Water quality - Guidance for determination of biodegradability in the marine environment

This International Standard specifies five methods for determining the ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in the marine environment by aerobic microorganisms in static aqueous test systems. Standard degradation methods developed for testing in fresh water are modified and adapted to marine conditions. These methods are the DOC die-away test (ISO 7827), the closed bottle test (ISO 10707), the two-phase closed bottle test (ISO 10708), the CO2 evolution test (ISO 9439) and the CO2 headspace test (ISO 14593). The methods apply to organic compounds which a) are water-soluble under the conditions of the test used; b) are poorly water-soluble under the conditions of the test used, in which case special measures may be necessary to achieve good dispersion of the compound (see for example, ISO 10634); c) are volatile, provided that an appropriate test with suitable conditions is used; d) are not inhibitory to the test microorganisms at the concentration chosen for the tests. The presence of inhibitory effects can be determined as specified in this International Standard. NOTE The conditions described in this International Standard do not always correspond to the optimal conditions for allowing the maximum degree of biodegradation to occur. For biodegradation methods in fresh water see ISO 14593 and ISO 15462, and for biodegradation at low concentrations see ISO 14592.

Qualité de l'eau - Lignes directrices pour la détermination de la biodégradabilité en milieu marin

La présente Norme internationale spécifie cinq méthodes de détermination de la biodégradabilité aérobie ultime
des composés organiques en milieu marin par des micro-organismes aérobies dans des systčmes d'essai
aquatiques statiques. Les méthodes de dégradation normalisées mises en oeuvre pour les essais en eau douce
sont modifiées et adaptées ŕ des conditions marines. Ces méthodes sont les suivantes: essai de décroissance du
COD (ISO 7827), essai en fiole fermée (ISO 10707), essai en fiole fermée ŕ deux phases (ISO 10708), essai
d'évolution du CO2 (ISO 9439) et essai de l'espace de tęte du CO2 (ISO 14593).
Ces méthodes s'appliquent ŕ des composés organiques
a) solubles dans l'eau dans les conditions de l'essai utilisé;
b) peu solubles dans l'eau dans les conditions de l'essai utilisé; dans ce cas, il peut ętre nécessaire de prendre
des mesures particuličres afin d'assurer une bonne dispersion du composé (voir par exemple l'ISO 10634);
c) volatils, ŕ condition qu'un essai approprié réalisé dans des conditions adéquates soit utilisé;
d) n'ayant pas d'effet inhibiteur sur les micro-organismes soumis ŕ l'essai, ŕ la concentration choisie pour les
essais. L'existence d'un effet inhibiteur peut ętre mis en évidence suivant la méthode proposée dans la
présente Norme internationale.
NOTE Les conditions décrites dans la présente Norme internationale ne correspondent pas toujours aux conditions
optimales permettant un degré de biodégradation maximal. Pour les méthodes de biodégradation en eau douce, voir
l'ISO 14593 et l'ISO 15462, et pour la biodégradation ŕ de faibles concentrations, voir l'ISO 14592.

Kakovost vode - Navodilo za določevanje biorazgradljivosti v morskem okolju

Ta mednarodni standard določa pet metod določevanja končne aerobne biorazgradljivosti organskih spojin v morskem okolju z aerobnimi mikroorganizmi v mirujočih preskusnih vodnih sistemih. Standardne metode razpada, razvite za preskušanje v sladki vodi, so spremenjene in prilagojene morskim pogojem. Te metode so preskus die-away DOC (ISO 7827), preskus v zaprtih steklenicah (ISO 10707), dvofazni preskus v zaprtih steklenicah (ISO 10708), preskus z merjenjem spuščenega ogljikovega dioksida (ISO 9439) in CO2 headspace test (ISO 14593). Metode veljajo za organske spojine, ki a) so topne v vodi pod pogoji uporabljenega preskusa; b) so slabo topne v vodi pod pogoji uporabljenega preskusa, pri čemer so lahko potrebni posebni ukrepi za doseganje dobre disperzije spojine (glej na primer ISO 10634); c) so hlapne, pod pogojem, da se uporabi preskus s primernimi pogoji; d) niso zaviralne za preskusne mikroorganizme pri koncentraciji, ki je izbrana za preskuse. Prisotnost zaviralnih učinkov se lahko določit, kot je tudi opredeljeno v tem mednarodnem standardu.   OPOMBA Pogoji, opisani v tem mednarodnem standardu, ne ustrezajo vedno optimalnim pogojem, da se omogoči pojav najvišje stopnje biorazgradljivosti. Za metode biorazdradljivosti v sladki vodi glej ISO 14593 in ISO 15462, za biorazgradljivost pri nizkih koncentracijah glej ISO 14592.

General Information

Status
Published
Public Enquiry End Date
19-Jul-2009
Publication Date
01-Jul-2010
Technical Committee
Current Stage
6060 - National Implementation/Publication (Adopted Project)
Start Date
12-May-2010
Due Date
17-Jul-2010
Completion Date
02-Jul-2010

Buy Standard

Standard
ISO 16221:2001 - Water quality -- Guidance for determination of biodegradability in the marine environment
English language
12 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview
Standard
SIST ISO 16221:2010
English language
17 pages
sale 10% off
Preview
sale 10% off
Preview

e-Library read for
1 day
Standard
ISO 16221:2001 - Qualité de l'eau -- Lignes directrices pour la détermination de la biodégradabilité en milieu marin
French language
13 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview

Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16221
First edition
2001-02-01
Water quality — Guidance for determination
of biodegradability in the marine
environment
Qualité de l'eau — Lignes directrices pour la détermination de la
biodégradabilité en milieu marin
Reference number
ISO 16221:2001(E)
ISO 2001
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 16221:2001(E)
PDF disclaimer

This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but shall not

be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In downloading this

file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat accepts no liability in this

area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.

Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation parameters

were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In the unlikely event

that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

© ISO 2001

All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means, electronic

or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or ISO's member body

in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 � CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.ch
Web www.iso.ch
Printed in Switzerland
ii © ISO 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 16221:2001(E)
Contents Page

Foreword.....................................................................................................................................................................iv

Introduction.................................................................................................................................................................v

1 Scope ..............................................................................................................................................................1

2 Normative references ....................................................................................................................................1

3 Terms and definitions ...................................................................................................................................2

4 Principle..........................................................................................................................................................4

5 Test environment...........................................................................................................................................4

6 Reagents.........................................................................................................................................................4

7 Apparatus .......................................................................................................................................................8

8 Test procedure...............................................................................................................................................8

9 Calculation and expression of results.........................................................................................................9

10 Validity of results.........................................................................................................................................10

11 Results of ring tests ....................................................................................................................................10

12 Test report ....................................................................................................................................................10

Bibliography..............................................................................................................................................................12

© ISO 2001 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 16221:2001(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO

member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical

committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has

the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in

liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical

Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.

Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.

Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

International Standard ISO 16221 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality,

Subcommittee SC 5, Biological methods.
iv © ISO 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 16221:2001(E)
Introduction

ISO/TC 147 has established International Standards for testing biodegradability of substances and waste water in

the aquatic environment. All these methods, which are summarized in ISO 15462, can only be used for the

determination and prediction of biodegradability in fresh water. There are, however, many cases, for example,

substances used off-shore, where an urgent need exists for testing biodegradability in the marine environment.

This International Standard describes biodegradation testing in marine test systems, and is based on an

established OECD Guideline and the experience gained by a working group of the Oslo and Paris Commission

(OSPARCOM) which has selected suitable standardized ISO methods, adopted for marine conditions and checked

in a ring test.
© ISO 2001 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 16221:2001(E)
Water quality — Guidance for determination of biodegradability in
themarineenvironment
1 Scope

This International Standard specifies five methods for determining the ultimate aerobic biodegradability of organic

compounds in the marine environment by aerobic microorganisms in static aqueous test systems. Standard

degradation methods developed for testing in fresh water are modified and adapted to marine conditions. These

methods are the DOC die-away test (ISO 7827), the closed bottle test (ISO 10707), the two-phase closed bottle

test (ISO 10708), the CO evolution test (ISO 9439) and the CO headspace test (ISO 14593).

2 2
The methods apply to organic compounds which
a) are water-soluble under the conditions of the test used;

b) are poorly water-soluble under the conditions of the test used, in which case special measures may be

necessary to achieve good dispersion of the compound (see for example, ISO 10634);

c) are volatile, provided that an appropriate test with suitable conditions is used;

d) are not inhibitory to the test microorganisms at the concentration chosen for the tests. The presence of

inhibitory effects can be determined as specified in this International Standard.

NOTE The conditions described in this International Standard do not always correspond to the optimal conditions for

allowing the maximum degree of biodegradation to occur. For biodegradation methods in fresh water see ISO 14593 and

ISO 15462, and for biodegradation at low concentrations see ISO 14592.
2 Normative references

The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of

this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these

publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to

investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For

undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC

maintain registers of currently valid International Standards.

ISO 7827, Water quality — Evaluation in an aqueous medium of the “ultimate” aerobic biodegradability of organic

compounds — Method by analysis of dissolved organic carbon (DOC).

ISO 9439, Water quality — Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in aqueous

medium — Carbon dioxide evolution test.

ISO 10707, Water quality — Evaluation in an aqueous medium of the “ultimate” aerobic biodegradability of organic

compounds — Method by analysis of biochemical oxygen demand (closed bottle test).

ISO 10708, Water quality — Evaluation in an aqueous medium of the “ultimate” aerobic biodegradability of organic

compounds — Determination of biochemical oxygen demand in a two-phase closed bottle test.

© ISO 2001 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 16221:2001(E)

ISO 14592-1, Water quality — Evaluation of the aerobic biodegradability of organic compounds at low

concentrations — Part 1: Shake-flask batch test with surface water or surface water/sediment suspensions.

ISO 14592-2, Water quality — Evaluation of the aerobic biodegradability of organic compounds at low

concentrations — Part 2: Continuous flow river model with attached biomass.

ISO 14593, Water quality — Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in aqueous

medium — Method by analysis of inorganic carbon in sealed vessels (CO headspace test).

3 Terms and definitions

For the purposes of this International Standard, the following terms and definitions apply.

3.1
ultimate aerobic biodegradation

breakdown of a chemical compound or organic matter by microorganisms in the presence of oxygen to carbon

dioxide, water and mineral salts of any other elements present (mineralization) and normally the production of new

biomass
3.2
primary biodegradation

structural change (transformation) of a chemical compound by microorganisms resulting in the loss of a specific

property
3.3
total organic carbon
TOC

all that carbon present in organic matter which is dissolved and suspended in the water sample

3.4
dissolved organic carbon
DOC

that part of the organic carbon in the water sample which cannot be removed by specified phase separation

NOTE Examples of specified phase separation are centrifugation at 40 000 ms for 15 min or membrane filtration using

membranes with pores of 0,2 �mto0,45 �mdiameter.
3.5
total inorganic carbon
TIC
all that carbon in the water sample deriving from carbon dioxide and carbonate.
3.6
dissolved inorganic carbon
DIC

that part of the carbon in the water sample which cannot be removed by specified phase separation

NOTE Examples of specified phase separation are centrifugation at 40 000 ms for 15 min or membrane filtration using

membranes with pores of 0,2 �mto0,45 �mdiameter.
3.7
chemical oxygen demand
COD

mass concentration of oxygen equivalent to the amount of a specified oxidant consumed by a chemical compound

or organic matter when a water sample is treated with that oxidant under defined conditions

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

2 © ISO 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 16221:2001(E)
3.8
biochemical oxygen demand
BOD

mass concentration of dissolved oxygen consumed under specified conditions by the aerobic biological oxidation of

a chemical compound or organic matter in the water sample

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

3.9
theoretical oxygen demand
ThOD

theoretical amount of oxygen required to oxidize a chemical compound completely, calculated from the molecular

formula

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

3.10
theoretical amount of formed carbon dioxide
ThCO

theoretical amount of carbon dioxide formed after oxidizing a chemical compound completely, calculated from the

molecular formula

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

3.11
theoretical amount of inorganic carbon
ThIC

theoretical amount of inorganic carbon formed after oxidizing a chemical compound completely, calculated from the

molecular formula

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

3.12
lag phase

time from the start of a test until adaptation and/or selection of the degrading microorganisms are achieved and the

biodegradation degree of a chemical compound or organic matter has increased to about 10 % biodegradation

NOTE It is expressed in days.
3.13
maximum level of biodegradation

degree of biodegradation of a chemical compound or organic matter in a test, above which no further

biodegradation takes place during the test
NOTE It is expressed as a percent.
3.14
biodegradation phase

time from the end of the lag phase of a test until about 90 % of the maximum level of biodegradation has been

reached
NOTE It is expressed in days.
3.15
plateau phase
time from the end of the biodegradation phase until the end of the test
NOTE It is expressed in days.
© ISO 2001 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 16221:2001(E)
3.16
pre-exposure

pre-incubation of an inoculum in the presence of the test chemical compound or organic matter, with the aim of

enhancing the ability of this inoculum to biodegrade the test material by adaptation and/or selection of the

microorganisms
3.17
preconditioning

pre-incubation of an inoculum under the conditions of the subsequent test in the absence of the test chemical

compound or organic matter, with the aim of improving the performance of the test by acclimatization of the

microorganisms to the test conditions
4Principle

This International Standard describes five methods for determining the biodegradability of organic compounds in

the marine environment by aerobic microorganisms using static aqueous test systems. Standard degradation

methods developed for testing in fresh water are modified, adapted and used for this purpose.

Test mixtures are prepared containing natural or artificial seawater, marine bacteria and the organic compound, at a

suitable concentration, as the sole source of carbon and energy. The test mixtures and controls are incubated at the

desired temperature. Ultimate biodegradation is followed over a specified period by measuring summary parameters

as described in the basic test methods. Biodegradation based on DOC (dissolved organic carbon) removal is

determined by comparing the measured concentrations at the start and the end of the test as specified in the DOC

die-away test (ISO 7827). BOD (biochemical oxygen demand) is measured and compared with the theoretical

oxygen demand (ThOD) or the measured chemical oxygen demand (COD) as specified in the closed bottle test

(ISO 10707) and the two-phase closed bottle test (ISO 10708). The evolution of carbon dioxide (CO)is

determined and compared with the theoretical carbon dioxide evolution (ThCO )using the CO evolution test

2 2

(ISO 9439), and TIC (total inorganic carbon) is determined and compared with the theoretical inorganic carbon

(ThIC) in accordance with the CO headspace test (ISO 14593).

If required and if a substance-specific analytical method is available, information on primary degradability may be

obtained by measuring the loss of the test compound during the test, or biodegradation may be determined at low

concentration using radio-labelled (usually C) test compounds (ISO 14592).
5 Test environment

Incubation shall take place in the dark or in diffused light, at the desired temperature, usually within the range 15 °C

to 25 °C which shall not vary by more than� 1 °C during the test. In those cases where the objective of the study is

to simulate environmental situations, tests may be carried out beyond this normal temperature range.

6 Reagents

Use as test medium natural (6.2) or artificial seawater (6.3). Use only reagents of recognized analytical grade.

6.1 Water, distilled or de-ionized, containing less than 1 mg DOC per litre.
6.2 Natural seawater
6.2.1 Sampling and pretreatment

Use any seawater of natural origin. Collect a sample in a thoroughly cleansed container and transport to the

laboratory, preferably within two days. During transport do not allow the temperature of the sample to exceed

significantly the range 10 °Cto30 C.
Provide the following information:
4 © ISO 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 16221:2001(E)
� place and depth of collection,

� pollutional and nutritional status of the sampling site (e.g. concentration of nitrate, ammonium and phosphate)

and appearance of the sample,
� date of collection and time between sampling and start of the test,
� temperature at collection,
� salinity and DOC (use e.g. ISO 8245).

When natural seawater is used, normally sufficient microorganisms are available and no additional inoculation is

required.

It is recommended to determine the number of colony-forming heterotrophic bacteria in the natural seawater, e.g.

by plate count using a marine agar. A suitable bacterial concentration is about 10 cells/ml in the test vessels.

When the natural seawater has too low a bacterial density, inoculate as described for artificial seawater (6.3).

Check the activity of the natural seawater by means of the reference compound.
NOTE 1 Normally the natural seawater and th
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 16221:2010
01-september-2010
.DNRYRVWYRGH1DYRGLOR]DGRORþHYDQMHELRUD]JUDGOMLYRVWLYPRUVNHPRNROMX

Water quality - Guidance for determination of biodegradability in the marine environment

Qualité de l'eau - Lignes directrices pour la détermination de la biodégradabilité en milieu

marin
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 16221:2001
ICS:
13.060.10 Voda iz naravnih virov Water of natural resources
13.060.70 Preiskava bioloških lastnosti Examination of biological
vode properties of water
SIST ISO 16221:2010 en,fr

2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

---------------------- Page: 1 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
---------------------- Page: 2 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 16221
First edition
2001-02-01
Water quality — Guidance for determination
of biodegradability in the marine
environment
Qualité de l'eau — Lignes directrices pour la détermination de la
biodégradabilité en milieu marin
Reference number
ISO 16221:2001(E)
ISO 2001
---------------------- Page: 3 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
ISO 16221:2001(E)
PDF disclaimer

This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but shall not

be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In downloading this

file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat accepts no liability in this

area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.

Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation parameters

were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In the unlikely event

that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

© ISO 2001

All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means, electronic

or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or ISO's member body

in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 � CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.ch
Web www.iso.ch
Printed in Switzerland
ii © ISO 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
ISO 16221:2001(E)
Contents Page

Foreword.....................................................................................................................................................................iv

Introduction.................................................................................................................................................................v

1 Scope ..............................................................................................................................................................1

2 Normative references ....................................................................................................................................1

3 Terms and definitions ...................................................................................................................................2

4 Principle..........................................................................................................................................................4

5 Test environment...........................................................................................................................................4

6 Reagents.........................................................................................................................................................4

7 Apparatus .......................................................................................................................................................8

8 Test procedure...............................................................................................................................................8

9 Calculation and expression of results.........................................................................................................9

10 Validity of results.........................................................................................................................................10

11 Results of ring tests ....................................................................................................................................10

12 Test report ....................................................................................................................................................10

Bibliography..............................................................................................................................................................12

© ISO 2001 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 5 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
ISO 16221:2001(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO

member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical

committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has

the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in

liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical

Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.

Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.

Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

International Standard ISO 16221 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality,

Subcommittee SC 5, Biological methods.
iv © ISO 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
ISO 16221:2001(E)
Introduction

ISO/TC 147 has established International Standards for testing biodegradability of substances and waste water in

the aquatic environment. All these methods, which are summarized in ISO 15462, can only be used for the

determination and prediction of biodegradability in fresh water. There are, however, many cases, for example,

substances used off-shore, where an urgent need exists for testing biodegradability in the marine environment.

This International Standard describes biodegradation testing in marine test systems, and is based on an

established OECD Guideline and the experience gained by a working group of the Oslo and Paris Commission

(OSPARCOM) which has selected suitable standardized ISO methods, adopted for marine conditions and checked

in a ring test.
© ISO 2001 – All rights reserved v
---------------------- Page: 7 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
---------------------- Page: 8 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
INTERNATIONAL STANDARD ISO 16221:2001(E)
Water quality — Guidance for determination of biodegradability in
themarineenvironment
1 Scope

This International Standard specifies five methods for determining the ultimate aerobic biodegradability of organic

compounds in the marine environment by aerobic microorganisms in static aqueous test systems. Standard

degradation methods developed for testing in fresh water are modified and adapted to marine conditions. These

methods are the DOC die-away test (ISO 7827), the closed bottle test (ISO 10707), the two-phase closed bottle

test (ISO 10708), the CO evolution test (ISO 9439) and the CO headspace test (ISO 14593).

2 2
The methods apply to organic compounds which
a) are water-soluble under the conditions of the test used;

b) are poorly water-soluble under the conditions of the test used, in which case special measures may be

necessary to achieve good dispersion of the compound (see for example, ISO 10634);

c) are volatile, provided that an appropriate test with suitable conditions is used;

d) are not inhibitory to the test microorganisms at the concentration chosen for the tests. The presence of

inhibitory effects can be determined as specified in this International Standard.

NOTE The conditions described in this International Standard do not always correspond to the optimal conditions for

allowing the maximum degree of biodegradation to occur. For biodegradation methods in fresh water see ISO 14593 and

ISO 15462, and for biodegradation at low concentrations see ISO 14592.
2 Normative references

The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of

this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these

publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to

investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For

undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC

maintain registers of currently valid International Standards.

ISO 7827, Water quality — Evaluation in an aqueous medium of the “ultimate” aerobic biodegradability of organic

compounds — Method by analysis of dissolved organic carbon (DOC).

ISO 9439, Water quality — Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in aqueous

medium — Carbon dioxide evolution test.

ISO 10707, Water quality — Evaluation in an aqueous medium of the “ultimate” aerobic biodegradability of organic

compounds — Method by analysis of biochemical oxygen demand (closed bottle test).

ISO 10708, Water quality — Evaluation in an aqueous medium of the “ultimate” aerobic biodegradability of organic

compounds — Determination of biochemical oxygen demand in a two-phase closed bottle test.

© ISO 2001 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 9 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
ISO 16221:2001(E)

ISO 14592-1, Water quality — Evaluation of the aerobic biodegradability of organic compounds at low

concentrations — Part 1: Shake-flask batch test with surface water or surface water/sediment suspensions.

ISO 14592-2, Water quality — Evaluation of the aerobic biodegradability of organic compounds at low

concentrations — Part 2: Continuous flow river model with attached biomass.

ISO 14593, Water quality — Evaluation of ultimate aerobic biodegradability of organic compounds in aqueous

medium — Method by analysis of inorganic carbon in sealed vessels (CO headspace test).

3 Terms and definitions

For the purposes of this International Standard, the following terms and definitions apply.

3.1
ultimate aerobic biodegradation

breakdown of a chemical compound or organic matter by microorganisms in the presence of oxygen to carbon

dioxide, water and mineral salts of any other elements present (mineralization) and normally the production of new

biomass
3.2
primary biodegradation

structural change (transformation) of a chemical compound by microorganisms resulting in the loss of a specific

property
3.3
total organic carbon
TOC

all that carbon present in organic matter which is dissolved and suspended in the water sample

3.4
dissolved organic carbon
DOC

that part of the organic carbon in the water sample which cannot be removed by specified phase separation

NOTE Examples of specified phase separation are centrifugation at 40 000 ms for 15 min or membrane filtration using

membranes with pores of 0,2 �mto0,45 �mdiameter.
3.5
total inorganic carbon
TIC
all that carbon in the water sample deriving from carbon dioxide and carbonate.
3.6
dissolved inorganic carbon
DIC

that part of the carbon in the water sample which cannot be removed by specified phase separation

NOTE Examples of specified phase separation are centrifugation at 40 000 ms for 15 min or membrane filtration using

membranes with pores of 0,2 �mto0,45 �mdiameter.
3.7
chemical oxygen demand
COD

mass concentration of oxygen equivalent to the amount of a specified oxidant consumed by a chemical compound

or organic matter when a water sample is treated with that oxidant under defined conditions

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

2 © ISO 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 10 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
ISO 16221:2001(E)
3.8
biochemical oxygen demand
BOD

mass concentration of dissolved oxygen consumed under specified conditions by the aerobic biological oxidation of

a chemical compound or organic matter in the water sample

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

3.9
theoretical oxygen demand
ThOD

theoretical amount of oxygen required to oxidize a chemical compound completely, calculated from the molecular

formula

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

3.10
theoretical amount of formed carbon dioxide
ThCO

theoretical amount of carbon dioxide formed after oxidizing a chemical compound completely, calculated from the

molecular formula

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

3.11
theoretical amount of inorganic carbon
ThIC

theoretical amount of inorganic carbon formed after oxidizing a chemical compound completely, calculated from the

molecular formula

NOTE It is expressed in this case as milligrams oxygen uptake per milligram (or gram) test compound.

3.12
lag phase

time from the start of a test until adaptation and/or selection of the degrading microorganisms are achieved and the

biodegradation degree of a chemical compound or organic matter has increased to about 10 % biodegradation

NOTE It is expressed in days.
3.13
maximum level of biodegradation

degree of biodegradation of a chemical compound or organic matter in a test, above which no further

biodegradation takes place during the test
NOTE It is expressed as a percent.
3.14
biodegradation phase

time from the end of the lag phase of a test until about 90 % of the maximum level of biodegradation has been

reached
NOTE It is expressed in days.
3.15
plateau phase
time from the end of the biodegradation phase until the end of the test
NOTE It is expressed in days.
© ISO 2001 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 11 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
ISO 16221:2001(E)
3.16
pre-exposure

pre-incubation of an inoculum in the presence of the test chemical compound or organic matter, with the aim of

enhancing the ability of this inoculum to biodegrade the test material by adaptation and/or selection of the

microorganisms
3.17
preconditioning

pre-incubation of an inoculum under the conditions of the subsequent test in the absence of the test chemical

compound or organic matter, with the aim of improving the performance of the test by acclimatization of the

microorganisms to the test conditions
4Principle

This International Standard describes five methods for determining the biodegradability of organic compounds in

the marine environment by aerobic microorganisms using static aqueous test systems. Standard degradation

methods developed for testing in fresh water are modified, adapted and used for this purpose.

Test mixtures are prepared containing natural or artificial seawater, marine bacteria and the organic compound, at a

suitable concentration, as the sole source of carbon and energy. The test mixtures and controls are incubated at the

desired temperature. Ultimate biodegradation is followed over a specified period by measuring summary parameters

as described in the basic test methods. Biodegradation based on DOC (dissolved organic carbon) removal is

determined by comparing the measured concentrations at the start and the end of the test as specified in the DOC

die-away test (ISO 7827). BOD (biochemical oxygen demand) is measured and compared with the theoretical

oxygen demand (ThOD) or the measured chemical oxygen demand (COD) as specified in the closed bottle test

(ISO 10707) and the two-phase closed bottle test (ISO 10708). The evolution of carbon dioxide (CO)is

determined and compared with the theoretical carbon dioxide evolution (ThCO )using the CO evolution test

2 2

(ISO 9439), and TIC (total inorganic carbon) is determined and compared with the theoretical inorganic carbon

(ThIC) in accordance with the CO headspace test (ISO 14593).

If required and if a substance-specific analytical method is available, information on primary degradability may be

obtained by measuring the loss of the test compound during the test, or biodegradation may be determined at low

concentration using radio-labelled (usually C) test compounds (ISO 14592).
5 Test environment

Incubation shall take place in the dark or in diffused light, at the desired temperature, usually within the range 15 °C

to 25 °C which shall not vary by more than� 1 °C during the test. In those cases where the objective of the study is

to simulate environmental situations, tests may be carried out beyond this normal temperature range.

6 Reagents

Use as test medium natural (6.2) or artificial seawater (6.3). Use only reagents of recognized analytical grade.

6.1 Water, distilled or de-ionized, containing less than 1 mg DOC per litre.
6.2 Natural seawater
6.2.1 Sampling and pretreatment

Use any seawater of natural origin. Collect a sample in a thoroughly cleansed container and transport to the

laboratory, preferably within two days. During transport do not allow the temperature of the sample to exceed

significantly the range 10 °Cto30 C.
Provide the following information:
4 © ISO 2001 – All rights reserved
---------------------- Page: 12 ----------------------
SIST ISO 16221:2010
ISO 16221:2001(E)
� place and depth of collection,

� pollutional and nutritional status of the sampling site (e.g. concentration of nitrate, ammonium and phosphate)

and appearance of the sample,
� date of collection and time between sampling and start of the test,
� temperature at collection,
� salinity and DOC (use e.g. ISO 8245).
When natural seawater is used, norma
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 16221
Première édition
2001-02-01
Qualité de l'eau — Lignes directrices pour
la détermination de la biodégradabilité en
milieu marin
Water quality — Guidance for determination of biodegradability in the
marine environment
Numéro de référence
ISO 16221:2001(F)
ISO 2001
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 16221:2001(F)
PDF – Exonération de responsabilité

Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier peut

être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifiéà moins que l'ordinateur employéà cet effet ne bénéficie d'une licence autorisant

l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées acceptent de fait la

responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute responsabilité en la

matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.

Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la créationduprésent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du

fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir l'exploitation de

ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation, veuillez en informer le

Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
© ISO 2001

Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque

forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit de l’ISO à

l’adresse ci-aprèsouducomité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 � CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.ch
Web www.iso.ch
Imprimé en Suisse
ii © ISO 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 16221:2001(F)
Sommaire Page

Avant-propos..............................................................................................................................................................iv

Introduction.................................................................................................................................................................v

1 Domaine d'application...................................................................................................................................1

2Références normatives .................................................................................................................................1

3Termesetdéfinitions.....................................................................................................................................2

4 Principe...........................................................................................................................................................4

5 Environnement de l’essai .............................................................................................................................4

6Réactifs ...........................................................................................................................................................5

7 Appareillage ...................................................................................................................................................8

8 Mode opératoire pour l'essai........................................................................................................................8

9 Calculs et expression des résultats...........................................................................................................10

10 Validité des résultats...................................................................................................................................10

11 Résultats des essais interlaboratoires......................................................................................................10

12 Rapport d'essai ............................................................................................................................................11

Bibliographie .............................................................................................................................................................13

© ISO 2001 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 16221:2001(F)
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de

normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiéeaux

comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude aledroit de fairepartie ducomité

technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en

liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission

électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.

Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.

Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour

vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités

membres votants.

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments delaprésente Norme internationale peuvent faire

l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de

ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.

La Norme internationale ISO 16221 a étéélaboréepar le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau,

sous-comité SC 5, Méthodes biologiques.
iv © ISO 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 16221:2001(F)
Introduction

L'ISO/TC 147 a élaboré des Normes internationales pour contrôler la biodégradabilité des substances et eaux

usées en milieu aquatique. Toutes ces méthodes, récapitulées dans l'ISO 15462, ne peuvent être utilisées que

pour la déterminationetlaprévision de la biodégradabilité en eau douce. Cependant, il existe de nombreux cas,

par exemple pour les substances utilisées au large des côtes, où il est urgent de tester la biodégradabilité en milieu

marin. La présente Norme internationale donne une description du contrôle de la biodégradation dans des

systèmes d'essai marins; elle est basée sur une ligne directrice de l'OCDE et sur l'expérience acquise par un

groupe de travail de la Commission d'Oslo et de Paris (OSPARCOM), qui a sélectionné des méthodes ISO

normalisées appropriées, lesquelles ont été adaptées à des conditions marines et vérifiées par un essai

interlaboratoires.
© ISO 2001 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 16221:2001(F)
Qualité de l'eau — Lignes directrices pour la détermination de la
biodégradabilité en milieu marin
1 Domaine d'application

La présente Norme internationale spécifiecinqméthodes de déterminationdelabiodégradabilité aérobie ultime

des composés organiques en milieu marin par des micro-organismes aérobies dans des systèmes d'essai

aquatiques statiques. Les méthodes de dégradation normalisées mises en œuvre pour les essais en eau douce

sont modifiées et adaptées à des conditions marines. Ces méthodes sont les suivantes: essai de décroissance du

COD (ISO 7827), essai en fiole fermée (ISO 10707), essai en fiole fermée à deux phases (ISO 10708), essai

d'évolution du CO (ISO 9439) et essai de l'espace de tête du CO (ISO 14593).
2 2
Ces méthodes s'appliquent à des composés organiques
a) solubles dans l'eau dans les conditions de l'essai utilisé;

b) peu solubles dans l'eau dans les conditions de l'essai utilisé; dans ce cas, il peut être nécessaire de prendre

des mesures particulières afin d'assurer une bonne dispersion du composé (voir par exemple l’ISO 10634);

c) volatils, à condition qu'un essai approprié réalisé dans des conditions adéquates soit utilisé;

d) n'ayant pas d'effet inhibiteur sur les micro-organismes soumis à l'essai, à la concentration choisie pour les

essais. L'existence d'un effet inhibiteur peut être mis en évidence suivant la méthode proposéedans la

présente Norme internationale.

NOTE Les conditions décrites dans la présente Norme internationale ne correspondent pas toujours aux conditions

optimales permettant un degré de biodégradation maximal. Pour les méthodes de biodégradation en eau douce, voir

l’ISO 14593 et l’ISO 15462, et pour la biodégradation à de faibles concentrations, voir l’ISO 14592.

2Références normatives

Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,

constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les

amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes

aux accords fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer les

éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non datées, la dernière

édition du document normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des

Normes internationales en vigueur.

ISO 7827, Qualité de l'eau —Évaluation en milieu aqueux de la biodégradabilité aérobie «ultime» des composés

organiques — Méthode par analyse du carbone organique dissous (COD).

ISO 9439, Qualité de l'eau —Évaluationdelabiodégradabilité aérobie ultime en milieu aqueux des composés

organiques — Essai de dégagement de dioxyde de carbone.

ISO 10707, Qualité de l'eau —Évaluation en milieu aqueux de la biodégradabilité aérobie «ultime» des composés

organiques — Méthode par analyse de la demande biochimique en oxygène (essai en fiole fermée).

© ISO 2001 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 16221:2001(F)

ISO 10708, Qualité de l'eau —Évaluation en milieu aqueux de la biodégradabilité aérobie ultime des composés

organiques — Détermination de la demande biochimique en oxygène en fiole fermée à deux phases.

ISO 14592-1, Qualité de l'eau —Évaluationdela biodégradabilité aérobie des composés organiques à faibles

concentrations — Partie 1: Essai par agitation de fiole avec des eaux de surface ou des suspensions eaux de

surface/sédiments.

ISO 14592-2, Qualité de l'eau —Évaluationdela biodégradabilité aérobie des composés organiques à faibles

concentrations — Partie 2: Modèle de la rivière àécoulement continu avec biomasse liée.

ISO 14593, Qualité de l'eau —Évaluation en milieu aqueux de la biodégradabilité aérobie ultime des composés

organiques — Méthode par analyse du carbone inorganique dans des récipients hermétiquement clos (Essai au

CO dans l’espace de tête).
3 Termes et définitions

Pour les besoins de la présente Norme internationale, les termes et définitions suivants s’appliquent.

3.1
biodégradation aérobie ultime

décomposition d'un composé chimique ou d'une matière organique par des micro-organismes, en présence

d'oxygène, en dioxyde de carbone, eau et sels minéraux de tout autre élément présent (minéralisation) et,

normalement, production de nouvelle biomasse
3.2
biodégradation primaire

modification structurale (transformation) d'un composé chimique par des micro-organismes, entraînant la perte

d'une propriété spécifique
3.3
carbone organique total
COT

totalité du carbone présent dans la matière organique, dissous et en suspension dans l'échantillon d'eau

3.4
carbone organique dissous
COD

fraction du carbone organique présent dans l'échantillon d'eau qui ne peut être éliminéepar la méthode de

séparation des phases spécifiées

NOTE La centrifugation à 40 000 m·s pendant 15 min ou la filtration sur membrane avec un diamètre de pores de 0,2µm

à 0,45 µm sont des exemples de m éthodes de séparation de phases.
3.5
carbone inorganique total
CIT

totalité du carbone présent dans l'échantillon d'eau provenant du dioxyde de carbone et des carbonates

3.6
carbone inorganique dissous
CID

fraction du carbone inorganique présent dans l'échantillon d'eau qui ne peut être éliminée par la méthode de

séparation des phases spécifiées

NOTE La centrifugation à 40 000 m·s pendant 15 min ou la filtration sur membrane avec un diamètre de pores de 0,2µm

à 0,45 µm sont des exemples de m éthodes de séparation de phases.
2 © ISO 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 16221:2001(F)
3.7
demande chimique en oxygène
DCO

concentration en masse d'oxygène équivalente à la quantité d'un oxydant défini consommé par un composé

chimique ou une matière organique lorsqu'un échantillon d'eau est traité avec cet oxydant dans des conditions

définies

NOTE Elle est exprimée dans ce cas en milligrammes d'oxygène consommé par milligramme (ou par gramme) du

composéà analyser.
3.8
demande biochimique en oxygène
DBO

concentration en masse d'oxygène dissous consommé dans des conditions définies par l'oxydation biologique

aérobie d'un composé chimique ou d'une matière organique dans l'échantillon d'eau

NOTE Elle est exprimée dans ce cas en milligrammes d'oxygène consommé par milligramme (ou par gramme) du

composéà analyser.
3.9
demande théorique en oxygène
DThO

quantité théorique d'oxygène nécessaire pour oxyder complètement un composé chimique, calculée à partir de la

formule moléculaire

NOTE Elle est exprimée dans ce cas en milligrammes d'oxygène consommé par milligramme (ou par gramme) du

composéà analyser.
3.10
quantité théorique de dioxyde de carbone formé
CO Th

quantité théorique de dioxyde de carbone formé aprèsl'oxydation complète d'un composé chimique, calculée à

partir de la formule moléculaire

NOTE Elle est exprimée dans ce cas en milligrammes d'oxygène consommé par milligramme (ou par gramme) du

composéà analyser.
3.11
quantité théorique de carbone inorganique
CITh

quantité théorique de carbone inorganique formé aprèsl'oxydation complète d'un composé chimique, calculée à

partir de la formule moléculaire

NOTE Elle est exprimée dans ce cas en milligrammes d'oxygène consommé par milligramme (ou par gramme) du

composéà analyser.
3.12
phase de latence

délai s'écoulant entre le début d'un essai et le moment où l'adaptation et/ou la sélection des micro-organismes de

dégradation est achevée, et où le degré de biodégradation d'un composé chimique ou d'une matière organique

représente environ 10 % de biodégradation
NOTE Elle est expriméeenjours.
3.13
niveau maximal de biodégradation

taux de biodégradation d'un composé chimique ou d'une matière organique au cours d'un essai, au-delà duquel

aucune biodégradation ne survient plus pendant l'essai
NOTE Il est exprimé en pourcentage.
© ISO 2001 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 16221:2001(F)
3.14
phase de biodégradation

duréeentre la findelaphase de latenced'unessaiet lemoment où environ 90 % du niveau maximal de

biodégradation a été atteint
NOTE Elle est expriméeenjours.
3.15
phase de plateau
durée entre la fin de la phase de biodégradation et la fin de l'essai
NOTE Elle est expriméeenjours.
3.16
préexposition

préincubation d'un inoculum en présence du composé chimique ou de la matière organique à analyser, destinée à

accroître l'aptitude de l'inoculum à dégrader le matériau d'essai par adaptation et/ou par sélection des micro-

organismes
3.17
préconditionnement

préincubation d'un inoculum dans les conditions de l'essai, en l'absence du composé chimique ou de la matière

organique à analyser, destinée à améliorer l'efficacité de l'essai par acclimatation des micro-organismes aux

conditions d'essai
4Principe

La présente Norme internationale décrit cinq méthodes de déterminationdela biodégradabilité des composés

organiques en milieu marin par des micro-organismes aérobies à l'aide de systèmes d'essai aquatiques statiques.

Les méthodes de dégradation normalisées mises en œuvre pour les essais en eau douce sont modifiées et

adaptées pour être utilisées à cet effet.

Les mélanges d'essai sont constituésd’un mélange d'eau de mer naturelle ou artificielle, de bactéries marines et

du composé organique constituant la seule source de carbone et d'énergie à une concentration appropriée. Les

mélanges d’essai et témoins sont incubés à la température souhaitée. Le mesurage des paramètres définis,

comme décrit dans les méthodes d'essai fondamentales, permet de suivre la biodégradation ultime pendant une

période spécifiée. La biodégradation baséesur l'élimination du COD (carbone organique dissous) est déterminée

en comparant les concentrations mesurées au début et à la fin de l'essai, comme spécifié dans l'essai de

décroissance du COD (ISO 7827). La DBO (demande biochimique en oxygène) est mesurée et comparée à la

demande théorique en oxygène (DThO) ou à la demande chimique en oxygène (DCO) comme spécifié dans l'essai

en fiole fermée (ISO 10707) et dans l'essai en fiole fermée à deux phases (ISO 10708). L'évolution du dioxyde de

carbone (CO )est déterminée et comparéeaudioxyde de carbone théorique (CO Th), à l'aide de l'essai

2 2

d'évolution du CO (ISO 9439) et le CIT (carbone inorganique total) est déterminé et comparé au carbone

inorganique théorique (CITh) suivant l'essai de l'espace de tête du CO (ISO 14593).

Si nécessaire et s'il existe une méthode d'analyse spécifique pour la substance, il est possible d'obtenir des

informations concernant la dégradabilité primaire en mesurant la perte du composéà analyser pendant l'essai. De

même, la biodégradation peut être déterminée à une concentration faible en utilisant des composés à analyser

radiomarqués(généralement au C) (ISO 14592).
5 Environnement de l’essai

L'incubation doit avoir lieu à l'abri de la lumière ou sous lumière diffuse, à la température souhaitée, généralement

comprise entre 15 °Cet 25 °C, maintenue constante à� 1 °Cprès tout au long de l'essai. Dans les cas où le but de

l'étude est de simuler des situations environnementales, les essais peuvent être effectués à des températures non

comprises dans cette plage.
4 © ISO 2001 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 16221:2001(F)
6Réactifs

Utiliser comme milieu d'essai de l'eau de mer naturelle (6.2) ou artificielle (6.3). Utiliser uniquement des réactifs de

qualité analytique reconnue.
6.1 Eau, distilléeoudéionisée, contenant moins de 1 mg de COD par litre.
6.2 Eau de mer naturelle
6.2.1 Échantillonnage et prétraitement

Utiliser toute eau de mer d'origine naturelle. Prélever un échantillon dans un récipient soigneusement nettoyé et le

transporter au laboratoire, de préférence dans les deux jours suivant le prélèvement. Pendant le transport, éviter

que la température de l'échantillon dépasse de façon significative la plage 10 °C à 30 °C.

Fournir les informations suivantes:
� le lieu et la profondeur du prélèvement;

� l'état de pollution et de trophie du site d'échantillonnage (par exemple concentration en nitrate, ammonium et

phosphate) et l'aspect de l'échantillon;

� la date de prélèvement et le temps écoulé entre l'échantillonnage et le début de l'essai;

� la température au moment du prélèvement;
� la salinité et le COD (utiliser par exemple l’ISO 8245).

Lorsque de l'eau de mer naturelle est utilisée, il est normalement possible d'obtenir des micro-organismes en

nombre suffisant et aucune inoculation supplémentaire n'est nécessaire.

Il est recommandé de déterminer dans l'eau de mer naturelle le nombre de bactéries hétérotrophes formant des

colonies, par exemple par dénombrement dans une boîte de Petri en utilisant une gélose marine. Une

concentration bactérienne adéquate correspond à environ 10 cellules par millilitre dans les récipients d'essai.

Lorsque l'eau de mer naturelle présente une densité bactérienne trop faible, inoculer tel que décrit pour l'eau de

mer artificielle (6.3). Vérifier l'activité de l'eau de mer naturelle au moyen du composé de référence.

NOTE 1 Normalement, il convient de ne pas exposer préalablement l'inoculum et l’eau de mer naturelle au composéà

analyser dans le but d’obtenir une prévision générale du comportement de dégradation au sein de l'environnement. Dans

certaines circonstances, selon l'objectif de l'essai, il est possible d'utiliser des inocula préalablement exposés, à condition de

clairement le mentionner dans le rapport d'essai (par exemple pourcentage de biodégradation = x %, avec inocula préexposés)

et à condition que la méthode d’exposition préalable soit détaillée dans le rapport d'essai. Des inocula préexposés peuvent être

obtenus à partir d'essais de biodégradation de laboratoire effectués en milieu marin dans diverses conditions, ou à

...

Questions, Comments and Discussion

Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.