’est pas possible de se procurer dans le commerce des gra-
nulés de cadmium, ceux-ci peuvent être préparés de la manière
suivante :
3 Définition
Placer, dans un bécher, un nombre convenable de baguettes de
teneurs en nitrates et nitrites des caséines et caséinates:
zinc et les recouvrir avec une solution de sulfate de cadmium
Teneurs en substances déterminées selon la méthode spécifiée
octahydraté (CdS04e8H20) à 40 g/l. Gratter de temps en
dans la présente Norme internationale et exprimées respective-
temps le cadmium spongieux déposé sur les baguettes et cela
ment en milligrammes d’ion nitrate (NO 3 ) et d’ion nitrite (NO 2 )
pendant une période de 24 h. Retirer les baguettes de zinc et
par kilogramme.
décanter le liquide jusqu’à ce qu’il en reste seulement une quan-
tité suffisante pour recouvrir le cadmium. Laver deux ou trois
fois le cadmium spongieux avec de l’eau. Transférer le cad-
4 Principe
mium dans un broyeur de laboratoire avec 400 ml de solution
d’acide chlorhydrique, c( HCI) = 0,l mol/l, et broyer pendant
Mise en suspension des caséines ou caséinates dans de l’eau
quelques secondes, afin d’obtenir des granulés de la dimension
chaude, précipitation de la matiére grasse et des protéines, et
requise. Replacer le contenu du broyeur dans le bécher et l’y
filtration.
maintenir pendant plusieurs heures en agitant de temps en
temps pour chasser les bulles. Décanter la majeure partie du
Sur une portion du filtrat, réduction des nitrates extraits, à
liquide et procéder immédiatement au cuivrage comme décrit
l’état de nitrite, au moyen de cadmium cuivré.
de 8.1.1 à 8.1.5.
Développement d’une coloration rouge à partir de portions de
filtrat non réduit et à partir de portions de filtrat réduit, par addi-
5.2 Sulfate de cuivre(U), solution.
tion de sulfanilamide et de dichlorhydrate de Wnaphtyl-1)
éthyléne diamine, puis mesurage spectrométrique à une lon-
Dissoudre 20 g de sulfate de cuivre(ll) pentahydraté
gueur d’onde de 538 nm.
(CUSO~~~H~O) dans de l’eau et compléter à 1 000 ml.
Calcul de la teneur en nitrites de l’échantillon et de la teneur
totale en nitrites après réduction des nitrates, par comparaison
des absorbantes mesurées avec celles d’une série de solutions 5.3 Acide chlorhydrique, solution, c(HCI) = 2 mol/l.
étalons de nitrite de sodium; calcul de la teneur en nitrates à
Diluer 160 ml d’acide chlorhydrique concentré (~20 1,19 g/ml) à
partir de la différence entre ces deux teneurs.
1 000 ml avec de l’eau.
5 Réactifs
5.4 Acide chlorhydrique, solution, c(HCI) = 0,I mol/l.
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
L’eau utilisée doit être distillée ou déionisée, exempte de nitrites Diluer 50 ml de la solution d’acide chlorhydrique (5.3) à
et de nitrates. 1 000 ml avec de l’eau.
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ISO 8195 : 1987 (F)
5.5 Solutions pour la précipitation des protéines et de trait de 1 000 ml. Compléter au trait repère avec de l’eau et
homogénéiser.
la matière grasse.
1 ml de cette solution étalon contient 1,00 pg de NO,.
5.5.1 Sulfate de zinc, solution.
Dissoudre 53,5 g de sulfate de zinc heptahydraté 5.9 Nitrate de potassium, solution étalon, correspondant à
0,004 5 g de NO3 par litre.
(ZnSOd.7H20.) dans de l’eau et compléter à 100 ml.
5.5.2 HexacyanoferrateIII) de potassium, solution. 5.9.1 Solution mère.
Dissoudre 17,2 g d’hexacyanoferrate(II) de potassium trihy- Sécher quelques grammes de nitrate de potassium (KNO$
entre 110 et 120 OC jusqu’à masse constante, c’est-à-dire
draté (K,[Fe(CN)G] .3H20) dans de l’eau et compléter à 100 ml.
jusqu’à ce que la différence entre deux pesées successives
n’excède pas 1 mg. Dissoudre 1,468 g de nitrate de potassium
5.6 EDTA, solution.
dans de l’eau dans une fiole jaugée à un trait de 1 000 ml. Com-
pléter au trait repère avec de l’eau et homogénéiser.
Dissoudre 33,5 g d’éthylène diamine tétraacétate disodique
dihydraté (Na2C10H14N208*2H20) dans de l’eau et compléter à
5.9.2 Préparation de la solution étalon.
1 000 ml.
Introduire, à l’aide de pipettes, 5 ml de la solution mère (5.9.1)
5.7 Solutions pour le développement de la coloration.
et 20 ml de la solution tampon (5.10) dans une fiole jaugée à un
trait de 1 000 ml. Compléter au trait repère avec de l’eau et
5.7.1 Solution 1. homogénéiser.
Diluer 450 ml d’acide chlorhydrique concentré (~20 1,19 g/ml) à Préparer cette solution le jour de l’emploi.
1 000 ml avec de l’eau.
1 ml de cette solution étalon contient 4,50 Fg de NO:.
5.7.2 Solution II.
5.10 Solution tampon, de pH 9,6 à 9,7.
Dissoudre, en chauffant au bain d’eau, 0,5 g de sulfanilamide
Diluer 50 ml d’acide chlorhydrique concentré [ezO 1,19 g/ml;
(NH2C6H4S02NH2) dans un mélange constitué par 75 ml d’eau
et 5 ml d’acide chlorhydrique concentré (~2~ 1,19 g/ml). solution à environ 38 % (mlm) HCI] avec 600 ml d’eau. Après
Refroidir à la température ambiante et compléter à 100 ml avec mélange, ajouter 135 ml de solution d’hydroxyde d’ammonium
de l’eau. Filtrer si nécessaire. [QI~ 0,91 g/ml; solution à environ 25 % (mlm) NH,]. Complé-
ter à 1 000 ml avec de l’eau et homogénéiser.
5.7.3 Solution III.
Ajuster le pH de 9,6 à 9,7 si nécessaire.
Dissoudre 0,l g de dichlorhydrate de Wnaphtyl-1) éthylène
NOTE - Si l’on ne dispose pas d’une solution d’hydroxyde d’ammo-
diamine (C10H7NHCH2CH2NH2.2HCI) dans de l’eau. Compléter
nium à cette concentration, une quantité équivalente d’une solution
à 100 ml avec de l’eau. Filtrer si nécessaire.
plus concentrée peut être utilisée, par exemple 100 ml d’une solution à
35 % hlm) lezo 0,88 g/mlL
‘à 1 semaine au réfrigéra-
La solution peut être conservée jusqu
bien bouché.
teur, dans un récipient en verre brun
6 Appareillage
5.8 Nitrite de sodium, solution étalon, correspondant à
NOTE SUR LA PRÉPARATION DE LA VERRERIE
0,001 g de NO, par litre.
Toute la verrerie doit être soigneusement lavée et rincée avec
de l’eau distillée pour être certain qu’elle est exempte de nitra-
5.8.1 Solution mère.
tes et de nitrites.
Sécher quelques grammes de nitrite de sodium (NaNO$, entre
110 et 120 OC jusqu’à masse constante, c’est-à-dire jusqu’à ce
Matériel courant de laboratoire, et notamment:
que la différence entre deux pesées successives n’excède pas
1 mg. Dissoudre 0,150 g de nitrite de sodium dans de l’eau
dans une fiole jaugée à un trait de 1 000 ml. Compléter au trait
6.1 Balance analytique.
repére avec de l’eau et homogénéiser.
6.2 Récipient pour échantillon, muni d’un couvercle her-
Préparer cette solution le jour de l’emploi.
métique.
5.8.2 Préparation de la solution étalon.
63 . Agitateur magnétique.
Introduire, à l’aide de pipettes, 10 ml de la solution mère (5.8.1)
et 20 ml de la solution tampon (5.10) dans une fiole jaugée à un 6.4 Fioles coniques, de 250 ml et 500 ml de capacités.
2
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ISO 8195: 1987 (FI
6.5 Fioles jaugées à un trait, de 100, 500 et 1 000 ml de 8.1.5 Aussitôt après, décanter la solution, puis laver le cad-
mium cuivré avec de l’eau, en prenant soin que le cadmium soit
capacités, conformes à I’ISO 1042, classe B.
continuellement couvert d’eau. Arrêter le lavage lorsque l’eau
de lavage est exempte de cuivre précipité.
6.6 Pipettes, permettant de délivrer 2; 4; 5; 6; 8; 10; 12; 20
et 25 ml, conformes à I’ISO 648, classe A ou à I’ISO 835/1.
8.1.6 Placer un tampon de laine de verre à la base de la
colonne en verre destinée à contenir le cadmium cuivré (voir la
NOTE - Le cas échéant, des burettes peuvent être utilisées à la place
des pipettes.
figure). Remplir la colonne en verre avec de l’eau.
6.7 Éprouvettes graduées, de 5; 10; 25; 100; 250; 500 et
8.1.7 Transférer le cadmium cuivré dans la colonne en verre,
1 000 ml de capacités.
en réduisant à un minimum l’exposition à l’air. La hauteur de
cadmium cuivré doit être de 15 à 20 cm.
6.8 Entonnoirs en verre, d’environ 7 cm de diamètre, à tige
NOTES
courte.
1 Éviter d’enfermer des bulles d’air entre les granulés de cadmium
cuivré.
6.9 Papier filtre, pour filtration moyenne, d’environ 15 cm
2 Éviter de la isser le liquide descendre en-dessous du niveau de cad-
de diamètre, exempt de nitrates et de nitrites.
mium cuivré.
6.10 Appareil pour la réduction des nitrates (par exemple
8.1.8 Conditionner la colonne qui vient d’être préparée en y
celui qui est représenté par la figure).
faisant circuler un mélange constitué par 750 ml d’eau, 225 ml
de la solution étalon de nitrate de potassium (5.91, 20 ml de la
6. II Spectromètre, permettant d’effectuer des mesurages
solution tampon (5.10) et 20 ml de la solution d’EDTA (5.61, à
à une longueur d’onde
...
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NORME INTERNATIONALE
8195
Première édition
1987-03-15
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION
ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
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Caséines et caséinates - Détermination des teneurs en
- Méthode par réduction au
nitrates et en nitrites
cadmium et spectrométrie
Caseins and caseinates - De termina tion of nitrate and nitrite contents - Method b y cadmium
reduction and spectrometry
Numéro de référence
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Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est normalement confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8195 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée
conjointement avec la Fédération internationale de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes
analytiques officiels (AOAC) et sera également publiée par ces organisations.
L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
contraire, de la dernière édition.
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Caséines et caséinates -
nitrates et en nitrites - Méthode par réduction au
cadmium et spectrométrie
NOTE - Dans le but d’éviter l’inclusion de petites bulles de gaz dans la
1 Objet et domaine d’application
colonne de cadmium cuivré (6.101, l’eau distillée ou déionisée, utilisée
pour la préparation de la colonne (8.11, pour la vérification du pouvoir
La présente Norme internationale spécifie une méthode par
réducteur de la colonne (8.2) et pour la régénération de la colonne
réduction au cadmium et spectrométrie, pour la détermination
(8.3), doit être de préférence récemment bouillie puis refroidie à la tem-
des teneurs en nitrates et en nitrites des caséines et caséinates.
pérature ambiante.
2 Référence
5.1 Cadmium, sous forme de granules, diamétre des parti-
cules 0,3 à 0,8 mm.
I S 0 707, Lait et produits laitiers - M& thodes d’échantillon-
nage.
S’il n’est pas possible de se procurer dans le commerce des gra-
nulés de cadmium, ceux-ci peuvent être préparés de la manière
suivante :
3 Définition
Placer, dans un bécher, un nombre convenable de baguettes de
teneurs en nitrates et nitrites des caséines et caséinates:
zinc et les recouvrir avec une solution de sulfate de cadmium
Teneurs en substances déterminées selon la méthode spécifiée
octahydraté (CdS04e8H20) à 40 g/l. Gratter de temps en
dans la présente Norme internationale et exprimées respective-
temps le cadmium spongieux déposé sur les baguettes et cela
ment en milligrammes d’ion nitrate (NO 3 ) et d’ion nitrite (NO 2 )
pendant une période de 24 h. Retirer les baguettes de zinc et
par kilogramme.
décanter le liquide jusqu’à ce qu’il en reste seulement une quan-
tité suffisante pour recouvrir le cadmium. Laver deux ou trois
fois le cadmium spongieux avec de l’eau. Transférer le cad-
4 Principe
mium dans un broyeur de laboratoire avec 400 ml de solution
d’acide chlorhydrique, c( HCI) = 0,l mol/l, et broyer pendant
Mise en suspension des caséines ou caséinates dans de l’eau
quelques secondes, afin d’obtenir des granulés de la dimension
chaude, précipitation de la matiére grasse et des protéines, et
requise. Replacer le contenu du broyeur dans le bécher et l’y
filtration.
maintenir pendant plusieurs heures en agitant de temps en
temps pour chasser les bulles. Décanter la majeure partie du
Sur une portion du filtrat, réduction des nitrates extraits, à
liquide et procéder immédiatement au cuivrage comme décrit
l’état de nitrite, au moyen de cadmium cuivré.
de 8.1.1 à 8.1.5.
Développement d’une coloration rouge à partir de portions de
filtrat non réduit et à partir de portions de filtrat réduit, par addi-
5.2 Sulfate de cuivre(U), solution.
tion de sulfanilamide et de dichlorhydrate de Wnaphtyl-1)
éthyléne diamine, puis mesurage spectrométrique à une lon-
Dissoudre 20 g de sulfate de cuivre(ll) pentahydraté
gueur d’onde de 538 nm.
(CUSO~~~H~O) dans de l’eau et compléter à 1 000 ml.
Calcul de la teneur en nitrites de l’échantillon et de la teneur
totale en nitrites après réduction des nitrates, par comparaison
des absorbantes mesurées avec celles d’une série de solutions 5.3 Acide chlorhydrique, solution, c(HCI) = 2 mol/l.
étalons de nitrite de sodium; calcul de la teneur en nitrates à
Diluer 160 ml d’acide chlorhydrique concentré (~20 1,19 g/ml) à
partir de la différence entre ces deux teneurs.
1 000 ml avec de l’eau.
5 Réactifs
5.4 Acide chlorhydrique, solution, c(HCI) = 0,I mol/l.
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
L’eau utilisée doit être distillée ou déionisée, exempte de nitrites Diluer 50 ml de la solution d’acide chlorhydrique (5.3) à
et de nitrates. 1 000 ml avec de l’eau.
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ISO 8195 : 1987 (F)
5.5 Solutions pour la précipitation des protéines et de trait de 1 000 ml. Compléter au trait repère avec de l’eau et
homogénéiser.
la matière grasse.
1 ml de cette solution étalon contient 1,00 pg de NO,.
5.5.1 Sulfate de zinc, solution.
Dissoudre 53,5 g de sulfate de zinc heptahydraté 5.9 Nitrate de potassium, solution étalon, correspondant à
0,004 5 g de NO3 par litre.
(ZnSOd.7H20.) dans de l’eau et compléter à 100 ml.
5.5.2 HexacyanoferrateIII) de potassium, solution. 5.9.1 Solution mère.
Dissoudre 17,2 g d’hexacyanoferrate(II) de potassium trihy- Sécher quelques grammes de nitrate de potassium (KNO$
entre 110 et 120 OC jusqu’à masse constante, c’est-à-dire
draté (K,[Fe(CN)G] .3H20) dans de l’eau et compléter à 100 ml.
jusqu’à ce que la différence entre deux pesées successives
n’excède pas 1 mg. Dissoudre 1,468 g de nitrate de potassium
5.6 EDTA, solution.
dans de l’eau dans une fiole jaugée à un trait de 1 000 ml. Com-
pléter au trait repère avec de l’eau et homogénéiser.
Dissoudre 33,5 g d’éthylène diamine tétraacétate disodique
dihydraté (Na2C10H14N208*2H20) dans de l’eau et compléter à
5.9.2 Préparation de la solution étalon.
1 000 ml.
Introduire, à l’aide de pipettes, 5 ml de la solution mère (5.9.1)
5.7 Solutions pour le développement de la coloration.
et 20 ml de la solution tampon (5.10) dans une fiole jaugée à un
trait de 1 000 ml. Compléter au trait repère avec de l’eau et
5.7.1 Solution 1. homogénéiser.
Diluer 450 ml d’acide chlorhydrique concentré (~20 1,19 g/ml) à Préparer cette solution le jour de l’emploi.
1 000 ml avec de l’eau.
1 ml de cette solution étalon contient 4,50 Fg de NO:.
5.7.2 Solution II.
5.10 Solution tampon, de pH 9,6 à 9,7.
Dissoudre, en chauffant au bain d’eau, 0,5 g de sulfanilamide
Diluer 50 ml d’acide chlorhydrique concentré [ezO 1,19 g/ml;
(NH2C6H4S02NH2) dans un mélange constitué par 75 ml d’eau
et 5 ml d’acide chlorhydrique concentré (~2~ 1,19 g/ml). solution à environ 38 % (mlm) HCI] avec 600 ml d’eau. Après
Refroidir à la température ambiante et compléter à 100 ml avec mélange, ajouter 135 ml de solution d’hydroxyde d’ammonium
de l’eau. Filtrer si nécessaire. [QI~ 0,91 g/ml; solution à environ 25 % (mlm) NH,]. Complé-
ter à 1 000 ml avec de l’eau et homogénéiser.
5.7.3 Solution III.
Ajuster le pH de 9,6 à 9,7 si nécessaire.
Dissoudre 0,l g de dichlorhydrate de Wnaphtyl-1) éthylène
NOTE - Si l’on ne dispose pas d’une solution d’hydroxyde d’ammo-
diamine (C10H7NHCH2CH2NH2.2HCI) dans de l’eau. Compléter
nium à cette concentration, une quantité équivalente d’une solution
à 100 ml avec de l’eau. Filtrer si nécessaire.
plus concentrée peut être utilisée, par exemple 100 ml d’une solution à
35 % hlm) lezo 0,88 g/mlL
‘à 1 semaine au réfrigéra-
La solution peut être conservée jusqu
bien bouché.
teur, dans un récipient en verre brun
6 Appareillage
5.8 Nitrite de sodium, solution étalon, correspondant à
NOTE SUR LA PRÉPARATION DE LA VERRERIE
0,001 g de NO, par litre.
Toute la verrerie doit être soigneusement lavée et rincée avec
de l’eau distillée pour être certain qu’elle est exempte de nitra-
5.8.1 Solution mère.
tes et de nitrites.
Sécher quelques grammes de nitrite de sodium (NaNO$, entre
110 et 120 OC jusqu’à masse constante, c’est-à-dire jusqu’à ce
Matériel courant de laboratoire, et notamment:
que la différence entre deux pesées successives n’excède pas
1 mg. Dissoudre 0,150 g de nitrite de sodium dans de l’eau
dans une fiole jaugée à un trait de 1 000 ml. Compléter au trait
6.1 Balance analytique.
repére avec de l’eau et homogénéiser.
6.2 Récipient pour échantillon, muni d’un couvercle her-
Préparer cette solution le jour de l’emploi.
métique.
5.8.2 Préparation de la solution étalon.
63 . Agitateur magnétique.
Introduire, à l’aide de pipettes, 10 ml de la solution mère (5.8.1)
et 20 ml de la solution tampon (5.10) dans une fiole jaugée à un 6.4 Fioles coniques, de 250 ml et 500 ml de capacités.
2
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ISO 8195: 1987 (FI
6.5 Fioles jaugées à un trait, de 100, 500 et 1 000 ml de 8.1.5 Aussitôt après, décanter la solution, puis laver le cad-
mium cuivré avec de l’eau, en prenant soin que le cadmium soit
capacités, conformes à I’ISO 1042, classe B.
continuellement couvert d’eau. Arrêter le lavage lorsque l’eau
de lavage est exempte de cuivre précipité.
6.6 Pipettes, permettant de délivrer 2; 4; 5; 6; 8; 10; 12; 20
et 25 ml, conformes à I’ISO 648, classe A ou à I’ISO 835/1.
8.1.6 Placer un tampon de laine de verre à la base de la
colonne en verre destinée à contenir le cadmium cuivré (voir la
NOTE - Le cas échéant, des burettes peuvent être utilisées à la place
des pipettes.
figure). Remplir la colonne en verre avec de l’eau.
6.7 Éprouvettes graduées, de 5; 10; 25; 100; 250; 500 et
8.1.7 Transférer le cadmium cuivré dans la colonne en verre,
1 000 ml de capacités.
en réduisant à un minimum l’exposition à l’air. La hauteur de
cadmium cuivré doit être de 15 à 20 cm.
6.8 Entonnoirs en verre, d’environ 7 cm de diamètre, à tige
NOTES
courte.
1 Éviter d’enfermer des bulles d’air entre les granulés de cadmium
cuivré.
6.9 Papier filtre, pour filtration moyenne, d’environ 15 cm
2 Éviter de la isser le liquide descendre en-dessous du niveau de cad-
de diamètre, exempt de nitrates et de nitrites.
mium cuivré.
6.10 Appareil pour la réduction des nitrates (par exemple
8.1.8 Conditionner la colonne qui vient d’être préparée en y
celui qui est représenté par la figure).
faisant circuler un mélange constitué par 750 ml d’eau, 225 ml
de la solution étalon de nitrate de potassium (5.91, 20 ml de la
6. II Spectromètre, permettant d’effectuer des mesurages
solution tampon (5.10) et 20 ml de la solution d’EDTA (5.61, à
à une longueur d’onde
...
Questions, Comments and Discussion
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