ISO 29981:2024

Milk products — Enumeration of bifidobacteria — Colony-count technique

This document specifies a method for the selective enumeration of bifidobacteria in milk products by using a colony-count technique at 37 °C under anaerobic conditions. The method is applicable to milk products, such as fermented (e.g. yoghurts) and non-fermented milks (e.g. pasteurized milks, skim milks, whey protein concentrates), milk powders and formulae (e.g. infant formulae, follow-up formulae for older infants, products for young children) where these microorganisms are present and viable, in combination with other lactic acid bacteria or alone. The method is also applicable to starter and probiotic cultures. For proposed quality criteria of dairy products, see, for example, CXS 243-2003. Bifidobacteria used in milk products usually belong to the following species (e.g. References [7] and [10]): — Bifidobacterium adolescentis; — B. animalis subsp. animalis; — B. animalis subsp. lactis; — B. bifidum; — B. breve; — B. longum subsp. infantis; — B. longum subsp. longum.

Produits laitiers — Dénombrement des bifidobacteria présumés — Technique par comptage des colonies

Le présent document spécifie une méthode de dénombrement sélectif des bifidobacteria dans les produits laitiers en utilisant une technique par comptage des colonies à 37 °C dans des conditions anaérobies. La méthode est applicable aux produits laitiers tels que les laits fermentés (par exemple, le yaourt) et non fermentés (par exemple, les laits pasteurisés, les laits écrémés, les concentrés de protéines de lactosérum), les poudres de lait et les préparations (par exemple, les préparations pour nourrissons, les préparations de suite pour nourrissons plus âgés, produits pour enfants en bas âge) où ces micro-organismes sont présents et viables, en combinaison avec d’autres bactéries lactiques ou seuls. La méthode s’applique également aux ferments et cultures probiotiques. Pour les critères de qualité proposés pour les produits laitiers, voir, par exemple, CXS 243-2003. Les bifidobacteria utilisés dans les produits laitiers appartiennent généralement aux espèces suivantes (par exemple, Références [7] et [10]): — Bifidobacterium adolescentis; — B. animalis subsp. animalis; — B. animalis subsp. lactis; — B. bifidum; — B. breve; — B. longum subsp. infantis; — B. longum subsp. longum.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 25-Nov-2024
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 26-Nov-2024
• Due Date: 26-Nov-2024
• Completion Date: 26-Nov-2024

Relations

• Revises: ISO 29981:2010 - Milk products — Enumeration of presumptive bifidobacteria — Colony count technique at 37 degrees C
• Effective Date: 23-Apr-2020

Standards Content (Sample)

International
Standard
ISO 29981
IDF 220
Second edition
Milk products — Enumeration of
2024-11
bifidobacteria — Colony-count
technique
Produits laitiers — Dénombrement des bifidobacteria présumés
— Technique par comptage des colonies
Reference numbers
IDF 220:2024:2024(en) © ISO and IDF 2024

IDF 220:2024:2024(en)
© ISO and IDF 2024
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Published in Switzerland
ii
IDF 220:2024:2024(en)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 2
4 Principle . 2
4.1 General .2
4.2 Preparation of initial suspension and decimal dilutions .2
4.3 Isolation and selection for confirmation .2
4.4 Confirmation .2
4.5 Calculation .3
5 Culture media and reagents . 3
6 Equipment and consumables . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of test sample . 4
9 Procedure . 4
9.1 General .4
9.2 Preparation of the test portion and primary dilution .4
9.2.1 Dried milk products (e.g. infant milk formulae) including dehydrated starter
and probiotic cultures .4
9.2.2 Non-dried fermented (e.g. yoghurt) and non-fermented milk-based products
(e.g. pasteurized milks) .4
9.3 Microscopic examination of initial suspension or primary dilution (optional) .5
9.4 Preparation of decimal dilution series .5
9.5 Inoculation and incubation.5
9.6 Counting of colonies .5
9.7 Confirmation .6
10 Expression of results . 6
11 Validation of the method . 6
11.1 Validation in accordance with ISO 17468 .6
11.2 Performance characteristics .6
12 Test report . 7
13 Quality assurance . 7
Annex A (normative) Flow diagram of the procedure . 8
Annex B (normative) Culture media and reagents . 9
Annex C (informative) Performance characteristics of the method .13
Bibliography .15

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IDF 220:2024:2024(en)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk
and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and IDF.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 29981 | IDF 220:2010), which has been
technically revised.
The main changes are as follows:
— diluents which can be used have been added;
— preparation of the test portion and primary dilution in cases of dried milk products has been added;
— a new culture medium, TOS agar, has been introduced;
— storage of incubated plates has been included;
— expression of results has been changed to be in accordance with ISO 7218;
— performance testing of the culture media has been introduced;
— performance characteristics, with the results of an interlaboratory study, which are based on the method
of this second edition, have been included as Annex C.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.

iv
IDF 220:2024:2024(en)
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit private sector organization representing the
interests of various stakeholders in dairying at the global level. IDF members are organized in National
Committees, which are national associations composed of representatives of dairy-related national interest
groups including dairy farmers, dairy processing industry, dairy suppliers, academics and governments/
food control authorities.
ISO and IDF collaborate closely on all matters of standardization relating to methods of analysis and
sampling for milk and milk products. Since 2001, ISO and IDF jointly publish their International Standards
using the logos and reference numbers of both organizations.
IDF draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). IDF takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, IDF had not received notice of (a)
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this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
This document was prepared by IDF Standing Committee on Methods for Dairy Microbiology and ISO Technical
Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published jointly
by ISO and IDF.
The work was carried out by the IDF/ISO Action Team (D09) of the Standing Committee on Methods for Dairy
Microbiology under the aegis of its project leader Masamichi Muto (JP).

v
IDF 220:2024:2024(en)
Introduction
Bifidobacteria are non-acid-fast, non-spore-forming, Gram-positive, non-motile and catalase-negative
chemoorganotrophs bacilli, which produce acetic acid, lactic acid and formic acid. Glucose is degraded
exclusively and characteristically by the fructose-6-phosphate shunt in which fructose-6-phosphate
phosphoketolase (F6PPK, EC 4.1.2.22) cleaves fructose-6-phosphate into acetyl phosphate and erythrose-4-
phosphate.
Many reports show that bifidobacteria have various physiological functions and bifidobacteria are widely
applied to f
...

Norme
internationale
ISO 29981
FIL 220
Deuxième édition
Produits laitiers — Dénombrement
2024-11
des bifidobacteria présumés —
Technique par comptage des
colonies
Milk products — Enumeration of bifidobacteria — Colony-count
technique
Numéros de référence
FIL 220:2024:2024(fr) © ISO et FIL 2024

FIL 220:2024:2024(fr)
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Publié en Suisse
© ISO et FIL 2024 – Tous droits réservés
ii
FIL 220:2024:2024(fr)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe. 2
4.1 Généralités .2
4.2 Préparation de la suspension mère et des dilutions décimales .2
4.3 Isolement et sélection pour confirmation .2
4.4 Confirmation .3
4.5 Calcul .3
5 Milieux de culture et réactifs . 3
6 Matériel et consommables . 3
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon d’essai . 4
9 Mode opératoire . 4
9.1 Généralités .4
9.2 Préparation de la prise d’essai et de la dilution primaire .4
9.2.1 Produits laitiers en poudre (par exemple, préparations pour nourrissons), y
compris ferments et cultures probiotiques déshydratées .4
9.2.2 Produits à base de lait fermenté non séché (par exemple, yaourt) et non
fermenté (par exemple, laits pasteurisés) .4
9.3 Examen microscopique de la suspension mère ou de la dilution primaire (facultatif) .5
9.4 Préparation des séries de dilution décimale.5
9.5 Inoculation et incubation .5
9.6 Comptage des colonies.5
9.7 Confirmation .6
10 Expression des résultats . 6
11 Validation de la méthode . 6
11.1 Validation conformément à l’ISO 17468 .6
11.2 Caractéristiques de performance .6
12 Rapport d’essai . 7
13 Assurance qualité . 8
Annexe A (normative) Logigramme du mode opératoire . 9
Annexe B (normative) Milieux de culture et réactifs . 10
Annexe C (informative) Caractéristiques de performance de la méthode . 14
Bibliographie .16

© ISO et FIL 2024 – Tous droits réservés
iii
FIL 220:2024:2024(fr)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et par la Fédération internationale du lait (FIL). Il est publié conjointement par
l’ISO et la FIL.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 29981 | FIL 220:2010), qui a fait l’objet
d’une révision technique.
Les principales modifications sont les suivantes:
— des diluants utilisables ont été ajoutés;
— la préparation de la prise d’essai et la dilution primaire dans le cas de produits laitiers en poudre ont été
ajoutées;
— un nouveau milieu de culture, la gélose TOS, a été introduit;
— le stockage des plaques incubées a été inclus;
— l’expression des résultats a été modifiée afin d’être conforme à l’ISO 7218;
— des essais de performance des milieux de culture ont été introduits;
— les caractéristiques de performance, avec les résultats d’une étude interlaboratoires basés sur la méthode
de cette deuxième édition, ont été incluses en tant qu’Annexe C.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse https://www.iso.org/fr/members.html.

© ISO et FIL 2024 – Tous droits réservés
iv
FIL 220:2024:2024(fr)
La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente les
intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont organisés
en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de groupes d’intérêt
nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des acteurs de l’industrie
de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des universitaires et des
représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.
L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes
d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient
conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux
organisations.
La FIL attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. La FIL ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, la FIL n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie
de tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Le présent document a été élaboré par le Comité permanent sur d’analyse de la microbiologie laitière de la FIL
et le comité technique de l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Il est
publié conjointement par l’ISO et la FIL.
L’ensemble des t
...