Coffee -- Determination of caffeine content -- Method using high-performance liquid chromatography

Specifies the principle, the reagents, the apparatus, the sampling and preparation of the test sample, the test procedure, the expression of results, the precision and the test report.

Café -- Détermination de la teneur en caféine -- Méthode par chromatographie liquide à haute performance

La présente Norme internationale prescrit une méthode de détermination de la teneur en caféine par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) dans les cafés verts, le café torréfié et les extraits de café en poudre, que ces produits soient décaféinés ou non.  NOTE 1 La méthode de référence pour la détermination de la teneur en caféine, utilisant la spectrométrie d'absorption dans les ultraviolets, fait l'objet de l'ISO 4052:1983, Cafés -- Détermination de la teneur en caféine -- Méthode de référence.

Kava - Ugotavljanje vsebnosti kofeina - Metoda z uporabo tekočinske kromatografije

General Information

Status
Withdrawn
Publication Date
30-Nov-1995
Withdrawal Date
15-May-2011
Current Stage
9900 - Withdrawal (Adopted Project)
Start Date
12-May-2011
Due Date
04-Jun-2011
Completion Date
16-May-2011

RELATIONS

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ISO 10095:1992 - Coffee -- Determination of caffeine content -- Method using high-performance liquid chromatography
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SIST ISO 10095:1995
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ISO 10095:1992 - Café -- Détermination de la teneur en caféine -- Méthode par chromatographie liquide a haute performance
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Standards Content (sample)

IS0
INTERNATIONAL
10095
STANDARD
First edition
1992-01-15
Determination of caffeine content -
Coffee -
Method using high-performance liquid
chromatography
Etermination de la teneur en cafeine - MHhode par
Cafe -
chromatographie liquide 3 haute performance
Reference number
IS0 10095: 1992(E)
---------------------- Page: 1 ----------------------
IS0 10095:1992(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. IS0 collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an lnter-
national Standard requires approval by at least 75 % of the member
bodies casting a vote.
International Standard IS0 10095 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Sub-Committee SC 15, Coffee.
Annex A of this International Standard is for information only.
0 IS0 1992

All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form

or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without

permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1211 Genkve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
---------------------- Page: 2 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD IS0 10095:1992(E)
Coffee - Determination of caffeine content - Method using
high-performance liquid chromatography
on a silica microcolumn modified with phenyl
1 Scope
groups.
This International Standard specifies a method for
Determination of the caffeine content by HPLC with
the determination of caffeine content by high-
ultraviolet detection.
performance liquid chromatography (HPLC) of regu-
lar and decaffeinated green and roasted coffee
4 Reagents
beans and of regular and decaffeinated coffee ex-
tract powder.
Use only reagents of recognized anal’
ytical grade,
The reference method for determination of the
NOTE 1 unless otherwise specified, and
distilled or
caffeine content, using ultraviolet absorption spectrom-
demineralized water or water of equiva lent purity.
etry, is given in IS0 4052:1983, Coffee - Determination
of caffeine content (Reference method).
4.1 Methanol, HPLC grade.
2 Normative references
4.2 Ammonia solution (0,3 mol/l)/methanol, 90 + 10
mixture by volume.
The following standards contain provisions which,
through reference in this text, constitute provisions
4.3 Elution solvent, for purification
column,
of this International Standard. At the time of publi-
methanol/water/acetic acid, 75 + 25 + 1 mixture by
cation, the editions indicated were valid. All stan-
volume.
dards are subject to revision, and parties to
agreements based on this International Standard
4.4 Mobile phase, methanol/water, 30 + 70 mixture
are encouraged to investigate the possibility of ap-
by volume.
plying the most recent editions of the standards in-
dicated below. Members of IEC and IS0 maintain
Put 600 ml of methanol (4.1) into a 2 I one-mark
registers of currently valid International Standards.
volumetric flask and make up to the mark with wa-
ter. Mix and then filter the mixture through a filter
IS0 1447:1978, Green coffee - Determination of
of 0,45 pm pore size (5.7).
moisture content (Routine method).
NOTE 2 By adjusting the methanol concentration, the
IS0 3726:1983, instant coffee - Determination of loss
retention time of caffeine can be modified so as to opti-
in mass at 70 “C under reduced pressure.
mize the HPLC separation.
IS0 6673:1983, Green coffee - Determination of loss
4.5 Ethanol/water, 1 + 4 solution by volume.
in mass at 105 “C.
4.6 Magnesium oxide?
3 Principle
4.7 Caffeine, stock solution, corresponding to 0,5 g
Extraction of the caffeine from a test portion with
of caffeine per litre.
water at 90 OC in the presence of magnesium oxide.

Filtration and then purification of an aliquot portion Weigh, to the nearest 0,l mg, 125 mg of caffeine into

1) Merck 5867 is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience

of users of this International Standard and does not constitute an endorsement by IS0 of this product.

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IS0 10095:1992(E)
a 250 ml volumetric flask made of amber glass. Add
sufficient ethanol/water (4.5) to half-fill the flask.
Dissolve the caffeine and then make up to the mark
with the same ethanol/water mixture.
where
This solution can be stored for 1 month in a
is the retention time of the peak;
refrigerator.
is the peak width at half-height.
Wo,5
4.8 Caffeine, standard solutions.
5.3 Purification column, for reversed-phase chro-
matography, of 3 ml capacity, filled with silica modi-
4.8.1 standard solution A, corresponding to 0,010 g
fied with phenyl groups, the particles of which have
of caffeine per litre, to be used for the decaffeinated
an average size of 40 pm.3)
product.
5.4 Coffee mill, suitable for milling roasted coffee
Allow the stock solution (4.7) to warm up to room
beans.
temperature. Using a pipette (5.12), transfer 2 ml of
this solution to a 100 ml one-mark volumetric flask.
5.5 Grinder with cogged wheel, with a cooling
Make up to the mark with water and mix.
jacket, or analytical grinder, with blades and a cool-
Prepare this solution on the day of use.
ing jacket, or any other grinder suitable for grinding
green coffee beans.
4.8.2 Standard solution B, corresponding to 0,05 g
Sieve, of woven wire cloth, with an aperture
of caffeine per litre, to be used for regular products.
size of 630 pm.
Allow the stock solution (4.7) to warm up to room
temperature. Using a pipette (5.12), transfer 5 ml of
5.7 Filters, of 0,45 pm pore size.
this solution to a 50 ml one-mark volumetric flask.
Make up to the mark with water and mix.
5.8 Water-bath, capable of operating at
90 OC + 1 OC with continuous stirring.
5 Apparatus
5.9 Analytical balance, capable of weighing to the
nearest 0,000 1 g
Usual laboratory apparatus and, in particular, the
following.
5.10 Bottle, of 250 ml capacity, fitted with a screw
cap.
chromatograph,
5.1 High-performance liquid
equipped with an ultraviolet detector, allowing
5.11 One-mark volumetric flasks, of 10 ml, 50 ml,
measurements to be made at between 254 nm and
100 ml, 250 ml and 2 I capacity.
280 nm, and a chart recorder. A wavelength close to
280 nm is preferred since the maximum absorption
5.12 Pipettes, of 2,0 ml, 5,0 ml and IO,0 ml capacity.
by caffeine is at 272 nm.
6 Sampling
5.2 Chromatographic column for HPLC, type Cl&
preferably with spherical particles and having an

efficiency of at least 5000 theoretical plates.*) Sampling of green coffee in bags should have been

carried out in accordance with IS0 4072.
The theoretical plate number N of a column can be

calculated as follows, from the shape of the peak Sampling of instant coffee in cases with liners

obtained by injection of the pure caffeine standard should have been carried out in accordance with

solution (4.8): IS0 6670.

2) Spherisorb 5 ODS, Spherisorb 10 ODS, Nucleosil 5 C18, Nucleosil 7 CIa, Nucleosil 10 C18, Zorbax BP C18, Hypersil ODS,

CP-Spher C,*, Bondapak Cfs, Supelcosil L C18 and Partisphere C18 are examples of suitable products available commer-

cially. This information is given for the convenience of users of this International Standard and does not constitute an

endorsement by IS0 of these products.

In this International Standard, the chromatographic conditions and the composition of the mobile phase (4.4) specified are

suitable for a Partisphere C18 Cartridge column of dimensions 110 mm x 4,6 mm, filled in a Whatman HPLC Cartridge sys-

tem. If other types of column are used, an alternative mobile phase and chromatographic conditions may be necessary.

3) The 3 ml Baker SPE column, modified with phenyl groups in reversed phase, is an example of a suitable product

available commercially. This information is given for the convenience of users of this International Standard and does not

constitute an endorsement by IS0 of this product.
------
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 10095:1995
01-december-1995
.DYD8JRWDYOMDQMHYVHEQRVWLNRIHLQD0HWRGD]XSRUDERWHNRþLQVNH
NURPDWRJUDILMH

Coffee -- Determination of caffeine content -- Method using high-performance liquid

chromatography

Café -- Détermination de la teneur en caféine -- Méthode par chromatographie liquide à

haute performance
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 10095:1992
ICS:
67.140.20 Kava in kavni nadomestki Coffee and coffee substitutes
SIST ISO 10095:1995 en

2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

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SIST ISO 10095:1995
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SIST ISO 10095:1995
IS0
INTERNATIONAL
10095
STANDARD
First edition
1992-01-15
Determination of caffeine content -
Coffee -
Method using high-performance liquid
chromatography
Etermination de la teneur en cafeine - MHhode par
Cafe -
chromatographie liquide 3 haute performance
Reference number
IS0 10095: 1992(E)
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Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
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national Standard requires approval by at least 75 % of the member
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INTERNATIONAL STANDARD IS0 10095:1992(E)
Coffee - Determination of caffeine content - Method using
high-performance liquid chromatography
on a silica microcolumn modified with phenyl
1 Scope
groups.
This International Standard specifies a method for
Determination of the caffeine content by HPLC with
the determination of caffeine content by high-
ultraviolet detection.
performance liquid chromatography (HPLC) of regu-
lar and decaffeinated green and roasted coffee
4 Reagents
beans and of regular and decaffeinated coffee ex-
tract powder.
Use only reagents of recognized anal’
ytical grade,
The reference method for determination of the
NOTE 1 unless otherwise specified, and
distilled or
caffeine content, using ultraviolet absorption spectrom-
demineralized water or water of equiva lent purity.
etry, is given in IS0 4052:1983, Coffee - Determination
of caffeine content (Reference method).
4.1 Methanol, HPLC grade.
2 Normative references
4.2 Ammonia solution (0,3 mol/l)/methanol, 90 + 10
mixture by volume.
The following standards contain provisions which,
through reference in this text, constitute provisions
4.3 Elution solvent, for purification
column,
of this International Standard. At the time of publi-
methanol/water/acetic acid, 75 + 25 + 1 mixture by
cation, the editions indicated were valid. All stan-
volume.
dards are subject to revision, and parties to
agreements based on this International Standard
4.4 Mobile phase, methanol/water, 30 + 70 mixture
are encouraged to investigate the possibility of ap-
by volume.
plying the most recent editions of the standards in-
dicated below. Members of IEC and IS0 maintain
Put 600 ml of methanol (4.1) into a 2 I one-mark
registers of currently valid International Standards.
volumetric flask and make up to the mark with wa-
ter. Mix and then filter the mixture through a filter
IS0 1447:1978, Green coffee - Determination of
of 0,45 pm pore size (5.7).
moisture content (Routine method).
NOTE 2 By adjusting the methanol concentration, the
IS0 3726:1983, instant coffee - Determination of loss
retention time of caffeine can be modified so as to opti-
in mass at 70 “C under reduced pressure.
mize the HPLC separation.
IS0 6673:1983, Green coffee - Determination of loss
4.5 Ethanol/water, 1 + 4 solution by volume.
in mass at 105 “C.
4.6 Magnesium oxide?
3 Principle
4.7 Caffeine, stock solution, corresponding to 0,5 g
Extraction of the caffeine from a test portion with
of caffeine per litre.
water at 90 OC in the presence of magnesium oxide.

Filtration and then purification of an aliquot portion Weigh, to the nearest 0,l mg, 125 mg of caffeine into

1) Merck 5867 is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience

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IS0 10095:1992(E)
a 250 ml volumetric flask made of amber glass. Add
sufficient ethanol/water (4.5) to half-fill the flask.
Dissolve the caffeine and then make up to the mark
with the same ethanol/water mixture.
where
This solution can be stored for 1 month in a
is the retention time of the peak;
refrigerator.
is the peak width at half-height.
Wo,5
4.8 Caffeine, standard solutions.
5.3 Purification column, for reversed-phase chro-
matography, of 3 ml capacity, filled with silica modi-
4.8.1 standard solution A, corresponding to 0,010 g
fied with phenyl groups, the particles of which have
of caffeine per litre, to be used for the decaffeinated
an average size of 40 pm.3)
product.
5.4 Coffee mill, suitable for milling roasted coffee
Allow the stock solution (4.7) to warm up to room
beans.
temperature. Using a pipette (5.12), transfer 2 ml of
this solution to a 100 ml one-mark volumetric flask.
5.5 Grinder with cogged wheel, with a cooling
Make up to the mark with water and mix.
jacket, or analytical grinder, with blades and a cool-
Prepare this solution on the day of use.
ing jacket, or any other grinder suitable for grinding
green coffee beans.
4.8.2 Standard solution B, corresponding to 0,05 g
Sieve, of woven wire cloth, with an aperture
of caffeine per litre, to be used for regular products.
size of 630 pm.
Allow the stock solution (4.7) to warm up to room
temperature. Using a pipette (5.12), transfer 5 ml of
5.7 Filters, of 0,45 pm pore size.
this solution to a 50 ml one-mark volumetric flask.
Make up to the mark with water and mix.
5.8 Water-bath, capable of operating at
90 OC + 1 OC with continuous stirring.
5 Apparatus
5.9 Analytical balance, capable of weighing to the
nearest 0,000 1 g
Usual laboratory apparatus and, in particular, the
following.
5.10 Bottle, of 250 ml capacity, fitted with a screw
cap.
chromatograph,
5.1 High-performance liquid
equipped with an ultraviolet detector, allowing
5.11 One-mark volumetric flasks, of 10 ml, 50 ml,
measurements to be made at between 254 nm and
100 ml, 250 ml and 2 I capacity.
280 nm, and a chart recorder. A wavelength close to
280 nm is preferred since the maximum absorption
5.12 Pipettes, of 2,0 ml, 5,0 ml and IO,0 ml capacity.
by caffeine is at 272 nm.
6 Sampling
5.2 Chromatographic column for HPLC, type Cl&
preferably with spherical particles and having an

efficiency of at least 5000 theoretical plates.*) Sampling of green coffee in bags should have been

carried out in accordance with IS0 4072.
The theoretical plate number N of a column can be

calculated as follows, from the shape of the peak Sampling of instant coffee in cases with liners

obtained by injection of the pure caffeine standard should have been carried out in accordance with

solution (4.8): IS0 6670.

2) Spherisorb 5 ODS, Spherisorb 10 ODS, Nucleosil 5 C18, Nucleosil 7 CIa, Nucleosil 10 C18, Zorbax BP C18, Hypersil ODS,

CP-Spher C,*, Bondapak Cfs, Supelcosil L C18 and Partisphere C18 are examples of suitable products available commer-

cially. This information is given for the convenience of users of this International Standard and does not constitute an

endorsement by IS0 of these pro
...

IS0
NORME
I N T E R N AT 1 O NA LE 10095
Premihre 6dition
1992-01-15
Café - Détermination de la teneur en
caféine - Méthode par chromatographie liquide
à haute performance
Coffee - Determination of caffeine content - Method using
high-performance liquid chromatography
__---
Num6ro de réf6rence
__-_ IS0 10095:1992(F)
I ll I 1
---------------------- Page: 1 ----------------------
IS0 10095:1992(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’Blaboration des Normes internationales est en général
confiBe aux comitds techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une Btude a le droit de faire partie du cornit6 technique créé
A cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore Btroitement avec la Commission Blectrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des cornites membres votants.
La Norme internationale IS0 10095 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 15,
Caf6.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
A titre d’information.
8 IS0 1992

Drolts de reproductlon rbserves. Aucune partie de cette publication ne peut Btre repro-

duite nl utlllsbe sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, Blectronlque ou

rnhcanlque, y cornprls la photocople et les mlcrofilms, sans l’accord écrit de I’édlteur.

Organlsatlon lnternatlonale de normallsatlon
Case Postale 56 CH-1211 Genève 20 * SuisSe
Imprim6 en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
~- - ~
IS0 10095:1992(F)
NORME INTERNATIONALE
Café - Détermination de la teneur en caféine - Méthode par
chromatographie liquide à haute performance
3 Principe
1 Domaine d’appllcatlon
Extraction de la caféine d’une prise d’essai avec de
La présente Norme internationale prescrit une mé-
l’eau à 90 OC en présence d’oxyde de magnésium.
thode de determination de la teneur en caféine par
Filtration, puis purification d’une partie aliquote sur
chromatographie liquide à haute performance
une micro-colonne de silice greffee d’un grou-
(CLHP) dans les cafés verts, le café torrefié et les
pement phényle.
extraits de café en poudre, que ces produits soient
décaféines ou non.
Dosage de la caféine par chromatographie liquide
à haute performance (CLHP) avec détection aux ul-
NOTE 1 La methode de rkférence pour la détermination
traviolets.
de la teneur en cafeine, utilisant la spectrometrie d’ab-
sorption dans les ultraviolets, fait l’objet de
I’ISO 4052:1983, Cafes - Détermination de la teneur en
4 Réactifs
caféine - Methode de référence.
Sauf indication différente, utiliser uniquement des
réactifs de qualité analytique. L’eau utilisée doit etre
de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de
2 Références normatives
pureté au moins équivalente.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
4.1 Méthanol, qualité CLHP
qui, par suite de la reference qui en est faite,
constituent des dispositions valables pour la pré-

sente Norme internationale. Au moment de la pu- 4.2 Hydroxyde d’ammonium (à 0,3 mol/l)l

blication, les éditions indiquées étaient en vigueur. méthanol, mélange 90 + 10 en volume.

Toute norme est sujette à révision et les parties
prenantes des accords fondés sur la présente
4.3 Solvant d’éMon, pour purification de la co-
Norme internationale sont invitées A rechercher la
lonne méthanol/eau/acide acétique, mélange
possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes
75 + 25 + 1 en volume.
des normes indiquées ci-après. Les membres de la
CE1 et de I’ISO possèdent le registre des Normes
4.4 Phase mobile, méthanol/eau : mélange 30 + 70
internationales en vigueur à un moment donné.
en volume.
IS0 1447:1978, Café vert - Détermination de la te-
Introduire 600 ml de méthanol (4.1) dans une fiole
neur en eau (Méthode de routine).
jaugée à un trait de 2 I et compléter au trait repere
avec de l’eau. Homogénéiser et filtrer le melange
IS0 3726:1983, Café soluble - Détermination de la
sur un filtre de 0,45 pm d’ouverture de pores (5.7).
perte de masse ZI 70 OC sous pression rkduite.
NOTE 2 En ajustant la concentration du methanol, le
temps de retention de la cafkine peut Qtre modifie de fa-
IS0 6673:1983, Cat6 vert - D6termination de la perte
çon h optimiser la separation par CLHP.
de masse 5, 105 OC.
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 10095:1992(F)
4.5 Ethanolleau, solution 1 4- 4 en volume.
5 Appareillage
4.6 Oxyde de magnBslumQ.
Matériel courant de laboratoire, et notamment
4.7 Cafdine, solutlon m&re, correspondant A 0,5 g
5.1 Chromatographe liquide haute performance,
de caféine par litre.
équipé d’un détecteur B ultraviolets permettant les
mesures entre 254 nm et 280 nm et d’un enregis-
Préparer la solution mere en pesant, A 0,000 1 g
treur graphique. Une longueur d’onde proche de
pres, 0,125 g de cafeine dans une fiole jaugée de
280 nm est préférable, car le maximum d’absorption
250 mi en verre inactinique. Ajouter suffisamment
de la caféine se situe A 272 nm.
de mélange éthanol/eau (4.5) pour remplir la fiole
jusqu’A la moitie. Dissoudre la cafeine, puis com-
pléter au trait repere avec le meme mélange
5.2 Colonne de Chromatographie pour CLHP, de
6thanoVeau.
type Cl8 avec, de préférence, des particules sphéri-
ques et ayant une efficacité d’au moins 5 O00 pla-
Cette solution peut &re conservée pendant 1 mois
te aux théoriques. 2)
au réfrigerateur.
Le nombre N de plateaux théoriques d’une colonne
4.8 CafBine, solutions Btalons.
peut être calcul6 comme suit, A partir du pic obtenu
en injectant une solution étalon (4.8) de cafeine
4.8.1 Solution Btalon A, correspondant $I 0,010 g de
pure:
caf6ine par litre (pour les cafes decaféinés).
N = 5,54( $)
Laisser la solution mere (4.7) se réchauffer A la
temperature du laboratoire. Introduire A la pipette
(5.12) 2 ml de cette solution dans une fiole jaugée $I
un trait de 100 ml. Compléter au trait repere avec
t est le temps de rétention du pic;
de l’eau et melanger.
est la largeur du pic A mi-hauteur.
Préparer cette solution le jour de son utilisation. w0,5
4.8.2 Solution 6talon 8, correspondant A 0,05 g de
5.3 Colonne de purification, pour chromatographie
cafhine par litre (pour les cafh courants).
en phase inverse de 3 ml de capacité, remplie de
silice greffée d’un groupement au phényle, dont les
Laisser la solution mere (4.6) se rbchauffer A la
particules ont un diametre moyen de 40 ~m.~)
temperature du laboratoire. Introduire $I la pipette
5 ml de cette solution dans une fiole jaug6e A un

trait de 50 ml. Completer au trait repere avec de 5.4 Moulin A cafd, approprié, pour grains de cafe

l’eau et melanger. torréfiés.

1) Merck 5867 est un exemple de produit approprie disponible sur le marché. Cette information est donnee B l’intention

des utilisateurs de la presente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi

exclusif du produit ainsi designe.

2) Spherisorb 5 ODS, Spherisorb 10 ODS, Nucleosil 5 cf8, Nucleosil 7 cl,, Nucleosil 10 cf8, Zorbax BP cf8, Hypersil ODS,

CP-Spher Cl8, Bondapak cl8, Supelcosil L C,? Partisphere Cl! sont des exemples de produits appropriks disponibles sur

le marche. Cette information est donnee B I intention des utilisateurs de la presente Norme internationale et ne signifie

nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif des produits ainsi designes.

Dans la presente Norme internationale les conditions chromatographiques et la composition de la phase mobile (4.4) ont

c18 de dimensions 110 mm x 4,6 mm, ajustée 3 un systhme
et6 6tablies sur la base d‘une colonne Cartridge de Partisphere

Cartridge de CLHP Whatman. L‘utilisation d’un autre type de colonne peut demander des modifications de la phase mobile

et des conditions chromatographiques.

3) La colonne Baker SPE, de 3 ml, greffee d’un groupement phényle en phase inverse, est un exemple de produit approprie

disponible sur le marche. Cette information est donnke l’intention des utilisateurs de la prksente Norme internationale

et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.

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IS0 10095:1992(F)
- I’ISO 1447 ou 4 I’ISO 6673 pour le café vert,
5.5 Broyeur A roues denthes, avec manchon de re-
froidissement, ou broyeur analytique, à ailettes et
- I’ISO 3726 pour le café soluble, ou &
manchon de refroidissement, ou tout broyeur sem-
blable approprié pour café vert en grains.
- la future Norme internationale correspondante
pour d’autres types de café et produi
...

NORME
10095
INTERNATIONALE
Première édition
1992-01-15
Café - Détermination de la teneur en
caféine - Méthode par chromatographie liquide
à haute performance
Coffee - Determination of caffeine content - Method using
high-performance liquid chromatography
Numéro de référence
ISO 10095: 1992(F)
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ISO 10095:1992(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 10095 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 15,
Café.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1992

Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-

duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou

mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.

Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-121 1 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
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ISO 10095:1992(F)
NORME INTERNATIONALE
Café - Détermination de la teneur en caféine - Méthode par
chromatographie liquide à haute performance
1 Domaine d’application 3 Principe
Extraction de la caféine d’une prise d’essai avec de
La présente Norme internationale prescrit une mé-
l’eau à 90 OC en présence d’oxyde de magnésium.
thode de détermination de la teneur en caféine par
Filtration, puis purification d’une partie aliquote sur
chromatographie liquide à haute performance
une micro-colonne de silice greffée d’un grou-
(CLHP) dans les cafés verts, le café torréfié et les
pement phényle.
extraits de café en poudre, que ces produits soient
décaféinés ou non.
Dosage de la caféine par chromatographie liquide
à haute performance (CLHP) .avec détection aux ul-
NOTE 1 La méthode de référence pour la détermination
traviolets.
de la teneur en caféine, utilisant la spectrométrie d’ab-
fait l’objet de
sorption dans les ultraviolets,
Détermination de la teneur en
VIS0 4052:1983, Cafés -
4 Réactifs
caféine - Méthode de référence.
Sauf indication différente, utiliser uniquement des
réactifs de qualité analytique. L’eau utilisée doit être
de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de
2 Références normatives
pureté au moins équivalente.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite, 4.1 Méthanol, qualité CLHP.
constituent des dispositions valables pour la pré-
sente Norme internationale. Au moment de la pu-
4.2 Hydroxyde d’ammonium (à 0,3 mol/l)/
blication, les éditions indiquées étaient en vigueur.
méthanol, mélange 90 + 10 en volume.
Toute norme est sujette à révision et les parties
prenantes des accords fondés sur la présente
4.3 Solvant d’élution, pour purification de la co-
Norme internationale sont invitées à rechercher la
lonne méthanol/eau/acide acétique, mélange
possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes
75 + 25 + 1 en volume.
des normes indiquées ci-après. Les membres de la
CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes
4.4 Phase mobile, méthanol/eau : mélange 30 + 70
internationales en vigueur à un moment donné.
en volume.
ISO 1447:1978, Café vert - Détermination de la te-
Introduire 600 ml de méthanol (4.1) dans une fiole
neur en eau (Méthode de routine).
jaugée à un trait de 2 I et compléter au trait repère
avec de l’eau. Homogénéiser et filtrer le mélange
ISO 3726:1983, Café soluble - Détermination de la
sur un filtre de 0,45 prn d’ouverture de pores (5.7).
perte de masse à 70 “C sous pression réduite.
NOTE 2 En ajustant la concentration du méthanol, le
ISO 6673:1983, Café vert - Détermination de la perte
temps de rétention de la caféine peut être modifié de fa-
con à optimiser la séparation par CLHP.
de masse à 105 “C.
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ISO 10095:1992(F)
4.5 EthanoVeau, solution 1 + 4 en volume.
5 Appareillage
4.6 Oxyde de magnésium?
Matériel courant de laboratoire, et notamment
4.7 Cafeine, solution mère, correspondant à 0,5 g
5.1 Chromatographe liquide à haute performance,
de caféine par litre.
équipé d’un détecteur à ultraviolets permettant les
mesures entre 254 nm et 280 nm et d’un enregis-
Préparer la solution mère en pesant, à 0,000 1 g
treur graphique. Une longueur d’onde proche de
près, 0,125 g de caféine dans une fiole jaugée de
280 nm est préférable, car le maximum d’absorption
250 ml en verre inactinique. Ajouter suffisamment
de la caféine se situe à 272 nm.
de mélange éthanol/eau (4.5) pour remplir la fiole
jusqu’à la moitié. Dissoudre la caféine, puis com-
pléter au trait repère avec le même mélange
5.2 Colonne de chromatographie pour CLHP, de
éthanol/eau.
type CA~ avec, de préférence, des particules sphéri-
ques et ayant une efficacité d’au moins 5 000 pla-
Cette solution peut être conservée. pendant 1 mois
teaux théoriques.*)
au réfrigérateu r.
Le nombre N de plateaux théoriques d’une colonne
4.8 Caféine, solutions étalons.
peut être calculé comme suit, à partir du pic obtenu
en injectant une solution étalon (4.8) de caféine
4.8.1 Solution étalon A, correspondant à 0,010 g de pure:
cafeine par litre (pour les cafés décaféinés).
N=5,54 &
Laisser la solution mère (4.7) se réchauffer à la
( .>
température du laboratoire. Introduire à la pipette
(5.12) 2 ml de cette solution dans une fiole jaugée à où
un trait de 100 ml. Compléter au trait repère avec
t est le temps de rétention du pic;
de l’eau et mélanger.
est la largeur du pic à mi-hauteur.
WO,S
Préparer cette solution le jour de son utilisation.
4.8.2 Solution étalon B, correspondant à 0,05 g de
5.3 Colonne de purification, pour chromatographie
caféine par litre (pour les cafés courants).
en phase inverse de 3 ml de capacité, remplie de
silice greffée d’un groupement au phényle, dont les
Laisser la solution mère (4.6) se réchauffer à la
particules ont un diamètre moyen de 40 pm.3)
température du laboratoire. Introduire à la pipette
5 ml de cette solution dans une fiole jaugée à un
5.4 Moulin à café, approprié, pour grains de café
trait de 50 ml. Compléter au trait repère avec de
torréfiés.
l’eau et mélanger.

1) Merck 5867 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention

des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi

exclusif du produit ainsi désigné.

2) Spherisorb 5 ODS, Spherisorb 10 ODS, Nucleosil 5 C18, Nucleosil 7 CI*, Nucleosil 10 CI,, Zorbax BP CI,, Hypersil ODS,

sont des exemples de produits appropriés disponibles sur
CP-Spher CI*, Bondapak C18, Supelcosil L CI*, Partisphere Cl8

le marché. Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie

nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.

Dans la presente Norme internationale les conditions chromatographiques et la composition de la phase mobile (4.4) ont

été établies sur la base d’une colonne Cartridge de Partisphere CI8 de dimensions 110 mm x 4,6 mm, ajustée à un système

Cartridge de CLHP Whatman. L’utilisation d’un autre type de colonne peut demander des modifications de la phase mobile

et des conditions chromatographiques.

3) La colonne Baker SPE, de 3 ml, greffée d’un groupement phényle en phase inverse, est un exemple de produit approprié

disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale

et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.

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ISO 10095:1992(F)
- I’ISO 1447 ou à I’ISO 6673 pour le café vert,
5.5 Broyeur à roues dentées, avec manchon de re-
froidissement, ou broyeur analytique, à ailettes et
- I’ISO 3726 pour le café soluble, ou à
manchon de refroidissement, ou tout broyeur sem-
blable approprié pour café vert en grains.
- la future Norme internationale correspondante
pour d’autres types de café et produits dérivés.
5.6 Tamis, en tissu métallique de 630 prn d’ouver-
ture de mailles.
8.2 Prise d’essai
...

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