ISO 20743:2013

Textiles - Determination of antibacterial activity of textile products

ISO 20743:2013 specifies quantitative test methods to determine the antibacterial activity of all antibacterial textile products including nonwovens. ISO 20743:2013 is applicable to all textile products, including cloth, wadding, thread and material for clothing, bedclothes, home furnishings and miscellaneous goods, regardless of the type of antibacterial agent used (organic, inorganic, natural or man-made) or the method of application (built-in, after-treatment or grafting). Based on the intended application and on the environment in which the textile product is to be used and also on the surface properties of the textile properties, the user can select the most suitable of the following three inoculation methods on determination of antibacterial activity: a) absorption method (an evaluation method in which the test bacterial suspension is inoculated directly onto specimens); b) transfer method (an evaluation method in which test bacteria are placed on an agar plate and transferred onto specimens); c) printing method (an evaluation method in which test bacteria are placed on a filter and printed onto specimens). The colony plate count method and the ATP (ATP = Adenosine Tri-phosphate) luminescence method are also specified for measuring the enumeration of bacteria.

Textiles — Détermination de l'activité antibactérienne des produits textiles

L'ISO 20743:2013 spécifie des méthodes d'essai quantitatives permettant de déterminer l'activité antibactérienne de tous les produits textiles antibactériens, y compris les nontissés. L'ISO 20743:2013 s'applique à tous les produits textiles, y compris l'étoffe, le rembourrage, le fil et les matériaux utilisés pour les vêtements, la literie, l'ameublement et divers articles, quel que soit le type d'agent antibactérien utilisé (organique, inorganique, naturel ou synthétique) ou quelle que soit la méthode d'application (intégration, post-traitement ou greffage). Tenant compte de l'application prévue et de l'environnement dans lequel le produit textile est destiné à être utilisé, et également des propriétés de surface du textile, l'utilisateur peut choisir la plus adaptée des trois méthodes d'ensemencement suivantes pour la détermination de l'activité antibactérienne: a) méthode par absorption (méthode d'évaluation dans laquelle la suspension bactérienne d'essai est ensemencée directement sur des éprouvettes); b) méthode par transfert (méthode d'évaluation dans laquelle les bactéries d'essai sont placées sur une boîte de milieu gélosé, puis transférées sur des éprouvettes); c) méthode par impression (méthode d'évaluation dans laquelle les bactéries d'essai sont placées sur un filtre, puis imprimées sur des éprouvettes). La technique de dénombrement et la méthode de mesure par luminescence de l'ATP (adénosine triphosphate) sont également spécifiées pour le dénombrement des bactéries.

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 02-Jul-2013
• Withdrawal Date: 02-Jul-2013
• ICS: 07.100.99 - Other standards related to microbiology
• ICS: 59.080.01 - Textiles in general
• Technical Committee: ISO/TC 38 - Textiles
• Drafting Committee: ISO/TC 38/WG 23 - Biological properties of textiles
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Start Date: 08-Jun-2021
• Completion Date: 13-Dec-2025

Relations

• Revised: ISO 20743:2021 - Textiles - Determination of antibacterial activity of textile products
• Effective Date: 23-Apr-2020
• Revises: ISO 20743:2007 - Textiles - Determination of antibacterial activity of antibacterial finished products
• Effective Date: 09-Apr-2011

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20743
Second edition
2013-07-15
Textiles — Determination of
antibacterial activity of textile products
Textiles — Détermination de l’activité antibactérienne des produits
textiles
Reference number
©
ISO 2013
© ISO 2013
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Published in Switzerland
ii © ISO 2013 – All rights reserved

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Safety precaution . 2
5 Apparatus . 2
6 Reagents and culture media . 4
6.1 Water . 4
6.2 Tryptone soya broth (TSB) . 4
6.3 Tryptone soya agar (TSA) . 4
6.4 Agar for transfer . 5
6.5 Nutrient broth (NB) . 5
6.6 Peptone salt solution . 5
6.7 Physiological saline . 5
6.8 SCDLP medium . 6
6.9 Dilution buffer for shake-out bacterial suspension. 6
6.10 Neutralizing solution . 6
6.11 Enumeration agar (EA) . 7
6.12 Agar for printing . 7
6.13 Cryoprotective solution for bacterial species . 7
6.14 Stock solution of ATP standard reagent . 7
6.15 Buffer solution for ATP luminescent reagent . 8
6.16 ATP luminescent reagent . 8
6.17 ATP extracting reagent . 8
6.18 ATP eliminating reagent . 8
6.19 SCDLP or other medium for preparing ATP reference solution . 9
6.20 Shake-out physiological saline . 9
7 Reference strains . 9
7.1 Strains . 9
7.2 Storage of strains .10
8 Test procedures .11
8.1 Absorption method (see Annex E) .11
8.2 Transfer method (see Annex E) .15
8.3 Printing method (see Annex E) .18
9 Test report .22
Annex A (normative) Strain numbers .23
Annex B (normative) Shaking method .24
Annex C (normative) Quantitative measurement by plate count method .25
Annex D (normative) Quantitative measurement by luminescence method .26
Annex E (informative) Testing examples .28
Annex F (informative) Efficacy of antibacterial activity .31
Bibliography .32
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2. www.iso.org/directives
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received. www.iso.org/patents
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
The committee responsible for this document is ISO/TC 38, Textiles.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 20743:2007), which has been
technically revised.
iv © ISO 2013 – All rights reserved

Introduction
Speciality products of antibacterial-treated textiles have been introduced in the market and are expanding
year by year in various applications. Those textiles certainly meet the consumer’s requirement to seek
prevention and protection from the negative effects caused by bacteria and to secure the quality of life.
In this situation, the test methods to determine the antibacterial activity for antibacterial textile products
were expected to be established in order to address the substantial need for an International Standard.
The test method for antibacterial activity was developed as ISO 20645 which was a qualitative test
method. There are no testing standards for the quantitative method which gives more objective
information for the antibacterial activity of the textile products.
There are several practical test methods to determine the quantitative antibacterial activity specified
in this International Standard. The test methods are composed of 2 major steps, such as inoculation of
bacteria and quantitative measurement of bacteria.
The methods for the inoculation of bacteria specified in this International Standard are the absorption
method, transfer method and printing method.
The methods of the quantitative measurement of bacteria specified in this International Standard are
colony plate count method and ATP luminescence methods.
Although there are 6 ways for the combination of inoculation methods and quantitative measurements
to execute this test, the choice of the ways depends on the user’s availability and consensus between the
concerned parties.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20743:2013(E)
Textiles — Determination of antibacterial activity of
textile products
1 Scope
This International Standard specifies quantitative test methods to determine the antibacterial activity
of all antibacterial textile products including nonwovens.
This International Standard is applicable to all textile products, including cloth, wadding, thread and
material for clothing, bedclothes, home furnishings and miscellaneous goods, regardless of the type of
antibacterial agent used (organic, inorganic, natural or man-made) or the method of application (built-
in, after-treatment or grafting).
Based on the intended application and on the environment in which the textile product is to be used
and also on the surface properties of the textile properties, the user can select the most suitable of the
following three inoculation methods on determination of antibacterial activity:
a) absorption method (an evaluation method in which the test bacterial suspension is inoculated
directly onto specimens);
b) transfer method (an evaluation method in which test bacteria are placed on an agar plate and
transferred onto specimens);
c) printing method (an evaluation method in which test bacteria are placed on a filter and printed
onto specimens).
The colony plate count method and the ATP (ATP = Adenosine Tri-phosphate) luminescence method are
also specified for measuring the enumeration of bacteria.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6330, Textiles — Domestic washing and drying procedures for textile testing
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
control fabric
fabric used to validate the growth condition of test bacteria and validate the test
Note 1 to entry: The same fabric as the fabric to be tested but without antibacterial treatment or a 100 % cotton
fabric without fluorescent brighteners or other finish can be used.
3.2
antibacterial agent
product designed to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the number of bacteria or to
kill bacteria
3.3
antibacterial finish
treatment designed to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the number of bacteria or
to kill bacteria
3.4
antibacterial activity
activity of an antibacterial finish used to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the
number of bacteria or to kill bacteria
3.5
plate count method
method in which the number of bacteria present after incubation is calculated by counting the number
of colonies according to a ten-time dilution method
Note 1 to entry: The results are expressed in “CFU (Colony Forming Unit)”.
3.6
luminescence method
method in which the amount of ATP contained in bacterial cells is measured
Note 1 to entry: The results are expressed in “moles of ATP”.
3.7
neutralizer
chemical agents used to inactivate, neutralize or quench the antibacterial properties of antibacterial agents
4 Safety precaution
The test methods specified in this International Standard require the use of bacteria.
These tests should be carried out by persons with training and experience in the use of microbiological
techniques.
Appropriate safety precautions should be observed with due consideration given to country-specific
regulations.
5 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.1 Spectrophotometer, capable of measuring at a 620 nm to 660 nm wavelength, or McFarland’s
nephelometer.
5.2 Incubator, capable of maintaining a constant temperature of 37 °C ± 2 °C.
5.3 Water baths, one capable of maintaining a constant temperature of 46 °C ± 2 °C and another
capable of maintaining a temperature of 70 °C to 90 °C.
5.4 Mixer, producing a vortex shaking action.
5.5 Stomacher, capable of speeds of 6 blows per second to 8 blows per second, with the corresponding
disposable containers.
5.6 Clean bench, for microbial test.
5.7 Washing machine, in accordance with the specifications of ISO 6330.
2 © ISO 2013 – All rights reserved

5.8 Humidity chamber, tropical chamber or other container capable of maintaining a high-humidity
more than 70 %RH atmospheric condition.
−12 −7
5.9 Luminescence photometer, capable of measuring ATP of 10 mol/l to 10 mol/l at 300 nm to
650 nm with a luminescence-measuring reagent.
5.10 Printing apparatus, capable of applying a 4 N load to a test specimen and rotating the specimen
180° in one direction for a period of 3,0 s.
5.11 Refrigerator, capable of maintaining a temperature of between 2 °C and 8 °C.
5.12 Freezers, one adjustable to a temperature below −70 °C and another to a temperature below −20 °C.
5.13 Balance, which can be read to the nearest 0,01 g.
5.14 Filtering apparatus, consisting of an upper container equipped with a membrane filter and a
lower container equipped with a suction opening.
5.15 Pipette, having the most suitable volume for each use, with a tip made of glass or plastic, and with
a tolerance of 0,5 % or less.
5.16 Vials, 30 ml glass bottles, with screw openings, polytetrafluoroethylene or silicone packing and
caps made of polypropylene, polycarbonate or another suitable material.
5.17 Petri dishes, that have been sterilized, made of glass or plastic, in diameter sizes of 90 mm to
100 mm or 55 mm to 60 mm.
5.18 Glass rod, with a diameter of approximately 18 mm.
5.19 Anti-bumping granules (glass beads), with a diameter of 3 mm to 4 mm.
5.20 Erlenmeyer flask, of capacity 100 ml.
5.21 Cutting template, made of a sterilizable material (stainless steel or glass) with a diameter of
3,8 cm ± 0,1 cm.
5.22 Disposable plastic bags, sterile bags suitable for containing food products, to be used for one of
the shaking methods of the specimens.
5.23 Tweezers, made of a material which can be sterilized.
5.24 Stainless-steel cylinder, with a mass of 200 g ± 10 g and a diameter of 3,5 cm ± 0,1 cm.
5.25 Metal wire basket, for autoclaving.
5.26 Aluminium foil.
5.27 Reciprocal incubation shaker.
5.28 Autoclave, capable of sterilizing at 121 °C ± 2 °C and 103 kPa ± 5 kPa.
6 Reagents and culture media
Reagents used in tests shall be of analytical quality and/or suited for microbiological purposes.
Dehydrated products available on the commercial market are recommended for use in preparing the culture
media. The manufacturer’s instructions for the preparation of these products should be strictly followed.
6.1 Water
Water used in tests shall be analytical-grade water for microbiological media preparation, which is
freshly distilled and/or ion-exchanged and/or ultra-filtered and/or filtered with RO (reverse osmosis).
It shall be free from all toxic or bacteria inhibitory substances.
6.2 Tryptone soya broth (TSB)
Tryptone, pancreatic digest of casein       17 g
Soya peptone, papain digest of soya        3 g
Sodium chloride (NaCl)        5 g
Glucose      2,5 g
Dipotassium hydrogen phosphate      2,5 g
Water    1 000 ml
Mix well and adjust pH,       7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.3 Tryptone soya agar (TSA)
Tryptone, pancreatic digest of casein     15 g
Soya peptone, papain digest of soya      5 g
Sodium chloride (NaCl)      5 g
Agar     15 g
Water   1 000 ml
Mix well and adjust pH,    7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
4 © ISO 2013 – All rights reserved

6.4 Agar for transfer
Tryptone, pancreatic digest of casein    0,75 g
Soya peptone, papain digest of soya    0,25 g
Sodium chloride (NaCl)      5 g
Agar     15 g
Water   1 000 ml
Mix well and adjust pH,     7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.5 Nutrient broth (NB)
Beef extract      3 g
Peptone      5 g
Water   1 000 ml
Mix well and adjust pH, then sterilize by
autoclave (5.28).
pH    6,9 ± 0,2
6.6 Peptone salt solution
Peptone, pancreatic digest of 1 g
casein
Sodium chloride (NaCl) 8,5 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 6,9 ± 0,2
then sterilize by autoclave
(5.28).
6.7 Physiological saline
Sodium chloride (NaCl) 8,5 g
Water 1 000 ml
Mix well, then sterilize by autoclave (5.28).
6.8 SCDLP medium
Peptone, digest of casein      17 g
Peptone, digest of soybean       3 g
Sodium chloride (NaCl)       5 g
Dipotassium hydrogenphosphate      2,5 g
Glucose      2,5 g
Lecithin       1 g
Polysorbate 80       7 g
Water   1 000 ml
Mix well and adjust pH,    7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
If the neutralizing power is insufficient, the content of polysorbate 80 or lecithin may be adjusted or
another neutralizing agent may be added. The use of any unspecified neutralizer shall be recorded along
with the name and concentration.
6.9 Dilution buffer for shake-out bacterial suspension
This buffer solution consists of 0,005 mol/l sodium dihydrogenphosphate containing 0,037 % sucrose.
pH   7,2 ± 0,2
6.10 Neutralizing solution
The composition of the standard neutralizing solution shall be as follows.
Polysorbate 80     30 g
Egg-yolk lecithin      3 g
Histidine hydrochloride      1 g
Meat or casein peptone      1 g
Sodium chloride (NaCl)    4,3 g
Monopotassium phosphate    3,6 g
Disodium phosphate dihydrate    7,2 g
Water   1 000 ml
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
If the neutralizing power is insufficient, the content of polysorbate 80 or lecithin may be adjusted or
another neutralizing agent may be added. The use of any unspecified neutralizer shall be recorded along
with the name and concentration.
6 © ISO 2013 – All rights reserved

6.11 Enumeration agar (EA)
Dehydrated yeast extract    2,5 g
Casein tryptone    5,0 g
Glucose    1,0 g
Agar    12 g to 18 g (depending on the gel strength of the product)
Water   1 000 ml
Mix well and adjust pH,   7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.12 Agar for printing
Agar     20 g
Water   1 000 ml
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
6.13 Cryoprotective solution for bacterial species
For freezing, a cryoprotective solution containing 150 g/l of glycerol or 100 g/l of dimethylsulfoxide
shall be used and prepared as follows,
TSB (6.2) or NB (6.5): 1 000 ml
Add,
Glycerol: 150 g
or
dimethylsulfoxide: 100 g
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
For solutions containing glycerol, sterilize the mixed solution by autoclave (5.28). For solutions
containing dimethylsulfoxide, sterilize the mixed solution by using 0,22 µm membrane filter.
NOTE Any commercially available product may be used as long as it is a cryoprotective solution or preserving
system that contains glycerol or dimethylsulfoxide and allows preservation of the strains in the same manner as
the specified solutions.
6.14 Stock solution of ATP standard reagent
−4
The concentration of ATP standard reagent is 1 X 10 mol/l which is obtained by the following mixing.
Adenosine-disodium 5’-triphosphate trihydrate 60,5 mg
Water 1 000 ml (final volume)
After preparation, the solution shall be placed in a tightly sealed container and cryopreserved at a temperature
of −20 °C or lower. The solution shall be used no later than 6 months from the date of preparation.
NOTE The suitable amount of adenosine-disodium 5’-triphosphate trihydrate may be calculated from the
ATP content of each commercial product.
6.15 Buffer solution for ATP luminescent reagent
N-[Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine 1 117 mg
Ethylenediamine disodium tetraacetatedehydrate 183 mg
Magnesium acetate tetrahydrate 808 mg
DL-dithiothreitol 6,7 mg
Dextrin 25 000 mg
Sucrose 925 mg
Water 250 ml (final volume)
pH 7,5 ± 0,2
6.16 ATP luminescent reagent
Luciferase (EC: 1.13.12.7) 16,0 mg
D-luciferin 12,6 mg
Bovine serum albumin 56 mg
Buffer solution (6.15)   30 ml
Once fully dissolved, let sit at room temperature for 15 min before use. Use within 3 h of preparation.
When a different ATP luminescent reagent is used, its composition shall be recorded.
6.17 ATP extracting reagent
N-[Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine 45 mg
10 % aqueous benzalkonium chloride 0,2 ml
Water 9,8 ml
pH 12,0 ± 0,5
When a different ATP extraction reagent is used, its composition shall be recorded.
6.18 ATP eliminating reagent
−13
An agent to reduce the ATP in NB (6.5) to less than 10 mol/l within 15 min.
8 © ISO 2013 – All rights reserved

Use within 8 h of preparation.
Apyrase (EC: 3.6.1.5) 4,6 international units/ml
Adenosine phosphate deaminase (EC: 3.5.4.6 or 46 international units/ml
EC 3.5.4.17)
Sucrose 37 mg
Bovine serum albumin 20 mg
0,05 mol/l buffer solution of 2-morpholinoethanesul- 10 ml
fonicacid, monohydrate
pH 6,0 ± 0,5
When a different eliminating reagent is used, its composition shall be recorded.
NOTE Commercially available reagent.
6.19 SCDLP or other medium for preparing ATP reference solution
SCDLP (6.8) or other medium 10 ml
ATP eliminating agent (6.18) 1 ml
After mixing, maintain at 30 °C to 37 °C for 1 h to prevent microbiological contamination.
Next, transfer to a hot-water bath at 70 °C to 90 °C for 1 h and cool down to room temperature.
Preserve the solution under refrigeration and use within 24 h.
An ATP reference solution should be prepared if the addition of neutralizing agents causes the ATP
−11
content in the shake-out solution to exceed 10 mol/l.
6.20 Shake-out physiological saline
Sodium chloride (NaCl): 8,5 g
Polysorbate 80: 2,0 g
Water:    1 000 ml
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
7 Reference strains
7.1 Strains
The following strains shall be used in all antibacterial activity tests as the details are described in Annex A.
— Staphylococcus aureus
— Klebsiella pneumoniae
7.2 Storage of strains
7.2.1 General
The strains shall be stored in accordance with the supplier’s recommendations.
7.2.2 Ceramic bead method
Obtain a sample of the freeze-dried bacterial strain following the recommendations supplied with the
culture and resuspend it in 5 ml of TSB (6.2). Obtain a sample of the suspension and isolate it in a Petri
dish (5.17) containing TSA (6.3). Incubate the cultures for 18 h to 24 h at 37 °C ± 2 °C.
After incubation, use the culture isolated in the Petri dish to verify the purity of the strain.
After verification, prepare the stock cultures.
Sample 0,7 ml of the broth culture and spread it over the surface of the Petri dish containing the TSA.
Incubate the culture on plates for 18 h to 24 h under the conditions specified for the strain in the standard.
Add 10 ml of cryoprotective solution (6.13) to the surface of the TSA plate culture and resuspend the
cells in the solution using a sterile glass spreader. Sample the suspended cells from the surface of the
agar, dilute them in 100 ml of cryoprotective solution and incubate for 30 min at 20 °C.
Using a pipette (5.15), sample 1 ml of the suspension and transfer it to a cryogenic vial (5.16) containing
the beads (5.19). Shake the vial in order to spread the suspended cells around the beads.
— Where a cryoprotective solution containing dimethylsulfoxide is used, do not let it stand longer
than 1 min at ambient temperature.
— Where a cryoprotective solution containing glycerol is used, let it stand for 30 min at 20 °C.
— Withdraw the excess cryoprotective solution with a sterile pipette. Place the cryogenic vials in a
freezer (5.12) set at −70 °C or lower.
−6 −7
Prepare 10 and 10 dilutions of the suspension using the serial dilution method. Take a 1,0 ml sample
of each dilution and transfer it to separate Petri dishes. Add 12 ml to 15 ml of nutritive solution, cooled
down to 45 °C ± 1 °C. Incubate for 18 h to 24 h under the conditions specified for the strain. Enumerate
the plate cultures and confirm that the suspension contains less than 5 × 10 CFU/ml.
Store the cryogenic vials in a freezer at a temperature below −70 °C.
7.2.3 Glycerol suspension method
Inoculate a 15 ml culture tube containing 5 ml of appropriate medium with a freshly grown isolated
colony. Incubate usually for 5 h to overnight at 37 °C until the bacteria culture seems to reach the late
logarithm or stationary phase in the growth curve.
For each strain to be stored below −70 °C, for the archives, prepare a sterile, labelled cryogenic vial.
Place 225 μl of sterile 80 % glycerol in a cryogenic vial. Add 1,0 ml of the bacterial culture (frozen stock
shall be 15 % glycerol). Mix well using the vortex mixer (5.4) and store in a tube at −70 °C or lower.
For each strain to be stored at −20 °C, as liquid glycerol working stock, pipette equal volumes of 80 %
glycerol and bacterial culture into a labelled polypropylene tube. Mix the contents well to avoid formation
of ice crystals that will decrease the viability of the cells. Place the tube in a freezer at −20 °C. Check the
viability of the cells after 1 week if possible.
To recover a strain from the glycerol stock stored below −70 °C, use a sterile toothpick to scrape pieces
of the solid substance, then streak the cells onto the appropriate medium. Do not thaw the frozen stock
because each freeze–thaw cycle will result in a 50 % loss in cell viability.
To use the −20 °C working stock, pipette 50 μl to 100 μl as inoculum for a 5 ml overnight culture.
10 © ISO 2013 – All rights reserved

8 Test procedures
8.1 Absorption method (see Annex E)
8.1.1 Incubation
8.1.1.1 Pick up the preserved stock bacteria from the storage container using an inoculating loop.
Streak onto the plate of EA (6.11) and incubate at 37 °C ± 2 °C for 24 h to 48 h.
NOTE The plate is kept at 5 °C to 10 °C and used within 1 week after the date of preparation.
8.1.1.2 Pour 20 ml of NB (6.5) or TSB (6.2) into a 100 ml Erlenmeyer flask. Apply an inoculating loop to
pick one colony up from the incubation as specified in 8.1.1.1 and inoculate it in the broth. Incubate under
the following conditions:
Temperature: 37 °C ± 2 °C
−1
Rate of shaking: 110 min and 3 cm width by reciprocal incubation shaker (5.27)
Incubation time: 18 h to 24 h
8.1.1.3 Pour 20 ml of NB (6.5) or TSB (6.2) into a 100 ml Erlenmeyer flask. Add 0,4 ml of the inoculum
8 8
from the incubation as specified in 8.1.1.2 that contains 1 × 10 CFU/ml to 3 × 10 CFU/ml in bacteria
−6 −6
concentration or an ATP concentration of 1 × 10 mol/l to 3 × 10 mol/l to the flask and incubate under
the following conditions:
Temperature: 37 °C ± 2 °C
−1
Rate of shaking: 110 min and 3 cm width by reciprocal incubation shaker (5.27)
Incubation time: 3 h ± 1 h
7 −7
Target CFU or ATP concentration after incubation: 10 CFU/ml or 10 mol/l.
NOTE The prepared inoculum is preserved by ice-cooling and used within 8 h.
8.1.2 Preparation of test inoculum
5 5
Adjust the bacteria to a concentration of 1 × 10 CFU/ml to 3 × 10 CFU/ml by a spectrophotometer or
McFarland’s nephelometer (5.1).
or
−9 −9
adjust the ATP to a concentration of 1 × 10 mol/l to 3 × 10 mol/l by the luminescence method using
NB (6.5) or TSB (6.2) after it has been diluted 20 times with water at room temperature.
NOTE The prepared inoculum is preserved by ice-cooling and used within 4 h.
8.1.3 Preparation of test specimens
8.1.3.1 Mass and shape of test specimens
8.1.3.1.1 Obtain test specimens with a mass of 0,40 g ± 0,05 g and cut to a suitable size for test specimens.
8.1.3.1.2 Obtain six test specimens of the antibacterial testing sample and six test specimens of the
control fabric or untreated fabric if available.
NOTE Three of the control specimens and three of the antibacterial testing specimens are used for zero time,
immediately after inoculation. The remaining six specimens are used for the contact time after 18 h to 24 h incubation.
8.1.3.2 Setting the test specimen
Place each of the test specimens in separate vials by selecting the following method appropriate to the
nature of the test sample.
a) If specimens tends to curl easily, or if it contains wadding or down, place a glass rod (5.18) onto the
specimen in the vial. Alternatively, lace up both ends of the specimen with thread.
b) If the specimen is yarn, arrange the yarn in a bundle and place a glass rod onto the specimen in the vial.
c) If the specimen is from a carpet or a similar construction, cut the pile and place a glass rod onto the
specimen in the vial.
When necessary, test samples may be washed in accordance with ISO 6330 or another suitable method,
and after the final washing, the samples are rinsed with water to eliminate the washing detergent. The
use of an unspecified method shall be recorded.
8.1.3.3 Sterilization
When contamination is suspected or was found, sterilize test specimens by autoclave (5.28) according
to the following procedure.
8.1.3.3.1 Wrap the opening of vials containing specimens with aluminium foil (5.26).
8.1.3.3.2 Place the wrapped vials in a metal wire basket (5.25) for autoclaving.
8.1.3.3.3 Wrap the vial caps with aluminium foil and place them in the wire basket.
8.1.3.3.4 Sterilize the caps and the vials containing the test specimens by autoclave for 15 min to 20 min.
8.1.3.3.5 After sterilization, remove the aluminium foil and allow the specimens in the vials to dry for
60 min or more by placing them on a clean bench (5.6) or any other place where there is no risk of
airborne contamination.
8.1.3.3.6 Cap the vials securely.
NOTE When autoclaving is not possible, sterilization may be accomplished by ethylene oxide gas, γ -ray or
another suitable method. The use of alternative methods shall be recorded.
8.1.4 Test operation
8.1.4.1 Inoculation of test specimens
Accurately pipette 0,2 ml of the inoculum prepared in 8.1.2 at several points on each test specimen
prepared in 8.1.3.2 to ensure that no inoculum touches the surface of the vial and cap the vials.
8.1.4.2 Shake-out after inoculation
Immediately after the inoculation of 8.1.4.1, add 20 ml of SCDLP medium (6.8) or the neutralizing solution
(6.10) or the shake-out physiological saline (6.20) into each of the six vials in which a control specimen
and an antibacterial testing specimen have been placed, cap the vials and shake out as specified in
Annex B by hand or mixer (5.4).
12 © ISO 2013 – All rights reserved

8.1.4.3 Incubation
Incubate the six vials (three control specimens, three testing specimens) at 37 °C ± 2 °C for 18 h to 24 h.
8.1.4.4 Shake-out after incubation
After the incubation of 8.1.4.3, add 20 ml of SCDLP medium (6.8) or of the neutralizing solution (6.10) or
the shake-out physiological saline (6.20) to each of the six vials, cap the vials and shake out as specified
in Annex B by hand or mixer (5.4).
8.1.4.5 Calculation of number of bacteria or amount of ATP
8.1.4.5.1 General
Obtain the number of bacteria or amount of the ATP as specified in 8.1.4.2 and 8.1.4.4 from the bacteria
concentration or the ATP concentration obtained by the quantitative measurement methods in Annex C
or Annex D according to the following formulae:
8.1.4.5.2 Number of bacteria
Mc=×20
B
where
M is the number of bacteria per specimen;
c is the bacteria concentration obtained in Annex C;
B
20 is the volume of the shake-out solution, in millilitres (ml).
8.1.4.5.3 Amount of ATP
Mc'=×20
ATP'
where
M’ is the amount of ATP per specimen;
cATP’is the ATP concentration obtained in Annex D;
20 is the volume of the shake-out solution, in millilitres (ml).
8.1.5 Test results
8.1.5.1 Judgement of test effectiveness with the control specimen
When the conditions of a), b) and c) or a), b) and d) are satisfied, the test is judged to be effective. When
the test is judged to be ineffective, a retest shall be carried out.
5 5
a) The test inoculum of 8.1.2 shall be 1 × 10 CFU/ml to 3 × 10 CFU/ml or the ATP concentration shall
−9 −9
be 1 × 10 mol/l to 3 × 10 mol/l.
b) The difference in common logarithm in extremes of the number of bacteria, or the amount of ATP for
the three control specimens immediately after inoculation and after incubation, respectively, shall
be less than one .
c) The growth value obtained according to the following formula shall be equal or more than 1,0 in the
plate count method.
d) The growth value obtained according to the following formula shall be equal or more than 0,5 in the
luminescence method.
FC=−lg lgC
t 0
where
F is the growth value on the control specimen;
lg C is the common logarithm of arithmetic average of the numbers of bacteria, or the amount
t
of ATP, obtained from three control specimens after an 18 h to 24 h incubation;
lg C is the common logarithm of arithmetic average of the numbers of bacteria, or the amount
o
of ATP, obtained from three control specimens immediately after inoculation.
8.1.5.2 Calculation of antibacterial activity value
When the condition in the next paragraph is satisfied, the test is judged to be effective. When the test is
judged to be ineffective, a retest shall be carried out.
The difference in common logarithm in extreme of the number of bacteria, or the amount of ATP for the
three antibacterial testing specimens immediately after inoculation and after incubation, respectively,
shall be less than two.
To validate the test, it is necessary that the difference in logarithm of extremes for the specimens of
the treated sample is less than 2 after inoculation and incubation. To repeat the testing because the
neutralizer is not effective, it is necessary to know from the manufacturer how to neutralize the
antibacterial agent.
When the test has been judged to be effective, obtain the antibacterial activity value according to the
following formula, in case of C > T , substitute C for T .
0 0 0 0
AC=−lg lgCT−−lg lgTF=−G
() ()
tt00
where
A is the antibacterial activity value;
F
is the growth value on the control specimen FC=−lg lgC ;
()
t 0
G
is the growth value on the antibacterial testing specimen GT=−lg lgT ;
()
t 0
lg T is the common logarithm of arithmetic average of the numbers of bacteria, or the amount
t
of ATP, obtained from three antibacterial testing specimens after an 18 h to 24 h incuba-
tion;
lg T is the common logarithm of arithmetic average of the numbers of bacteria, or the amount
of ATP, obtained from three antibacterial testing specimens immediately after inoculation.
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8.2 Transfer method (see Annex E)
8.2.1 Preparation of test inoculum
8.2.1.1 Incubation of test strain
Obtain the strain preserved as stock culture using an inoculating loop, streak onto the plate of TSA (6.3)
and incubate at 37 °C ± 2 °C for 18 h to 24 h. After incubation, extract a colony from the plate, streak onto
another plate of TSA and incubate at 37 °C ± 2 °C for 18 h to 24 h.
NOTE The second transfer constitutes the working culture(s).
When inoculation cannot be completed within a single day, a 48-h culture may be used for the subsequent
inoculation, provided that the culture is stored in an incubator (5.2) for 48 h. In this event, a new 24-h
subculture shall be prepared prior to performing the test. A fourth subculture shall not be used.
8.2.1.2 Preparation of test inoculum
Obtain a colony from the second transferred TSA using an inoculating loop, place it in the Peptone-salt
solution (6.6) and mix well with the vortex mixer (5.4). Adjust the number of bacteria to a concentration
8 8 −7 −7
of 1 × 10 CFU/ml to 3 × 10 CFU/ml or an ATP concentration of 2 × 10 mol/l to 6 × 10 mol/l
using the Peptone-salt solution (6.6) by the spectrophotometer or McFarland’s nephelometer (5.1) or
6 6
luminescence method. Dilute the inoculum to a concentration of 1 × 10 CFU/ml to 3 × 10 CFU/ml or
−9 −9
an ATP concentration of 2 × 10 mol/l to 6 × 10 mol/l using the Peptone-salt solution (6.6). The final
number of bacteria should be checked by the quantitative measurement method specified in Annex C
and Annex D.
8.2.2 Preparation of specimens
Using a template (5.21), cut specimens for test that are 3,8 cm in diameter.
The specimens for test should not contain any seams, selvages, embroidery, fasteners, etc.
A sufficient number of specimens should be prepared to allow for repeat tests, with a minimum of 0,5 m
in size from the same batch and without from selvages or stemming.
When necessary, test samples may be washed in accordance with ISO 6330 or another suitable method,
and after the final washing, the specimens are rinsed with water to eliminate the washing detergent.
The use of an unspecified method shall be recorded.
When contamination is suspected or was found, the specimens for test shall be sterilized by autoclave (5.28).
The ethylene oxide gas, γ-ray or any other suitable method could be used with recording in the test report.
8.2.3 Test operation
8.2.3.1 Inoculation to agar plates
Prepare 12 plates of the agar for transfer (6.4). Inoculate 1 ml of the test inoculum of 8.2.1.2 on the agar,
inclining the plate in several directions so as to completely flood the surface of the plate. Suck up as
much of the excess liquid as possible. Let stand for 300 s ± 30 s.
8.2.3.2 Transfer to specimens
Prepare three control specimens and three antibacterial testing specimens for using immediately after
transfer (six specimens) and after incubation (six specimens), respectively. Set each specimen on the
agar surface of 8.2.3.1 and weigh down with a 200 g stainless-steel cylinder (5.24) for 60 s ± 5 s. Place
each specimen in a 55 mm to 60 mm in diameter Petri dish (5.17) with the transferred surface face up.
Incubate in a humidity chamber (5.8) for 18 h to 24 h at 37 °C ± 2 °C.
8.2.3.3 Shake-out after transfer
Immediately after transfer, place each specimen in a sterile bag or a vial containing 20 ml of the neutralizing
solution (6.10) and shake out as specified in Annex B by hand, mixer (5.4), or stomacher (5.5).
8.2.3.4 Shake-out after incubation
After incubation, place each specimen in a sterile bag or a vial containing 20 ml of the neutralizing
solution (6.10) and shake out as specified in Annex B, by hand, mixer (5.4) or stomacher (5.5).
8.2.3.5 Calculation of number of bacteria or amount of ATP
8.2.3.5.1 General
Obtain the number of bacteria or the amount of ATP from 8.2.3.3 and 8.2.3.4 from the bacteria
concentration or ATP concentration obtained by the quantitative measurement methods in Annex C and
Annex D according to the following formulae.
8.2.3.5.2 Number of bacteria
Mc=×20
B
where
M is the number of bacteria per specimen;
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20743
Deuxième édition
2013-07-15
Textiles — Détermination de l’activité
antibactérienne des produits textiles
Textiles — Determination of antibacterial activity of textile products
Numéro de référence
©
ISO 2013
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Mesures de sécurité . 2
5 Appareillage . 2
6 Réactifs et milieux de culture . 3
6.1 Eau . 4
6.2 Bouillon tryptone soja (TSB) . 4
6.3 Gélose tryptone soja (TSA) . 4
6.4 Gélose pour transfert . 4
6.5 Bouillon nutritif . 5
6.6 Eau peptonée saline . 5
6.7 Solution physiologique saline . 5
6.8 Milieu de culture SCDLP . 5
6.9 Tampon de dilution pour la suspension bactérienne d’extraction . 6
6.10 Solution neutralisante . 6
6.11 Gélose de dénombrement . 6
6.12 Gélose pour impression . . 6
6.13 Solution cryoprotectrice pour espèces bactériennes . 7
6.14 Solution mère du réactif standard d’ATP . 7
6.15 Solution tampon pour le réactif luminescent à l’ATP . 7
6.16 Réactif luminescent à l’ATP . 8
6.17 Réactif d’extraction de l’ATP . 8
6.18 Réactif d’élimination de l’ATP . 8
6.19 Milieu SCDLP ou autre milieu pour la préparation de la solution de référence d’ATP . 8
6.20 Solution physiologique saline d’extraction. 9
7 Souches de référence . 9
7.1 Souches . 9
7.2 Conservation des souches . 9
8 Modes opératoires d’essai .10
8.1 Méthode par absorption (voir Annexe E) .10
8.2 Méthode par transfert (voir Annexe E) .15
8.3 Méthode par impression (voir Annexe E).19
9 Rapport d’essai .23
Annexe A (normative) Numéros de souches .24
Annexe B (normative) Méthode d’agitation .25
Annexe C (normative) Mesurage quantitatif avec la méthode par dénombrement .26
Annexe D (normative) Mesurage quantitatif avec la méthode par luminescence .27
Annexe E (informative) Exemples d’essais .29
Annexe F (informative) Efficacité de l’activité antibactérienne .33
Bibliographie .34
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/CEI, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2, www.iso.
org/directives.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou sur la liste ISO des déclarations de brevets reçues,
www.iso.org/brevets.
Les éventuelles appellations commerciales utilisées dans le présent document sont données pour
information à l’intention des utilisateurs et ne constituent pas une approbation ou une recommandation.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 38, Textiles.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 20743:2007), qui a fait l’objet d’une
révision technique.
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Introduction
Des produits textiles antibactériens spécialisés ont été introduits sur le marché et leur utilisation
s’étend chaque année à diverses applications. Ces textiles satisfont certainement aux exigences des
consommateurs quant à la prévention et à la protection contre les effets négatifs des bactéries, et quant
à l’assurance de leur qualité de vie.
C’est dans ces circonstances qu’il a été prévu d’établir des méthodes d’essai visant à déterminer l’activité
antibactérienne des produits textiles antibactériens, afin de répondre au besoin important de disposer
d’une Norme internationale.
La méthode d’essai pour l’activité antibactérienne a été élaborée dans le cadre de l’ISO 20645, qui traite
d’une méthode d’essai qualitative. Il n’existe pas de norme d’essai pour la méthode quantitative, qui
donne davantage d’informations objectives concernant l’activité antibactérienne des produits textiles.
La présente Norme internationale spécifie plusieurs méthodes d’essai pratiques permettant de
déterminer l’activité antibactérienne de manière quantitative. Ces méthodes d’essai sont composées de
deux grandes étapes, qui sont l’ensemencement des bactéries et le mesurage quantitatif des bactéries.
Les méthodes d’ensemencement des bactéries spécifiées dans la présente Norme internationale sont la
méthode par absorption, la méthode par transfert et la méthode par impression.
Les méthodes de mesure quantitatives des bactéries spécifiées dans la présente Norme internationale
sont la méthode par dénombrement et la méthode par luminescence de l’ATP.
Bien qu’il existe six manières de combiner les méthodes d’ensemencement et de mesurage quantitatif
pour réaliser cet essai, le choix de ces manières dépend des pratiques des utilisateurs et résulte d’un
consensus entre les parties intéressées.
NORME INTERNATIONALE ISO 20743:2013(F)
Textiles — Détermination de l’activité antibactérienne des
produits textiles
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie des méthodes d’essai quantitatives permettant de déterminer
l’activité antibactérienne de tous les produits textiles antibactériens, y compris les nontissés.
La présente Norme internationale s’applique à tous les produits textiles, y compris l’étoffe, le rembourrage,
le fil et les matériaux utilisés pour les vêtements, la literie, l’ameublement et divers articles, quel que soit
le type d’agent antibactérien utilisé (organique, inorganique, naturel ou synthétique) ou quelle que soit
la méthode d’application (intégration, post-traitement ou greffage).
Tenant compte de l’application prévue et de l’environnement dans lequel le produit textile est destiné à
être utilisé, et également des propriétés de surface du textile, l’utilisateur peut choisir la plus adaptée
des trois méthodes d’ensemencement suivantes pour la détermination de l’activité antibactérienne:
a) méthode par absorption (méthode d’évaluation dans laquelle la suspension bactérienne d’essai est
ensemencée directement sur des éprouvettes);
b) méthode par transfert (méthode d’évaluation dans laquelle les bactéries d’essai sont placées sur une
boîte de milieu gélosé, puis transférées sur des éprouvettes);
c) méthode par impression (méthode d’évaluation dans laquelle les bactéries d’essai sont placées sur
un filtre, puis imprimées sur des éprouvettes).
La technique de dénombrement et la méthode de mesure par luminescence de l’ATP (adénosine
triphosphate) sont également spécifiées pour le dénombrement des bactéries.
2 Références normatives
Les documents suivants, en tout ou partie, sont référencés de manière normative dans le présent
document et sont indispensables pour son application. Pour les références datées, seule l’édition citée
s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y
compris les éventuels amendements).
ISO 6330, Textiles — Méthodes de lavage et de séchage domestiques en vue des essais des textiles
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
étoffe témoin
étoffe utilisée pour valider les conditions de croissance des bactéries d’essai et valider l’essai
Note 1 à l’article: Il est possible d’utiliser une étoffe identique à celle devant être soumise à essai, mais n’ayant subi
aucun traitement antibactérien, ou une étoffe de coton 100 % sans azurage optique ni autre apprêt.
3.2
agent antibactérien
produit conçu pour empêcher ou atténuer la croissance des bactéries, pour réduire le nombre de
bactéries ou pour tuer les bactéries
3.3
apprêt antibactérien
traitement conçu pour empêcher ou atténuer la croissance des bactéries, pour réduire le nombre de
bactéries ou pour tuer les bactéries
3.4
activité antibactérienne
activité d’un apprêt antibactérien servant à empêcher ou à atténuer la croissance des bactéries, à réduire
le nombre de bactéries ou à tuer les bactéries
3.5
méthode par dénombrement
méthode dans laquelle le nombre de bactéries présent après incubation est calculé en dénombrant le
nombre de colonies selon une méthode de dilution au dixième
Note 1 à l’article: Les résultats sont exprimés en «UFC (unité formant colonie)».
3.6
méthode par luminescence
méthode par laquelle la teneur en adénosine triphosphate (ATP) présente dans les cellules
bactériennes est mesurée
Note 1 à l’article: Les résultats sont exprimés en «moles d’ATP».
3.7
neutralisant
agent chimique utilisé pour désactiver, neutraliser ou atténuer les propriétés antibactériennes des
agents antibactériens
4 Mesures de sécurité
Les méthodes d’essai spécifiées dans la présente Norme internationale nécessitent l’utilisation de bactéries.
Il convient que ces essais soient réalisés par des personnes formées et expérimentées dans la mise en
œuvre des techniques microbiologiques.
Il convient d’observer les mesures de sécurité appropriées en prenant en considération la réglementation
propre à chaque pays.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Spectrophotomètre, capable de mesurer à une longueur d’onde comprise entre 620 nm et
660 nm, ou néphélomètre de McFarland.
5.2 Incubateur, capable de maintenir une température constante de (37 ± 2) °C.
5.3 Bains-marie, capables l’un de maintenir une température constante de (46 ± 2) °C, l’autre une
température comprise entre 70 °C et 90 °C.
5.4 Agitateur, produisant une agitation de type vortex.
5.5 Machine Stomacher, capable d’atteindre des vitesses comprises entre 6 coups par seconde et
8 coups par seconde, munie des sacs jetables correspondants.
5.6 Paillasse propre, pour l’essai microbien.
5.7 Machine à laver, conforme aux spécifications de l’ISO 6330.
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5.8 Chambre d’humidité, chambre tropicale ou autre enceinte capable de maintenir des conditions
atmosphériques d’humidité élevée, supérieures à 70 % HR (humidité relative).
5.9 Photomètre de luminescence, capable de mesurer l’ATP à une concentration comprise entre
−12 −7
10 mol/l et 10 mol/l à une longueur d’onde comprise entre 300 nm et 650 nm avec un réactif de
mesurage de la luminescence.
5.10 Appareil d’impression, capable d’appliquer une charge de 4 N sur une éprouvette d’essai et de
faire tourner cette éprouvette de 180° dans un sens pendant 3,0 s.
5.11 Réfrigérateur, capable de maintenir une température comprise entre 2 °C et 8 °C.
5.12 Congélateurs, pouvant être réglés l’un à une température inférieure à −70 °C et l’autre à une
température inférieure à −20 °C.
5.13 Balance, d’une précision de 0,01 g.
5.14 Appareil de filtration, constitué d’un récipient supérieur muni d’une membrane filtrante et
d’un récipient inférieur muni d’un orifice d’aspiration.
5.15 Pipette, possédant le volume le mieux adapté pour chaque utilisation, munie d’un embout en
verre ou en matière plastique et avec une tolérance inférieure ou égale à 0,5 %.
5.16 Flacons, contenants en verre de capacité 30 ml, à ouverture vissée, munis d’un joint en
polytétrafluoroéthylène (PTFE) ou en silicone et d’un couvercle en polypropylène, en polycarbonate ou
autre matériau approprié.
5.17 Boîtes de Petri, en verre ou en matière plastique, stérilisées et dont le diamètre est compris
entre 90 mm et 100 mm ou entre 55 mm et 60 mm.
5.18 Tige en verre, de 18 mm de diamètre environ.
5.19 Régulateurs d’ébullition (billes en verre), dont le diamètre est compris entre 3 mm et 4 mm.
5.20 Fiole Erlenmeyer, d’une capacité de 100 ml.
5.21 Gabarit de découpage, en matériau stérilisable (acier inoxydable ou verre) de (3,8 ± 0,1) cm de
diamètre.
5.22 Sachets plastiques jetables, sacs stériles appropriés pour une utilisation alimentaire, à utiliser
pour l’une des méthodes d’agitation des éprouvettes.
5.23 Brucelles, en matériau stérilisable.
5.24 Cylindre en acier inoxydable, d’une masse de (200 ± 10) g et d’un diamètre de (3,5 ± 0,1) cm.
5.25 Corbeille en fil métallique, pour l’autoclavage.
5.26 Feuille d’aluminium.
5.27 Agitateur-incubateur à agitation va et vient.
5.28 Autoclave, permettant d’effectuer une stérilisation à (121 ± 2) °C et à (103 ± 5) kPa.
6 Réactifs et milieux de culture
Les réactifs utilisés lors des essais doivent être de qualité analytique et/ou adaptés à des fins
microbiologiques.
Les produits déshydratés disponibles dans le commerce sont préconisés pour la préparation des milieux
de culture. Il convient de suivre rigoureusement les instructions du fabricant relatives à la préparation
de ces produits.
6.1 Eau
L’eau utilisée lors des essais doit être de qualité analytique pour la préparation des milieux
microbiologiques; cette eau est fraîchement distillée et/ou déionisée et/ou ultrafiltrée et/ou filtrée par
osmose inverse. Elle doit être exempte de toute substance toxique ou inhibitrice de bactéries.
6.2 Bouillon tryptone soja (TSB)
Tryptone, digestat pancréatique de caséine 17 g
Peptone de soja, digestion papaïnique de soja 3 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Glucose 2,5 g
Hydrogénophosphate de potassium 2,5 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.3 Gélose tryptone soja (TSA)
Tryptone, digestat pancréatique de caséine 15 g
Peptone de soja, digestion papaïnique de soja 5 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Agar-agar 15 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.4 Gélose pour transfert
Tryptone, digestat pancréatique de caséine 0,75 g
Peptone de soja, digestion papaïnique de soja 0,25 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Agar-agar 15 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
4 © ISO 2013 – Tous droits réservés

6.5 Bouillon nutritif
Extrait de bœuf 3 g
Peptone 5 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH,
puis stériliser par autoclavage (5.28).
pH 6,9 ± 0,2
6.6 Eau peptonée saline
Peptone, digestat pancréatique de caséine 1 g
Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 6,9 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.7 Solution physiologique saline
Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger, puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.8 Milieu de culture SCDLP
Peptone, digestat de caséine 17 g
Peptone, digestat de soja 3 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Hydrogénophosphate de potassium 2,5 g
Glucose 2,5 g
Lécithine 1 g
Monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane 7 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
Si le pouvoir neutralisant est insuffisant, la teneur en monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane
ou en lécithine peut être ajustée ou un autre agent de neutralisation peut être ajouté. L’utilisation d’un
neutralisant non spécifié doit être enregistrée avec indication du nom et de la concentration.
6.9 Tampon de dilution pour la suspension bactérienne d’extraction
Cette solution tampon est composée de 0,005 mol/l de dihydrogénophosphate de sodium contenant
0,037 % de saccharose.
pH 7,2 ± 0,2
6.10 Solution neutralisante
La composition de la solution neutralisante standard doit être la suivante.
Monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane 30 g
Lécithine de jaune d’œuf 3 g
Chlorhydrate d’histidine 1 g
Peptone de viande ou de caséine 1 g
Chlorure de sodium (NaCl) 4,3 g
Phosphate monopotassique 3,6 g
Phosphate disodique dihydraté 7,2 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger, puis stériliser par autoclavage (5.28).
Si le pouvoir neutralisant est insuffisant, la teneur en monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane
ou en lécithine peut être ajustée ou un autre agent de neutralisation peut être ajouté. L’utilisation d’un
neutralisant non spécifié doit être enregistrée avec indication du nom et de la concentration.
6.11 Gélose de dénombrement
Extrait de levure déshydraté 2,5 g
Peptone trypsique de caséine 5,0 g
Glucose 1,0 g
Agar-agar 12 g à 18 g (en fonction du pou-
voir gélifiant du produit)
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.12 Gélose pour impression
Agar-agar 20 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger, puis stériliser par autoclavage (5.28).
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6.13 Solution cryoprotectrice pour espèces bactériennes
Pour la congélation, une solution cryoprotectrice contenant 150 g/l de glycérol ou 100 g/l de
diméthylsulfoxyde doit être utilisée. Elle est préparée comme suit.
TSB (6.2) ou bouillon nutritif (6.5): 1 000 ml
Ajouter du
glycérol: 150 g
ou
diméthylsulfoxyde: 100 g
Bien mélanger, puis stériliser par autoclavage (5.28).
Pour les solutions contenant du glycérol, stériliser la solution mélangée par autoclavage (5.28). Pour les
solutions contenant du diméthylsulfoxyde, stériliser la solution mélangée en utilisant une membrane
filtrante de porosité 0,22 µm.
NOTE Tout produit disponible dans le commerce peut être utilisé à condition d’être une solution
cryoprotectrice ou un système de conservation contenant du glycérol ou du diméthylsulfoxyde et permettant la
conservation des souches de la même manière que les solutions spécifiées.
6.14 Solution mère du réactif standard d’ATP
−4
La concentration du réactif standard d’ATP est de 1 × 10 mol/l, que l’on obtient par le mélange suivant.
Adénosine 5’-triphosphate disodique trihydraté 60,5 mg
Eau 1 000 ml (volume final)
Après préparation, la solution doit être placée dans un récipient fermé hermétiquement et cryoconservée
à une température égale ou inférieure à −20 °C. La solution doit être utilisée dans les 6 mois suivant la
date de préparation.
NOTE La quantité adéquate d’adénosine 5’-triphosphate disodique trihydraté peut être calculée à partir de la
teneur en ATP de chaque produit commercial.
6.15 Solution tampon pour le réactif luminescent à l’ATP
N-[Tris (hydroxyméthyl) méthyl] glycine 1 117 mg
Sel disodique de l’acide éthylènediaminetétraacétique dihydraté 183 mg
Acétate de magnésium tétrahydraté 808 mg
dl-Dithio-1,4 thréitol 6,7 mg
Dextrine 25 000 mg
Saccharose 925 mg
Eau 250 ml (volume final)
pH 7,5 ± 0,2
6.16 Réactif luminescent à l’ATP
Luciférase (EC 1.13.12.7) 16,0 mg
d-Luciférine 12,6 mg
Albumine sérique bovine 56 mg
Solution tampon (6.15) 30 ml
Après dissolution totale, laisser reposer 15 min à température ambiante avant utilisation. Utiliser le
produit dans les 3 h suivant sa préparation.
Lorsqu’un réactif luminescent à l’ATP différent est utilisé, sa composition doit être consignée.
6.17 Réactif d’extraction de l’ATP
N-[Tris (hydroxyméthyl) méthyl] glycine 45 mg
Solution aqueuse à 10 % de chlorure de benzalkonium 0,2 ml
Eau 9,8 ml
pH 12,0 ± 0,5
Lorsqu’un réactif d’extraction de l’ATP différent est utilisé, sa composition doit être consignée.
6.18 Réactif d’élimination de l’ATP
−13
Agent permettant de réduire la teneur en ATP dans le bouillon nutritif (6.5) à moins de 10 mol/l en 15 min.
Utiliser le produit dans les 8 h suivant sa préparation.
Apyrase (EC 3.6.1.5) 4,6 unités internationales/ml
Adénosine-phosphate-désaminase (EC 3.5.4.6 ou EC 3.5.4.17) 46 unités internationales/ml
Saccharose 37 mg
Albumine sérique bovine 20 mg
Solution tampon à 0,05 mol/l d’acide 2-morpholino éthanesul- 10 ml
fonique monohydraté
pH 6,0 ± 0,5
Lorsqu’un réactif d’élimination de l’ATP différent est utilisé, sa composition doit être consignée.
NOTE Réactif disponible dans le commerce.
6.19 Milieu SCDLP ou autre milieu pour la préparation de la solution de référence d’ATP
Milieu SCDLP (6.8) ou autre milieu 10 ml
Réactif d’élimination de l’ATP (6.18) 1 ml
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Après mélange, maintenir à une température comprise entre 30 °C et 37 °C pendant 1 h afin d’empêcher
la contamination microbiologique.
Ensuite, transférer dans un bain-marie chauffé à une température comprise entre 70 °C et 90 °C pendant
1 h et refroidir à température ambiante.
Conserver la solution au réfrigérateur et l’utiliser dans les 24 h.
Il convient de préparer une solution de référence d’ATP si l’ajout d’agents neutralisants entraîne un
−11
dépassement au-delà de 10 mol/l de la teneur en ATP dans la solution d’extraction.
6.20 Solution physiologique saline d’extraction
Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g
Monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane 2,0 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger puis stériliser par autoclavage (5.28).
7 Souches de référence
7.1 Souches
Les souches suivantes doivent être utilisées dans tous les essais d’activité antibactérienne. Des
informations détaillées concernant ces souches figurent à l’Annexe A.
— Staphylococcus aureus
— Klebsiella pneumoniae
7.2 Conservation des souches
7.2.1 Généralités
Les souches doivent être conservées conformément aux recommandations du fournisseur.
7.2.2 Méthode des billes en céramique
Obtenir un échantillon de la souche bactérienne lyophilisée conformément aux recommandations
fournies avec la culture et le remettre en suspension dans 5 ml de TSB (6.2). Obtenir un échantillon de
la suspension et l’isoler dans une boîte de Petri (5.17) contenant de la TSA (6.3). Incuber les cultures
pendant 18 h à 24 h à (37 ± 2) °C.
Après incubation, utiliser la culture isolée dans la boîte de Petri pour vérifier la pureté de la souche.
Après vérification, préparer les cultures mères.
Prélever 0,7 ml du bouillon de culture et l’étaler sur la surface de la boîte de Petri contenant la TSA.
Incuber la culture sur des plaques pendant une durée comprise entre 18 h et 24 h selon les conditions
spécifiées dans la norme concernant la souche.
Ajouter 10 ml de solution cryoprotectrice (6.13) sur la surface de la culture sur plaque avec TSA et
remettre en suspension les cellules en se servant d’un étaleur en verre stérilisé. Prélever les cellules en
suspension de la surface de la gélose, les diluer dans 100 ml de solution cryoprotectrice et les incuber
pendant 30 min à 20 °C.
À l’aide d’une pipette (5.15), prélever 1 ml de la suspension et le transférer dans un flacon cryogénique (5.16)
contenant les billes (5.19). Agiter le flacon afin de répandre les cellules en suspension autour des billes.
— Lors de l’utilisation d’une solution cryoprotectrice contenant du diméthylsulfoxyde, ne pas laisser
reposer au-delà de 1 min à température ambiante.
— Lors de l’utilisation d’une solution cryoprotectrice contenant du glycérol, laisser reposer pendant
30 min à 20 °C.
— Retirer l’excès de solution cryoprotectrice avec une pipette stérile. Placer les flacons cryogéniques
dans un congélateur (5.12) réglé à une température égale ou inférieure à −70 °C.
−6 −7
Préparer des dilutions à 10 et 10 de la suspension en utilisant la méthode de dilution en série.
Prélever un échantillon de 1,0 ml de chaque dilution et le transférer dans des boîtes de Petri séparées.
Ajouter 12 ml à 15 ml de solution nutritive, refroidie à (45 ± 1) °C. Incuber pendant 18 h à 24 h dans les
conditions spécifiées pour la souche. Dénombrer les cultures sur plaque et confirmer que la suspension
contient moins de 5 × 10 UFC/ml.
Conserver les flacons cryogéniques dans un congélateur à une température inférieure à −70 °C.
7.2.3 Méthode par suspension de glycérol
Ensemencer un tube à culture de 15 ml contenant 5 ml de milieu approprié avec une colonie isolée
fraîchement cultivée. Incuber, pour une durée généralement comprise entre 5 h et toute la nuit, à 37 °C
jusqu’à ce que la culture de bactéries ait l’air de se trouver en phase logarithmique tardive ou en phase
stationnaire sur la courbe de croissance.
Pour chaque souche à conserver à une température inférieure à −70 °C, préparer pour les archives un
flacon cryogénique stérile étiqueté. Introduire 225 μl de glycérol stérile à 80 % dans le flacon cryogénique.
Ajouter 1,0 ml de culture bactérienne (la solution mère congelée doit être du glycérol à 15 %). Bien
mélanger à l’aide d’un agitateur de type vortex (5.4) et conserver dans un tube à une température égale
ou inférieure à −70 °C.
Pour chaque souche à conserver à −20 °C, en tant que solution mère de travail de glycérol liquide, pipeter
des volumes équivalents de glycérol à 80 % et de culture bactérienne dans un tube en polypropylène
étiqueté. Bien mélanger le contenu afin d’éviter la formation de cristaux de glace qui diminueraient la
viabilité des cellules. Placer le tube dans un congélateur à −20 °C. Si possible, vérifier la viabilité des
cellules après une semaine.
Pour récupérer une souche à partir de la solution mère de glycérol conservée à une température
inférieure à −70 °C, utiliser un cure-dent stérile pour gratter des morceaux de la substance solide, puis
ensemencer en stries les cellules sur le milieu approprié. Ne pas dégeler la solution mère congelée, car
chaque cycle de gel/dégel entraînera une perte de viabilité des cellules de 50 %.
Pour utiliser la solution mère de travail à −20 °C, pipeter entre 50 μl et 100 μl comme inoculum pour une
culture de 5 ml pendant une nuit.
8 Modes opératoires d’essai
8.1 Méthode par absorption (voir Annexe E)
8.1.1 Incubation
8.1.1.1 Récupérer les bactéries mères conservées dans le récipient de stockage à l’aide d’une anse
d’inoculation. Ensemencer en stries sur la boîte de gélose de dénombrement (6.11) et incuber à (37 ± 2) °C
pendant 24 h à 48 h.
NOTE La boîte est maintenue à une température comprise entre 5 °C et 10 °C et est utilisée dans la semaine
suivant sa préparation.
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8.1.1.2 Verser 20 ml du bouillon nutritif (6.5) ou de TSB (6.2) dans une fiole Erlenmeyer de capacité
100 ml. À l’aide d’une anse d’inoculation, recueillir une colonie à partir de l’incubation spécifiée en 8.1.1.1
et l’ensemencer dans le bouillon. Incuber dans les conditions suivantes:
Température: (37 ± 2) °C
−1
Vitesse d’agitation: 110 min et 3 cm d’amplitude avec l’agitateur-incubateur à
agitation va et vient (5.27).
Durée d’incubation: 18 h à 24 h
8.1.1.3 Verser 20 ml du bouillon nutritif (6.5) ou de TSB (6.2) dans une fiole Erlenmeyer de capacité
100 ml. Y ajouter 0,4 ml de l’inoculum provenant de l’incubation spécifiée en 8.1.1.2 présentant une
8 8
concentration en bactéries comprise entre 1 × 10 UFC/ml et 3 × 10 UFC/ml ou une concentration en
−6 −6
ATP comprise entre 1 × 10 mol/l et 3 × 10 mol/l et incuber dans les conditions suivantes:
Température: (37 ± 2) °C
−1
Vitesse d’agitation: 110 min et 3 cm d’amplitude avec l’agitateur-incubateur à
agitation va et vient (5.27)
Durée d’incubation: (3 ± 1) h
7 −7
UFC ou concentration en ATP cible après incubation: 10 UFC/ml ou 10 mol/l.
NOTE L’inoculum préparé est conservé sur glace et utilisé dans les 8 h.
8.1.2 Préparation de l’inoculum d’essai
5 5
Ajuster la concentration en bactéries à une valeur comprise entre 1 × 10 UFC/ml et 3 × 10 UFC/ml à
l’aide d’un spectrophotomètre ou d’un néphélomètre de McFarland (5.1)
ou
−9 −9
ajuster la concentration en ATP à une valeur comprise entre 1 × 10 mol/l et 3 × 10 mol/l à l’aide de la
méthode par luminescence, en utilisant le bouillon nutritif (6.5) ou le TSB (6.2) après l’avoir dilué 20 fois
avec de l’eau à température ambiante.
NOTE L’inoculum préparé est conservé sur glace et utilisé dans les 4 h.
8.1.3 Préparation des éprouvettes d’essai
8.1.3.1 Masse et forme des éprouvettes d’essai
8.1.3.1.1 Préparer des éprouvettes d’essai d’une masse de (0,40 ± 0,05) g et les découper à une
taille adaptée pour des éprouvettes d’essai.
8.1.3.1.2 Préparer six éprouvettes d’essai à partir de l’échantillon soumis à essai antibactérien et
six éprouvettes d’essai à partir d’étoffe témoin ou d’étoffe non traitée, si disponible.
NOTE Trois des éprouvettes témoins et trois des éprouvettes soumises à essai antibactérien sont utilisées
pour un temps zéro immédiatement après ensemencement. Les six éprouvettes restantes sont utilisées pour le
temps de contact, après une période d’incubation comprise entre 18 h et 24 h.
8.1.3.2 Montage des éprouvettes d’essai
Placer chacune des éprouvettes pour essai dans des flacons individuels en choisissant la méthode
adaptée, selon la nature de l’échantillon pour essai.
a) Si les éprouvettes ont tendance à s’enrouler facilement ou si elles contiennent du rembourrage ou
du duvet, introduire une tige en verre (5.18) sur l’éprouvette présente dans le flacon. Autrement,
attacher les deux extrémités de l’éprouvette avec du fil.
b) Si l’éprouvette est du fil, disposer le fil en petite échevette et introduire une tige en verre sur
l’éprouvette présente dans le flacon.
c) Si l’éprouvette provient d’une moquette ou d’un produit de structure similaire, couper le velours et
introduire une tige en verre sur l’éprouvette présente dans le flacon.
Lorsque cela est nécessaire, les échantillons pour essai peuvent être lavés conformément à l’ISO 6330 ou
par une autre méthode appropriée et, après le lavage final, les échantillons sont rincés avec de l’eau afin
d’éliminer le détergent de lavage. L’utilisation d’une méthode non spécifiée doit être consignée.
8.1.3.3 Stérilisation
Lorsqu’une contamination est présente ou suspectée, stériliser les éprouvettes pour essai par autoclavage
(5.28) selon le mode opératoire suivant.
8.1.3.3.1 Envelopper l’ouverture des flacons contenant les éprouvettes avec une feuille
d’aluminium (5.26).
8.1.3.3.2 Placer les flacons enveloppés dans une corbeille en fil métallique (5.25) pour autoclavage.
8.1.3.3.3 Envelopper les couvercles des flacons d’une feuille d’aluminium et les placer dans la
corbeille en fil métallique.
8.1.3.3.4 Stériliser les couvercles et les flacons contenant les éprouvettes pour essai par autoclavage
pendant 15 min à 20 min.
8.1.3.3.5 Après stérilisation, retirer la feuille d’aluminium et laisser sécher les éprouvettes dans
les flacons pendant une durée égale ou supérieure à 60 min, en les plaçant sur une paillasse propre (5.6)
ou à tout autre endroit où il n’existe aucun risque de contamination aérienne.
8.1.3.3.6 Fermer hermétiquement les flacons.
NOTE Lorsqu’il n’est pas possible de passer à l’autoclave, la stérilisation peut être réalisée par un traitement
à l’oxyde d’éthylène gazeux, aux rayons gamma ou par une autre méthode appropriée. L’utilisation d’autres
méthodes doit être consignée.
8.1.4 Réalisation de l’essai
8.1.4.1 Ensemencement des éprouvettes d’essai
Pipeter avec précision 0,2 ml de l’inoculum préparé en 8.1.2 en plusieurs endroits sur chaque
éprouvette d’essai préparée en 8.1.3.2, afin de s’assurer qu’aucun inoculum ne touche la surface du
flacon et fermer les flacons.
8.1.4.2 Extraction après ensemencement
Immédiatement après l’ensemencement décrit en 8.1.4.1, introduire 20 ml du milieu de culture SCDLP
(6.8), ou de solution neutralisante (6.10), ou de solution physiologique saline d’extraction (6.20) dans
chacun des six flacons dans lesquels ont été placés une éprouvette témoin et une éprouvette soumise
à essai antibactérien, fermer les flacons et procéder à l’extraction de la manière spécifiée à l’Annexe B,
manuellement ou à l’aide d’un agitateur (5.4).
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8.1.4.3 Incubation
Incuber les six flacons (trois éprouvettes témoins, trois éprouvettes soumises à essai) à (37 ± 2) °C
pendant 18 h à 24 h.
8.1.4.4 Extraction après incubation
Après l’incubation décrite en 8.1.4.3, introduire 20 ml du milieu de culture SCDLP (6.8), ou de solution
neutralisante (6.10), ou de solution physiologique saline d’extraction (6.20) dans chacun des six flacons,
fermer les flacons et procéder à l’extraction de la manière spécifiée à l’Annexe B, manuellement ou à
l’aide d’un agitateur (5.4).
8.1.4.5 Calcul du nombre de bactéries ou de la quantité d’ATP
8.1.4.5.1 Généralités
Calculer le nombre de bactéries ou la quantité d’ATP de la manière spécifiée en 8.1.4.2 et 8.1.4.4 à partir
de la concentration en bactéries ou en ATP obtenue par les méthodes de mesure quantitatives figurant
à l’Annexe C ou à l’Annexe D, selon les formules suivantes.
8.1.4.5.2 Nombre de bactéries
Mc=×20
B
où
M est le nombre de bactéries par éprouvette;
c est la concentration en bactéries obtenue à l’Annexe C;
B
20 est le volume de la solution d’extraction, en millilitres (ml).
8.1.4.5.3 Quantité d’ATP
Mc'=×20
ATP'
où
M′ est la quantité d’ATP par éprouvette;
c est la quantité d’ATP par éprouvette obtenue à l’Annexe D;
ATP′
20 est le volume de la solution d’extraction, en millilitres (ml).
8.1.5 Résultats d’essai
8.1.5.1 Jugement de l’efficacité de l’essai avec l’éprouvette témoin
Lorsque les conditions énoncées en a), b) et c) ou a), b) et d) sont satisfaites, l’essai est jugé efficace.
Lorsque l’essai est jugé inefficace, un contre-essai doit être réalisé.
a) L’inoculum d’essai préparé en 8.1.2 doit présenter une concentration en bactéries comprise entre
5 5 −9
1 × 10 UFC/ml et 3 × 10 UFC/ml ou une concentration en ATP comprise entre 1 × 10 mol/l et
−9
3 × 10 mol/l.
b) La différence, en logarithme décimal, entre les valeurs extrêmes du nombre de bactéries ou de la
quantité d’ATP des trois éprouvettes témoins, respectivement immédiatement après ensemencement
et après incubation, doit être inférieure à 1.
c) La valeur de croissance obtenue selon la formule suivante doit être égale ou supérieure à 1,0 avec la
méthode par dénombrement.
d) La valeur de croissance obtenue selon la formule suivante doit être égale ou supérieure à 0,5 avec la
méthode par luminescence.
FC=−lg lgC
t 0
où
F est la valeur de croissance obtenue sur l’éprouvette témoin;
lg C est le logarithme décimal de la moyenne arithmétique des nombres de bactéries ou de la
t
quantité d’ATP, obtenus à partir de trois éprouvettes témoins, après une incubation d’une
durée comprise entre 18 h et 24 h;
lg C est le logarithme décimal de la moyenne arithmétique des nombres de bactéries ou de la
quantité d’ATP, obtenus à partir de trois éprouvettes témoins, immédiatement après ense-
mencement.
8.1.5.2 Calcul de la valeur de l’activité antibactérienne
Lorsque la condition énoncée dans l’alinéa qui suit est satisfaite, l’essai est jugé efficace. Lorsque l’essai
est jugé inefficace, un contre-essai doit être réalisé.
La différence, en logarithme décimal, entre les valeurs extrêmes du nombre de bactéries ou de la
quantité d’ATP des trois éprouvettes soumises à essai antibactérien, respectivement immédiatement
après ensemencement et après incubation, doit être inférieure à deux.
Pour valider l’essai, il est nécessaire que la différence, en logarithme décimal, entre les valeurs extrêmes
pour les éprouvettes provenant de l’échantillon traité soit inférieure à deux après ensemencement et
après incubation. Pour répéter les essais, au cas où le neutralisant n’est pas efficace, il est nécessaire que
le fabricant indique comment neutraliser l’agent antibactérien.
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Lorsque l’essai a été jugé efficace, déterminer la valeur de l’activité antibactérienne selon la formule
suivante (dans le cas où C > T , remplacer C par T ):
0 0 0 0
AC=−lg lgCT−−lg lgTF=−G
() ()
tt00
où
A est la valeur de l’activité antibactérienne;
F
est la valeur de croissance obtenue sur l’éprouvette témoin FC=−lg lgC ;
()
t 0
G est la valeur de croissance obtenue sur l’éprouvette soumise à essai antibactérien
()GT=−lg lgT ;
t 0
lg T est le logarithme décimal de la moyenne arithmétiqu
...