ISO 11268-1:1993

Soil quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida) — Part 1: Determination of acute toxicity using artificial soil substrate

The method described is based on placing adult earthworms in a defined substrate containing the test substance in different concentrations and determining the percent mortality after 7 d and 14 d. It is not applicable to volatile substances, i.e. substances for which Henry's constant or the air/water partition coefficient is greater than 1, or for which the vapour pressure exceeds 0,0133 Pa at 25 °C. It does not take into account the possible degradation of the test substance.

Qualité du sol — Effets des polluants vis-à-vis des vers de terre (Eisenia fetida) — Partie 1: Détermination de la toxicité aiguë en utilisant des substrats de sol artificiel

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 15-Dec-1993
• Withdrawal Date: 15-Dec-1993
• ICS: 13.080.30 - Biological properties of soils
• Technical Committee: ISO/TC 190/SC 4 - Biological characterization
• Drafting Committee: ISO/TC 190/SC 4/WG 2 - Effects on soil fauna
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 29-Oct-2012

Relations

• Revised: ISO 11268-1:2012 - Soil quality — Effects of pollutants on earthworms — Part 1: Determination of acute toxicity to Eisenia fetida/Eisenia andrei
• Effective Date: 10-Jan-2009

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 11268-1
First edition
1993~12-15
- Effects of pollutants on
Soil quality
earthworms (Eisenia fetida) -
Part 1:
Determination of acute toxicity using artificial
soil Substrate
- Effets des polluants vis-a-vis des vers de terre Eisenia
QualitB du sol
fetida) -
Partie 7: D6termination de la toxicith aigue en utilisant des Substrats de
sol artificiel
Reference nurnber
ISO 11268~1:1993(E)

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OS0 1126891:1993[E)
Foreword
SS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(1 EC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO % % 268-1 was prepared by Technicai Committee
ISO/TC 190, SONY quality, Subcommittee SC 4, Biological methods.
ISO 1% 268 consists of the following Parts, under the general title Seil
quaky - Effects of polutants on earthworms (Eisenja fetida):
- Part 1: Determination of acute toxicity using artificial seil Substrate
- Part 2: Determination of effects on reproduction
- Part 3: Guidance on field testing
Annexes A and 5 of this patt of ISO i 1268 are for information only.
0 ISO 1993
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication mag/ be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronie or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1 21% Geneve 20 0 Switzerland
Printed in Switzerland
ii

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0 ISO
ISO 11268=1:1993(E)
Introduction
This International Standard, describing a method using artificial seil, has
been drawn up taking into consideration test procedures recommended
by the Organisation for Economic Co-Operation and Development (OECD).
. . .
Ill

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ISO 11268~1:1993(E)
INTERNATIONAL STANDARD * ISO
- Effects of pollutants on earthworms
Soil quality
(Eisenia fetida) -
Part 1:
Determination of acute toxicity using artificial soil Substrate
3 Definitions
1 Scope
For the purposes of BS0 11268, the following defi-
This International Standard describes a method for
nitions apply.
determining the acute toxicity of substances to
Eisenia fetida by dermal and alimentary uptake using
an artificial Substrate. The method is not applicable to
3.1 LC 50: The median Pethal concentration, i.e. that
volatile substances i.e. substances for which H concentration of test substance initially present which
(Henry’s constant) or the air/water partition coefficient kills 50 % of the test animals within the test period.
is greater than 1, or for which the vapour pressure
exceeds 0,013 3 Pa at 25 “C.
3.2 NOEC (no observed effect concentration): The
highest tested concentration of a test substance at
This method does not take into account the possible
which no lethal or other effect (such as weight alter-
degradation of the test substance.
ation) is observed.
NOTE 1 Both LC 50 and NOEC are expressed in milli-
grams of test substance per kilogram (dry mass) of the test
2 Normative references
Substrate (5.2).
The following Standards contain provisions which,
through reference in this text, constitute provisions
of this patt of ISO 11268. At the time of publication, 4 Principle
the editions indicated were valid. All Standards are
subject to revision, and Parties to agreements based The percent mortality of adult earthworms (species
Eisenia fetida) placed in a defined Substrate containing
on this part of ISO 11268 are encouraged to investi-
the test substance in different concentrations is de-
gate the possibility of applying the most recent edi-
tions of the Standards indicated below. Members of termined after 7 d and 14 d. The test substance is
IEC and ISO maintain registers of currently valid added in a Single step and the test is completed
International Standards. without replenishing the test substances. Test con-
centrations are measured as milligrams of substance
ISO 11274: -l), Seil quality - Determination o f the per kilogram of dry test Substrate.
wa ter reten tion characteris tic - Labora tot-y me thods.
The results obtained from the tests are compared
ISO 11461: Soil quality - Determination o f seil with a control and are used to estimate the concen-
-l),
tration which Causes the mortality of 50 % of
water content on a volume basis - Gravimetric
earthworms (LC 50, 14 d).
method.
1) To be published.

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0 ISO
ISO 11268=1:1993(E)
NOTE 2 Chloroacetamide has been found to be a suitable The Substrate called “artificial soil” shall have the fol-
reference substance.
lowing composition:
The test is conducted in two Steps: Percentage ex-
pressed on dry
mass basis
- a preliminary test, which gives an approximate in-
dication of the concentrations responsible for total
Sphagnum peat finely ground and
mortality and for the absence of mortality, which with no visible plant remains 10%
serves to determine the range of concentrations
Kaolinite clay containing not less than
for the final test;
30 % kaolinite 20 %
Industrial quartz sand (dominant fine
- the final test to determine the concentrations
sand with more than 50 % of particle
causing between 10 % and 90 % mortality, which
size 0,05 mm to 0,2 mm) 70 %
yields the definitive result.
Add sufficient Calcium carbonate (CaCO,), pulverized
higher
Substances are not tested at concentrations
and of recognized analytical grade, to bring the pH of
than 1 000 mg per kg of dry Substrate.
the wetted Substrate to 6,0 + 05 (commonly about
0,5 % of the mass of the dry ingredients).
If the preliminary test Shows no mortality, it is not
necessaty to perform the final test.
The Substrate shall be wetted with deionized OP dis-
tilled water to resch 40 % to 60 % of the total water
holding capacity determined in accordance with
ISO 1 ‘l274*).
5 Reagents
Determine the water content of the Substrate in ac-
cordante with ISO 114612).
NOTE 5 Allowance should be made for any water that is
5.1 Biological material
to be used for introducing the test substance into the soil.
The biological material consists of adult earthworms
of the species Eisenia fetida at least two months old,
6 Apparatus
with a clitellum and a wet mass between 300 mg and
600 mg.
Usual laboratory equipment and
NOTE 3 Eise& fetida exists in two sub-species which
some taxonomists regard as distinct species: Eisen& fetida
6.1 Glass Containers, one for each test, of capacity
and Eisenja andrei. These are morphologically similar, but
about 1 litre to 2 litres, not tightly closed, to allow
one, E. fetida fetida (E. fetida) has a typically transverse
exchanges between the medium and the atmos-
striping or banding on the Segments, and the other, E. fetida
phere.
andrei (E. andrei) lacks this and has a variegated reddish
colour. Either sub-species (species) may be used.
6.2 Apparatus to determine the dry mass of the
Select Worms used for the test to form as far as is
Substrate in accordance with ISO 11461.
practicable a homogenous population from the stand-
Point of size and weight. Before the test, wash them
with potable water.
7 Test environment
NOTE 4 An example of a breeding technique for Eisenja
fetida is given in annex A.
7.1 Enclosure, capable of being controlled at a
temperature of 20 “C & 2 “C.
5.2 Test Substrate
7.2 Light Source (e.g. white fluorescent tubes), ca-
pable of delivering a constant light intensity of 400 IX
For each glass Container (6.1), the quantity of
to 800 IX on the Containers at a controlled lightldark
Substrate used per glass Container shall be equivalent
cycle of between 12 h: i 2 h and 16 h: 8 h.
to 500 g (dry mass).
2) To be published.
2

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Q ISO
ISO 112684:1993(E)
Take 10 Worms prepared as described in 5.‘l, dry
8 Procedure
them on absorbent Paper, weit Jh them and add them
to the test Container.
8.1 Preparation of the test
Cover the Container as indicated in 6.1 and place it in
The concentrations of the test substance shall be ex-
the test enclosure (7.1).
pressed as mass of substance per dry mass of soil
Substrate (mg/kg) (see 5.2).
8.1.3 Control Container
8.1.1 Introduction of the test substances
Prepare the cont
...

NORME
INTERNATIONALE
11268-l
Première édition
1993-l 2-l 5
Qualité du sol - Effets des polluants
vis-à-vis des vers de terre (Eisenia fetida) -
Partie ‘Ile
Détermination de la toxicité aiguë en utilisant
des substrats de sol artificiel
Soi1 quality - Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida) -
Part 1: Determination of acute toxicity using artificial soi1 substrate
Numéro de référence
ISO 11268-I :1993(F)

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ISO 11268-1:1993(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
l’lS0). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 11268-l a été élaborée par le comité techni-
que lSO/TC 190, Qualité du sol, sous-comité SC 4, Méthodes
biologiques.
L’ISO 11268 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre gé-
- Effets des polluants vis-à-vis des vers de terre
néral Oualite du sol
(Eisenia fetida) :
- Partie 7: Détermination de la toxicite aiguë en utilisant des substrats
de sol artificiel
- Partie 2: Détermination des effets sur la reproduction
- Partie 3: Lignes directrices concernant les essais sur site
Les annexes A et B de la présente partie de I’ISO 11268 sont données
uniquement à titre d’information.
0 60 1993
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cede, électronique ou mécanique, y compris Sa photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Genéve 20 l Suisse
Imprime en Suisse
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0 ISO
ISO 11268-1:1993(F)
Introduction
La présente partie de I’ISO 11268 décrivant une méthode utilisant un sol
artificiel, a été élaborée en tenant compte des méthodes d’essai recpm-
mandées par l’Organisation de Coopération et de Développement Eco-
nomiques (OCDE).
. . .
III

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NORME INTERNATIONALE Qualité du sol - Effets des polluants vis-à-vis des vers
de terre (Eisenia fetida) -
Partie 1:
Détermination de Pa toxicité aiguë en utilisant des substrats
de sol artificiel
ISO 11274: -l) Qualité du sol - Détermination de la
1 Domaine d’application
carat téris tique’ de la r6 ten tion d’eau - M6thodes de
laboratoire.
La présente partie de NS0 11268 prescrit une mé-
thode de determination de la toxicité aiguë d’une
ISO 11461:
-l) Qualit6 du sol - D&ermina tion de la
substance vis-à-vis de Eisenia fetida après absorption
teneur en ea; volumique du sol - M&hode gra-
cutanee et ingestion, en utilisant un substrat artificiel.
vimétrique.
Cette methode ne s’applique pas aux substances vo-
latiles, c’est-à-dire les substances pour lesquelles H
3 Définitions
(constante de Henry) ou le coefficient de partage
air/eau est supérieur a 1, ou pour lesquelles la pres-
Pour les besoins de I’ISO Il 268, les définitions sui-
sion de vapeur à 25 “C excède 0,013 3 Pa.
vantes s’appliquent.
Elle ne tient pas compte de l’eventuelle dégradation
de la substance expérimentée. 3.1 CL 50: Concentration létale moyenne, c’est-à-
dire la concentration de substance expérimentée ini-
tialement présente qui provoque la mort de 50 % des
animaux soumis à l’essai pendant la période d’essai.
3.2 CSEO (concentration sans effet observable):
2 Références normatives
Plus forte concentration de substance expérimentée
pour laquelle aucun effet Mal ou autre (tel qu’une
Les normes suivantes contiennent des dispositions
modification de poids) n’est observe.
qui, par suite de la reference qui en est faite, consti-
tuent des dispositions valables pour la présente partie NOTE 1 CL 50 et CSEO sont exprimées en milligrammes
de substance expérimentée par kilogramme de masse sé-
de I’ISO 11268. Au moment de la publication, les
che de substrat d’essai (5.2).
éditions indiquées etaient en vigueur. Toute norme
est sujette à revision et les parties prenantes des ac-
cords fondes sur la présente partie de NS0 11268
4 Principe
sont invitees à rechercher la possibilité d’appliquer les
éditions les plus recentes des normes indiquées ci- Le pourcentage de mortalité de lombriciens adultes
aprés. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent (espèce Eisenia fetida) places dans un substrat defini,
le registre des Normes internationales en vigueur a contenant la substance expérimentée à différentes
un moment donne. concentrations est déterminé au bout de 7 jours et
1) À publier.

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@3 ISO
%SO 112684:1993(F~
14 jours. La substance expérimentée est ajoutée en 5.2 Substrat d’essai
une seule fois et l’essai est réalise sans renou-
La quantité de substrat utilisé par récipient d’essai
vellement de la substance.
(6.1) doit être équivalente a 500 g de matière sèche.
Les resultats obtenus lors des essais sont compares
Le substrat appelé «sol artificiel)) doit avoir la compo-
avec ceux d’un essai témoin et utilises pour estimer
sition suivante:
la concentration qui provoque la mortalité de 50 %
des lombriciens (CL 50, 14 jours).
Pourcentage ex-
primé en masse
NOTE 2 L’expérience a montre que la chloroacétamide
sèche
est une substance de référence appropriée.
Sphaigne finement moulue,
exempte de tout résidu de plante
L’essai est conduit en deux étapes:
visible 10%
- un essai préliminaire qui donne une indication ap-
Argile kaolinique, contenant plus de
proximative des concentrations responsables de la 30 % de kaolinite 20 %
mortalité totale et de l’absence de mortalité, et qui
Sable de quartz industriel (sable fin
sert a determiner la gamme des concentrations
dominant dont plus de 50 % des
pour l’essai définitif;
grains présentent une granulomé-
trie de 0,05 mm à 0,2 mm) 70 %
- un essai définitif qui précise les concentrations
Ajouter du carbonate de calcium (CaCO,) pulvérisé,
provoquant entre 10 % et 90 % de mortalité, dont
de qualité analytique reconnue, en quantité suffisante
le résultat est le seul retenu.
pour amener le pH du substrat humidifié à 6,0 + 0,5
Les substances ne sont pas expénmentées a des
(généralement environ 0,5 % de la masse des ingré-
concentrations supérieures à 1 000 mg par kilo-
dients secs.)
gramme de substrat sec.
Le substrat doit être humidifié avec de l’eau déionisée
Si l’essai préliminaire ne provoque pas de mortalité, il
ou distillée jusqu’à 40 % à 60 % de sa capacité de
n’est pas nécessaire de réaliser l’essai définitif.
rétention d’eau totale, déterminée conformément à
I’ISO 11274.
Déterminer la teneur en eau du substrat conformé-
5 Réactifs
ment à I’ISO 11461.
NOTE 5 II convient de permettre d’utiliser tout type d’eau
5.1 Matériel biologique
pour introduire la substance d’essai dans le sol.
Le matériel biologique est constitué par des
lombriciens adultes de I’espéce Eisenia fetida, âgés
d’au moins deux mois, possédant un clitellum et dont
6 Appareillage
la masse humide est compris entre 300 mg et
600 mg.
Matériel courant de laboratoire, et
NOTE 3 II existe deux espèces d’Eisenia fetida que cer-
tains taxonomistes considèrent comme des espèces dis-
6.1 Récipients en verre, un pour chaque essai, de
tinctes, Eisenla fetida et Eisenia andrei Elles sont
capacité comprise entre 1 litre et 2 litres, non hermé-
morphologiquement similaires mais l’une, appelée E. fetida
tiquement fermés de manière à permettre des
fetida (E. fetida) comporte des bandes ou rayures transver-
échanges entre le milieu et l’atmosphère.
sales caractéristiques sur les segments, tandis que l’autre,
appelée E. fetida andrei (E. andrei) en est dépourvue et
présente une couleur diaprée rougeatre. Les deux espèces
6.2 Dispositif, permettant de mesurer la masse sè-
peuvent être utilisées indifféremment.
che du substrat conformément à I’ISO 11461.
Sélectionner les vers à utiliser pour l’essai de manier-e
à obtenir, dans la mesure du possible, une population
7 Environnement de ll’essai
homogène du point de vue de la taille et du poids Les
laver à l’eau potable avant l’essai.
%% Enceinte, thermostatée à la température de
NOTE 4 Un exemple de technique d’élevage d’Eisenia
fetida est indique dans l’annexe A.
20 “6 & 2 “6.
2

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0 ISO
ISO 11268-1:1993(F)
obtenir la concentration souhaitée. Placer ce mélange,
7.2 Source lumineuse (par exemple, tubes fluo-
le reste de substrat de sol (voir 5.2) et l’eau (voir 5.2)
rescents blancs), permettant de soumettre les reci-
dans le récipient d’essai (voir 6.1).
pients à une intensite lumineuse constante de 400 lx
à 800 lx sous un cycle contrôle lumiére/obscurité
Homogénéiser soigneusement l’ensemble et pour-
compris entre 12 h: % 2 h et ‘l6 h: 8 h.
suivre comme spécifié en 8.1.2.
8 Mode opératoire
8.1.2 Introduction du réactif biologique
Determiner la teneur en eau et le pH du sol artificiel
8.1 Préparation de l’essai
au début et à la fin de l’essai (lorsque l’essai est réa-
Les concentrations de substance expérimentée doi- lise avec des substances acides ou basiques, ne pas
vent être exprimées en masse de substance par la ajuster le pH).
masse sèche du substrat de sol (mg/kg) (voir 5.2).
Prélever 10 vers sur la quantité préparée conformé-
ment à 5.1, les secher sur du p
...