ISO 8381:2000
(Main)Milk-based infant foods — Determination of fat content — Gravimetric method (Reference method)
Milk-based infant foods — Determination of fat content — Gravimetric method (Reference method)
Aliments à base de lait pour enfants en bas âge — Détermination de la teneur en matière grasse — Méthode gravimétrique (Méthode de référence)
La présente Norme internationale spécifie la méthode de référence pour la détermination de la teneur en matière grasse des aliments à base de lait pour enfants en bas âge.Cette méthode est applicable aux aliments à base de lait liquides, concentrés et séchés pour enfants en bas âge, ne contenant pas ou pas plus qu'une fraction massique de 5 % (de la matière sèche) d'amidon, de dextrines, de légumes, de fruits, de viandes, etc.NOTE 1 Les malto-dextrines ne contenant pas de dextrines de haut poids moléculaire, souvent présentes dans les aliments pour enfants en bas âge, ne troublent pas l'extraction par la méthode Rôse-Gottlieb, même si elles sont présentes en concentrations élevées.La méthode n'est applicable ni aux produits qui ne se dissolvent pas complètement dans l'ammoniaque, du fait de la présence d'un certain pourcentage d'amidon ou de dextrines, ou encore de la présence de grumeaux compacts, ni aux produits qui contiennent des acides gras libres en quantité importante; le résultat de la détermination sera trop faible.NOTE 2 Avec de tels produits, il convient d'avoir recours à une méthode utilisant le principe de Weibull-Berntrop (voir l'ISO 8262-1).
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8381
Second edition
2000-03-01
Milk-based infant foods — Determination of
fat content — Gravimetric method
(Reference method)
Aliments à base de lait pour enfants en bas âge — Détermination de la
teneur en matière grasse — Méthode gravimétrique (Méthode de
référence)
Reference number
ISO 8381:2000(E)
©
ISO 2000
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ISO 8381:2000(E)
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ISO 8381:2000(E)
Contents Page
Foreword.iv
1 Scope .1
2 Normative reference .1
3 Term and definition .1
4 Principle.2
5 Reagents.2
6 Apparatus .2
7 Sampling.3
8 Preparation of test sample.4
8.1 Liquid products.4
8.2 Viscous or pasty products.4
8.3 Dried products .4
9 Procedure .4
9.1 Test portion .4
9.2 Blank tests.4
9.3 Preparation of fat-collecting vessel .5
9.4 Determination.5
10 Calculation and expression of results.7
10.1 Calculation.7
10.2 Expression of results .8
11 Precision.8
11.1 Interlaboratory test .8
11.2 Repeatability.8
11.3 Reproducibility.8
12 Test report .9
Annex A (informative) Notes on procedures.10
Annex B (informative) Alternative procedure using fat-extraction tubes with siphon or wash-bottle
fittings.12
Bibliography .15
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ISO 8381:2000(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
International Standard ISO 8381 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Agricultural food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, in collaboration with the International Dairy Federation (IDF) and
AOAC International, and will also be published by these organizations.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 8381:1987), which has been technically revised.
Annexes A and B of this International Standard are for information only.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 8381:2000(E)
Milk-based infant foods — Determination of fat content —
Gravimetric method (Reference method)
WARNING — The use of this International Standard may involve hazardous materials, operations and
equipment. This standard does not purport to address all the safety problems associated with its use. It is
the responsibility of the user of this standard to establish safety and health practices and determine the
applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This International Standard specifies the reference method for the determination of the fat content of milk-based
infant foods.
The method is applicable to liquid, concentrated and dried milk-based infant foods with no, or not more than a mass
fraction of 5 % (dry matter) of starch or dextrin, or vegetable, fruit, meat, etc.
NOTE 1 Malto-dextrins without higher molecular mass dextrins, which are often present in infant foods, do not disturb the
Röse-Gottlieb extraction even when present in high concentrations.
The method is not applicable to products which do not dissolve completely in ammonia owing to the presence of
more than a few percent of starch or dextrin, or to the presence of hard lumps. The method is also not applicable to
products which contains free fatty acids in significant quantities. The results obtained for these products will be too
low.
NOTE 2 For such products, recourse should be made to a method utilizing the Weibull-Berntrop principle (see ISO 8262-1).
2 Normative reference
The following normative document contains provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, this publication do
not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to investigate the
possibility of applying the most recent editions of the normative document indicated below. For undated references,
the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC maintain registers of
currently valid International Standards.
ISO 3889, Milk and milk products — Determination of fat content — Mojonnier-type fat extraction flasks.
3 Term and definition
For the purposes of this International Standard, the following term and definition apply.
3.1
fatcontentofmilk
mass fraction of substances determined by the procedure specified in this International Standard
NOTE The fat content is expressed as a mass fraction, in percent [formerly given as % (m/m)].
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ISO 8381:2000(E)
4 Principle
An ammoniacal ethanolic solution of a test portion is extracted with diethyl ether and light petroleum. The solvents
are removed by distillation or evaporation. The mass of the substances extracted is determined.
NOTE This is usually known as the Röse-Gottlieb principle.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized water or
water of equivalent purity.
The reagents shall leave no appreciable residue when the determination is carried out by the method specified (see
9.2.2).
5.1 Ammonia solution, containing a mass fraction of NH of approximately 25 % (� = 910 g/l).
3 20
NOTE If ammonia solution of this concentration is not available, a more concentrated solution of known concentration may
be used (see 9.4.2).
5.2 Ethanol (C H OH), or ethanol denatured by methanol, containing a volume fraction of ethanol of at least
2 5
94 %. (See A.5.)
5.3 Congo red solution
Dissolve1gof Congo red in water in a 100 ml one-mark volumetric flask (6.14). Dilute to the mark with water.
NOTE The use of this solution, which allows the interface between the solvent and aqueous layers to be seen more
clearly, is optional (see 9.4.4). Other aqueous colour solutions may be used provided that they do not affect the result of the
determination.
5.4 Diethyl ether (C H OC H ), free from peroxides (see A.3), containing no more than 2 mg/kg of antioxidants,
2 5 2 5
and complying with the requirements for the blank test (see 9.2.2, A.1 and A.4).
NOTE The use of diethyl ether could lead to hazardous situations. Due to expected changes in safety regulations studies
are ongoing to replace diethyl ether by another reagent provided that it does not affect the end result of the determination.
5.5 Light petroleum, with any boiling range between 30 °C and 60 °C or, as equivalent, pentane
(CH [CH ] CH ) with a boiling point of 36 °C and complying with the requirements for the blank test (see 9.2.2, A.1
3 2 3 3
and A.4).
NOTE The use of pentane is recommended because of its higher purity and constant quality.
5.6 Mixed solvent
Shortly before use, mix equal volumes of diethyl ether (5.4) and light petroleum (5.5).
6 Apparatus
WARNING — Since the determination involves the use of volatile flammable solvents, all electrical
apparatus employed shall comply with legislation relating to the hazards in using such solvents.
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 1 mg, with a readability of 0,1 mg.
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ISO 8381:2000(E)
6.2 Centrifuge, capable of holding the fat-extraction flasks or tubes (6.6) and capable of spinning at a rotational
–1 –1
frequency of 500 min to 600 min to produce a radial acceleration of 80 g to 90 g at the outer end of the flasks or
tubes.
NOTE The use of the centrifuge is optional but recommended (see 9.4.7).
6.3 Distillation or evaporation apparatus, for distilling the solvents and ethanol from the boiling or conical
flasks, or evaporating from beakers and dishes (see 9.4.14) at a temperature not exceeding 100 °C.
6.4 Drying oven, electrically heated, with ventilation port(s) fully open, capable of being maintained at a
temperature of 102 °C � 2 °C throughout its working space.
Theovenshallbefittedwithasuitablethermometer.
6.5 Water baths, capable of being maintained at temperatures of between 30 °C and 40 °C, 40 °C and 60 °C,
and 60 °C and 70 °C.
6.6 Mojonnier-type fat-extraction flasks, as specified in ISO 3889.
NOTE It is also possible to use fat-extraction tubes, with siphon or wash-bottle fittings, but then the procedure is different.
The alternative procedure is given in annex B.
The fat-extraction flasks shall be provided with good quality bark corks or stoppers of other material [e.g. silicone
rubber or polytetrafluoroethylene (PTFE)] unaffected by the reagents used. Bark corks shall be extracted with the
diethyl ether (5.4), kept in water at a temperature of 60 °C or more for at least 15 min, and shall then be allowed to
cool in the water so that they are saturated when used.
6.7 Rack, for holding the fat-extraction flasks (or tubes) (6.6).
6.8 Wash bottle, suitable for use with the mixed solvent (5.6).
A plastics wash bottle shall not be used.
6.9 Fat-collecting vessels, such as boiling flasks (flat-bottomed), of capacities 125 ml to 250 ml, conical flasks,
of capacity 250 ml, or metal dishes.
If metal dishes are used, they shall be of stainless steel, flat-bottomed with a diameter of 80 mm to 100 mm and a
height of approximately 50 mm.
6.10 Boiling aids, fat-free, of non-porous porcelain or silicon carbide (optional when metal dishes are used).
6.11 Measuring cylinders, of capacities 5 ml and 25 ml.
6.12 Pipettes, graduated, of capacity 10 ml.
6.13 Tongs, made of metal, for holding flasks, beakers or dishes.
6.14 Volumetric flask, one-mark, of capacity 100 ml.
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method is
given in ISO 707.
It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been damaged or
changed during transport or storage.
Store all liquid, viscous or pasty samples at a temperature of between 2 °C and 6 °C from the time of sampling to
the time of commencing the procedure. In the case of samples in sealed cans or bottles, store these samples
unopened at a temperature below 20 °C.
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ISO 8381:2000(E)
8 Preparation of test sample
8.1 Liquid products
Shake and invert the sample container. Open the container to pour the product slowly into a second sample
container provided with an airtight lid. Mix by repeated transfer the product, taking care to incorporate in the sample
any fat or other constituent adhering to the wall and ends of the first container. Transfer the test sample as
completely as possible to the second sample container. Close this container.
If necessary, condition the unopened sample container in the water bath (6.5) set at between 40 �C and 60 �C.
Remove and shake the container vigorously every 15 min. After 2 h, remove the container, dry the outside with a
tissue and allow to cool to room temperature. Remove the lid or cap entirely and thoroughly mix the contents by
stirring with a spoon or spatula. (If fat separates, do not test the sample.) Transfer the test sample as completely as
possible to a second sample container provided with an airtight lid. Close this container.
8.2 Viscous or pasty products
Open the sample container and thoroughly mix the contents with a spoon or spatula. If possible, use an up-and-
down rotary movement in such a way that the top layers and the contents of the lower corners of the container are
moved and mixed. Take care to incorporate in the test sample any fat or other constituents adhering to the wall and
ends of the container. Transfer the test sample as completely as possible to a second sample container provided
with an airtight lid. Close this container.
If necessary, condition the unopened sample container in the water bath (6.5) set at between 30 �C and 40 �C.
Remove the container, dry the outside with a tissue and open it. Scrape out all test sample adhering to the interior
of the container. Transfer the test sample to a dish large enough to permit thorough stirring, and mix until the whole
mass is homogeneous. Transfer the test sample as completely as possible to a second sample container provided
with an airtight lid. Close this container.
8.3 Dried products
Thoroughly mix the sample container by repeatedly rotating and inverting. If necessary, transfer all of the test
sample to a suitable airtight sample container of sufficient capacity to allow this operation to be carried out.
9 Procedure
NOTE 1 If it is required to check whether the repeatability limit (11.2) is met, carry out two single determinations in
accordance with 9.1 to 9.4.
NOTE 2 An alternative procedure using fat-extraction tubes with siphon or wash-bottle fittings (see note in 6.6) is given in
annex B.
9.1 Test portion
Mix the test sample (clause 8) in the case of viscous, pasty or dried products by stirring, or in the case of liquid
products by gently inverting the sample container three or four times. Immediately weigh to the nearest 1 mg,
directly or by difference, 1,5 g to 10 g of the test sample, corresponding to 1,0 to 1,5 g of dry matter, in a fat-
extraction flask (6.6).
Transfer the test portion as completely as possible into the lower (small) bulb of the fat-extraction flask.
9.2 Blank tests
9.2.1 Blank test for method
Carry out a blank test simultaneously with the determination using the same procedure and same reagents, but
replacing the dispersed test portion in 9.4.1 by 10 ml of water (see A.2).
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ISO 8381:2000(E)
If the value obtained in the blank test regularly exceeds 1,0 mg, check the reagents if this has not been recently
done (9.2.2). Corrections of more than 2,5 mg should be mentioned in the test report.
9.2.2 Blank test for reagents
To test the quality of the reagents, carry out a blank test as specified in 9.2.1. Additionally use an empty fat-
collecting vessel, prepared as specified in 9.3, for mass control purposes. The reagents shall leave no residue
greater than 1,0 mg (see A.1).
If the residue of the complete reagent blank test is greater than 1,0 mg, determine the residue of the solvents
separately by distilling 100 ml of the diethyl ether (5.4) and light petroleum (5.5), respectively. Use an empty fat-
collecting vessel, prepared for control purposes as described above, to obtain the real mass of residue which shall
not exceed 1,0 mg.
Very occasionally, the solvents may contain volatile matter which is strongly retained in fat. If there are indications of
the presence of such substances, carry out blank tests on all the reagents and for each solvent using a fat-
collecting vessel with about 1 g of anhydrous butterfat. If necessary, redistil solvents in the presence of 1 g of
anhydrous butterfat per 100 ml of solvent. Use the solvents only shortly after the redistillation.
Replace unsatisfactory reagents and solvents, or redistil solvents.
9.3 Preparation of fat-collecting vessel
Dry a fat-collecting vessel (6.9) with a few boiling aids (6.10) in the oven (6.4) set at 102 °C for 1 h.
NOTE 1 Boiling aids are desirable to promote gentle boiling during the subsequent removal of solvents, especially when
using glass fat-collecting vessels; their use is optional with metal dishes.
Protect the fat-collecting vessel from dust and allow it to cool to the temperature of the weighing room (glass fat-
collecting vessel for at least 1 h, metal dish for at least 30 min).
NOTE 2 To avoid insufficient cooling or unduly long cooling times, the fat-collecting vessel should not be placed in a
desiccator.
Use tongs (6.13) to place the fat-collecting vessel on the balance. Weigh the fat-collecting vessel to the nearest
1,0 mg.
NOTE 3 Tongs should preferably be
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 8381
Deuxième édition
2000-03-01
Aliments à base de lait pour enfants en bas
âge — Détermination de la teneur en
matière grasse — Méthode gravimétrique
(Méthode de référence)
Milk-based infant foods — Determination of fat content — Gravimetric
method (Reference method)
Numéro de référence
ISO 8381:2000(F)
©
ISO 2000
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ISO 8381:2000(F)
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ii © ISO 2000 – Tous droits réservés
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ISO 8381:2000(F)
Sommaire Page
Avant-propos.iv
1 Domaine d’application.1
2 Référence normative .1
3 Terme et définition.1
4 Principe.2
5 Réactifs .2
6 Appareillage.3
7 Échantillonnage .4
8 Préparation de l'échantillon pour essai.4
8.1 Produits liquides.4
8.2 Produits visqueux ou pâteux.4
8.3 Produits secs .4
9 Mode opératoire.4
9.1 Prise d'essai .5
9.2 Essais à blanc .5
9.3 Préparation du récipient pour la récupération de la matière grasse.5
9.4 Détermination.6
10 Calcul et expression des résultats.8
10.1 Calcul .8
10.2 Expression des résultats .8
11 Fidélité .9
11.1 Essai interlaboratoires .9
11.2 Répétabilité.9
11.3 Reproductibilité.9
12 Rapport d'essai .9
Annexe A (informative) Notes sur les modes opératoires.10
Annexe B (informative) Autre mode opératoire utilisant des tubes d'extraction de la matière grasse
munis d'un siphon ou d'un dispositif de lavage.12
Bibliographie .15
© ISO 2000 – Tous droits réservés iii
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ISO 8381:2000(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments de la présente Norme internationale peuvent faire
l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
La Norme internationale ISO 8381 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, en collaboration avec la Fédération internationale de laiterie
(FIL) et l’AOAC International (Association des chimistes analytiques officiels); elle sera également publiée par ces
deux organisations.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 8381:1987), dont elle constitue une révision
technique.
Les annexes A et B de la présente Norme internationale sont données uniquement à titre d'information.
iv © ISO 2000 – Tous droits réservés
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NORME INTERNATIONALE ISO 8381:2000(F)
Aliments à base de lait pour enfants en bas âge — Détermination
de la teneur en matière grasse — Méthode gravimétrique (Méthode
de référence)
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente Norme internationale implique l'emploi de produits,
d'opérations et d'équipements à caractère dangereux. La présente Norme internationale ne prétend pas
aborder tous les problèmes de sécurité relatifs à son usage. Il est de la responsabilité de l'utilisateur de
consulter ou de fixer les règles de sécurité et d'hygiène appropriées et de déterminer si certaines
restrictions réglementaires s'appliquent avant utilisation.
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie la méthode de référence pour la détermination de la teneur en matière
grasse des aliments à base de lait pour enfants en bas âge.
Cette méthode est applicable aux aliments à base de lait liquides, concentrés et séchés pour enfants en bas âge,
ne contenant pas ou pas plus qu'une fraction massique de 5 % (de la matière sèche) d'amidon, de dextrines, de
légumes, de fruits, de viandes, etc.
NOTE 1 Les malto-dextrines ne contenant pas de dextrines de haut poids moléculaire, souvent présentes dans les aliments
pour enfants en bas âge, ne troublent pas l'extraction par la méthode Röse-Gottlieb, même si elles sont présentes en
concentrations élevées.
La méthode n'est applicable ni aux produits qui ne se dissolvent pas complètement dans l'ammoniaque, du fait de
la présence d'un certain pourcentage d'amidon ou de dextrines, ou encore de la présence de grumeaux compacts,
ni aux produits qui contiennent des acides gras libres en quantité importante; le résultat de la détermination sera
trop faible.
NOTE 2 Avec de tels produits, il convient d'avoir recours à une méthode utilisant le principe de Weibull-Berntrop (voir
l'ISO 8262-1).
2 Référence normative
Le document normatif suivant contient des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les amendements
ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords
fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer l'édition la plus
récentes du document normatif indiqué ci-après. Pour les références non datées, la dernière édition du document
normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des Normes
internationales en vigueur.
ISO 3889, Lait et produits laitiers — Détermination de la teneur en matière grasse — Fioles d'extraction, type
Mojonnier.
3 Terme et définition
Pour les besoins de la présente Norme internationale, le terme et la définition suivants s'appliquent.
© ISO 2000 – Tous droits réservés 1
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ISO 8381:2000(F)
3.1
teneur en matière grasse des aliments à base de lait pour enfants en bas âge
fraction massique de substances, déterminée par la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale
NOTE La teneur en matière grasse est exprimée comme fraction massique, en pourcentage [dans le passé également
exprimée en % (m/m)].
4Principe
Une solution ammoniaco-éthanolique d'une prise d'essai est extraite au moyen d'oxyde diéthylique et d'éther de
pétrole. Les solvants sont éliminés par distillation ou évaporation, puis la masse des substances extraites est
déterminée.
NOTE Cette méthode est habituellement dite Röse-Gottlieb.
5 Réactifs
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau distillée ou
déminéralisée, ou de l'eau de pureté au moins équivalente.
Les réactifs ne doivent pas laisser de résidu appréciable lorsque la détermination est effectuée selon la méthode
spécifiée (voir 9.2.2).
5.1 Hydroxyde d'ammonium, solution contenant une fraction massique de NH d'environ 25 % (� = 910 g/l).
3 20
NOTE Si l'on ne dispose pas d'une solution d'hydroxyde d'ammonium à cette concentration, une solution plus concentrée,
de concentration connue, peut être utilisée (voir 9.4.2).
5.2 Éthanol (C H OH), ou éthanol dénaturé par du méthanol, contenant une fraction volumique d’éthanol d’au
2 5
moins 94 % (voir A.5).
5.3 Solution de rouge-Congo.
Dans une fiole jaugée de 100 ml (6.14), dissoudre dans de l'eau1gderouge-Congo. Ajuster au trait avec de l'eau.
NOTE L'utilisation de cette solution, qui permet de mieux voir l'interface entre le solvant et la couche aqueuse, est
facultative (voir 9.4.4). D'autres solutions aqueuses de colorants peuvent être utilisées pourvu qu'elles ne modifient pas le
résultat de la détermination.
5.4 Oxyde diéthylique (C H OC H ), exempt de peroxydes (voir A.3) et ne contenant pas plus de 2 mg/kg
2 5 2 5
d'antioxydants, et conforme aux spécifications de l'essai à blanc (voir 9.2.2, A.1 et A.4).
NOTE L'utilisation d'oxyde diéthylique comporte des risques. Dans l'attente de nouvelles réglementations en matière de
sécurité, des études sont en cours en vue de remplacer l'oxyde diéthylique par un autre réactif, à condition que celui-ci ne
modifie pas le résultat final de la détermination.
5.5 Éther de pétrole, ayant un point d'ébullition compris entre 30 °C et 60 °C, ou, en alternative, pentane
(CH [CH ] CH ) ayant un point d'ébullition de 36 °C et conforme aux spécifications de l’essai à blanc (voir 9.2.2,
3 2 3 3
A.1 et A.4).
NOTE Il est recommandé d'utiliser le pentane car il est d'une pureté plus élevée et de qualité constante.
5.6 Mélange de solvants.
Peu de temps avant l'emploi, mélanger des volumes égaux d'oxyde diéthylique (5.4) et d'éther de pétrole (5.5).
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6 Appareillage
AVERTISSEMENT — La détermination impliquant l'utilisation de solvants volatils inflammables, l'appa-
reillage électrique utilisé doit être conforme à la législation concernant les risques d'utilisation de ces
solvants.
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Balance analytique, capable de peser à 1 mg près et avec une lisibilité de 0,1 mg.
6.2 Centrifugeuse, dans laquelle les fioles ou les tubes d'extraction (6.6) peuvent être soumis à une rotation
avec une fréquence de 500 r/min à 600 r/min, afin de produire une accélération radiale de 80 g à90 g àl'extrémité
extérieure des fioles ou des tubes.
NOTE L'utilisation d'une centrifugeuse est facultative mais recommandée (voir 9.4.7).
6.3 Appareil de distillation ou d'évaporation, permettant de distiller les solvants et l'éthanol des fioles, ou de
les évaporer des béchers et des capsules (voir 9.4.14) à une température n'excédant pas 100 °C.
6.4 Étuve à dessiccation, à chauffage électrique, munie d'ouïes de ventilation complètement ouvertes et
réglable à une température de 102 °C � 2 °C dans l'espace utilisé.
L'étuve doit être munie d'un thermomètre approprié.
6.5 Bains d'eau, pouvant être maintenus à une température comprise respectivement entre 30 °C et 40 °C,
entre 40 °C et 60 °C et entre 60 °C et 70 °C.
6.6 Fioles d'extraction de la matière grasse, type Mojonnier, telles que spécifiées dans l'ISO 3889.
NOTE On peut également utiliser des tubes d'extraction de la matière grasse munis d'un siphon ou d'un dispositif de
lavage, mais le mode opératoire est alors différent et est décrit à l'annexe B.
Les fioles doivent être munies de bouchons en liège de bonne qualité, ou en une autre matière [par exemple,
caoutchouc siliconé ou polytétrafluoroéthylène (PTFE)] inaltérable aux réactifs utilisés. Les bouchons en liège
doivent être lavés à l'oxyde diéthylique (5.4), maintenus dans l'eau à 60 °C ou plus durant au moins 15 min et
ensuite mis à refroidir dans l'eau de façon à en être imprégnés au moment de l'emploi.
6.7 Support, pour maintenir les fioles (ou les tubes) d'extraction de la matière grasse (6.6).
6.8 Flacon de lavage, approprié à l'utilisation avec le mélange de solvants (5.6).
Ne pas utiliser de flacon de lavage en plastique.
6.9 Récipients pour la récupération de la matière grasse, par exemple fioles à ébullition (fioles à fond plat) de
125 ml à 250 ml de capacité, fioles coniques de 250 ml de capacité ou capsules métalliques.
Si l'on utilise des capsules métalliques, elles doivent être de préférence en acier inoxydable, à fond plat et avoir un
diamètre de 80 mm à 100 mm et une hauteur d'environ 50 mm.
6.10 Régularisateurs d'ébullition, exempts de matière grasse, en porcelaine non poreuse ou en carbure de
silicium (facultatif si l'on utilise des capsules métalliques).
6.11 Éprouvettes graduées, de 5 ml et 25 ml de capacité.
6.12 Pipettes, graduées, de 10 ml de capacité.
6.13 Pinces métalliques, appropriées pour tenir les fioles, les béchers ou les capsules.
6.14 Fiole volumétrique, à un trait, de 100 ml de capacité.
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7 Échantillonnage
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une méthode
d'échantillonnage recommandée est donnée dans l'ISO 707.
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou modifié lors
du transport et de l'entreposage.
Conserver tous les échantillons liquides, visqueux ou pâteux à une température comprise entre 2 °C et 6 °C à partir
du moment de l'échantillonnage jusqu'au commencement du mode opératoire. Dans le cas de boîtes ou de flacons
bouchés, les conserver non ouverts à une température inférieure à 20 °C.
8 Préparation de l'échantillon pour essai
8.1 Produits liquides
Agiter et retourner le récipient. Ouvrir le récipient et transvaser lentement le produit dans un deuxième récipient
(muni d'un couvercle étanche). Mélanger par transvasements répétés, en prenant soin de bien réincorporer dans
l'échantillon toute matière grasse ou tout autre constituant pouvant adhérer à la paroi et au fond du premier
récipient. Enfin, transvaser l'échantillon aussi complètement que possible dans le deuxième récipient. Fermer ce
récipient.
Si nécessaire, conditionner le récipient non ouvert dans le bain d'eau (6.5), réglé entre 40 °C et 60 °C. Retirer et
agiter le récipient vigoureusement toutes les 15 min. Au bout de 2 h, retirer le récipient, sécher l'extérieur avec du
papier absorbant et laisser refroidir à température ambiante. Ôter complètement le couvercle et mélanger avec soin
le contenu à l'aide d'une cuillère ou d'une spatule. (Si la matière grasse se sépare, ne pas procéder à la
détermination sur cet échantillon.) Enfin, transvaser l'échantillon aussi complètement que possible dans un
deuxième récipient. Fermer ce récipient.
8.2 Produits visqueux ou pâteux
Ouvrir le récipient et mélanger les contenus avec soin à l'aide d'une cuillère ou d'une spatule. Si possible, remuer
selon un mouvement rotatoire ascendant et descendant, de manière que les couches supérieures et le contenu des
coins inférieurs du récipient soient remués et mélangés. Veiller à réincorporer dans l'échantillon toute matière
grasse ou tout autre constituant pouvant adhérer à la paroi et au fond du récipient. Transvaser l'échantillon aussi
complètement que possible dans un deuxième récipient (muni d'un couvercle étanche). Fermer ce récipient.
Si nécessaire, conditionner le récipient non ouvert dans le bain d'eau (6.5), réglé entre 30 °C et 40 °C. Retirer le
récipient, sécher l'extérieur avec du papier absorbant et l'ouvrir. Racler tout l'échantillon adhérant à l'intérieur du
récipient. Transvaser l'échantillon dans une capsule de taille suffisante pour permettre une bonne agitation et
mélanger jusqu'à obtenir une masse homogène. Transvaser l'échantillon aussi complètement que possible dans un
deuxième récipient (muni d'un couvercle étanche). Fermer ce récipient.
8.3 Produits secs
Mélanger soigneusement par rotations et retournements du récipient. Si nécessaire, transvaser l'échantillon pour
essai dans un récipient approprié, hermétique à l'air, de capacité suffisante pour permettre le mélange.
9 Mode opératoire
NOTE 1 S'il est demandé de vérifier que l'on satisfait aux exigences données en ce qui concerne la limite de répétabilité
(11.2), effectuer deux déterminations séparées selon 9.1 à 9.4.
NOTE 2 Un autre mode opératoire utilisant des tubes d'extraction de la matière grasse munis de siphon ou de dispositif de
lavage (voir la note en 6.6) est décrit dans l'annexe B.
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9.1 Prise d'essai
Mélanger l'échantillon pour essai (article 8) en agitant doucement (dans le cas de produits visqueux, pâteux ou
secs) ou en retournant doucement le récipient trois ou quatre fois (dans le cas de produits liquides). Peser
immédiatement, à 1 mg près, directement ou par différence, dans une fiole d'extraction de la matière grasse (6.6),
1,5gà10gdel'échantillon pour essai, correspondant à 1,0gà1,5gdematièresèche.
La prise d'essai doit être placée aussi complètement que possible dans le bulbe inférieur (étroit) de la fiole
d'extraction.
9.2 Essais à blanc
9.2.1 Essai à blanc pour la méthode
Effectuer un essai à blanc simultanément avec la détermination, en utilisant le même mode opératoire et les
mêmes réactifs, mais en remplaçant la prise d'essai indiquée en 9.4.1 par 10 ml d'eau (voir A.2).
Si la valeur obtenue pour l'essai à blanc dépasse régulièrement 1,0 mg, vérifier les réactifs si cela n'a pas été fait
récemment (9.2.2). Les corrections faites pour des valeurs supérieures à 2,5 mg doivent figurer dans le rapport
d'essai.
9.2.2 Essai à blanc pour les réactifs
Pour vérifier la qualité des réactifs, effectuer un essai à blanc comme mentionné en 9.2.1. En outre, pour les
contrôles de masses, utiliser un récipient de récupération de la matière grasse vide, préparé comme spécifié en
9.3. Les réactifs ne doivent pas laisser de résidus supérieurs à 1,0 mg (voir A.1).
Si les résidus des réactifs de l'essai à blanc complet sont supérieurs à 1,0 mg, déterminer les résidus des solvants
séparément en distillant respectivement 100 ml d'oxyde diéthylique (5.4) et d'éther de pétrole (5.5). Utiliser un
récipient de contrôle vide pour obtenir la masse réelle de résidus qui ne doit pas être supérieure à 1,0 mg.
Il peut arriver que les réactifs contiennent des matières volatiles qui sont fortement retenues dans la matière
grasse. S'il y a des indications de la présence de telles substances, effectuer des essais à blanc sur tous les
réactifs et pour chaque solvant, en utilisant pour chacun un récipient pour la matière grasse, avec environ 1 g de
matière grasse du beurre anhydre. Si nécessaire, distiller à nouveau les solvants en présence de 1 g de matière
grasse du beurre anhydre pour 100 ml de solvant. Utiliser les solvants juste après redistillation.
Remplacer les réactifs et solvants non satisfaisants, ou redistiller les solvants.
9.3 Préparation du récipient pour la récupération de la matière grasse
Sécher, pendant 1 h, un récipient (6.9) avec quelques régularisateurs d'ébullition (6.10) à l'étuve (6.4) réglée à
102 °C.
NOTE 1 Les régularisateurs d'ébullition sont recommandés pour permettre une ébullition modérée au cours de l'élimination
ultérieure des solvants, notamment dans le cas de récipients en verre; leur utilisation est facultative dans le cas de capsules
métalliques.
Protéger le récipient des poussières et le laisser refroidir à la température de la salle des balances (récipients en
verre pendant au moins 1 h, capsules métalliques pendant au moins 30 min).
NOTE 2 Pour éviter un refroidissement insuffisant ou des périodes de refroidissement exagérément prolongées, il convient
que le récipient ne soit pas placé dans un dessiccateur.
À l'aide de pinces (6.13), placer le récipient sur la balance. Peser, à 1,0 mg près, le récipient pour la récupération
de la matière grasse.
NOTE 3 Il convient d'utiliser de préférence des pinces pour éviter, en particulier, des variations de température.
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9.4 Détermination
9.4.1 Effectuer la détermination sans attendre.
Si nécessaire, ajouter à la prise d'essai (9.1) se trouvant dans la fiole d'extraction de l'eau préalablement chauffée à
65 °C � 5 °C, de façon à obtenir un volume total de 10 ml à 11 ml et à entraîner la totalité de la prise d'essai dans le
bulbe étroit de la fiole. Agiter doucement en réchauffant légèrement dans un bain d'eau (6.5) réglé à une
température comprise entre 40 °C et 60 °C, jusqu'à ce que la prise d'essai soit complètement dispersée.
9.4.2 Ajouter 2 ml de solution d'hydroxyde d'ammonium (5.1) à la prise d'essai dispersée (9.4.1) se trouvant dans
la fiole d'extraction, ou un volume équivalent d'une solution plus concentrée (voir la note en 5.1). Mélanger
vigoureusement avec la prise d'essai dans le bulbe étroit de la fiole.
9.4.3 Chauffer, pendant 15 min à 20 min, la fiole dans le bain d'eau (6.5) réglé à 65 °C � 5 °C, tout en l'agitant de
temps en temps, puis la refroidir sous l'eau courante jusqu'à température ambiante.
9.4.4 Ajouter 10 ml d'éthanol (5.2). Mélanger doucement, mais à fond, en laissant le contenu de la fiole aller et
venir entre les deux bulbes. Éviter d'amener le liquide trop près du col de la fiole. Ajouter, si nécessaire, 2 gouttes
de solution de rouge-Congo (5.3). Si nécessaire, refroidir de nouveau la fiole à la température ambiante.
9.4.5 Ajouter 25 ml d'oxyde diéthylique (5.4). Boucher la fiole avec un bouchon en liège saturé d'eau, ou avec un
bouchon d'une autre matière (voir 6.6), mouillé avec de l'eau. Agiter la fiole vigoureusement mais sans excès
pendant 1 min, afin d'éviter la formation d'émulsions persistantes.
Lors de l'agitation, maintenir la fiole en position horizontale, le bulbe étroit étant en haut, en laissant de temps en
temps le liquide du bulbe large passer dans le bulbe étroit. Si nécessaire, refroidir la fiole à l'eau courante jusqu'à
température ambiante. Retirer avec précaution le bouchon en liège ou le dispositif de fermeture et le rincer, ainsi
que le col de la fiole, avec une petite quantité de mélange de solvants (5.6). Utiliser un flacon de lavage (6.8), de
façon que les liquides de rinçage coulent dans la fiole.
9.4.6 Ajouter 25 ml d'éther de pétrole (5.5). Boucher la fiole avec le bouchon en liège réhumidifié, ou l'autre
bouchon réhumidifié (en le trempant dans l'eau), et mélanger à nouveau doucement pendant 30 s comme décrit en
9.4.4. Poursuivre en agitant comme décrit en 9.4.5.
9.4.7 Centrifuger la fiole bouchée pendant 1 min à 5 min avec une accélération radiale de 80 g à90 g.Sil'onne
dispose pas de centrifugeuse (6.2), laisser la fiole bouchée reposer sur le support (6.7) pendant au moins 30 min,
jusqu'à ce que la couche surnageante soit claire et nettement séparée de la couche aqueuse. Si nécessaire,
refroidir la fiole à l'eau courante jusqu'à température ambiante.
9.4.8 Enlever avec précaution le bouchon en liège ou le dispositif de fermeture et le rincer, ainsi que l'intérieur du
col de la fiole, avec un peu de mélange de solvants (5.6). Utiliser un flacon de lavage (6.8) de façon que les liquides
de rinçage coulent dans la fiole. Si l'interface se situe au-dessous du fond du col de la fiole, la faire monter à ce
niveau en ajoutant doucement de l'eau par le côté de la fiole (voir Figure 1), afin de permettre la décantation du
solvant.
NOTE Dans les Figures 1 et 2, il a été choisi l'un parmi les trois types de flacons spécifiés dans l'ISO 3889, mais cela
n'implique pas une préférence par rapport aux autres types.
9.4.9 Tenir la fiole d'extraction par le bulbe étroit, décanter avec soin le plus possible de la couche surnageante
dans le récipient préparé, destiné à la récupération de la matière grasse (voir 9.3), contenant quelques
régularisateurs d'ébullition (6.10) dans le cas des fioles (facultatif avec les capsules métalliques). Éviter de décanter
une partie quelconque de la couche aqueuse (voir Figure 2).
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Légende Légende
1 Solvants 1 À la seconde et troisième extraction
2 À la seconde et troisième extraction 2 À la première extraction
3 À la première extraction 3 Couche aqueuse
4 Interface 4 Interface
5 Couche aqueuse
Figure 1 — Avant décantation Figure 2 — Après décantation
9.4.10 Rincer l'extérieur du col de la fiole d'extraction avec un peu de mélange de solvants (5.6). Recueillir les
liquides de rinçage dans le récipient pour la récupération de la matière grasse. Prendre soin que le mélange de
solvants ne soit pas projeté sur l'extérieur de la fiole d'extraction. Si nécessaire, éliminer le solvant totalement ou
partiellement du récipient par distillation ou évaporation comme décrit en 9.4.14.
9.4.11 Ajouter 5 ml d'éthanol (5.2) au contenu de la fiole d'extraction. Utiliser de l'éthanol pour rincer l'intérieur du
col de la fiole et mélanger comme décrit en 9.4.4.
9.4.12 Effectuer une seconde extraction en
...
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