ISO 20743:2013
(Main)Textiles — Determination of antibacterial activity of textile products
Textiles — Determination of antibacterial activity of textile products
ISO 20743:2013 specifies quantitative test methods to determine the antibacterial activity of all antibacterial textile products including nonwovens. ISO 20743:2013 is applicable to all textile products, including cloth, wadding, thread and material for clothing, bedclothes, home furnishings and miscellaneous goods, regardless of the type of antibacterial agent used (organic, inorganic, natural or man-made) or the method of application (built-in, after-treatment or grafting). Based on the intended application and on the environment in which the textile product is to be used and also on the surface properties of the textile properties, the user can select the most suitable of the following three inoculation methods on determination of antibacterial activity: a) absorption method (an evaluation method in which the test bacterial suspension is inoculated directly onto specimens); b) transfer method (an evaluation method in which test bacteria are placed on an agar plate and transferred onto specimens); c) printing method (an evaluation method in which test bacteria are placed on a filter and printed onto specimens). The colony plate count method and the ATP (ATP = Adenosine Tri-phosphate) luminescence method are also specified for measuring the enumeration of bacteria.
Textiles — Détermination de l'activité antibactérienne des produits textiles
L'ISO 20743:2013 spécifie des méthodes d'essai quantitatives permettant de déterminer l'activité antibactérienne de tous les produits textiles antibactériens, y compris les nontissés. L'ISO 20743:2013 s'applique à tous les produits textiles, y compris l'étoffe, le rembourrage, le fil et les matériaux utilisés pour les vêtements, la literie, l'ameublement et divers articles, quel que soit le type d'agent antibactérien utilisé (organique, inorganique, naturel ou synthétique) ou quelle que soit la méthode d'application (intégration, post-traitement ou greffage). Tenant compte de l'application prévue et de l'environnement dans lequel le produit textile est destiné à être utilisé, et également des propriétés de surface du textile, l'utilisateur peut choisir la plus adaptée des trois méthodes d'ensemencement suivantes pour la détermination de l'activité antibactérienne: a) méthode par absorption (méthode d'évaluation dans laquelle la suspension bactérienne d'essai est ensemencée directement sur des éprouvettes); b) méthode par transfert (méthode d'évaluation dans laquelle les bactéries d'essai sont placées sur une boîte de milieu gélosé, puis transférées sur des éprouvettes); c) méthode par impression (méthode d'évaluation dans laquelle les bactéries d'essai sont placées sur un filtre, puis imprimées sur des éprouvettes). La technique de dénombrement et la méthode de mesure par luminescence de l'ATP (adénosine triphosphate) sont également spécifiées pour le dénombrement des bactéries.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20743
Second edition
2013-07-15
Textiles — Determination of
antibacterial activity of textile products
Textiles — Détermination de l’activité antibactérienne des produits
textiles
Reference number
ISO 20743:2013(E)
©
ISO 2013
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ISO 20743:2013(E)
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Published in Switzerland
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ISO 20743:2013(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Safety precaution . 2
5 Apparatus . 2
6 Reagents and culture media . 4
6.1 Water . 4
6.2 Tryptone soya broth (TSB) . 4
6.3 Tryptone soya agar (TSA) . 4
6.4 Agar for transfer . 5
6.5 Nutrient broth (NB) . 5
6.6 Peptone salt solution . 5
6.7 Physiological saline . 5
6.8 SCDLP medium . 6
6.9 Dilution buffer for shake-out bacterial suspension. 6
6.10 Neutralizing solution . 6
6.11 Enumeration agar (EA) . 7
6.12 Agar for printing . 7
6.13 Cryoprotective solution for bacterial species . 7
6.14 Stock solution of ATP standard reagent . 7
6.15 Buffer solution for ATP luminescent reagent . 8
6.16 ATP luminescent reagent . 8
6.17 ATP extracting reagent . 8
6.18 ATP eliminating reagent . 8
6.19 SCDLP or other medium for preparing ATP reference solution . 9
6.20 Shake-out physiological saline . 9
7 Reference strains . 9
7.1 Strains . 9
7.2 Storage of strains .10
8 Test procedures .11
8.1 Absorption method (see Annex E) .11
8.2 Transfer method (see Annex E) .15
8.3 Printing method (see Annex E) .18
9 Test report .22
Annex A (normative) Strain numbers .23
Annex B (normative) Shaking method .24
Annex C (normative) Quantitative measurement by plate count method .25
Annex D (normative) Quantitative measurement by luminescence method .26
Annex E (informative) Testing examples .28
Annex F (informative) Efficacy of antibacterial activity .31
Bibliography .32
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ISO 20743:2013(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2. www.iso.org/directives
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received. www.iso.org/patents
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
The committee responsible for this document is ISO/TC 38, Textiles.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 20743:2007), which has been
technically revised.
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ISO 20743:2013(E)
Introduction
Speciality products of antibacterial-treated textiles have been introduced in the market and are expanding
year by year in various applications. Those textiles certainly meet the consumer’s requirement to seek
prevention and protection from the negative effects caused by bacteria and to secure the quality of life.
In this situation, the test methods to determine the antibacterial activity for antibacterial textile products
were expected to be established in order to address the substantial need for an International Standard.
The test method for antibacterial activity was developed as ISO 20645 which was a qualitative test
method. There are no testing standards for the quantitative method which gives more objective
information for the antibacterial activity of the textile products.
There are several practical test methods to determine the quantitative antibacterial activity specified
in this International Standard. The test methods are composed of 2 major steps, such as inoculation of
bacteria and quantitative measurement of bacteria.
The methods for the inoculation of bacteria specified in this International Standard are the absorption
method, transfer method and printing method.
The methods of the quantitative measurement of bacteria specified in this International Standard are
colony plate count method and ATP luminescence methods.
Although there are 6 ways for the combination of inoculation methods and quantitative measurements
to execute this test, the choice of the ways depends on the user’s availability and consensus between the
concerned parties.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 20743:2013(E)
Textiles — Determination of antibacterial activity of
textile products
1 Scope
This International Standard specifies quantitative test methods to determine the antibacterial activity
of all antibacterial textile products including nonwovens.
This International Standard is applicable to all textile products, including cloth, wadding, thread and
material for clothing, bedclothes, home furnishings and miscellaneous goods, regardless of the type of
antibacterial agent used (organic, inorganic, natural or man-made) or the method of application (built-
in, after-treatment or grafting).
Based on the intended application and on the environment in which the textile product is to be used
and also on the surface properties of the textile properties, the user can select the most suitable of the
following three inoculation methods on determination of antibacterial activity:
a) absorption method (an evaluation method in which the test bacterial suspension is inoculated
directly onto specimens);
b) transfer method (an evaluation method in which test bacteria are placed on an agar plate and
transferred onto specimens);
c) printing method (an evaluation method in which test bacteria are placed on a filter and printed
onto specimens).
The colony plate count method and the ATP (ATP = Adenosine Tri-phosphate) luminescence method are
also specified for measuring the enumeration of bacteria.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6330, Textiles — Domestic washing and drying procedures for textile testing
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
control fabric
fabric used to validate the growth condition of test bacteria and validate the test
Note 1 to entry: The same fabric as the fabric to be tested but without antibacterial treatment or a 100 % cotton
fabric without fluorescent brighteners or other finish can be used.
3.2
antibacterial agent
product designed to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the number of bacteria or to
kill bacteria
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ISO 20743:2013(E)
3.3
antibacterial finish
treatment designed to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the number of bacteria or
to kill bacteria
3.4
antibacterial activity
activity of an antibacterial finish used to prevent or mitigate the growth of bacteria, to reduce the
number of bacteria or to kill bacteria
3.5
plate count method
method in which the number of bacteria present after incubation is calculated by counting the number
of colonies according to a ten-time dilution method
Note 1 to entry: The results are expressed in “CFU (Colony Forming Unit)”.
3.6
luminescence method
method in which the amount of ATP contained in bacterial cells is measured
Note 1 to entry: The results are expressed in “moles of ATP”.
3.7
neutralizer
chemical agents used to inactivate, neutralize or quench the antibacterial properties of antibacterial agents
4 Safety precaution
The test methods specified in this International Standard require the use of bacteria.
These tests should be carried out by persons with training and experience in the use of microbiological
techniques.
Appropriate safety precautions should be observed with due consideration given to country-specific
regulations.
5 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.1 Spectrophotometer, capable of measuring at a 620 nm to 660 nm wavelength, or McFarland’s
nephelometer.
5.2 Incubator, capable of maintaining a constant temperature of 37 °C ± 2 °C.
5.3 Water baths, one capable of maintaining a constant temperature of 46 °C ± 2 °C and another
capable of maintaining a temperature of 70 °C to 90 °C.
5.4 Mixer, producing a vortex shaking action.
5.5 Stomacher, capable of speeds of 6 blows per second to 8 blows per second, with the corresponding
disposable containers.
5.6 Clean bench, for microbial test.
5.7 Washing machine, in accordance with the specifications of ISO 6330.
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ISO 20743:2013(E)
5.8 Humidity chamber, tropical chamber or other container capable of maintaining a high-humidity
more than 70 %RH atmospheric condition.
−12 −7
5.9 Luminescence photometer, capable of measuring ATP of 10 mol/l to 10 mol/l at 300 nm to
650 nm with a luminescence-measuring reagent.
5.10 Printing apparatus, capable of applying a 4 N load to a test specimen and rotating the specimen
180° in one direction for a period of 3,0 s.
5.11 Refrigerator, capable of maintaining a temperature of between 2 °C and 8 °C.
5.12 Freezers, one adjustable to a temperature below −70 °C and another to a temperature below −20 °C.
5.13 Balance, which can be read to the nearest 0,01 g.
5.14 Filtering apparatus, consisting of an upper container equipped with a membrane filter and a
lower container equipped with a suction opening.
5.15 Pipette, having the most suitable volume for each use, with a tip made of glass or plastic, and with
a tolerance of 0,5 % or less.
5.16 Vials, 30 ml glass bottles, with screw openings, polytetrafluoroethylene or silicone packing and
caps made of polypropylene, polycarbonate or another suitable material.
5.17 Petri dishes, that have been sterilized, made of glass or plastic, in diameter sizes of 90 mm to
100 mm or 55 mm to 60 mm.
5.18 Glass rod, with a diameter of approximately 18 mm.
5.19 Anti-bumping granules (glass beads), with a diameter of 3 mm to 4 mm.
5.20 Erlenmeyer flask, of capacity 100 ml.
5.21 Cutting template, made of a sterilizable material (stainless steel or glass) with a diameter of
3,8 cm ± 0,1 cm.
5.22 Disposable plastic bags, sterile bags suitable for containing food products, to be used for one of
the shaking methods of the specimens.
5.23 Tweezers, made of a material which can be sterilized.
5.24 Stainless-steel cylinder, with a mass of 200 g ± 10 g and a diameter of 3,5 cm ± 0,1 cm.
5.25 Metal wire basket, for autoclaving.
5.26 Aluminium foil.
5.27 Reciprocal incubation shaker.
5.28 Autoclave, capable of sterilizing at 121 °C ± 2 °C and 103 kPa ± 5 kPa.
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ISO 20743:2013(E)
6 Reagents and culture media
Reagents used in tests shall be of analytical quality and/or suited for microbiological purposes.
Dehydrated products available on the commercial market are recommended for use in preparing the culture
media. The manufacturer’s instructions for the preparation of these products should be strictly followed.
6.1 Water
Water used in tests shall be analytical-grade water for microbiological media preparation, which is
freshly distilled and/or ion-exchanged and/or ultra-filtered and/or filtered with RO (reverse osmosis).
It shall be free from all toxic or bacteria inhibitory substances.
6.2 Tryptone soya broth (TSB)
Tryptone, pancreatic digest of casein 17 g
Soya peptone, papain digest of soya 3 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
Glucose 2,5 g
Dipotassium hydrogen phosphate 2,5 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.3 Tryptone soya agar (TSA)
Tryptone, pancreatic digest of casein 15 g
Soya peptone, papain digest of soya 5 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
Agar 15 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
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ISO 20743:2013(E)
6.4 Agar for transfer
Tryptone, pancreatic digest of casein 0,75 g
Soya peptone, papain digest of soya 0,25 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
Agar 15 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.5 Nutrient broth (NB)
Beef extract 3 g
Peptone 5 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, then sterilize by
autoclave (5.28).
pH 6,9 ± 0,2
6.6 Peptone salt solution
Peptone, pancreatic digest of 1 g
casein
Sodium chloride (NaCl) 8,5 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 6,9 ± 0,2
then sterilize by autoclave
(5.28).
6.7 Physiological saline
Sodium chloride (NaCl) 8,5 g
Water 1 000 ml
Mix well, then sterilize by autoclave (5.28).
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ISO 20743:2013(E)
6.8 SCDLP medium
Peptone, digest of casein 17 g
Peptone, digest of soybean 3 g
Sodium chloride (NaCl) 5 g
Dipotassium hydrogenphosphate 2,5 g
Glucose 2,5 g
Lecithin 1 g
Polysorbate 80 7 g
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
If the neutralizing power is insufficient, the content of polysorbate 80 or lecithin may be adjusted or
another neutralizing agent may be added. The use of any unspecified neutralizer shall be recorded along
with the name and concentration.
6.9 Dilution buffer for shake-out bacterial suspension
This buffer solution consists of 0,005 mol/l sodium dihydrogenphosphate containing 0,037 % sucrose.
pH 7,2 ± 0,2
6.10 Neutralizing solution
The composition of the standard neutralizing solution shall be as follows.
Polysorbate 80 30 g
Egg-yolk lecithin 3 g
Histidine hydrochloride 1 g
Meat or casein peptone 1 g
Sodium chloride (NaCl) 4,3 g
Monopotassium phosphate 3,6 g
Disodium phosphate dihydrate 7,2 g
Water 1 000 ml
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
If the neutralizing power is insufficient, the content of polysorbate 80 or lecithin may be adjusted or
another neutralizing agent may be added. The use of any unspecified neutralizer shall be recorded along
with the name and concentration.
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ISO 20743:2013(E)
6.11 Enumeration agar (EA)
Dehydrated yeast extract 2,5 g
Casein tryptone 5,0 g
Glucose 1,0 g
Agar 12 g to 18 g (depending on the gel strength of the product)
Water 1 000 ml
Mix well and adjust pH, 7,2 ± 0,2
then sterilize by autoclave (5.28).
6.12 Agar for printing
Agar 20 g
Water 1 000 ml
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
6.13 Cryoprotective solution for bacterial species
For freezing, a cryoprotective solution containing 150 g/l of glycerol or 100 g/l of dimethylsulfoxide
shall be used and prepared as follows,
TSB (6.2) or NB (6.5): 1 000 ml
Add,
Glycerol: 150 g
or
dimethylsulfoxide: 100 g
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
For solutions containing glycerol, sterilize the mixed solution by autoclave (5.28). For solutions
containing dimethylsulfoxide, sterilize the mixed solution by using 0,22 µm membrane filter.
NOTE Any commercially available product may be used as long as it is a cryoprotective solution or preserving
system that contains glycerol or dimethylsulfoxide and allows preservation of the strains in the same manner as
the specified solutions.
6.14 Stock solution of ATP standard reagent
−4
The concentration of ATP standard reagent is 1 X 10 mol/l which is obtained by the following mixing.
Adenosine-disodium 5’-triphosphate trihydrate 60,5 mg
Water 1 000 ml (final volume)
After preparation, the solution shall be placed in a tightly sealed container and cryopreserved at a temperature
of −20 °C or lower. The solution shall be used no later than 6 months from the date of preparation.
NOTE The suitable amount of adenosine-disodium 5’-triphosphate trihydrate may be calculated from the
ATP content of each commercial product.
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6.15 Buffer solution for ATP luminescent reagent
N-[Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine 1 117 mg
Ethylenediamine disodium tetraacetatedehydrate 183 mg
Magnesium acetate tetrahydrate 808 mg
DL-dithiothreitol 6,7 mg
Dextrin 25 000 mg
Sucrose 925 mg
Water 250 ml (final volume)
pH 7,5 ± 0,2
6.16 ATP luminescent reagent
Luciferase (EC: 1.13.12.7) 16,0 mg
D-luciferin 12,6 mg
Bovine serum albumin 56 mg
Buffer solution (6.15) 30 ml
Once fully dissolved, let sit at room temperature for 15 min before use. Use within 3 h of preparation.
When a different ATP luminescent reagent is used, its composition shall be recorded.
6.17 ATP extracting reagent
N-[Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine 45 mg
10 % aqueous benzalkonium chloride 0,2 ml
Water 9,8 ml
pH 12,0 ± 0,5
When a different ATP extraction reagent is used, its composition shall be recorded.
6.18 ATP eliminating reagent
−13
An agent to reduce the ATP in NB (6.5) to less than 10 mol/l within 15 min.
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Use within 8 h of preparation.
Apyrase (EC: 3.6.1.5) 4,6 international units/ml
Adenosine phosphate deaminase (EC: 3.5.4.6 or 46 international units/ml
EC 3.5.4.17)
Sucrose 37 mg
Bovine serum albumin 20 mg
0,05 mol/l buffer solution of 2-morpholinoethanesul- 10 ml
fonicacid, monohydrate
pH 6,0 ± 0,5
When a different eliminating reagent is used, its composition shall be recorded.
NOTE Commercially available reagent.
6.19 SCDLP or other medium for preparing ATP reference solution
SCDLP (6.8) or other medium 10 ml
ATP eliminating agent (6.18) 1 ml
After mixing, maintain at 30 °C to 37 °C for 1 h to prevent microbiological contamination.
Next, transfer to a hot-water bath at 70 °C to 90 °C for 1 h and cool down to room temperature.
Preserve the solution under refrigeration and use within 24 h.
An ATP reference solution should be prepared if the addition of neutralizing agents causes the ATP
−11
content in the shake-out solution to exceed 10 mol/l.
6.20 Shake-out physiological saline
Sodium chloride (NaCl): 8,5 g
Polysorbate 80: 2,0 g
Water: 1 000 ml
Mix well and sterilize by autoclave (5.28).
7 Reference strains
7.1 Strains
The following strains shall be used in all antibacterial activity tests as the details are described in Annex A.
— Staphylococcus aureus
— Klebsiella pneumoniae
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7.2 Storage of strains
7.2.1 General
The strains shall be stored in accordance with the supplier’s recommendations.
7.2.2 Ceramic bead method
Obtain a sample of the freeze-dried bacterial strain following the recommendations supplied with the
culture and resuspend it in 5 ml of TSB (6.2). Obtain a sample of the suspension and isolate it in a Petri
dish (5.17) containing TSA (6.3). Incubate the cultures for 18 h to 24 h at 37 °C ± 2 °C.
After incubation, use the culture isolated in the Petri dish to verify the purity of the strain.
After verification, prepare the stock cultures.
Sample 0,7 ml of the broth culture and spread it over the surface of the Petri dish containing the TSA.
Incubate the culture on plates for 18 h to 24 h under the conditions specified for the strain in the standard.
Add 10 ml of cryoprotective solution (6.13) to the surface of the TSA plate culture and resuspend the
cells in the solution using a sterile glass spreader. Sample the suspended cells from the surface of the
agar, dilute them in 100 ml of cryoprotective solution and incubate for 30 min at 20 °C.
Using a pipette (5.15), sample 1 ml of the suspension and transfer it to a cryogenic vial (5.16) containing
the beads (5.19). Shake the vial in order to spread the suspended cells around the beads.
— Where a cryoprotective solution containing dimethylsulfoxide is used, do not let it stand longer
than 1 min at ambient temperature.
— Where a cryoprotective solution containing glycerol is used, let it stand for 30 min at 20 °C.
— Withdraw the excess cryoprotective solution with a sterile pipette. Place the cryogenic vials in a
freezer (5.12) set at −70 °C or lower.
−6 −7
Prepare 10 and 10 dilutions of the suspension using the serial dilution method. Take a 1,0 ml sample
of each dilution and transfer it to separate Petri dishes. Add 12 ml to 15 ml of nutritive solution, cooled
down to 45 °C ± 1 °C. Incubate for 18 h to 24 h under the conditions specified for the strain. Enumerate
8
the plate cultures and confirm that the suspension contains less than 5 × 10 CFU/ml.
Store the cryogenic vials in a freezer at a temperature below −70 °C.
7.2.3 Glycerol suspension m
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 20743
Deuxième édition
2013-07-15
Textiles — Détermination de l’activité
antibactérienne des produits textiles
Textiles — Determination of antibacterial activity of textile products
Numéro de référence
ISO 20743:2013(F)
©
ISO 2013
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Publié en Suisse
ii © ISO 2013 – Tous droits réservés
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ISO 20743:2013(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Mesures de sécurité . 2
5 Appareillage . 2
6 Réactifs et milieux de culture . 3
6.1 Eau . 4
6.2 Bouillon tryptone soja (TSB) . 4
6.3 Gélose tryptone soja (TSA) . 4
6.4 Gélose pour transfert . 4
6.5 Bouillon nutritif . 5
6.6 Eau peptonée saline . 5
6.7 Solution physiologique saline . 5
6.8 Milieu de culture SCDLP . 5
6.9 Tampon de dilution pour la suspension bactérienne d’extraction . 6
6.10 Solution neutralisante . 6
6.11 Gélose de dénombrement . 6
6.12 Gélose pour impression . . 6
6.13 Solution cryoprotectrice pour espèces bactériennes . 7
6.14 Solution mère du réactif standard d’ATP . 7
6.15 Solution tampon pour le réactif luminescent à l’ATP . 7
6.16 Réactif luminescent à l’ATP . 8
6.17 Réactif d’extraction de l’ATP . 8
6.18 Réactif d’élimination de l’ATP . 8
6.19 Milieu SCDLP ou autre milieu pour la préparation de la solution de référence d’ATP . 8
6.20 Solution physiologique saline d’extraction. 9
7 Souches de référence . 9
7.1 Souches . 9
7.2 Conservation des souches . 9
8 Modes opératoires d’essai .10
8.1 Méthode par absorption (voir Annexe E) .10
8.2 Méthode par transfert (voir Annexe E) .15
8.3 Méthode par impression (voir Annexe E).19
9 Rapport d’essai .23
Annexe A (normative) Numéros de souches .24
Annexe B (normative) Méthode d’agitation .25
Annexe C (normative) Mesurage quantitatif avec la méthode par dénombrement .26
Annexe D (normative) Mesurage quantitatif avec la méthode par luminescence .27
Annexe E (informative) Exemples d’essais .29
Annexe F (informative) Efficacité de l’activité antibactérienne .33
Bibliographie .34
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ISO 20743:2013(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/CEI, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/CEI, Partie 2, www.iso.
org/directives.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou sur la liste ISO des déclarations de brevets reçues,
www.iso.org/brevets.
Les éventuelles appellations commerciales utilisées dans le présent document sont données pour
information à l’intention des utilisateurs et ne constituent pas une approbation ou une recommandation.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 38, Textiles.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 20743:2007), qui a fait l’objet d’une
révision technique.
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ISO 20743:2013(F)
Introduction
Des produits textiles antibactériens spécialisés ont été introduits sur le marché et leur utilisation
s’étend chaque année à diverses applications. Ces textiles satisfont certainement aux exigences des
consommateurs quant à la prévention et à la protection contre les effets négatifs des bactéries, et quant
à l’assurance de leur qualité de vie.
C’est dans ces circonstances qu’il a été prévu d’établir des méthodes d’essai visant à déterminer l’activité
antibactérienne des produits textiles antibactériens, afin de répondre au besoin important de disposer
d’une Norme internationale.
La méthode d’essai pour l’activité antibactérienne a été élaborée dans le cadre de l’ISO 20645, qui traite
d’une méthode d’essai qualitative. Il n’existe pas de norme d’essai pour la méthode quantitative, qui
donne davantage d’informations objectives concernant l’activité antibactérienne des produits textiles.
La présente Norme internationale spécifie plusieurs méthodes d’essai pratiques permettant de
déterminer l’activité antibactérienne de manière quantitative. Ces méthodes d’essai sont composées de
deux grandes étapes, qui sont l’ensemencement des bactéries et le mesurage quantitatif des bactéries.
Les méthodes d’ensemencement des bactéries spécifiées dans la présente Norme internationale sont la
méthode par absorption, la méthode par transfert et la méthode par impression.
Les méthodes de mesure quantitatives des bactéries spécifiées dans la présente Norme internationale
sont la méthode par dénombrement et la méthode par luminescence de l’ATP.
Bien qu’il existe six manières de combiner les méthodes d’ensemencement et de mesurage quantitatif
pour réaliser cet essai, le choix de ces manières dépend des pratiques des utilisateurs et résulte d’un
consensus entre les parties intéressées.
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NORME INTERNATIONALE ISO 20743:2013(F)
Textiles — Détermination de l’activité antibactérienne des
produits textiles
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie des méthodes d’essai quantitatives permettant de déterminer
l’activité antibactérienne de tous les produits textiles antibactériens, y compris les nontissés.
La présente Norme internationale s’applique à tous les produits textiles, y compris l’étoffe, le rembourrage,
le fil et les matériaux utilisés pour les vêtements, la literie, l’ameublement et divers articles, quel que soit
le type d’agent antibactérien utilisé (organique, inorganique, naturel ou synthétique) ou quelle que soit
la méthode d’application (intégration, post-traitement ou greffage).
Tenant compte de l’application prévue et de l’environnement dans lequel le produit textile est destiné à
être utilisé, et également des propriétés de surface du textile, l’utilisateur peut choisir la plus adaptée
des trois méthodes d’ensemencement suivantes pour la détermination de l’activité antibactérienne:
a) méthode par absorption (méthode d’évaluation dans laquelle la suspension bactérienne d’essai est
ensemencée directement sur des éprouvettes);
b) méthode par transfert (méthode d’évaluation dans laquelle les bactéries d’essai sont placées sur une
boîte de milieu gélosé, puis transférées sur des éprouvettes);
c) méthode par impression (méthode d’évaluation dans laquelle les bactéries d’essai sont placées sur
un filtre, puis imprimées sur des éprouvettes).
La technique de dénombrement et la méthode de mesure par luminescence de l’ATP (adénosine
triphosphate) sont également spécifiées pour le dénombrement des bactéries.
2 Références normatives
Les documents suivants, en tout ou partie, sont référencés de manière normative dans le présent
document et sont indispensables pour son application. Pour les références datées, seule l’édition citée
s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y
compris les éventuels amendements).
ISO 6330, Textiles — Méthodes de lavage et de séchage domestiques en vue des essais des textiles
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
étoffe témoin
étoffe utilisée pour valider les conditions de croissance des bactéries d’essai et valider l’essai
Note 1 à l’article: Il est possible d’utiliser une étoffe identique à celle devant être soumise à essai, mais n’ayant subi
aucun traitement antibactérien, ou une étoffe de coton 100 % sans azurage optique ni autre apprêt.
3.2
agent antibactérien
produit conçu pour empêcher ou atténuer la croissance des bactéries, pour réduire le nombre de
bactéries ou pour tuer les bactéries
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ISO 20743:2013(F)
3.3
apprêt antibactérien
traitement conçu pour empêcher ou atténuer la croissance des bactéries, pour réduire le nombre de
bactéries ou pour tuer les bactéries
3.4
activité antibactérienne
activité d’un apprêt antibactérien servant à empêcher ou à atténuer la croissance des bactéries, à réduire
le nombre de bactéries ou à tuer les bactéries
3.5
méthode par dénombrement
méthode dans laquelle le nombre de bactéries présent après incubation est calculé en dénombrant le
nombre de colonies selon une méthode de dilution au dixième
Note 1 à l’article: Les résultats sont exprimés en «UFC (unité formant colonie)».
3.6
méthode par luminescence
méthode par laquelle la teneur en adénosine triphosphate (ATP) présente dans les cellules
bactériennes est mesurée
Note 1 à l’article: Les résultats sont exprimés en «moles d’ATP».
3.7
neutralisant
agent chimique utilisé pour désactiver, neutraliser ou atténuer les propriétés antibactériennes des
agents antibactériens
4 Mesures de sécurité
Les méthodes d’essai spécifiées dans la présente Norme internationale nécessitent l’utilisation de bactéries.
Il convient que ces essais soient réalisés par des personnes formées et expérimentées dans la mise en
œuvre des techniques microbiologiques.
Il convient d’observer les mesures de sécurité appropriées en prenant en considération la réglementation
propre à chaque pays.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Spectrophotomètre, capable de mesurer à une longueur d’onde comprise entre 620 nm et
660 nm, ou néphélomètre de McFarland.
5.2 Incubateur, capable de maintenir une température constante de (37 ± 2) °C.
5.3 Bains-marie, capables l’un de maintenir une température constante de (46 ± 2) °C, l’autre une
température comprise entre 70 °C et 90 °C.
5.4 Agitateur, produisant une agitation de type vortex.
5.5 Machine Stomacher, capable d’atteindre des vitesses comprises entre 6 coups par seconde et
8 coups par seconde, munie des sacs jetables correspondants.
5.6 Paillasse propre, pour l’essai microbien.
5.7 Machine à laver, conforme aux spécifications de l’ISO 6330.
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ISO 20743:2013(F)
5.8 Chambre d’humidité, chambre tropicale ou autre enceinte capable de maintenir des conditions
atmosphériques d’humidité élevée, supérieures à 70 % HR (humidité relative).
5.9 Photomètre de luminescence, capable de mesurer l’ATP à une concentration comprise entre
−12 −7
10 mol/l et 10 mol/l à une longueur d’onde comprise entre 300 nm et 650 nm avec un réactif de
mesurage de la luminescence.
5.10 Appareil d’impression, capable d’appliquer une charge de 4 N sur une éprouvette d’essai et de
faire tourner cette éprouvette de 180° dans un sens pendant 3,0 s.
5.11 Réfrigérateur, capable de maintenir une température comprise entre 2 °C et 8 °C.
5.12 Congélateurs, pouvant être réglés l’un à une température inférieure à −70 °C et l’autre à une
température inférieure à −20 °C.
5.13 Balance, d’une précision de 0,01 g.
5.14 Appareil de filtration, constitué d’un récipient supérieur muni d’une membrane filtrante et
d’un récipient inférieur muni d’un orifice d’aspiration.
5.15 Pipette, possédant le volume le mieux adapté pour chaque utilisation, munie d’un embout en
verre ou en matière plastique et avec une tolérance inférieure ou égale à 0,5 %.
5.16 Flacons, contenants en verre de capacité 30 ml, à ouverture vissée, munis d’un joint en
polytétrafluoroéthylène (PTFE) ou en silicone et d’un couvercle en polypropylène, en polycarbonate ou
autre matériau approprié.
5.17 Boîtes de Petri, en verre ou en matière plastique, stérilisées et dont le diamètre est compris
entre 90 mm et 100 mm ou entre 55 mm et 60 mm.
5.18 Tige en verre, de 18 mm de diamètre environ.
5.19 Régulateurs d’ébullition (billes en verre), dont le diamètre est compris entre 3 mm et 4 mm.
5.20 Fiole Erlenmeyer, d’une capacité de 100 ml.
5.21 Gabarit de découpage, en matériau stérilisable (acier inoxydable ou verre) de (3,8 ± 0,1) cm de
diamètre.
5.22 Sachets plastiques jetables, sacs stériles appropriés pour une utilisation alimentaire, à utiliser
pour l’une des méthodes d’agitation des éprouvettes.
5.23 Brucelles, en matériau stérilisable.
5.24 Cylindre en acier inoxydable, d’une masse de (200 ± 10) g et d’un diamètre de (3,5 ± 0,1) cm.
5.25 Corbeille en fil métallique, pour l’autoclavage.
5.26 Feuille d’aluminium.
5.27 Agitateur-incubateur à agitation va et vient.
5.28 Autoclave, permettant d’effectuer une stérilisation à (121 ± 2) °C et à (103 ± 5) kPa.
6 Réactifs et milieux de culture
Les réactifs utilisés lors des essais doivent être de qualité analytique et/ou adaptés à des fins
microbiologiques.
Les produits déshydratés disponibles dans le commerce sont préconisés pour la préparation des milieux
de culture. Il convient de suivre rigoureusement les instructions du fabricant relatives à la préparation
de ces produits.
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ISO 20743:2013(F)
6.1 Eau
L’eau utilisée lors des essais doit être de qualité analytique pour la préparation des milieux
microbiologiques; cette eau est fraîchement distillée et/ou déionisée et/ou ultrafiltrée et/ou filtrée par
osmose inverse. Elle doit être exempte de toute substance toxique ou inhibitrice de bactéries.
6.2 Bouillon tryptone soja (TSB)
Tryptone, digestat pancréatique de caséine 17 g
Peptone de soja, digestion papaïnique de soja 3 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Glucose 2,5 g
Hydrogénophosphate de potassium 2,5 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.3 Gélose tryptone soja (TSA)
Tryptone, digestat pancréatique de caséine 15 g
Peptone de soja, digestion papaïnique de soja 5 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Agar-agar 15 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.4 Gélose pour transfert
Tryptone, digestat pancréatique de caséine 0,75 g
Peptone de soja, digestion papaïnique de soja 0,25 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Agar-agar 15 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
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ISO 20743:2013(F)
6.5 Bouillon nutritif
Extrait de bœuf 3 g
Peptone 5 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH,
puis stériliser par autoclavage (5.28).
pH 6,9 ± 0,2
6.6 Eau peptonée saline
Peptone, digestat pancréatique de caséine 1 g
Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 6,9 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.7 Solution physiologique saline
Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger, puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.8 Milieu de culture SCDLP
Peptone, digestat de caséine 17 g
Peptone, digestat de soja 3 g
Chlorure de sodium (NaCl) 5 g
Hydrogénophosphate de potassium 2,5 g
Glucose 2,5 g
Lécithine 1 g
Monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane 7 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
Si le pouvoir neutralisant est insuffisant, la teneur en monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane
ou en lécithine peut être ajustée ou un autre agent de neutralisation peut être ajouté. L’utilisation d’un
neutralisant non spécifié doit être enregistrée avec indication du nom et de la concentration.
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ISO 20743:2013(F)
6.9 Tampon de dilution pour la suspension bactérienne d’extraction
Cette solution tampon est composée de 0,005 mol/l de dihydrogénophosphate de sodium contenant
0,037 % de saccharose.
pH 7,2 ± 0,2
6.10 Solution neutralisante
La composition de la solution neutralisante standard doit être la suivante.
Monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane 30 g
Lécithine de jaune d’œuf 3 g
Chlorhydrate d’histidine 1 g
Peptone de viande ou de caséine 1 g
Chlorure de sodium (NaCl) 4,3 g
Phosphate monopotassique 3,6 g
Phosphate disodique dihydraté 7,2 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger, puis stériliser par autoclavage (5.28).
Si le pouvoir neutralisant est insuffisant, la teneur en monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane
ou en lécithine peut être ajustée ou un autre agent de neutralisation peut être ajouté. L’utilisation d’un
neutralisant non spécifié doit être enregistrée avec indication du nom et de la concentration.
6.11 Gélose de dénombrement
Extrait de levure déshydraté 2,5 g
Peptone trypsique de caséine 5,0 g
Glucose 1,0 g
Agar-agar 12 g à 18 g (en fonction du pou-
voir gélifiant du produit)
Eau 1 000 ml
Bien mélanger et ajuster le pH, 7,2 ± 0,2
puis stériliser par autoclavage (5.28).
6.12 Gélose pour impression
Agar-agar 20 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger, puis stériliser par autoclavage (5.28).
6 © ISO 2013 – Tous droits réservés
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ISO 20743:2013(F)
6.13 Solution cryoprotectrice pour espèces bactériennes
Pour la congélation, une solution cryoprotectrice contenant 150 g/l de glycérol ou 100 g/l de
diméthylsulfoxyde doit être utilisée. Elle est préparée comme suit.
TSB (6.2) ou bouillon nutritif (6.5): 1 000 ml
Ajouter du
glycérol: 150 g
ou
diméthylsulfoxyde: 100 g
Bien mélanger, puis stériliser par autoclavage (5.28).
Pour les solutions contenant du glycérol, stériliser la solution mélangée par autoclavage (5.28). Pour les
solutions contenant du diméthylsulfoxyde, stériliser la solution mélangée en utilisant une membrane
filtrante de porosité 0,22 µm.
NOTE Tout produit disponible dans le commerce peut être utilisé à condition d’être une solution
cryoprotectrice ou un système de conservation contenant du glycérol ou du diméthylsulfoxyde et permettant la
conservation des souches de la même manière que les solutions spécifiées.
6.14 Solution mère du réactif standard d’ATP
−4
La concentration du réactif standard d’ATP est de 1 × 10 mol/l, que l’on obtient par le mélange suivant.
Adénosine 5’-triphosphate disodique trihydraté 60,5 mg
Eau 1 000 ml (volume final)
Après préparation, la solution doit être placée dans un récipient fermé hermétiquement et cryoconservée
à une température égale ou inférieure à −20 °C. La solution doit être utilisée dans les 6 mois suivant la
date de préparation.
NOTE La quantité adéquate d’adénosine 5’-triphosphate disodique trihydraté peut être calculée à partir de la
teneur en ATP de chaque produit commercial.
6.15 Solution tampon pour le réactif luminescent à l’ATP
N-[Tris (hydroxyméthyl) méthyl] glycine 1 117 mg
Sel disodique de l’acide éthylènediaminetétraacétique dihydraté 183 mg
Acétate de magnésium tétrahydraté 808 mg
dl-Dithio-1,4 thréitol 6,7 mg
Dextrine 25 000 mg
Saccharose 925 mg
Eau 250 ml (volume final)
pH 7,5 ± 0,2
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ISO 20743:2013(F)
6.16 Réactif luminescent à l’ATP
Luciférase (EC 1.13.12.7) 16,0 mg
d-Luciférine 12,6 mg
Albumine sérique bovine 56 mg
Solution tampon (6.15) 30 ml
Après dissolution totale, laisser reposer 15 min à température ambiante avant utilisation. Utiliser le
produit dans les 3 h suivant sa préparation.
Lorsqu’un réactif luminescent à l’ATP différent est utilisé, sa composition doit être consignée.
6.17 Réactif d’extraction de l’ATP
N-[Tris (hydroxyméthyl) méthyl] glycine 45 mg
Solution aqueuse à 10 % de chlorure de benzalkonium 0,2 ml
Eau 9,8 ml
pH 12,0 ± 0,5
Lorsqu’un réactif d’extraction de l’ATP différent est utilisé, sa composition doit être consignée.
6.18 Réactif d’élimination de l’ATP
−13
Agent permettant de réduire la teneur en ATP dans le bouillon nutritif (6.5) à moins de 10 mol/l en 15 min.
Utiliser le produit dans les 8 h suivant sa préparation.
Apyrase (EC 3.6.1.5) 4,6 unités internationales/ml
Adénosine-phosphate-désaminase (EC 3.5.4.6 ou EC 3.5.4.17) 46 unités internationales/ml
Saccharose 37 mg
Albumine sérique bovine 20 mg
Solution tampon à 0,05 mol/l d’acide 2-morpholino éthanesul- 10 ml
fonique monohydraté
pH 6,0 ± 0,5
Lorsqu’un réactif d’élimination de l’ATP différent est utilisé, sa composition doit être consignée.
NOTE Réactif disponible dans le commerce.
6.19 Milieu SCDLP ou autre milieu pour la préparation de la solution de référence d’ATP
Milieu SCDLP (6.8) ou autre milieu 10 ml
Réactif d’élimination de l’ATP (6.18) 1 ml
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ISO 20743:2013(F)
Après mélange, maintenir à une température comprise entre 30 °C et 37 °C pendant 1 h afin d’empêcher
la contamination microbiologique.
Ensuite, transférer dans un bain-marie chauffé à une température comprise entre 70 °C et 90 °C pendant
1 h et refroidir à température ambiante.
Conserver la solution au réfrigérateur et l’utiliser dans les 24 h.
Il convient de préparer une solution de référence d’ATP si l’ajout d’agents neutralisants entraîne un
−11
dépassement au-delà de 10 mol/l de la teneur en ATP dans la solution d’extraction.
6.20 Solution physiologique saline d’extraction
Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g
Monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitane 2,0 g
Eau 1 000 ml
Bien mélanger puis stériliser par autoclavage (5.28).
7 Souches de référence
7.1 Souches
Les souches suivantes doivent être utilisées dans tous les essais d’activité antibactérienne. Des
informations détaillées concernant ces souches figurent à l’Annexe A.
— Staphylococcus aureus
— Klebsiella pneumoniae
7.2 Conservation des souches
7.2.1 Généralités
Les souches doivent être conservées conformément aux recommandations du fournisseur.
7.2.2 Méthode des billes en céramique
Obtenir un échantillon de la s
...
Questions, Comments and Discussion
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