ISO 14673-3:2004

Milk and milk products - Determination of nitrate and nitrite contents - Part 3: Method using cadmium reduction and flow injection analysis with in-line dialysis (Routine method)

ISO 14673-3|IDF 189-3:2004 specifies a routine method for the determination of the nitrate and nitrite contents of milk and milk products by cadmium reduction and flow injection analysis (FIA). The method is applicable to hard, semi-hard and soft cheeses of various ages, and processed cheese. The detection limits of the method are 0,5 mg of nitrate ions per kilogram and 1,0 mg of nitrite ions per kilogram, respectively. The method is also applicable to whey powder, milk powder and milk-based infant food.

Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites — Partie 3: Méthode par réduction au cadmium et d'analyse par injection de flux avec dialyse en ligne (Méthode de routine)

L'ISO 14673-3|FIL 189-3:2004 spécifie une méthode de routine pour la détermination des teneurs en nitrates et nitrites dans le fromage par réduction au cadmium et analyse par injection de flux. La méthode s'applique aux fromages à pâte dure, aux fromages à pâte semi-dure, aux fromages à pâte molle à longueur d'affinage variable ainsi qu'aux fromages fondus. Les limites de détection de la méthode sont de 0,5 mg d'ions nitrate par kilogramme et de 1,0 mg d'ions nitrite par kilogramme. Cette méthode s'est également avérée adaptée pour la poudre de petit-lait, le lait en poudre et les aliments à base de lait pour bébés.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 01-Feb-2004
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Start Date: 03-Jul-2025
• Completion Date: 30-Oct-2025

Relations

• Consolidates: ISO/IEC 13818-2:1996 - Information technology - Generic coding of moving pictures and associated audio information: Video
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Consolidated By: ISO 6145-6:2017 - Gas analysis - Preparation of calibration gas mixtures using dynamic methods - Part 6: Critical flow orifices
• Effective Date: 06-Jun-2022
• Revises: ISO 14673-3:2001/Cor 1:2002 - Milk and milk products - Determination of nitrate and nitrite contents - Part 3: Method using cadmium reduction and flow injection analysis with in-line dialysis (Routine method) - Technical Corrigendum 1
• Effective Date: 15-Apr-2008
• Revises: ISO 14673-3:2001 - Milk and milk products - Determination of nitrate and nitrite contents - Part 3: Method using cadmium reduction and flow injection analysis with in-line dialysis (Routine method)
• Effective Date: 15-Apr-2008

Overview

ISO 14673-3:2004 (IDF 189-3:2004) specifies a routine method for the determination of nitrate and nitrite in milk and milk products using cadmium reduction and flow injection analysis (FIA) with in-line dialysis. The standard covers sample preparation, reagents, instrumentation and calculation procedures applicable to hard, semi‑hard and soft cheeses, processed cheese, whey powder, milk powder and milk‑based infant food. Detection limits are specified as 0.5 mg NO3‑/kg (nitrate) and 1.0 mg NO2‑/kg (nitrite).

Key topics and technical requirements

• Principle: Extraction of a defatted aqueous sample, protein/fat removal by in‑line dialysis, reduction of nitrate to nitrite on a cadmium column, followed by color development (sulfanilamide + N‑1‑naphthyl ethylenediamine) and spectrophotometric detection at 540 nm with 620 nm reference.
• Reagents: Includes preparation of extraction/carrier buffer (ammonium chloride, pH 8.5), reagent solutions (sulfanilamide and N‑1‑naphthyl ethylenediamine), nitrate/nitrite stock and calibration solutions, and cadmium column regeneration solution.
• Apparatus: Flow injection analyser (FIA) with dialysis module, cadmium reduction column, homogenizer, centrifuge (defatting step), calibrated volumetric glassware and a spectrophotometric flow cell.
• Procedure elements: Sample homogenization, warm buffer extraction, centrifugation and cooling to separate fat, FIA analysis with specified flow rates, calibration using prepared standards, and calculation rules including correction of nitrate values when nitrite exceeds thresholds.
• Quality control: Checking cadmium column reducing capacity, column regeneration, and use of calibration/reference solutions are required. Precision and reporting requirements are defined in the standard.

Applications and users

ISO 14673-3:2004 is intended for:

• Dairy quality control laboratories performing routine monitoring of nitrate/nitrite in cheeses, processed cheese, milk powders, whey powder and infant foods.
• Regulatory and food safety authorities verifying compliance with nitrate/nitrite limits.
• Manufacturers of dairy and infant food products for raw material screening, process control and batch release.
• Food chemists and research labs studying contamination, shelf‑life or processing effects on nitrate/nitrite levels.

Keywords: ISO 14673-3:2004, nitrate and nitrite, milk and milk products, cadmium reduction, flow injection analysis, in-line dialysis, routine method, dairy testing, nitrate detection limit.

Related standards

• ISO 14673-1: Method using cadmium reduction and spectrometry
• ISO 14673-2: Method using segmented flow analysis (Routine method)

These complementary parts cover alternative analytical techniques for nitrate/nitrite determination in dairy matrices.

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 14673-3
IDF
189-3
Second edition
2004-02-01
Milk and milk products — Determination
of nitrate and nitrite contents —
Part 3:
Method using cadmium reduction and
flow injection analysis with in-line
dialysis (Routine method)
Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites —
Partie 3: Méthode par réduction au cadmium et d'analyse par injection
de flux avec dialyse en ligne (Méthode de routine)

Reference numbers
IDF 189-3:2004(E)
©
ISO and IDF 2004
IDF 189-3:2004(E)
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Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland
ii © ISO and IDF 2004 – All rights reserved

IDF 189-3:2004(E)
Contents Page
Foreword. iv
1 Scope. 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus. 3
7 Sampling . 5
8 Preparation of test sample. 5
8.1 Cheese. 5
9 Procedure. 6
9.1 Checking the reducing capacity of the cadmium column . 6
9.2 Regeneration of the cadmium column. 6
9.3 Test portion . 6
9.4 Extraction. 6
9.5 Determination of nitrite content . 7
9.6 Determination of nitrate content . 7
10 Calculation and expression of results . 7
10.1 Nitrite content. 7
10.2 Nitrate content. 8
11 Precision . 8
11.1 General. 8
11.2 Nitrite content. 8
11.3 Nitrate content. 9
12 Test report. 9
Bibliography . 10

IDF 189-3:2004(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 14673-3IDF 189-3 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC
International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 14673-3IDF 189-3:2001), of which it
constitutes a minor revision.
ISO 14673IDF 189 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products —
Determination of nitrate and nitrite contents:
— Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
— Part 2: Method using segmented flow analysis (Routine method)
— Part 3: Method using cadmium reduction and flow injection analysis with in-line dialysis (Routine method)

iv © ISO and IDF 2004 – All rights reserved

IDF 189-3:2004(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
the National Committees casting a vote.
ISO 14673-3IDF 189-3 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC
International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Action Team, Minerals and minor compounds, of the
Standing Committee on Minor components characterization of physical properties, under the aegis of its
project leader, Mr G. Bråthen (NO).
This second edition, together with ISO 14673-1IDF 189-1 and ISO 14673-2IDF 189-2, cancels and replaces
IDF 84A:1984, IDF 95A:1982, IDF 96A:1987, IDF 97A:1985 and IDF 120:1984, which have been technically
revised.
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 189-3:2004(E)
Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite
contents —
Part 3:
Method using cadmium reduction and flow injection analysis
with in-line dialysis (Routine method)
WARNING — The use of this International Standard may involve hazardous materials, operations and
equipment. This standard does not purport to address all the safety problems associated with its use.
It is the responsibility of the user of this standard to establish safety and health practices and
determine the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of ISO 14673IDF 189 specifies a routine method for the determination of the nitrate and nitrite
contents of milk and milk products by cadmium reduction and flow injection analysis (FIA). The method is
applicable to hard, semi-hard and soft cheeses of various ages, and processed cheese. The detection limits of
the method are 0,5 mg of nitrate ions per kilogram and 1,0 mg of nitrite ions per kilogram.
The method is also applicable to whey powder, milk powder and milk-based infant food.
NOTE 1 The method closely resembles the FIA method described in reference [2] for the determination of nitrate and
nitrite in milk and fluid dairy products. Adaptations were made to allow for the analysis of cheese and to obtain sufficient
sensitivity for the determination of low levels of nitrite in cheese and milk-based infant foods.
NOTE 2 For determination of nitrite and nitrate following cadmium reduction, use is made of the same colour reaction
as described in ISO 14673-1IDF 189-1.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks
ISO 14673-1IDF 189-1, Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite contents — Part 1:
Method using cadmium reduction and spectrometry
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
nitrate content
mass fraction of nitrate determined by the procedure specified in this part of ISO 14673IDF 189
–
NOTE The nitrate content is expressed as the mass in milligrams of nitrate ions (NO ) per kilogram of product.
IDF 189-3:2004(E)
3.2
nitrite content
mass fraction of nitrite determined by the procedure specified in this part of ISO 14673IDF 189
–
NOTE The nitrite content is expressed as the mass in milligrams of nitrite ions (NO ) per kilogram of product.
4 Principle
4.1 A test portion is suspended in a warm extraction buffer solution. Fat is separated by centrifuging and
rapid cooling. Analyses are made of small portions of the de-fatted solution by flow injection analysis (FIA). In-
line dialysis is used to remove protein and remaining fat. The nitrate ions are reduced to nitrite ions by
cadmium. The nitrite ions are reacted with sulfanilamide and N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride to
give a red-coloured azo dye. The colour is measured in a flow cell at maximum absorption of the dye at
540 nm with reference to the absorption measured at 620 nm.
4.2 The nitrite and nitrate contents of the test sample are calculated with reference to the measured
absorbances for a series of standard solutions of nitrite and nitrate, respectively. If the nitrite content exceeds
0,5 mg/kg, or exceeds 10 % of the nitrate content, correction of the nitrate content is made by subtracting the
nitrite content from the obtained nitrate results.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade unless otherwise specified.
5.1 Water, distilled or deionized, or water of equivalent purity, free from nitrate and nitrite ions.
1)
5.2 Cadmium reduction column, for example Aquatec-Tecator .
5.3 Extraction buffer solution or carrier solution (C2).
Dissolve 26,6 g of ammonium chloride (NH Cl) in 800 ml water in a 1 000 ml conical flask. By adding
concentrated ammonia, adjust the pH to 8,5. Dilute to 1 000 ml with water and mix.
5.4 Hydrochloric acid (HCl), (ρ = 1,19 g/ml).
5.5 Reagent solution (R1).
Dissolve 5,0 g sulfanilamide (NH C H SO NH ) in a mixture of 300 ml water and 26 ml of hydrochloric acid
2 6 4 2 2
(5.4) in a 500 ml volumetric flask (6.3). Dilute to the mark with water and mix.
5.6 Reagent solution (R2).
Dissolve 0,5 g of N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride (C H NHCH CH NH ⋅2HCl) in water in a
10 7 2 2 2
500 ml volumetric flask (6.3). Dilute to the mark with water and mix.
The solution may be stored for up to 1 week in a well-stoppered brown bottle in a refrigerator.
5.7 Regeneration solution, c(HCl) = 0,1 mol/l.
Dilute 80 ml of hydrochloric acid (5.4) with water to 1 litre and mix.

1) Aquatec-Tecator is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the
convenience of users of this part of ISO 14673IDF 189 and does not constitute an endorsement by ISO or IDF of this
product.
2 © ISO and IDF 2004 – All rights reserved

IDF 189-3:2004(E)
–
5.8 Sodium nitrate stock solution, c(NO ) = 1 000 mg/l.
Before use, dry sodium nitrate (NaNO ) to constant mass at 110 °C to 120 °C. Dissolve 137,1 mg of the dry
NaNO in water in a 100 ml volumetric flask (6.3). Dilute to the mark with water and mix.
5.9 Sodium nitrate calibration solutions.
Prepare the sodium nitrate calibration solutions on the day of use. Pipette amo
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 14673-3
FIL
189-3
Deuxième édition
2004-02-01
Lait et produits laitiers — Détermination
des teneurs en nitrates et en nitrites —
Partie 3:
Méthode par réduction au cadmium et
d'analyse par injection de flux avec
dialyse en ligne (Méthode de routine)
Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite contents —
Part 3: Method using cadmium reduction and flow injection analysis with
in-line dialysis (Routine method)

Numéros de référence
FIL 189-3:2004(F)
©
ISO et FIL 2004
FIL 189-3:2004(F)
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quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
soit de l'ISO soit de la FIL à l'adresse respective ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Bruxelles
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Publié en Suisse
ii © ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés

FIL 189-3:2004(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage. 4
7 Échantillonnage . 6
8 Préparation de l'échantillon pour essai. 6
8.1 Fromage . 6
9 Mode opératoire . 6
9.1 Contrôle du pouvoir réducteur de la colonne de cadmium. 6
9.2 Régénération de la colonne de cadmium.6
9.3 Prise d'essai . 7
9.4 Extraction. 7
9.5 Détermination des nitrites. 7
9.6 Détermination des nitrates. 7
10 Calcul et expression des résultats. 8
10.1 Teneur en nitrites . 8
10.2 Teneur en nitrates . 8
11 Fidélité. 9
11.1 Généralités. 9
11.2 Teneur en nitrites . 9
11.3 Teneur en nitrates . 9
12 Rapport d'essai . 9
Bibliographie . 11

© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés iii

FIL 189-3:2004(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 14673-3FIL 189-3 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration
avec l'AOAC International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL, et séparément par l'AOAC
International.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 14673-3FIL 189-3:2001), dont elle
constitue une révision mineure.
L'ISO 14673FIL 189 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits
laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites:
— Partie 1: Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
— Partie 2: Méthode d'analyse par flux continus segmentés (Méthode de routine)
— Partie 3: Méthode par réduction au cadmium et d'analyse par injection de flux avec dialyse en ligne
(Méthode de routine)
iv © ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés

FIL 189-3:2004(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO et avec
l'AOAC International pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et
les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux votants.
L'ISO 14673-3FIL 189-3 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration
avec l'AOAC International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL, et séparément par l'AOAC
International.
L'ensemble des travaux a été confié à l'Équipe d'Action mixte ISO/FIL/AOAC, Composants azotés dans le lait
et les produits laitiers, du Comité permanent chargé des Composants mineurs du lait et de la caractérisation
des propriétés physiques, sous la conduite de son chef de projet, Monsieur G. Bråthen (NO).
Cette deuxième édition, ainsi que l'ISO 14673-1FIL 189-1 et l'ISO 14673-2FIL 189-2, annule et remplace la
FIL 84A:1984, la FIL 95A:1982, la FIL 96A:1987, la FIL 97A:1985 et la FIL 120:1984, dont elle constitue une
révision technique.
© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés v

NORME INTERNATIONALE
FIL 189-3:2004(F)
Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates
et en nitrites —
Partie 3:
Méthode par réduction au cadmium et d'analyse par injection
de flux avec dialyse en ligne (Méthode de routine)
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer l'intervention de
produits, d'opérations et d'équipements à caractère dangereux. La présente Norme internationale ne
prétend pas aborder tous les problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il
incombe à l'utilisateur d'établir des pratiques appropriées en matière d'hygiène et de sécurité, et de
s'assurer du respect de la réglementation nationale en vigueur.
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 14673FIL 189 spécifie une méthode de routine pour la détermination des teneurs
en nitrates et nitrites dans le fromage par réduction au cadmium et analyse par injection de flux. La méthode
s'applique aux fromages à pâte dure, aux fromages à pâte semi-dure, aux fromages à pâte molle à longueur
d'affinage variable ainsi qu'aux fromages fondus. Les limites de détection de la méthode sont de 0,5 mg d'ions
nitrate par kilogramme et de 1,0 mg d'ions nitrite par kilogramme.
Cette méthode s'est également avérée adaptée pour la poudre de petit-lait, le lait en poudre et les aliments à
base de lait pour bébés.
NOTE 1 Cette méthode est très proche de la méthode FIA décrite dans la référence [2] pour la détermination du nitrate
et du nitrite dans le lait et les produits laitiers liquides. Certaines adaptations ont été faites afin de permettre l'analyse du
fromage et de parvenir à un niveau de sensibilité suffisant pour déterminer les niveaux très faibles de nitrite dans le
fromage et les aliments à base de lait pour bébés.
NOTE 2 Pour la détermination des nitrates et des nitrites après réduction au cadmium, la même réaction de coloration
est utilisée que dans l'ISO 14673-1FIL 189-1.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait
ISO 14673-1FIL 189-1, Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites —
Partie 1: Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés 1

FIL 189-3:2004(F)
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en nitrates
fraction massique des substances déterminée par le mode opératoire spécifié dans la présente partie de
l'ISO 14673FIL 189
–
NOTE La teneur en nitrates est exprimée sous forme de masse, en milligrammes d'ions nitrate (NO ) par
kilogramme de produit.
3.2
teneur en nitrites
fraction massique des substances déterminée par le mode opératoire spécifié dans la présente partie de
l'ISO 14673FIL 189
–
NOTE La teneur en nitrites est exprimée sous forme de masse, en milligrammes d'ions nitrite (NO ) par kilogramme
de produit.
4 Principe
4.1 Une prise d'essai est suspendue dans une solution tampon d'extraction chaude. La matière grasse est
séparée par centrifugation et refroidissement rapide. Des analyses de petites portions de la solution
dégraissée sont faites par analyse par injection (FIA). On utilise la dialyse en ligne pour éliminer les protéines
et la matière grasse résiduelle. Les ions nitrate sont réduits en ions nitrite par le cadmium. Réaction des ions
nitrite avec du sulfanilamide et du dihydrochlorure de N-(naphtyl-1)-éthylènediamine créant un colorant
azoïque de couleur rouge. La coloration est mesurée dans une cellule au niveau d'absorption maximal du
colorant à 540 nm par rapport à l'absorption mesurée à 620 nm.
4.2 Les teneurs en nitrates et en nitrites de l'échantillon sont calculées par rapport aux absorbances
mesurées pour une série de solutions étalons de nitrite et de nitrate. Si la teneur en nitrites est supérieure à
0,5 mg par kilogramme, ou représente plus de 10 % de la teneur en nitrates, la correction de la teneur en
nitrates est calculée par soustraction de la teneur en nitrites des résultats obtenus pour le nitrate.
5 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1 Eau, distillée ou déionisée, ou eau de pureté équivalente, exempte d'ions nitrate et nitrite.
1)
5.2 Colonne de réduction au cadmium, par exemple Aquatec-Tecator .
5.3 Solution tampon d'extraction ou solution vecteur (C2).
Dissoudre 26,6 g de chlorure d'ammonium (NH Cl) dans 800 ml d'eau dans une fiole conique de 1 000 ml.
Ajuster le pH à 8,5 en ajoutant de l'hydroxyde d'ammonium concentré. Compléter à 1 000 ml avec de l'eau et
mélanger.
5.4 Acide chlorhydrique (HCl), (ρ = 1,19 g/ml).
1) Aquatec-Tecator est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à
l’intention des utilisateurs de la présente partie de l'ISO 14673FIL 189 et ne signifie nullement que l’ISO ou la FIL
approuve ou recommande l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
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FIL 189-3:2004(F)
5.5 Solution de réactif (R1).
Dissoudre 0,5 g de sulfanilamide (NH C H SO NH ) dans un mélange composé de 300 ml d'eau et de 26 ml
2 6 4 2 2
de HCl (5.4) dans une fiole jaugée de 500 ml (6.3). Compléter à 500 ml avec de l'eau et mélanger.
5.6 Solution de réactif (R2).
Dissoudre 0,5 g de dihydrochlorure de N-(naphtyl-1)-éthylènediamine (C H NHCH CH NH ,2HCl) dans de
10 7 2 2 2
l'eau dans une fiole jaugée de 500 ml (6.3). Compléter à 500 ml avec de l'eau et mélanger.
La solution peut être conservée au maximum pendant une semaine au réfrigérateur, dans un récipient en
verre brun bien bouché.
5.7 Solution de régénération, c(HCl) = 0,1 mol/l.
Diluer 80 ml de HCl (5.4) à 1 l avec de l'eau et mélanger.
–
5.8 Solution mère de nitrate de sodium, c(NO ) = 1 000 mg/l.
Avant utilisation, sécher le nitrate de sodium (NaNO ) entre 110 °C et 120 °C jusqu'à masse constante.
Dissoudre 137,1 mg de NaNO séché dans de l'eau dans une fiole jaugée de 100 ml (6.3). Compléter la
solution à 100 ml avec de l'eau et mélanger.
5.9 Solutions pour étalonnage de nitrate de sodium.
Le jour de l'utilisation, prélever à la pipette respectivement 25 µl, 50 µl, 100 µl, 150 µl et 250 µl de solution
mère de nitrate de sodium (5.8) et les transvaser dans des fioles jaugées de 50 ml (6.3). Compléter à 50 ml
avec de la solution tampon d'extraction (5.3) pour prépar
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