ISO 8784-1:2014
(Main)Pulp, paper and board — Microbiological examination — Part 1: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on disintegration
Pulp, paper and board — Microbiological examination — Part 1: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on disintegration
ISO 8784-1:2014 specifies a method for determining the total number of colony-forming units of bacteria and bacterial spores in dry market pulp, paper, and paperboard after disintegration. The enumeration relates to specific media.
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbienne — Partie 1: Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé sur la désintégration
L'ISO 8784-1:2014 spécifie une méthode de détermination du nombre total d'unités formant colonie de bactéries et de spores bactériennes, dans la pâte commerciale sèche, le papier et le carton, après désintégration. Le dénombrement se rapporte à un milieu spécifique.
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Standards Content (Sample)
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 8784-1
Третье издание
2014-12-01
Бумага, картон и целлюлоза.
Микробиологическое исследование.
Часть 1.
Подсчет бактерий и бактериальных
спор на основе дезинтеграции
Pulp, paper and board – Microbiological examination –
Part 1:Enumeration of bacteria and bacterial spores basеd on
disintegration
Ссылочный номер
ISO 8784-1:2014(R)
©
ISO 2014
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ISO 8784-1:2014(R)
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO 2014
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по
адресу, приведенному ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
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Опубликовано в Швейцарии
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ISO 8784-1:2014(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .1
4 Принцип .2
5 Питательные среды и разбавители .2
5.1 Общие положения .2
5.2 Вода .2
5.3 Питательные среды для подсчета общего числа бактерий и бактериальных спор .2
5.4 Разбавители .3
6 Аппаратура и оборудование .3
6.1 Общие положения .3
6.2 Перечень оборудования .3
7 Отбор проб .4
8 Приготовление материала для испытания .5
8.1 Общие положения .5
8.2 Определение содержания сухого вещества .5
8.3 Взвешивание .5
8.4 Дезинтеграция .5
9 Определение общего числа бактерий и спор .6
9.1 Общие положения .6
9.2 Посев в чашки для подсчета общего количества бактерий .6
9.3 Посев для подсчета спор .7
9.4 Инкубация .7
10 Определение количества колоний .7
11 Вычисление и регистрация .8
11.1 Вычисление .8
11.2 Интерпретация .9
11.3 Отчет .9
12 Протокол испытания .9
Приложение А (информативное) Жидкость для разбавления . 11
Приложение В (информативное) Прецизионность . 12
Библиография . 16
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ISO 8784-1:2014(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации в области электротехники, ISO
работает в тесном сотрудничестве с Международной электротехнической комиссией (IEC).
Процедуры, используемые для разработки данного документа, и процедуры, предусмотренные для его
дальнейшего ведения, описаны в Директивах ISO/IEC Directives, Part 1. В частности, следует отметить
различные критерии утверждения, требуемые для различных типов документов ISO. Проект данного
документа был разработан в соответствии с редакционными правилами Директив ISO/IEC Directives,
Part 2. www.iso.org/directives .
Необходимо обратить внимание на возможность того, что ряд элементов данного документа могут
быть предметом патентных прав. Международная организация ISO не должна нести ответственность
за идентификацию таких прав, частично или полностью. Сведения о патентных правах,
идентифицированных при разработке документа, будут указаны во Введении и/или в перечне
полученных ISO объявлений о патентном праве. www.iso.org/patents .
Любое торговое название, использованное в данном документе, является информацией,
предоставляемой для удобства пользователей, а не свидетельством в пользу того или иного товара
или той или иной компании.
Для пояснения значений конкретных терминов и выражений ISO, относящихся к оценке соответствия, а
также информация о соблюдении Международной организацией ISO принципов ВТО по техническим
барьерам в торговле (TБT), см. следующий унифицированный локатор ресурса (URL): Foreword -
Supplementary information.
Технический комитет, несущий ответственность за данный документ, ISO/TC 6, Бумага, картон и
целлюлоза, Подкомитет SC 2, Методы испытаний и требования к качеству бумаги и картона.
Настоящее третье издание отменяет и заменяет второе издание (ISO 8784-1:2005) после технического
пересмотра.
Второе издание было применимо, наряду с бактериями, к дрожжевым и плесневым грибкам. В
отношении предыдущего издания были внесены следующие основные изменения:
— настоящее третье издание применимо только к бактериям и бактериальным спорам и больше
неприменимо к к дрожжевым и плесневым грибкам;
— температура инкубации изменилась с (37 С 1 С) до (32 С 2 С) (9.4);
— необходимо проводить 2 параллельных опыта (Раздел 8 и Раздел 9);
— результат можно вносить в протокол в форме «как получено» в дополнение к сообщению на
основе сухой массы (8.2, 11.1 и Раздел 12).
ISO 8784 состоит из следующих частей под общим названием Целлюлоза, бумага и картон.
Микробиологическое исследование:
— Часть 1. Подсчет бактерий и бактериальных спор на основе дезинтеграции
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ISO 8784-1:2014(R)
Введение
Настоящая часть ISO 8784, которая распространяется на микробиологическое исследование сухой
[1]
товарной целлюлозы, бумаги и картона, в общем, основана на ISO 4883 , хотя условия могут
оказаться неидентичными, В то же время, там где необходимо, в ней дана конкретная амплификация.
Данная часть предназначена для оценки колониеобразующих единиц (КОЕ=CFU) аэробных бактерий и
бактериальных спор.
Поскольку необходимо точно соблюдать правила асептики, воспроизводимые результаты хорошего
качества могут быть получены только квалифицированными микробиологами.
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МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ
ISO 8784-1:2014(R)
Бумага картон и целлюлоза. Микробиологическое
исследование.
Часть 1.
Подсчет бактерий и бактериальных спор на основе
дезинтеграции
1 Область применения
В настоящей части международного стандарта ISO 8784 описан метод определения общего числа
колониеобразующих единиц бактерий и бактериальных спор в сухой товарной целлюлозе, бумаге и
картоне после дезинтеграции. Принцип определения связан с конкретными средами.
2 Нормативные ссылки
Следующие нормативные документы являются обязательными для применения с настоящим
международным стандартом. Для жестких ссылок применяются только указанное по тексту издание.
Для плавающих ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного
документа (включая любые изменения).
ISO 186, Бумага и картон. Отбор проб для определения среднего качества
ISO 7213:1981, Целлюлоза. Отбор проб для испытаний
ISO 638:2008, Бумага, картон и целлюлоза. Определение содержания сухого вещества. Метод
сушки в печи
3 Термины и определения
Исходя из назначения данного документа, применимы следующие термины и определения:
3.1
бактерии
bacteria
микроскопические, одноклеточные организмы, обладающие прокариотическим типом структуры клетки,
которые размножаются делением и способны расти в условиях испытания, установленных в данной
части ISO 8784
3.2
бактериальные споры
bacterial spores
дремлющие структуры высокой сопротивляемости
ПРИМЕЧАНИЕ Эндоспоры определенных видов бактерий.
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ISO 8784-1:2014(R)
3.3
общее микробное(бактериальное) число
total bacterial count
количество колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий и бактериальных спор, образованных после
инкубирования в стандартной питательной среде в условиях испытания, установленных в данной
части ISO 8784
3.4
число спор
spore count
количество колониеобразующих единиц (КОЕ) бактериальных спор, образованных после
инкубирования в стандартной питательной среде в условиях испытания, установленных в данной
части ISO 8784
4 Принцип
Чашечный метод включает подсчет колоний на стандартной питательной среде. Волокнистая
суспензия, приготовленная из пробы бумаги, картона или целлюлозы разливают по чашкам на агар.
Выполняют два параллельных опыта. Для подсчета бактериальных спор волокнистую суспензию
перед разливом по чашкам нагревают в течение 10 мин при температуре 80 °C. Чашки инкубируют при
температуре 32°C в течение 48 ч. Определяют общее число бактерий или бактериальных спор,
подсчитав число колоний, образованных на агаре.
Среднее значение от двух параллельных опытов подсчитывают и результат выражают как число КОЕ
на грамм пробы.
5 Питательные среды и разбавители
5.1 Общие положения
Все субстраты и разбавители должны быть соответствующим образом стерилизованы. При
приготовлении питательной среды следует убедиться, что ингредиенты полностью растворены
перемешиванием при нагревании, прежде чем разливать в подходящие емкости для стерилизации. См.
[2]
ISO 11133 по обеспечению качества и руководства по приготовлению и производству питательных
сред.
5.2 Вода
[2]
Если в составе упомянута вода, используют дистиллированную или очищенную воду, см. ISO 11133 .
5.3 Питательные среды для подсчета общего числа бактерий и бактериальных спор
Питательные среды должны быть приготовлены из имеющихся в продаже обезвоженных питательных
сред (концентратов) в соответствии с инструкциями изготовителя. Готовую к использованию среду
можно использовать, если ее состав сопоставим с составом, приведенным в данной части ISO 8784.
[2]
Чтобы определить характеристики среды, см. ISO 11133 .
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ISO 8784-1:2014(R)
Разливают по чашкам агар для бактериологического подсчета (PСA). Химический состав на литр:
Триптон 5,0 г
Дрожжевой экстракт 2,5 г
Декстроза 1,0 г
Агар 15,0 г
Вода 1000 мл
рН готовой среды
7,0 0,2
Если РСА нет в наличии, можно использовать агар TGE (триптон-глюкозный экстракт) (см. А.3).
Применение TGE в качестве альтернативной питательной среды допускается, если это дает
сопоставимые результаты, такие как стандартная питательная среда. Использованную питательную
среду необходимо указать в протоколе испытания (см. Раздел 12).
5.4 Разбавители
Раствор Рингера (Ringer’s) (см. А.1) является предпочтительным, но можно использовать другие
изотонические растворы. В продаже имеется реактив Рингера в таблетках.
Чтобы облегчить выделение клеток из волокон, рекомендуется добавить 20 мкл Tween 20 (см. А.2) на
литр раствора Рингера перед стерилизацией в автоклаве.
Использованный разбавитель, и Tween 80, если использовался, необходимо указать в протоколе
испытания (см. Раздел 12)
6 Аппаратура и оборудование
6.1 Общие положения
Все лабораторное оборудование и части, соприкасающиеся непосредственно с пробой и
разбавителем или питательной средой должны быть стерилизованы.
[1]
ПРИМЕЧАНИЕ Рекомендации по стандартному микробиологическому оборудованию см. в ISO 7218 .
6.2 Перечень оборудования
6.2.1 Обычное микробиологическое лабораторное оборудование, а также следующее:
6.2.2 Подходящий оберточный материал, например, алюминиевая фольга (инертная, без
покрытия), готовые к употреблению имеющиеся в продаже конверты разного размера или
самозакрывающиеся пластиковые пакеты.
6.2.3 Дезинтегратор, высокоскоростной электрический блендер с металлической (предпочтительно
из нержавеющей стали) или стеклянной пробкой, который можно стерилизовать.
ПРИМЕЧАНИЕ Можно пользоваться другими гомогенизирующими системами равноценной эффективности.
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ISO 8784-1:2014(R)
6.2.4 Инкубатор, способный поддерживать температуру 32 °С ± 2 °С.
6.2.5 Чашки Петри, имеющие диаметр 90 мм (стандартные) или от 140 мм до 150 мм
(альтернативные).
6.2.6 Пипетки, подходящей вместимости и с широким входным отверстием.
Ширина входного отверстия должна быть достаточной, чтобы легко можно было через кончик пипетки
втянуть 1 %-ную волокнистую суспензию.
ПРИМЕЧАНИЕ Подходящая вместимость составляет 10 мл или 50 мл.
6.2.7 Водяная баня, обеспечивающая поддержание температуры на уровне 80 °С ± 2 °С.
6.2.8 Приспособление для подсчета колоний или увеличительное устройство, с увеличением от
1,5-кратного до 2,5 –кратного.
ПРИМЕЧАНИЕ Применение дополнительной линзы может потребоваться для увеличения вплоть до 10-
кратного для облегчения подсчета точечных бактериальных колониеобразующих единиц, а также исключающие
подсчет других частиц, кроме колоний бактерий (см. Раздел 10).
6.2.9 Весы, точностью до 0,01 г.
6.2.10 Стерилизатор, автоклав, обеспечивающий стерилизацию при температуре 121 °С.
7 Отбор проб
Убеждаются, что методика отбора проб осуществляется с соблюдением правил асептики.
Если проба должна быть репрезентативной для партии бумаги или картона, отбор должен проводиться
в соответствии с ISO 186:2002. От каждой опробуемой единицы бумаги или картона отрезают
несколько верхних слоев и выбрасывают, чтобы исключить загрязнение поверхности. Пользуются
стерильным ножом для прорезания нескольких слоев пробы бумаги или картона и получают стопку
листов. Верхний лист отбрасывают.
Если проба должна быть репрезентативной для партии целлюлозы, отбор должно проводиться в
соответствии с ISO 7213:1981. Из каждой опробуемой единицы сухой товарной целлюлозы, бракуют
несколько верхних слоев каждой упаковки для устранения поверхностного загрязнения.
Во всех других случаях отбирают достаточное количество единиц, так чтобы испытуемый материал
оказался репрезентативным для бумаги или картона или для сухой товарной целлюлозы, подлежащей
испытанию. При реализации всех методик отбора и исследования убеждаются, что отобранный
испытуемый материал является представительным для полученной пробы.
В идеальном случае выборка должна состоять, по крайней мере, из четырех листов, и каждый из
листов из сухой товарной целлюлозы, бумаги или картона должен иметь минимальный размер 200 мм
250 мм (по крайней мере, 2 листа для испытания и 2 защитных листа).
ПРИМЕЧАНИЕ Для картона или более толстого материала иногда достаточно 1 листа на каждое
параллельное определение. Для более тонкой бумаги можно использовать более 2 листов на каждое
параллельное определение.
После отбора неэкспонированный испытуемый материал заворачивают в соответствующий
оберточный материал (6.2.2).
4 © ISO 2014 – Все права сохраняются
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ISO 8784-1:2014(R)
8 Приготовление материала для испытания
8.1 Общие положения
Предпочтительно данную методику осуществлять с соблюдением правил асептики. Для посева на
чашки рекомендуется пользоваться вытяжным шкафом с ламинарным потоком. Разворачивают
испытуемый материал в асептических условиях и удаляют защитные листы сверху и снизу стопки
листов образца, не прикасаясь к листам, предназначенным для испытания, расположенным в
середине стопки.
Процедура 8.3 и 8.4 должна быть повторена для 2 параллельных определений.
8.2 Определение содержания сухого вещества
Если полученный результат должен быть приведен на основе массы сухого вещества, определяют
содержание сухого вещества в испытуемом материале, Х, в соответствии с ISO 638:2008.
Если полученный результат должен быть приведен на основании массы «в сос
...
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8784-1
Third edition
2014-12-01
Pulp, paper and board —
Microbiological examination —
Part 1:
Enumeration of bacteria and bacterial
spores based on disintegration
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbienne —
Partie 1: Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé
sur la désintégration
Reference number
ISO 8784-1:2014(E)
©
ISO 2014
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ISO 8784-1:2014(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2014
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
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Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2014 – All rights reserved
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ISO 8784-1:2014(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Culture media and diluents . 2
5.1 General . 2
5.2 Water . 2
5.3 Culture media for total bacteria count and spore count . 2
5.4 Diluents . 2
6 Apparatus and equipment . 3
6.1 General . 3
6.2 List of equipment . 3
7 Sampling . 3
8 Preparation of the test material . 4
8.1 General . 4
8.2 Determination of dry-matter content . 4
8.3 Weighing . 4
8.4 Disintegration . 4
9 Determination of the total bacterial count and spore count . 5
9.1 General . 5
9.2 Plating for total bacterial count . 5
9.3 Plating for spore count . 6
9.4 Incubation . 6
10 Enumeration of the colonies . 6
11 Calculation and report . 6
11.1 Calculation . 6
11.2 Interpretation . 7
11.3 Report . 8
12 Test report . 8
Annex A (informative) Dilution fluid . 9
Annex B (informative) Precision .10
Bibliography .14
© ISO 2014 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 8784-1:2014(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any
patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on
the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 6, Paper, board and pulps, Subcommittee SC 2,
Test methods and quality specifications for paper and board.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 8784-1:2005), which has been
technically revised.
The second edition was applicable to yeast and mould, as well as bacteria. The following main changes
have been made with respect to the previous edition:
— This third edition is only applicable to bacteria and bacterial spores, and no longer applicable to
yeast and mould;
— incubation temperature changed from (37 °C ± 1 °C) to (32 °C ± 2 °C) (9.4);
— 2 parallel determinations are to be made (Clause 8 and Clause 9);
— the result can be reported “as received” in addition to reporting on a dry-mass basis (8.2, 11.1,
and Clause 12).
ISO 8784 consists of the following parts, under the general title Pulp, paper and board — Microbiological
examination:
— Part 1: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on disintegration
iv © ISO 2014 – All rights reserved
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ISO 8784-1:2014(E)
Introduction
This part of ISO 8784, which deals with the microbiological examination of dry market pulp, paper,
[1]
and paperboard, is broadly based on ISO 4833 although the conditions are not identical. However,
it provides specific amplification where necessary. It is intended for the estimation of colony-forming
units, CFU, aerobic bacteria, and bacterial spores.
Because of the exacting techniques required in aseptic procedures, reproducible good quality results
can only be ensured by skilled microbiological technicians.
© ISO 2014 – All rights reserved v
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 8784-1:2014(E)
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 1:
Enumeration of bacteria and bacterial spores based on
disintegration
1 Scope
This part of ISO 8784 specifies a method for determining the total number of colony-forming units
of bacteria and bacterial spores in dry market pulp, paper, and paperboard after disintegration. The
enumeration relates to specific media.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 186:2002, Paper and board — Sampling to determine average quality
ISO 7213:1981, Pulps — Sampling for testing
ISO 638:2008, Paper, board and pulps — Determination of dry matter content — Oven-drying method
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
bacteria
microscopic, single-celled organisms that possess a prokaryotic type of cell structure, which reproduce
by fission and are able to grow under the test conditions specified in this part of ISO 8784
3.2
bacterial spores
highly resistant, dormant structures
EXAMPLE Endospores from certain genera of bacteria.
3.3
total bacterial count
number of colony-forming units (CFU) of bacteria and bacterial spores formed after incubation in a
standard culture medium, under the test conditions specified in this part of ISO 8784
3.4
spore count
number of colony-forming units (CFU) of bacterial spores formed after incubation in a standard culture
medium, under the test conditions specified in this part of ISO 8784
© ISO 2014 – All rights reserved 1
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ISO 8784-1:2014(E)
4 Principle
This poured plate method involves enumeration of colonies in a standard culture medium. A fibre
suspension, prepared from paper, paperboard, or pulp samples, is plated in agar. Two parallel
determinations are made. For enumeration of bacterial spores, the fibre suspension is heated for 10 min
at 80 °C prior to plating. The plates are incubated at 32 °C for 48 h. The total numbers of bacteria or
bacterial spores are enumerated by counting the colonies formed in the agar.
The mean value of 2 parallel determinations is calculated and the results are expressed as the number
of CFU per gram of sample.
5 Culture media and diluents
5.1 General
All substrates and diluents shall be appropriately sterilized. When preparing the culture medium, make
sure that the ingredients are completely dissolved by mixing while heating prior to dispensing into
[2]
suitable containers for sterilization. See ISO 11133 for quality assurance and guidelines on preparation
and production of culture media.
5.2 Water
[2]
When water is mentioned in a formula, use distilled water or purified water, see ISO 11133 .
5.3 Culture media for total bacteria count and spore count
Culture medium shall be prepared as follows, or from commercially available dehydrated culture media
according to the manufacturer’s instructions. Ready-to-use medium may be used when its composition
is comparable to that given in this part of ISO 8784. To test the performance of the medium, see
[2]
ISO 11133 .
Plate count agar (PCA) composition per litre:
Tryptone 5,0 g
Yeast Extract 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Agar 15,0 g
Water 1 000 ml
Final pH 7,0 ± 0,2
If PCA is not available, Tryptone glucose extract (TGE) agar may be used (see A.3). The use of TGE as an
alternative culture medium is acceptable if it gives comparable results as the standard culture medium.
The culture medium used shall be stated in the test report (see Clause 12).
5.4 Diluents
Ringer’s solution (see A.1) is preferred, although other isotonic solutions may be used. Ringer’s tablets
are commercially available.
To facilitate the release of cells from the fibres, it is recommended to add 20 µl of Tween 80 (see A.2) per
litre to the Ringer’s solution prior to sterilization by autoclaving.
The diluent used and if Tween 80 has been added, shall be stated in the test report (see Clause 12).
2 © ISO 2014 – All rights reserved
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ISO 8784-1:2014(E)
6 Apparatus and equipment
6.1 General
All laboratory equipment and parts of the equipment in direct contact with the sample and the diluent
or the culture medium shall be sterilized.
[4]
NOTE For advice on standard microbiological equipment, see ISO 7218 .
6.2 List of equipment
6.2.1 Use ordinary microbiological laboratory equipment, and the following.
6.2.2 Suitable wrapping material, e.g. aluminium foil (non-coated and inert), ready-to-use envelopes
of different sizes or self-closing plastic bags, all of which are commercially available.
6.2.3 Disintegrator, high speed electrical blender with metal (preferably stainless steel) or glass cup
that can be sterilized.
NOTE Other homogenizing system with equivalent efficiency may be used.
6.2.4 Incubator, capable of maintaining a constant temperature of 32 °C ± 2 °C.
6.2.5 Petri dishes, having a diameter of 90 mm (standard) or 140 mm to 150 mm (alternative).
6.2.6 Pipettes, of wide-mouth type suitable volume.
The width of the mouth must be large enough so that a 1 % fibre suspension can easily be drawn into
the pipette tip.
NOTE A suitable volume is 10 ml or 50 ml.
6.2.7 Water bath, capable of maintaining a temperature of 80 °C ± 2 °C.
6.2.8 Colony-counting equipment or magnifying device, with a magnification between 1,5 × and
2,5 × shall be used.
NOTE The use of an additional lens might be necessary to increase the magnification, up to 10 ×, to facilitate
the counting of pin-point bacterial colony-forming units and also to ensure that no other particles except bacterial
colonies are counted (see Clause 10).
6.2.9 Balance, with an accuracy of 0,01 g.
6.2.10 Sterilizing unit, an autoclave capable of sterilization at 121 °C.
7 Sampling
Make sure that the sampling procedure is performed using aseptic techniques.
If the sample is to represent a lot of paper or paperboard, the sampling shall be in accordance with
ISO 186:2002. From each unit of paper or paperboard to be sampled, cut several top layers and discard
them to eliminate surface contamination. Use a sterile knife to cut through several layers of the paper or
board sample, producing a stack of sheets. Discard the top sheet.
© ISO 2014 – All rights reserved 3
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ISO 8784-1:2014(E)
If the sample is to represent a lot of pulp, the sampling shall be in accordance with ISO 7213:1981. From
each unit of dry market pulp to be sampled, discard several top sheets from each bale to eliminate
surface contamination.
In other cases, sample a sufficient number of units so that the test material is representative of the
paper, the paperboard, or the dry market pulp to be tested. In all sampling and examination procedures,
make sure that the test material taken is representative of the sample received.
Ideally, a sample should contain at least four sheets, each of them having a minimum size of 200 mm × 250 mm
of dry market pulp, paper, or paperboard (at least 2 sheets for testing and 2 protective sheets).
NOTE For paperboard or thicker material, it might
...
DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 8784-1
ISO/TC 6/SC 2 Secretariat: SIS
Voting begins on Voting terminates on
2011-11-02 2012-04-02
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION МЕЖДУНАРОДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 1:
Enumeration of bacteria and bacterial spores based on
disintegration
Pâte, papier et carton — Analyse microbienne —
Partie 1: Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé sur la désagrégation
[Revision of second edition (ISO 8784-1:2005)]
ICS 07.100.99; 85.040; 85.060
To expedite distribution, this document is circulated as received from the committee
secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text composition will be undertaken at
publication stage.
Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu'il est parvenu du
secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de texte sera effectué au
Secrétariat central de l'ISO au stade de publication.
THIS DOCUMENT IS A DRAFT CIRCULATED FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY NOT BE
REFERRED TO AS AN INTERNATIONAL STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME
STANDARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN NATIONAL REGULATIONS.
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPORTING DOCUMENTATION.
© International Organization for Standardization, 2011
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ISO/DIS 8784-1
Copyright notice
This ISO document is a Draft International Standard and is copyright-protected by ISO. Except as permitted
under the applicable laws of the user’s country, neither this ISO draft nor any extract from it may be
reproduced, stored in a retrieval system or transmitted in any form or by any means, electronic,
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ii © ISO 2011 – All rights reserved
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ISO/DIS 8784-1
Contents Page
Foreword .iv
Introduction.v
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .1
4 Principle .1
5 Culture media and diluents .2
5.1 General .2
5.2 Water.2
5.3 Culture media for total bacteria count and spore count .2
5.4 Diluents.2
6 Apparatus and equipment .2
6.1 General .2
6.2 List of equipment.2
7 Sampling .3
8 Preparation of the test material .3
8.1 General .3
8.2 Determination of dry-matter content.4
8.3 Weighing .4
8.4 Disintegration .4
9 Determination of the total bacterial count and spore count.4
9.1 General .4
9.2 Plating for total bacterial count .4
9.3 Plating for spore count .5
9.4 Incubation .5
10 Enumeration of the colonies .5
11 Calculation and report .5
11.1 Calculation .5
11.2 Interpretation .7
11.3 Report .7
12 Test report.7
Annex A (informative) Dilution fluid.8
Annex B (informative) Precision.9
Bibliography.10
© ISO 2011 – All rights reserved iii
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ISO/DIS 8784-1
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 8784-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 6, Paper, board and pulps, Subcommittee SC 2,
Test methods and quality specifications for paper and board.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 8784-1:2005), which has been technically
revised. The second edition was applicable to yeast and mould as well as bacteria. In the revision the content
has been divided into two parts, in Part 1 bacteria and bacterial spores are enumerated after disintegration
and in Part 2 yeast and mould are enumerated as surface count.
ISO 8784 consists of the following parts, under the general title Pulp, paper and board — Microbiological
examination:
⎯ Part 1: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on disintegration
1)
⎯ Part 2: Enumeration of yeast and mould on surface
1)
Part 2 is under development and not yet published.
© ISO 2011 – All rights reserved iv
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ISO/DIS 8784-1
Introduction
This part of ISO 8784, which deals with the microbiological examination of dry market pulp, paper and
[1]
paperboard, is broadly based on ISO 4833 , although the conditions are not identical: However, it provides
specific amplification where necessary. It is intended for the estimation of colony-forming units, CFU, of
aerobic bacteria and bacterial spores.
Because of the exacting techniques required in aseptic procedures, reproducible good quality results can only
be ensured by skilled microbiological technicians.
© ISO 2011 – All rights reserved v
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DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 8784-1
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 1:
Enumeration of bacteria and bacterial spores based on
disintegration
1 Scope
This part of ISO 8784 specifies a method for determining the total number of colony-forming units of bacteria
and bacterial spores in dry market pulp, paper and paperboard after disintegration. The enumeration relates to
specific media.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 186:2002, Paper and board — Sampling to determine average quality
ISO 7213:1981, Pulps — Sampling for testing
ISO 638:2008, Paper, board and pulps — Determination of dry matter content — Oven-drying method
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
bacteria
microscopic, single-celled organisms that possess a prokaryotic type of cell structure, which reproduce by
fission and are able to grow under the test conditions specified in this part of ISO 8784
3.2
bacterial spores
highly resistant, dormant structures, e.g. endospores from certain genera of bacteria
3.3
total bacterial count
number of colony-forming units (CFU) of bacteria and bacterial spores formed after incubation in a standard
culture medium, under the test conditions specified in this part of ISO 8784
3.4
spore count
number of colony-forming units (CFU) of bacterial spores formed after incubation in a standard culture
medium, under the test conditions specified in this part of ISO 8784
4 Principle
This poured plate method involves enumeration of colonies in a standard culture medium. A fibre suspension,
prepared from paper, paperboard or pulp samples, is plated in agar. For enumeration of bacterial spores, the
fibre suspension is heated for 10 min at 80 °C prior to plating. The plates are incubated at 32 °C for 48 h. The
total numbers of bacteria or bacterial spores are enumerated by counting the colonies formed in the agar.
Results are expressed as the number of CFU per gram of sample.
© ISO 2011 – All rights reserved 1
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ISO/DIS 8784-1
5 Culture media and diluents
5.1 General
All substrates and diluents shall be appropriately sterilized. When preparing the culture medium, make sure
that the ingredients are completely dissolved by mixing while heating prior to dispensing into suitable
[2] [3]
containers for sterilization. See ISO/TS 11133-1 and ISO/TS 11133-2 for quality assurance and guidelines
on preparation and production of culture media.
5.2 Water
[2]
When water is mentioned in a formula, use distilled water or purified water, see ISO/TS 11133-1 .
5.3 Culture media for total bacteria count and spore count
Culture medium shall be prepared as follows, or from commercially available dehydrated culture media
according to the manufacturer's instructions. Ready-to-use medium may be used when its composition is
comparable to that given in this part of ISO 8784. To test the performance of the medium, see
[3]
ISO/TS 11133-2 .
Plate count agar (PCA) composition per litre:
Tryptone 5,0 g
Yeast Extract 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Agar 15,0 g
Water 1000 ml
Final pH 7,0 ± 0,2
If PCA is not available, Tryptone glucose extract (TGE) agar may be used (see A.3). The use of TGE as an
alternative culture medium is acceptable if it gives comparable results as the standard culture medium. The
culture medium used shall be stated in the test report (see 12).
5.4 Diluents
Ringer's solution (see A.1) is preferred, although other isotonic solutions may be used. Ringer's tablets are
commercially available.
To facilitate the release of cells from the fibres, it is recommended to add 20 µl of Tween 80 (see A.2) per litre
to the Ringer's solution prior to sterilization by autoclaving.
The diluent used and if Tween 80 has been added, shall be stated in the test report (see 12).
6 Apparatus and equipment
6.1 General
All laboratory equipment and parts of the equipment in direct contact with the sample and the diluent or the
culture medium shall be sterilized.
6.2 List of equipment
6.2.1 Use ordinary microbiological laboratory equipment, and the following.
6.2.2 Suitable wrapping material, e.g. aluminium foil (non coated and inert), ready-to-use envelopes of
different sizes or self-closing plastic bags. All of which are commercially available.
© ISO 2011 – All rights reserved 2
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ISO/DIS 8784-1
6.2.3 Disintegrator, high speed electrical blender with metal (preferably stainless steel) or glass cup that
can be sterilized.
NOTE Other homogenizing system with equivalent efficiency may be used.
6.2.4 Incubator, capable of maintaining a constant temperature of 32 °C ± 2 °C.
6.2.5 Petri dishes, having a diameter of 90 mm (standard) or 140 mm to 150 mm (alternative).
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 8784-1
Troisième édition
2014-12-01
Pâtes, papiers et cartons — Analyse
microbienne —
Partie 1:
Dénombrement des bactéries et
des spores bactériennes basé sur la
désintégration
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 1: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on
disintegration
Numéro de référence
ISO 8784-1:2014(F)
©
ISO 2014
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ISO 8784-1:2014(F)
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Publié en Suisse
ii © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 8784-1:2014(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Milieux de culture et diluants . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Eau . 2
5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de bactéries et au nombre de spores . 2
5.4 Diluants . 2
6 Appareillage et matériel . 3
6.1 Généralités . 3
6.2 Liste de matériel . 3
7 Échantillonnage . 3
8 Préparation du matériau pour essai . 4
8.1 Généralités . 4
8.2 Détermination de la teneur en matière sèche . 4
8.3 Pesée . 4
8.4 Désintégration . 5
9 Détermination du nombre total de bactéries et du nombre de spores bactériennes .5
9.1 Généralités . 5
9.2 Ensemencement relatif au nombre total de bactéries . 5
9.3 Ensemencement relatif au nombre de spores . 6
9.4 Incubation . 6
10 Dénombrement des colonies . 6
11 Calcul et expression des résultats . 7
11.1 Calcul . 7
11.2 Interprétation . 8
11.3 Rapport . 8
12 Rapport d’essai . 8
Annexe A (informative) Liquide de dilution . 9
Annexe B (informative) Fidélité.10
Bibliographie .14
© ISO 2014 – Tous droits réservés iii
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ISO 8784-1:2014(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 6, Papiers, cartons et pâtes,
sous-comité SC 2, Méthodes d’essais et spécifications de qualité des papiers et cartons.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 8784-1:2005), qui a fait l’objet d’une
révision technique.
La deuxième édition s’appliquait aux levures et aux moisissures ainsi qu’aux bactéries. Les principales
modifications apportées par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— cette troisième édition n’est applicable qu’aux bactéries et aux spores bactériennes, elle ne s’applique
plus aux levures ni aux moisissures;
— la température d’incubation est passée de (37 °C ± 1 °C) à (32 °C ± 2 °C) (9.4);
— deux déterminations sont réalisées en parallèle (Articles 8 et 9);
— le résultat peut être exprimé en fonction de la «masse reçue» en plus d’être exprimé en fonction de
la masse sèche (8.2, 11.1 et Article 12).
L’ISO 8784 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Pâtes, papiers et cartons —
Analyse microbiologique:
— Partie 1: Dénombrement des bactéries et spores bactériennes basé sur la désintégration
iv © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 8784-1:2014(F)
Introduction
La présente partie de l’ISO 8784, qui traite de l’analyse microbiologique de la pâte commerciale sèche,
[1]
du papier et du carton, est dans ses grandes lignes fondée sur l’ISO 4833 , malgré des conditions
différentes. Toutefois, elle fournit des précisions particulières lorsque cela s’avère nécessaire. Elle est
destinée à l’estimation du nombre d’unités formant colonie (UFC) de bactéries aérobies et de spores
bactériennes.
Compte tenu de la précision des techniques exigées dans les modes opératoires aseptiques, des résultats
reproductibles de bonne qualité peuvent être garantis uniquement par un personnel qualifié en
microbiologie.
© ISO 2014 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 8784-1:2014(F)
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbienne —
Partie 1:
Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes
basé sur la désintégration
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 8784 spécifie une méthode de détermination du nombre total d’unités
formant colonie de bactéries et de spores bactériennes, dans la pâte commerciale sèche, le papier et le
carton, après désintégration. Le dénombrement se rapporte à un milieu spécifique.
2 Références normatives
Les documents suivants, en tout ou partie, sont référencés de façon normative dans le présent document
et sont indispensables pour son application. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 186:2002, Papier et carton — Échantillonnage pour déterminer la qualité moyenne.
ISO 7213:1981, Pâtes — Échantillonnage pour essais.
ISO 638:2008, Papiers, cartons et pates — Détermination de la teneur en matières sèches — Méthode par
séchage à l’étuve.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
bactérie
organisme microscopique unicellulaire ayant une structure cellulaire de type procaryote, qui se reproduit
par division et peut croître dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784
3.2
spore bactérienne
structure hautement résistante en sommeil
EXEMPLE Endospore provenant d’un genre particulier de bactérie.
3.3
nombre total de bactéries
nombre d’unités formant colonie (UFC) de bactéries et de spores bactériennes, formées après incubation
dans un milieu de culture type, dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784
3.4
nombre de spores
nombre d’unités formant colonie (UFC) de spores bactériennes, formées après incubation dans un milieu
de culture type, dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784
© ISO 2014 – Tous droits réservés 1
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ISO 8784-1:2014(F)
4 Principe
La présente méthode d’ensemencement en profondeur implique un dénombrement des colonies dans
un milieu de culture type. Une suspension fibreuse préparée à partir d’échantillons de papier, de carton
ou de pâte est ensemencée dans une gélose. Deux déterminations sont réalisées en parallèle. Pour le
dénombrement de spores bactériennes, la suspension fibreuse est chauffée avant l’ensemencement
pendant 10 min à 80 °C. Les boîtes sont incubées à 32 °C pendant 48 h. Le nombre total de bactéries ou
de spores bactériennes est obtenu par dénombrement des colonies formées dans la gélose.
La valeur moyenne des deux déterminations réalisées en parallèle est calculée et les résultats sont
exprimés en nombre d’UFC par gramme d’échantillon.
5 Milieux de culture et diluants
5.1 Généralités
Tous les substrats et diluants doivent être convenablement stérilisés. Lors de la préparation du milieu de
culture, s’assurer que les ingrédients sont entièrement dissous en les mélangeant pendant qu’ils chauffent
[2]
avant de les répartir dans des récipients appropriés pour la stérilisation. Voir l’ISO 11133 relative à
l’assurance qualité et aux lignes directrices pour la préparation et la production de milieux de culture.
5.2 Eau
[2]
Lorsque de l’eau est mentionnée dans une formule, utiliser de l’eau distillée ou purifiée; voir l’ISO 11133 .
5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de bactéries et au nombre de spores
Les milieux de culture doivent être préparés de la manière suivante ou selon les instructions du fabricant
à partir de milieux de culture déshydratés disponibles dans le commerce. Les milieux prêts à l’emploi
peuvent être utilisés lorsque leur composition est comparable à celle donnée dans la présente partie de
[2]
l’ISO 8784. Pour les essais de performance des milieux, voir l’ISO 11133 .
Composition par litre de la gélose pour dénombrement:
Tryptone 5,0 g
Extrait de levure 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Gélose 15,0 g
Eau 1 000 ml
pH final 7,0 ± 0,2
En l’absence de gélose pour dénombrement, la gélose à l’extrait de glucose tryptone (TGE) peut être
utilisée (voir A.3). L’utilisation de TGE comme autre milieu de culture est admise si elle donne des
résultats comparables au milieu de culture type. Le milieu de culture utilisé doit être consigné dans le
rapport d’essai (voir Article 12).
5.4 Diluants
Il est préférable d’utiliser la solution de Ringer (voir A.1) bien que d’autres solutions isotoniques puissent
être utilisées. Les pastilles Ringer sont disponibles dans le commerce.
Pour faciliter la libération des cellules par les fibres, il est recommandé d’ajouter 20 µl de Tween 80
(voir A.2) par litre à la solution de Ringer, avant la stérilisation par autoclave.
2 © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 8784-1:2014(F)
Le diluant utilisé et l’ajout éventuel de Tween 80 doivent être consignés dans le rapport d’essai
(voir Article 12).
6 Appareillage et matériel
6.1 Généralités
Tout le matériel de laboratoire et les parties du matériel en contact direct avec l’échantillon et le diluant
ou le milieu de culture doivent être stérilisés.
[4]
NOTE Pour des conseils sur le matériel de microbiologie courant, voir l’ISO 7218 .
6.2 Liste de matériel
6.2.1 Utiliser du matériel de laboratoire ordinaire pour microbiologie, et le matériel suivant.
6.2.2 Matériel d’emballage approprié, par exemple feuille d’aluminium (non revêtue et inerte),
enveloppes prêtes à l’emploi de dimensions différentes ou sacs plastiques auto-fermants, tous disponibles
dans le commerce.
6.2.3 Désintégrateur, mélangeur électrique à grande vitesse doté d’un récipient en métal (de préférence
en acier inoxydable) ou en verre pouvant être stérilisé.
NOTE Un autre système d’homogénéisation d’efficacité équivalente peut être utilisé.
6.2.4 Incubateur, permettant de maintenir une température constante de 32 °C ± 2 °C.
6.2.5 Boîtes de Petri, d’un diamètre de 90 mm (normalisé) ou de 140 mm à 150 mm (autre possibilité).
6.2.6 Pipettes, d’un volume approprié, à large ouverture.
La largeur de l’ouverture doit être assez grande pour qu’une suspension fibreuse à 1 % puisse facilement
couler dans l’embout de la pipette.
NOTE 10 ml ou 50 ml représentent un volume approprié.
6.2.7 Bain-marie, permettant de maintenir une température de 80 °C ± 2 °C.
6.2.8 Matériel de dénombrement des colonies ou dispositif grossissant, d’un grossissement
compris entre 1,5 x et 2,5 x.
NOTE L’utilisation de lentilles supplémentaires peut être nécessaire pour augmenter le grossissement
jusqu’à 10 fois, afin de faciliter le dénombrement des unités formant des colonies bactériennes se présentant sous
forme de points, et aussi pour garantir qu’aucun autre élément à l’exception des colonies de bactéries n’est compté
(voir Article 10).
6.2.9 Balance, précise à 0,01 g.
6.2.10 Unité de stérilisation, autoclave permettant de stériliser à 121 °C.
7 Échantillonnage
S’assurer que le mode opératoire d’échantillonnage est réalisé en utilisant des techniques d’asepsie.
© ISO 2014 – Tous droits réservés 3
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ISO 8784-1:2014(F)
Si l’échantillon représente un lot de papier ou de carton, l’échantillonnage doit être conforme à
l’ISO 186:2002. Découper plusieurs couches supérieures dans chaque unité de papier ou de carton à
échantillonner et les retirer pour éliminer la contamination en surface. Utiliser un couteau stérile et
découper plusieurs feuilles de l’échantillon de papier ou de carton, en produisant une pile. Retirer la
feuille supérieure.
Si l’échantillon représente un lot de pâte, l’échantillonnage doit être conforme à l’ISO 7213:1981. Retirer
plusieurs feuilles du dessus de chaque liasse de chaque unité de pâte commerciale sèche pour éliminer
la contamination en surface.
Dans les autres cas, échantillonner un nombre suffisant d’unités pour que le matériau pour essai soit
représentatif du papier, du carton ou de la pâte commerciale sèche à soumettre à essai. Pour tous les
modes opératoires d’échantillonnage ou d’analyse, s’assurer que le matériau pour essai prélevé est
représentatif de l’échantillon reçu.
Dans l’idéal, il convient qu’un échantillon de pâte commerciale sèche, de papier ou de carton contienne
au moins quatre feuilles (dont au moins deux feuilles pour les essais et deux servant à la protection),
ayant chacune une dimension minimale de 200 mm × 250 mm.
NOTE Pour le carton ou un matériau plus épais, il se peut qu’une seule feuille suffise pour chaque détermination
en parallèle. Pour le papier plus fin, plus de deux feuilles peuvent être utilisées pour chaque détermination en parallèle.
Après l’échantillonnage, envelopper le matériau pour essai non exposé dans un emballage approprié (6.2.2).
8 Préparation du matériau pour essai
8.1 Généralités
Il est préférabl
...
PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 8784-1
ISO/TC 6/SC 2 Secrétariat: SIS
Début de vote Vote clos le
2011-11-02 2012-04-02
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION МЕЖДУНАРОДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Pâte, papier et carton — Analyse microbienne —
Partie 1:
Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé
sur la désagrégation
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 3: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on disintegration
[Révision de la deuxième édition (ISO 8784-1:2005)]
ICS 07.100.99; 85.040; 85.060
Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu'il est parvenu du
secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de texte sera effectué au
Secrétariat central de l'ISO au stade de publication.
To expedite distribution, this document is circulated as received from the committee
secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text composition will be undertaken at
publication stage.
CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE
PEUT ETRE CITE COMME NORME INTERNATIONALE AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.
OUTRE LE FAIT D'ETRE EXAMINES POUR ETABLIR S'ILS SONT ACCEPTABLES A DES FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET
COMMERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ETRE
CONSIDERES DU POINT DE VUE DE LEUR POSSIBILITE DE DEVENIR DES NORMES POUVANT SERVIR DE REFERENCE DANS LA
REGLEMENTATION NATIONALE.
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS DE PRO-
PRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.
© Organisation Internationale de Normalisation, 2011
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ISO/DIS 8784-1
Notice de droit d'auteur
Ce document de l'ISO est un projet de Norme internationale qui est protégé par les droits d'auteur de l'ISO.
Sauf autorisé par les lois en matière de droits d'auteur du pays utilisateur, aucune partie de ce projet ISO ne
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Toute reproduction est soumise au paiement de droits ou à un contrat de licence.
Les contrevenants pourront être poursuivis.
ii © ISO 2011 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 8784-1
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction.v
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Termes et définitions .1
4 Principe.2
5 Milieux de culture et diluants .2
5.1 Généralités .2
5.2 Eau.2
5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de bactéries et relatifs au nombre total de
spores.2
5.4 Diluants.2
6 Appareillage et matériel.3
6.1 Généralités .3
6.2 Liste de matériel .3
7 Echantillonnage.3
8 Préparation du matériau pour essai.4
8.1 Généralités .4
8.2 Détermination de la teneur en matière sèche.4
8.3 Pesée .4
8.4 Désagrégation.4
9 Détermination du nombre total de bactéries et du nombre de spores.5
9.1 Généralités .5
9.2 Ensemencement relatif au nombre total de bactéries.5
9.3 Ensemencement relatif au nombre de spores .5
9.4 Incubation .6
10 Dénombrement des colonies .6
11 Calcul et expression des résultats .6
11.1 Calcul.6
11.2 Interprétation.8
11.3 Rapport.8
12 Rapport d’essai.8
Annexe A (informative) Liquide de dilution.9
A.1 Solution de Ringer.9
A.2 Surfactant non ionique .9
A.3 Extrait de tryptone glucose .9
Annexe B (informative) Fidélité .10
B.1 Généralités .10
B.2 Recommandations .10
B.2.1 Echantillons de référence certifiés.10
[1]
B.2.2 Données de fidélité selon l’ISO 4833 .10
B.2.3 Données publiées dans l’ISO 4833.10
Bibliographie.12
© ISO 2011 – Tous droits réservés iii
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ISO/DIS 8784-1
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 8784-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 6, Papiers, cartons et pâtes, sous-comité SC 2,
Méthodes d'essais et spécifications de qualité des papiers et cartons.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 8784-1:2005), qui a fait l’objet d’une
révision technique. La deuxième édition s’appliquait aux levures et aux moisissures ainsi qu’aux bactéries.
Dans le texte révisé, le contenu a été divisé en deux parties, dans la Partie 1, les bactéries et les spores
bactériennes sont dénombrées après désagrégation, et dans la Partie 2, les levures et les moisissures sont
dénombrées en surface.
L'ISO 8784 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Pâtes, papiers et cartons —
Analyse microbiologique:
⎯ Partie 1 : Dénombrement des bactéries et spores bactériennes, basé sur la désagrégation
1)
⎯ Partie 2 : Dénombrement des levures et des moisissures en surface
1) La Partie 2 est en cours d’élaboration et n’est pas encore publiée.
iv © ISO 2011 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 8784-1
Introduction
La présente partie de l’ISO 8784, qui traite de l’analyse microbiologique de la pâte commerciale sèche, du
[1]
papier et du carton, est dans ses grandes lignes fondée sur l’ISO 4833 , malgré des conditions différentes.
Toutefois, elle fournit des précisions particulières lorsque cela s’avère nécessaire. Elle est destinée à
l’estimation de colonies formant unité, CFU, des bactéries aérobies et des spores bactériennes.
Compte tenu de la précision des techniques exigées dans les modes opératoires aseptiques, des résultats
reproductibles de bonne qualité peuvent être garantis uniquement par un personnel qualifié en microbiologie.
© ISO 2011 – Tous droits réservés v
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PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 8784-1
Pâte, papier et carton — Analyse microbienne —
Partie 1:
Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé
sur la désagrégation
1 Domaine d'application
La présente partie de l’ISO 8784 spécifie une méthode de détermination du nombre total de colonies de
bactéries et de spores bactériennes formant unité, dans la pâte commerciale, le papier et le carton, après
désagrégation. Le dénombrement se rapporte à un milieu spécifique.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 186:2002, Papier et carton — Échantillonnage pour déterminer la qualité moyenne.
ISO 7213:1981, Pâtes — Échantillonnage pour essais.
ISO 638:2008, Papiers, cartons et pâtes — Détermination de la teneur en matières sèches — Méthode par
séchage à l'étuve.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
bactérie
organisme microscopique unicellulaire ayant une structure cellulaire de type procaryote, qui se reproduit par
division et pouvant croître dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784
3.2
spore bactérienne
structure hautement résistante en sommeil, par exemple endospore provenant d’un genre particulier de
bactérie
3.3
nombre total de bactéries
nombre de colonies de bactéries et de spores bactériennes formant unité (CFU), formées après incubation
dans un milieu de culture type, dans des conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784
3.4
nombre de spores
nombre de colonies formant unité (CFU), de spores bactériennes formées après incubation dans un milieu de
culture type, dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784
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ISO/DIS 8784-1
4 Principe
La présente méthode consistant à transvaser dans une boîte de Petri implique un dénombrement des
colonies dans un milieu de culture type. Une suspension fibreuse préparée à partir d’échantillons de papier,
de carton ou de pâte est ensemencée dans de la gélose. Pour le dénombrement de spores bactériennes, la
suspension fibreuse est chauffée avant l’ensemencement pendant 10 min à 80 °C. Les boîtes subissent une
incubation à 32 °C pendant 48 h. Le nombre total de bactéries ou de spores bactériennes est obtenu par
dénombrement en comptant les colonies formées dans la gélose. Les résultats sont exprimés en nombre de
CFU par gramme d’échantillon.
5 Milieux de culture et diluants
5.1 Généralités
Tous les substrats et diluants doivent être convenablement stérilisés. Lors de la préparation du milieu de
culture, s’assurer que les ingrédients sont entièrement dissous en mélangeant pendant qu’ils chauffent avant
[2] [3]
de les répartir dans des récipients appropriés pour stérilisation. Voir l’ISO/TS 11133-1 et l’ISO/TS 11133-2
relatives à l’assurance qualité et aux lignes directrices pour la préparation et la production de milieux de
culture.
5.2 Eau
Lorsque de l’eau est mentionnée dans une formule, utiliser de l’eau distillée ou purifiée, voir
[2]
l’ISO/TS 11133-1 .
5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de bactéries et relatifs au nombre total de
spores
Les milieux de culture doivent être préparés de la manière suivante ou selon les instructions du fabricant à
partir de milieux de culture déshydratés disponibles dans le commerce. Les milieux prêts à l’emploi peuvent
être utilisés lorsque leur composition est comparable à celle donnée dans la présente partie de l’ISO 8784.
[3]
Pour les essais de performance des milieux, voir l’ISO/TS 11133-2 .
Composition par litre de la gélose pour dénombrement :
Tryptone 5,0 g
Extrait de levure 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Gélose 15,0 g
Eau 1000 ml
pH final 7,0 ± 0,2
En l’absence de gélose pour dénombrement, la gélose à l’extrait de glucose tryptone (TGE) peut être utilisée
(voir A.3). L’utilisation de TGE comme autre milieu de culture est admis s’il donne des résultats comparables
au milieu de culture type. Le milieu de culture utilisé doit être consigné dans le rapport d’essai (voir 12).
5.4 Diluants
Il est préférable d’utiliser la solution de Ringer (voir A.1) bien que d’autres solutions isotoniques puissent être
utilisées. Des pastilles Ringer sont disponibles dans le commerce.
2 © ISO 2011 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 8784-1
Pour faciliter la libération des cellules par les fibres, il est recommandé d’ajouter 20 µl de Tween 80 (voir A.2)
par litre à la solution de Ringer, avant la stérilisation par autoclave.
Le diluant utilisé et l’ajout éventuel de Tween 80 doivent être consignés dans le rapport d’essai (voir 12).
6 Appareillage et matériel
6.1 Généralités
Tout le matériel de laboratoire et les parties du matériel en contact direct avec l’échantillon et le diluant ou le
milieu de culture doivent être stérilisés.
6.2 Liste de matériel
6.2.1 Utiliser du matériel de laboratoire ordinaire pour microbiologie, et le matériel suivant.
6.2.2 Matériel d’emballage approprié, par exemple feuille d’aluminium (non revêtue et inerte), enveloppes
prêtes à l’emploi de dimensions différentes ou sacs plastiques auto-fermants ; tous disponibles dans le
commerce.
6.2.3 Désintégrateur, mélangeur électrique à grande vitesse doté d’un récipient en métal (de préférence
en acier inoxydable) ou en verre pouvant être stérilisé.
NOTE Un autre système d’homogénéisation d’efficacité équ
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.