Pulp, paper and board -- Microbiological examination

ISO 8784-1:2014 specifies a method for determining the total number of colony-forming units of bacteria and bacterial spores in dry market pulp, paper, and paperboard after disintegration. The enumeration relates to specific media.

Pâtes, papiers et cartons -- Analyse microbienne

L'ISO 8784-1:2014 spécifie une méthode de détermination du nombre total d'unités formant colonie de bactéries et de spores bactériennes, dans la pâte commerciale sčche, le papier et le carton, aprčs désintégration. Le dénombrement se rapporte ŕ un milieu spécifique.

General Information

Status
Published
Publication Date
23-Nov-2014
Current Stage
6060 - International Standard published
Start Date
13-Oct-2014
Completion Date
24-Nov-2014
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ISO 8784-1:2014 - Pulp, paper and board -- Microbiological examination
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ISO 8784-1:2014 - Pulp, paper and board -- Microbiological examination
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ISO 8784-1:2014 - Pâtes, papiers et cartons -- Analyse microbienne
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Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8784-1
Third edition
2014-12-01
Pulp, paper and board —
Microbiological examination —
Part 1:
Enumeration of bacteria and bacterial
spores based on disintegration
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbienne —
Partie 1: Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé
sur la désintégration
Reference number
ISO 8784-1:2014(E)
ISO 2014
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8784-1:2014(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2014

All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form

or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior

written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of

the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2014 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 8784-1:2014(E)
Contents Page

Foreword ........................................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 2

5 Culture media and diluents ....................................................................................................................................................................... 2

5.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 2

5.2 Water ............................................................................................................................................................................................................... 2

5.3 Culture media for total bacteria count and spore count ..................................................................................... 2

5.4 Diluents ......................................................................................................................................................................................................... 2

6 Apparatus and equipment .......................................................................................................................................................................... 3

6.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 3

6.2 List of equipment .................................................................................................................................................................................. 3

7 Sampling ........................................................................................................................................................................................................................ 3

8 Preparation of the test material ........................................................................................................................................................... 4

8.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 4

8.2 Determination of dry-matter content ................................................................................................................................. 4

8.3 Weighing ....................................................................................................................................................................................................... 4

8.4 Disintegration .......................................................................................................................................................................................... 4

9 Determination of the total bacterial count and spore count .................................................................................. 5

9.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 5

9.2 Plating for total bacterial count ................................................................................................................................................ 5

9.3 Plating for spore count ..................................................................................................................................................................... 6

9.4 Incubation ................................................................................................................................................................................................... 6

10 Enumeration of the colonies .................................................................................................................................................................... 6

11 Calculation and report .................................................................................................................................................................................... 6

11.1 Calculation .................................................................................................................................................................................................. 6

11.2 Interpretation .......................................................................................................................................................................................... 7

11.3 Report ............................................................................................................................................................................................................. 8

12 Test report ................................................................................................................................................................................................................... 8

Annex A (informative) Dilution fluid .................................................................................................................................................................... 9

Annex B (informative) Precision ............................................................................................................................................................................10

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................14

© ISO 2014 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 8784-1:2014(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of any

patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or on

the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity

assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers

to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information

The committee responsible for this document is ISO/TC 6, Paper, board and pulps, Subcommittee SC 2,

Test methods and quality specifications for paper and board.

This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 8784-1:2005), which has been

technically revised.

The second edition was applicable to yeast and mould, as well as bacteria. The following main changes

have been made with respect to the previous edition:

— This third edition is only applicable to bacteria and bacterial spores, and no longer applicable to

yeast and mould;
— incubation temperature changed from (37 °C ± 1 °C) to (32 °C ± 2 °C) (9.4);
— 2 parallel determinations are to be made (Clause 8 and Clause 9);

— the result can be reported “as received” in addition to reporting on a dry-mass basis (8.2, 11.1,

and Clause 12).

ISO 8784 consists of the following parts, under the general title Pulp, paper and board — Microbiological

examination:
— Part 1: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on disintegration
iv © ISO 2014 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 8784-1:2014(E)
Introduction

This part of ISO 8784, which deals with the microbiological examination of dry market pulp, paper,

[1]

and paperboard, is broadly based on ISO 4833 although the conditions are not identical. However,

it provides specific amplification where necessary. It is intended for the estimation of colony-forming

units, CFU, aerobic bacteria, and bacterial spores.

Because of the exacting techniques required in aseptic procedures, reproducible good quality results

can only be ensured by skilled microbiological technicians.
© ISO 2014 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 8784-1:2014(E)
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 1:
Enumeration of bacteria and bacterial spores based on
disintegration
1 Scope

This part of ISO 8784 specifies a method for determining the total number of colony-forming units

of bacteria and bacterial spores in dry market pulp, paper, and paperboard after disintegration. The

enumeration relates to specific media.
2 Normative references

The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are

indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated

references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 186:2002, Paper and board — Sampling to determine average quality
ISO 7213:1981, Pulps — Sampling for testing

ISO 638:2008, Paper, board and pulps — Determination of dry matter content — Oven-drying method

3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
bacteria

microscopic, single-celled organisms that possess a prokaryotic type of cell structure, which reproduce

by fission and are able to grow under the test conditions specified in this part of ISO 8784

3.2
bacterial spores
highly resistant, dormant structures
EXAMPLE Endospores from certain genera of bacteria.
3.3
total bacterial count

number of colony-forming units (CFU) of bacteria and bacterial spores formed after incubation in a

standard culture medium, under the test conditions specified in this part of ISO 8784

3.4
spore count

number of colony-forming units (CFU) of bacterial spores formed after incubation in a standard culture

medium, under the test conditions specified in this part of ISO 8784
© ISO 2014 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 8784-1:2014(E)
4 Principle

This poured plate method involves enumeration of colonies in a standard culture medium. A fibre

suspension, prepared from paper, paperboard, or pulp samples, is plated in agar. Two parallel

determinations are made. For enumeration of bacterial spores, the fibre suspension is heated for 10 min

at 80 °C prior to plating. The plates are incubated at 32 °C for 48 h. The total numbers of bacteria or

bacterial spores are enumerated by counting the colonies formed in the agar.

The mean value of 2 parallel determinations is calculated and the results are expressed as the number

of CFU per gram of sample.
5 Culture media and diluents
5.1 General

All substrates and diluents shall be appropriately sterilized. When preparing the culture medium, make

sure that the ingredients are completely dissolved by mixing while heating prior to dispensing into

[2]

suitable containers for sterilization. See ISO 11133 for quality assurance and guidelines on preparation

and production of culture media.
5.2 Water
[2]

When water is mentioned in a formula, use distilled water or purified water, see ISO 11133 .

5.3 Culture media for total bacteria count and spore count

Culture medium shall be prepared as follows, or from commercially available dehydrated culture media

according to the manufacturer’s instructions. Ready-to-use medium may be used when its composition

is comparable to that given in this part of ISO 8784. To test the performance of the medium, see

[2]
ISO 11133 .
Plate count agar (PCA) composition per litre:
Tryptone 5,0 g
Yeast Extract 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Agar 15,0 g
Water 1 000 ml
Final pH 7,0 ± 0,2

If PCA is not available, Tryptone glucose extract (TGE) agar may be used (see A.3). The use of TGE as an

alternative culture medium is acceptable if it gives comparable results as the standard culture medium.

The culture medium used shall be stated in the test report (see Clause 12).
5.4 Diluents

Ringer’s solution (see A.1) is preferred, although other isotonic solutions may be used. Ringer’s tablets

are commercially available.

To facilitate the release of cells from the fibres, it is recommended to add 20 µl of Tween 80 (see A.2) per

litre to the Ringer’s solution prior to sterilization by autoclaving.

The diluent used and if Tween 80 has been added, shall be stated in the test report (see Clause 12).

2 © ISO 2014 – All rights reserved
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 8784-1:2014(E)
6 Apparatus and equipment
6.1 General

All laboratory equipment and parts of the equipment in direct contact with the sample and the diluent

or the culture medium shall be sterilized.
[4]
NOTE For advice on standard microbiological equipment, see ISO 7218 .
6.2 List of equipment
6.2.1 Use ordinary microbiological laboratory equipment, and the following.

6.2.2 Suitable wrapping material, e.g. aluminium foil (non-coated and inert), ready-to-use envelopes

of different sizes or self-closing plastic bags, all of which are commercially available.

6.2.3 Disintegrator, high speed electrical blender with metal (preferably stainless steel) or glass cup

that can be sterilized.
NOTE Other homogenizing system with equivalent efficiency may be used.
6.2.4 Incubator, capable of maintaining a constant temperature of 32 °C ± 2 °C.

6.2.5 Petri dishes, having a diameter of 90 mm (standard) or 140 mm to 150 mm (alternative).

6.2.6 Pipettes, of wide-mouth type suitable volume.

The width of the mouth must be large enough so that a 1 % fibre suspension can easily be drawn into

the pipette tip.
NOTE A suitable volume is 10 ml or 50 ml.
6.2.7 Water bath, capable of maintaining a temperature of 80 °C ± 2 °C.

6.2.8 Colony-counting equipment or magnifying device, with a magnification between 1,5 × and

2,5 × shall be used.

NOTE The use of an additional lens might be necessary to increase the magnification, up to 10 ×, to facilitate

the counting of pin-point bacterial colony-forming units and also to ensure that no other particles except bacterial

colonies are counted (see Clause 10).
6.2.9 Balance, with an accuracy of 0,01 g.
6.2.10 Sterilizing unit, an autoclave capable of sterilization at 121 °C.
7 Sampling
Make sure that the sampling procedure is performed using aseptic techniques.

If the sample is to represent a lot of paper or paperboard, the sampling shall be in accordance with

ISO 186:2002. From each unit of paper or paperboard to be sampled, cut several top layers and discard

them to eliminate surface contamination. Use a sterile knife to cut through several layers of the paper or

board sample, producing a stack of sheets. Discard the top sheet.
© ISO 2014 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 8784-1:2014(E)

If the sample is to represent a lot of pulp, the sampling shall be in accordance with ISO 7213:1981. From

each unit of dry market pulp to be sampled, discard several top sheets from each bale to eliminate

surface contamination.

In other cases, sample a sufficient number of units so that the test material is representative of the

paper, the paperboard, or the dry market pulp to be tested. In all sampling and examination procedures,

make sure that the test material taken is representative of the sample received.

Ideally, a sample should contain at least four sheets, each of them having a minimum size of 200 mm × 250 mm

of dry market pulp, paper, or paperboard (at least 2 sheets for testing and 2 protective sheets).

NOTE For paperboard or thicker material, it might
...

DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 8784-1
ISO/TC 6/SC 2 Secretariat: SIS
Voting begins on Voting terminates on
2011-11-02 2012-04-02

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION  МЕЖДУНАРОДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ  ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION

Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 1:
Enumeration of bacteria and bacterial spores based on
disintegration
Pâte, papier et carton — Analyse microbienne —

Partie 1: Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé sur la désagrégation

[Revision of second edition (ISO 8784-1:2005)]
ICS 07.100.99; 85.040; 85.060

To expedite distribution, this document is circulated as received from the committee

secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text composition will be undertaken at

publication stage.

Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu'il est parvenu du

secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de texte sera effectué au

Secrétariat central de l'ISO au stade de publication.

THIS DOCUMENT IS A DRAFT CIRCULATED FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY NOT BE

REFERRED TO AS AN INTERNATIONAL STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.

IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,

DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME

STANDARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN NATIONAL REGULATIONS.

RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH

THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPORTING DOCUMENTATION.
© International Organization for Standardization, 2011
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/DIS 8784-1
Copyright notice

This ISO document is a Draft International Standard and is copyright-protected by ISO. Except as permitted

under the applicable laws of the user’s country, neither this ISO draft nor any extract from it may be

reproduced, stored in a retrieval system or transmitted in any form or by any means, electronic,

photocopying, recording or otherwise, without prior written permission being secured.

Requests for permission to reproduce should be addressed to either ISO at the address below or ISO’s

member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56  CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Reproduction may be subject to royalty payments or a licensing agreement.
Violators may be prosecuted.
ii © ISO 2011 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/DIS 8784-1
Contents Page

Foreword ............................................................................................................................................................iv

Introduction.........................................................................................................................................................v

1 Scope......................................................................................................................................................1

2 Normative references............................................................................................................................1

3 Terms and definitions ...........................................................................................................................1

4 Principle .................................................................................................................................................1

5 Culture media and diluents ..................................................................................................................2

5.1 General ...................................................................................................................................................2

5.2 Water.......................................................................................................................................................2

5.3 Culture media for total bacteria count and spore count ...................................................................2

5.4 Diluents...................................................................................................................................................2

6 Apparatus and equipment ....................................................................................................................2

6.1 General ...................................................................................................................................................2

6.2 List of equipment...................................................................................................................................2

7 Sampling ................................................................................................................................................3

8 Preparation of the test material ...........................................................................................................3

8.1 General ...................................................................................................................................................3

8.2 Determination of dry-matter content...................................................................................................4

8.3 Weighing ................................................................................................................................................4

8.4 Disintegration ........................................................................................................................................4

9 Determination of the total bacterial count and spore count.............................................................4

9.1 General ...................................................................................................................................................4

9.2 Plating for total bacterial count ...........................................................................................................4

9.3 Plating for spore count .........................................................................................................................5

9.4 Incubation ..............................................................................................................................................5

10 Enumeration of the colonies ................................................................................................................5

11 Calculation and report ..........................................................................................................................5

11.1 Calculation .............................................................................................................................................5

11.2 Interpretation .........................................................................................................................................7

11.3 Report .....................................................................................................................................................7

12 Test report..............................................................................................................................................7

Annex A (informative) Dilution fluid..................................................................................................................8

Annex B (informative) Precision........................................................................................................................9

Bibliography......................................................................................................................................................10

© ISO 2011 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/DIS 8784-1
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies

(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO

technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been

established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and

non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the

International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.

International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.

The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards

adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an

International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent

rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.

ISO 8784-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 6, Paper, board and pulps, Subcommittee SC 2,

Test methods and quality specifications for paper and board.

This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 8784-1:2005), which has been technically

revised. The second edition was applicable to yeast and mould as well as bacteria. In the revision the content

has been divided into two parts, in Part 1 bacteria and bacterial spores are enumerated after disintegration

and in Part 2 yeast and mould are enumerated as surface count.

ISO 8784 consists of the following parts, under the general title Pulp, paper and board — Microbiological

examination:
⎯ Part 1: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on disintegration
⎯ Part 2: Enumeration of yeast and mould on surface
Part 2 is under development and not yet published.
© ISO 2011 – All rights reserved iv
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/DIS 8784-1
Introduction

This part of ISO 8784, which deals with the microbiological examination of dry market pulp, paper and

[1]

paperboard, is broadly based on ISO 4833 , although the conditions are not identical: However, it provides

specific amplification where necessary. It is intended for the estimation of colony-forming units, CFU, of

aerobic bacteria and bacterial spores.

Because of the exacting techniques required in aseptic procedures, reproducible good quality results can only

be ensured by skilled microbiological technicians.
© ISO 2011 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 8784-1
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 1:
Enumeration of bacteria and bacterial spores based on
disintegration
1 Scope

This part of ISO 8784 specifies a method for determining the total number of colony-forming units of bacteria

and bacterial spores in dry market pulp, paper and paperboard after disintegration. The enumeration relates to

specific media.
2 Normative references

The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated

references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced

document (including any amendments) applies.
ISO 186:2002, Paper and board — Sampling to determine average quality
ISO 7213:1981, Pulps — Sampling for testing

ISO 638:2008, Paper, board and pulps — Determination of dry matter content — Oven-drying method

3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
bacteria

microscopic, single-celled organisms that possess a prokaryotic type of cell structure, which reproduce by

fission and are able to grow under the test conditions specified in this part of ISO 8784

3.2
bacterial spores

highly resistant, dormant structures, e.g. endospores from certain genera of bacteria

3.3
total bacterial count

number of colony-forming units (CFU) of bacteria and bacterial spores formed after incubation in a standard

culture medium, under the test conditions specified in this part of ISO 8784
3.4
spore count

number of colony-forming units (CFU) of bacterial spores formed after incubation in a standard culture

medium, under the test conditions specified in this part of ISO 8784
4 Principle

This poured plate method involves enumeration of colonies in a standard culture medium. A fibre suspension,

prepared from paper, paperboard or pulp samples, is plated in agar. For enumeration of bacterial spores, the

fibre suspension is heated for 10 min at 80 °C prior to plating. The plates are incubated at 32 °C for 48 h. The

total numbers of bacteria or bacterial spores are enumerated by counting the colonies formed in the agar.

Results are expressed as the number of CFU per gram of sample.
© ISO 2011 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO/DIS 8784-1
5 Culture media and diluents
5.1 General

All substrates and diluents shall be appropriately sterilized. When preparing the culture medium, make sure

that the ingredients are completely dissolved by mixing while heating prior to dispensing into suitable

[2] [3]

containers for sterilization. See ISO/TS 11133-1 and ISO/TS 11133-2 for quality assurance and guidelines

on preparation and production of culture media.
5.2 Water
[2]

When water is mentioned in a formula, use distilled water or purified water, see ISO/TS 11133-1 .

5.3 Culture media for total bacteria count and spore count

Culture medium shall be prepared as follows, or from commercially available dehydrated culture media

according to the manufacturer's instructions. Ready-to-use medium may be used when its composition is

comparable to that given in this part of ISO 8784. To test the performance of the medium, see

[3]
ISO/TS 11133-2 .
Plate count agar (PCA) composition per litre:
Tryptone 5,0 g
Yeast Extract 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Agar 15,0 g
Water 1000 ml
Final pH 7,0 ± 0,2

If PCA is not available, Tryptone glucose extract (TGE) agar may be used (see A.3). The use of TGE as an

alternative culture medium is acceptable if it gives comparable results as the standard culture medium. The

culture medium used shall be stated in the test report (see 12).
5.4 Diluents

Ringer's solution (see A.1) is preferred, although other isotonic solutions may be used. Ringer's tablets are

commercially available.

To facilitate the release of cells from the fibres, it is recommended to add 20 µl of Tween 80 (see A.2) per litre

to the Ringer's solution prior to sterilization by autoclaving.

The diluent used and if Tween 80 has been added, shall be stated in the test report (see 12).

6 Apparatus and equipment
6.1 General

All laboratory equipment and parts of the equipment in direct contact with the sample and the diluent or the

culture medium shall be sterilized.
6.2 List of equipment
6.2.1 Use ordinary microbiological laboratory equipment, and the following.

6.2.2 Suitable wrapping material, e.g. aluminium foil (non coated and inert), ready-to-use envelopes of

different sizes or self-closing plastic bags. All of which are commercially available.

© ISO 2011 – All rights reserved 2
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO/DIS 8784-1

6.2.3 Disintegrator, high speed electrical blender with metal (preferably stainless steel) or glass cup that

can be sterilized.
NOTE Other homogenizing system with equivalent efficiency may be used.
6.2.4 Incubator, capable of maintaining a constant temperature of 32 °C ± 2 °C.

6.2.5 Petri dishes, having a diameter of 90 mm (standard) or 140 mm to 150 mm (alternative).

...

NORME ISO
INTERNATIONALE 8784-1
Troisième édition
2014-12-01
Pâtes, papiers et cartons — Analyse
microbienne —
Partie 1:
Dénombrement des bactéries et
des spores bactériennes basé sur la
désintégration
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 1: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on
disintegration
Numéro de référence
ISO 8784-1:2014(F)
ISO 2014
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ISO 8784-1:2014(F)
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sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur

l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à

l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Publié en Suisse
ii © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 8784-1:2014(F)
Sommaire Page

Avant-propos ..............................................................................................................................................................................................................................iv

Introduction ..................................................................................................................................................................................................................................v

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 1

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 2

5 Milieux de culture et diluants ................................................................................................................................................................. 2

5.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 2

5.2 Eau ..................................................................................................................................................................................................................... 2

5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de bactéries et au nombre de spores ....................... 2

5.4 Diluants ......................................................................................................................................................................................................... 2

6 Appareillage et matériel ............................................................................................................................................................................... 3

6.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 3

6.2 Liste de matériel .................................................................................................................................................................................... 3

7 Échantillonnage ..................................................................................................................................................................................................... 3

8 Préparation du matériau pour essai ................................................................................................................................................ 4

8.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 4

8.2 Détermination de la teneur en matière sèche .............................................................................................................. 4

8.3 Pesée ................................................................................................................................................................................................................ 4

8.4 Désintégration ......................................................................................................................................................................................... 5

9 Détermination du nombre total de bactéries et du nombre de spores bactériennes ..................5

9.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 5

9.2 Ensemencement relatif au nombre total de bactéries .......................................................................................... 5

9.3 Ensemencement relatif au nombre de spores ............................................................................................................. 6

9.4 Incubation ................................................................................................................................................................................................... 6

10 Dénombrement des colonies ................................................................................................................................................................... 6

11 Calcul et expression des résultats ...................................................................................................................................................... 7

11.1 Calcul ............................................................................................................................................................................................................... 7

11.2 Interprétation .......................................................................................................................................................................................... 8

11.3 Rapport .......................................................................................................................................................................................................... 8

12 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................... 8

Annexe A (informative) Liquide de dilution ................................................................................................................................................. 9

Annexe B (informative) Fidélité..............................................................................................................................................................................10

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................14

© ISO 2014 – Tous droits réservés iii
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ISO 8784-1:2014(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne

la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.

iso.org/directives).

L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les

références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration

du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par

l’ISO (voir www.iso.org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour

information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.

Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de

la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant

les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations

supplémentaires.

Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 6, Papiers, cartons et pâtes,

sous-comité SC 2, Méthodes d’essais et spécifications de qualité des papiers et cartons.

Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 8784-1:2005), qui a fait l’objet d’une

révision technique.

La deuxième édition s’appliquait aux levures et aux moisissures ainsi qu’aux bactéries. Les principales

modifications apportées par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:

— cette troisième édition n’est applicable qu’aux bactéries et aux spores bactériennes, elle ne s’applique

plus aux levures ni aux moisissures;

— la température d’incubation est passée de (37 °C ± 1 °C) à (32 °C ± 2 °C) (9.4);

— deux déterminations sont réalisées en parallèle (Articles 8 et 9);

— le résultat peut être exprimé en fonction de la «masse reçue» en plus d’être exprimé en fonction de

la masse sèche (8.2, 11.1 et Article 12).

L’ISO 8784 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Pâtes, papiers et cartons —

Analyse microbiologique:

— Partie 1: Dénombrement des bactéries et spores bactériennes basé sur la désintégration

iv © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 8784-1:2014(F)
Introduction

La présente partie de l’ISO 8784, qui traite de l’analyse microbiologique de la pâte commerciale sèche,

[1]

du papier et du carton, est dans ses grandes lignes fondée sur l’ISO 4833 , malgré des conditions

différentes. Toutefois, elle fournit des précisions particulières lorsque cela s’avère nécessaire. Elle est

destinée à l’estimation du nombre d’unités formant colonie (UFC) de bactéries aérobies et de spores

bactériennes.

Compte tenu de la précision des techniques exigées dans les modes opératoires aseptiques, des résultats

reproductibles de bonne qualité peuvent être garantis uniquement par un personnel qualifié en

microbiologie.
© ISO 2014 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 8784-1:2014(F)
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbienne —
Partie 1:
Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes
basé sur la désintégration
1 Domaine d’application

La présente partie de l’ISO 8784 spécifie une méthode de détermination du nombre total d’unités

formant colonie de bactéries et de spores bactériennes, dans la pâte commerciale sèche, le papier et le

carton, après désintégration. Le dénombrement se rapporte à un milieu spécifique.

2 Références normatives

Les documents suivants, en tout ou partie, sont référencés de façon normative dans le présent document

et sont indispensables pour son application. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.

Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les

éventuels amendements).

ISO 186:2002, Papier et carton — Échantillonnage pour déterminer la qualité moyenne.

ISO 7213:1981, Pâtes — Échantillonnage pour essais.

ISO 638:2008, Papiers, cartons et pates — Détermination de la teneur en matières sèches — Méthode par

séchage à l’étuve.
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

3.1
bactérie

organisme microscopique unicellulaire ayant une structure cellulaire de type procaryote, qui se reproduit

par division et peut croître dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784

3.2
spore bactérienne
structure hautement résistante en sommeil
EXEMPLE Endospore provenant d’un genre particulier de bactérie.
3.3
nombre total de bactéries

nombre d’unités formant colonie (UFC) de bactéries et de spores bactériennes, formées après incubation

dans un milieu de culture type, dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784

3.4
nombre de spores

nombre d’unités formant colonie (UFC) de spores bactériennes, formées après incubation dans un milieu

de culture type, dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784

© ISO 2014 – Tous droits réservés 1
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ISO 8784-1:2014(F)
4 Principe

La présente méthode d’ensemencement en profondeur implique un dénombrement des colonies dans

un milieu de culture type. Une suspension fibreuse préparée à partir d’échantillons de papier, de carton

ou de pâte est ensemencée dans une gélose. Deux déterminations sont réalisées en parallèle. Pour le

dénombrement de spores bactériennes, la suspension fibreuse est chauffée avant l’ensemencement

pendant 10 min à 80 °C. Les boîtes sont incubées à 32 °C pendant 48 h. Le nombre total de bactéries ou

de spores bactériennes est obtenu par dénombrement des colonies formées dans la gélose.

La valeur moyenne des deux déterminations réalisées en parallèle est calculée et les résultats sont

exprimés en nombre d’UFC par gramme d’échantillon.
5 Milieux de culture et diluants
5.1 Généralités

Tous les substrats et diluants doivent être convenablement stérilisés. Lors de la préparation du milieu de

culture, s’assurer que les ingrédients sont entièrement dissous en les mélangeant pendant qu’ils chauffent

[2]

avant de les répartir dans des récipients appropriés pour la stérilisation. Voir l’ISO 11133 relative à

l’assurance qualité et aux lignes directrices pour la préparation et la production de milieux de culture.

5.2 Eau
[2]

Lorsque de l’eau est mentionnée dans une formule, utiliser de l’eau distillée ou purifiée; voir l’ISO 11133 .

5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de bactéries et au nombre de spores

Les milieux de culture doivent être préparés de la manière suivante ou selon les instructions du fabricant

à partir de milieux de culture déshydratés disponibles dans le commerce. Les milieux prêts à l’emploi

peuvent être utilisés lorsque leur composition est comparable à celle donnée dans la présente partie de

[2]
l’ISO 8784. Pour les essais de performance des milieux, voir l’ISO 11133 .
Composition par litre de la gélose pour dénombrement:
Tryptone 5,0 g
Extrait de levure 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Gélose 15,0 g
Eau 1 000 ml
pH final 7,0 ± 0,2

En l’absence de gélose pour dénombrement, la gélose à l’extrait de glucose tryptone (TGE) peut être

utilisée (voir A.3). L’utilisation de TGE comme autre milieu de culture est admise si elle donne des

résultats comparables au milieu de culture type. Le milieu de culture utilisé doit être consigné dans le

rapport d’essai (voir Article 12).
5.4 Diluants

Il est préférable d’utiliser la solution de Ringer (voir A.1) bien que d’autres solutions isotoniques puissent

être utilisées. Les pastilles Ringer sont disponibles dans le commerce.

Pour faciliter la libération des cellules par les fibres, il est recommandé d’ajouter 20 µl de Tween 80

(voir A.2) par litre à la solution de Ringer, avant la stérilisation par autoclave.

2 © ISO 2014 – Tous droits réservés
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ISO 8784-1:2014(F)

Le diluant utilisé et l’ajout éventuel de Tween 80 doivent être consignés dans le rapport d’essai

(voir Article 12).
6 Appareillage et matériel
6.1 Généralités

Tout le matériel de laboratoire et les parties du matériel en contact direct avec l’échantillon et le diluant

ou le milieu de culture doivent être stérilisés.
[4]

NOTE Pour des conseils sur le matériel de microbiologie courant, voir l’ISO 7218 .

6.2 Liste de matériel

6.2.1 Utiliser du matériel de laboratoire ordinaire pour microbiologie, et le matériel suivant.

6.2.2 Matériel d’emballage approprié, par exemple feuille d’aluminium (non revêtue et inerte),

enveloppes prêtes à l’emploi de dimensions différentes ou sacs plastiques auto-fermants, tous disponibles

dans le commerce.

6.2.3 Désintégrateur, mélangeur électrique à grande vitesse doté d’un récipient en métal (de préférence

en acier inoxydable) ou en verre pouvant être stérilisé.

NOTE Un autre système d’homogénéisation d’efficacité équivalente peut être utilisé.

6.2.4 Incubateur, permettant de maintenir une température constante de 32 °C ± 2 °C.

6.2.5 Boîtes de Petri, d’un diamètre de 90 mm (normalisé) ou de 140 mm à 150 mm (autre possibilité).

6.2.6 Pipettes, d’un volume approprié, à large ouverture.

La largeur de l’ouverture doit être assez grande pour qu’une suspension fibreuse à 1 % puisse facilement

couler dans l’embout de la pipette.
NOTE 10 ml ou 50 ml représentent un volume approprié.
6.2.7 Bain-marie, permettant de maintenir une température de 80 °C ± 2 °C.

6.2.8 Matériel de dénombrement des colonies ou dispositif grossissant, d’un grossissement

compris entre 1,5 x et 2,5 x.

NOTE L’utilisation de lentilles supplémentaires peut être nécessaire pour augmenter le grossissement

jusqu’à 10 fois, afin de faciliter le dénombrement des unités formant des colonies bactériennes se présentant sous

forme de points, et aussi pour garantir qu’aucun autre élément à l’exception des colonies de bactéries n’est compté

(voir Article 10).
6.2.9 Balance, précise à 0,01 g.
6.2.10 Unité de stérilisation, autoclave permettant de stériliser à 121 °C.
7 Échantillonnage

S’assurer que le mode opératoire d’échantillonnage est réalisé en utilisant des techniques d’asepsie.

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ISO 8784-1:2014(F)

Si l’échantillon représente un lot de papier ou de carton, l’échantillonnage doit être conforme à

l’ISO 186:2002. Découper plusieurs couches supérieures dans chaque unité de papier ou de carton à

échantillonner et les retirer pour éliminer la contamination en surface. Utiliser un couteau stérile et

découper plusieurs feuilles de l’échantillon de papier ou de carton, en produisant une pile. Retirer la

feuille supérieure.

Si l’échantillon représente un lot de pâte, l’échantillonnage doit être conforme à l’ISO 7213:1981. Retirer

plusieurs feuilles du dessus de chaque liasse de chaque unité de pâte commerciale sèche pour éliminer

la contamination en surface.

Dans les autres cas, échantillonner un nombre suffisant d’unités pour que le matériau pour essai soit

représentatif du papier, du carton ou de la pâte commerciale sèche à soumettre à essai. Pour tous les

modes opératoires d’échantillonnage ou d’analyse, s’assurer que le matériau pour essai prélevé est

représentatif de l’échantillon reçu.

Dans l’idéal, il convient qu’un échantillon de pâte commerciale sèche, de papier ou de carton contienne

au moins quatre feuilles (dont au moins deux feuilles pour les essais et deux servant à la protection),

ayant chacune une dimension minimale de 200 mm × 250 mm.

NOTE Pour le carton ou un matériau plus épais, il se peut qu’une seule feuille suffise pour chaque détermination

en parallèle. Pour le papier plus fin, plus de deux feuilles peuvent être utilisées pour chaque détermination en parallèle.

Après l’échantillonnage, envelopper le matériau pour essai non exposé dans un emballage approprié (6.2.2).

8 Préparation du matériau pour essai
8.1 Généralités
Il est préférabl
...

PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 8784-1
ISO/TC 6/SC 2 Secrétariat: SIS
Début de vote Vote clos le
2011-11-02 2012-04-02

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION  МЕЖДУНАРОДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ  ORGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION

Pâte, papier et carton — Analyse microbienne —
Partie 1:
Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé
sur la désagrégation
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 3: Enumeration of bacteria and bacterial spores based on disintegration
[Révision de la deuxième édition (ISO 8784-1:2005)]
ICS 07.100.99; 85.040; 85.060

Pour accélérer la distribution, le présent document est distribué tel qu'il est parvenu du

secrétariat du comité. Le travail de rédaction et de composition de texte sera effectué au

Secrétariat central de l'ISO au stade de publication.

To expedite distribution, this document is circulated as received from the committee

secretariat. ISO Central Secretariat work of editing and text composition will be undertaken at

publication stage.

CE DOCUMENT EST UN PROJET DIFFUSÉ POUR OBSERVATIONS ET APPROBATION. IL EST DONC SUSCEPTIBLE DE MODIFICATION ET NE

PEUT ETRE CITE COMME NORME INTERNATIONALE AVANT SA PUBLICATION EN TANT QUE TELLE.

OUTRE LE FAIT D'ETRE EXAMINES POUR ETABLIR S'ILS SONT ACCEPTABLES A DES FINS INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET

COMMERCIALES, AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES PROJETS DE NORMES INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ETRE

CONSIDERES DU POINT DE VUE DE LEUR POSSIBILITE DE DEVENIR DES NORMES POUVANT SERVIR DE REFERENCE DANS LA

REGLEMENTATION NATIONALE.

LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS, NOTIFICATION DES DROITS DE PRO-

PRIÉTÉ DONT ILS AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.

© Organisation Internationale de Normalisation, 2011
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ISO/DIS 8784-1
Notice de droit d'auteur

Ce document de l'ISO est un projet de Norme internationale qui est protégé par les droits d'auteur de l'ISO.

Sauf autorisé par les lois en matière de droits d'auteur du pays utilisateur, aucune partie de ce projet ISO ne

peut être reproduite, enregistrée dans un système d'extraction ou transmise sous quelque forme que ce soit

et par aucun procédé électronique ou mécanique, y compris la photocopie, les enregistrements ou autres,

sans autorisation écrite préalable.

Les demandes d'autorisation de reproduction doivent être envoyées à l'ISO à l'adresse ci-après ou au

comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
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Les contrevenants pourront être poursuivis.
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ISO/DIS 8784-1
Sommaire Page

Avant-propos .....................................................................................................................................................iv

Introduction.........................................................................................................................................................v

1 Domaine d'application ..........................................................................................................................1

2 Références normatives.........................................................................................................................1

3 Termes et définitions ............................................................................................................................1

4 Principe..................................................................................................................................................2

5 Milieux de culture et diluants ...............................................................................................................2

5.1 Généralités .............................................................................................................................................2

5.2 Eau..........................................................................................................................................................2

5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de bactéries et relatifs au nombre total de

spores.....................................................................................................................................................2

5.4 Diluants...................................................................................................................................................2

6 Appareillage et matériel........................................................................................................................3

6.1 Généralités .............................................................................................................................................3

6.2 Liste de matériel ....................................................................................................................................3

7 Echantillonnage.....................................................................................................................................3

8 Préparation du matériau pour essai....................................................................................................4

8.1 Généralités .............................................................................................................................................4

8.2 Détermination de la teneur en matière sèche.....................................................................................4

8.3 Pesée ......................................................................................................................................................4

8.4 Désagrégation........................................................................................................................................4

9 Détermination du nombre total de bactéries et du nombre de spores............................................5

9.1 Généralités .............................................................................................................................................5

9.2 Ensemencement relatif au nombre total de bactéries.......................................................................5

9.3 Ensemencement relatif au nombre de spores ...................................................................................5

9.4 Incubation ..............................................................................................................................................6

10 Dénombrement des colonies ...............................................................................................................6

11 Calcul et expression des résultats ......................................................................................................6

11.1 Calcul......................................................................................................................................................6

11.2 Interprétation.........................................................................................................................................8

11.3 Rapport...................................................................................................................................................8

12 Rapport d’essai......................................................................................................................................8

Annexe A (informative) Liquide de dilution......................................................................................................9

A.1 Solution de Ringer.................................................................................................................................9

A.2 Surfactant non ionique .........................................................................................................................9

A.3 Extrait de tryptone glucose ..................................................................................................................9

Annexe B (informative) Fidélité .......................................................................................................................10

B.1 Généralités ...........................................................................................................................................10

B.2 Recommandations ..............................................................................................................................10

B.2.1 Echantillons de référence certifiés....................................................................................................10

[1]

B.2.2 Données de fidélité selon l’ISO 4833 ............................................................................................10

B.2.3 Données publiées dans l’ISO 4833....................................................................................................10

Bibliographie.....................................................................................................................................................12

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ISO/DIS 8784-1
Avant-propos

L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de

normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée

aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du

comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non

gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec

la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.

Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,

Partie 2.

La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes

internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur

publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres

votants.

L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne

pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.

L'ISO 8784-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 6, Papiers, cartons et pâtes, sous-comité SC 2,

Méthodes d'essais et spécifications de qualité des papiers et cartons.

Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 8784-1:2005), qui a fait l’objet d’une

révision technique. La deuxième édition s’appliquait aux levures et aux moisissures ainsi qu’aux bactéries.

Dans le texte révisé, le contenu a été divisé en deux parties, dans la Partie 1, les bactéries et les spores

bactériennes sont dénombrées après désagrégation, et dans la Partie 2, les levures et les moisissures sont

dénombrées en surface.

L'ISO 8784 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Pâtes, papiers et cartons —

Analyse microbiologique:

⎯ Partie 1 : Dénombrement des bactéries et spores bactériennes, basé sur la désagrégation

⎯ Partie 2 : Dénombrement des levures et des moisissures en surface
1) La Partie 2 est en cours d’élaboration et n’est pas encore publiée.
iv © ISO 2011 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 8784-1
Introduction

La présente partie de l’ISO 8784, qui traite de l’analyse microbiologique de la pâte commerciale sèche, du

[1]

papier et du carton, est dans ses grandes lignes fondée sur l’ISO 4833 , malgré des conditions différentes.

Toutefois, elle fournit des précisions particulières lorsque cela s’avère nécessaire. Elle est destinée à

l’estimation de colonies formant unité, CFU, des bactéries aérobies et des spores bactériennes.

Compte tenu de la précision des techniques exigées dans les modes opératoires aseptiques, des résultats

reproductibles de bonne qualité peuvent être garantis uniquement par un personnel qualifié en microbiologie.

© ISO 2011 – Tous droits réservés v
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PROJET DE NORME INTERNATIONALE ISO/DIS 8784-1
Pâte, papier et carton — Analyse microbienne —
Partie 1:
Dénombrement des bactéries et des spores bactériennes basé
sur la désagrégation
1 Domaine d'application

La présente partie de l’ISO 8784 spécifie une méthode de détermination du nombre total de colonies de

bactéries et de spores bactériennes formant unité, dans la pâte commerciale, le papier et le carton, après

désagrégation. Le dénombrement se rapporte à un milieu spécifique.
2 Références normatives

Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les

références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du

document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).

ISO 186:2002, Papier et carton — Échantillonnage pour déterminer la qualité moyenne.

ISO 7213:1981, Pâtes — Échantillonnage pour essais.

ISO 638:2008, Papiers, cartons et pâtes — Détermination de la teneur en matières sèches — Méthode par

séchage à l'étuve.
3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.

3.1
bactérie

organisme microscopique unicellulaire ayant une structure cellulaire de type procaryote, qui se reproduit par

division et pouvant croître dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784

3.2
spore bactérienne

structure hautement résistante en sommeil, par exemple endospore provenant d’un genre particulier de

bactérie
3.3
nombre total de bactéries

nombre de colonies de bactéries et de spores bactériennes formant unité (CFU), formées après incubation

dans un milieu de culture type, dans des conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784

3.4
nombre de spores

nombre de colonies formant unité (CFU), de spores bactériennes formées après incubation dans un milieu de

culture type, dans les conditions d’essai spécifiées dans la présente partie de l’ISO 8784

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ISO/DIS 8784-1
4 Principe

La présente méthode consistant à transvaser dans une boîte de Petri implique un dénombrement des

colonies dans un milieu de culture type. Une suspension fibreuse préparée à partir d’échantillons de papier,

de carton ou de pâte est ensemencée dans de la gélose. Pour le dénombrement de spores bactériennes, la

suspension fibreuse est chauffée avant l’ensemencement pendant 10 min à 80 °C. Les boîtes subissent une

incubation à 32 °C pendant 48 h. Le nombre total de bactéries ou de spores bactériennes est obtenu par

dénombrement en comptant les colonies formées dans la gélose. Les résultats sont exprimés en nombre de

CFU par gramme d’échantillon.
5 Milieux de culture et diluants
5.1 Généralités

Tous les substrats et diluants doivent être convenablement stérilisés. Lors de la préparation du milieu de

culture, s’assurer que les ingrédients sont entièrement dissous en mélangeant pendant qu’ils chauffent avant

[2] [3]

de les répartir dans des récipients appropriés pour stérilisation. Voir l’ISO/TS 11133-1 et l’ISO/TS 11133-2

relatives à l’assurance qualité et aux lignes directrices pour la préparation et la production de milieux de

culture.
5.2 Eau

Lorsque de l’eau est mentionnée dans une formule, utiliser de l’eau distillée ou purifiée, voir

[2]
l’ISO/TS 11133-1 .

5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de bactéries et relatifs au nombre total de

spores

Les milieux de culture doivent être préparés de la manière suivante ou selon les instructions du fabricant à

partir de milieux de culture déshydratés disponibles dans le commerce. Les milieux prêts à l’emploi peuvent

être utilisés lorsque leur composition est comparable à celle donnée dans la présente partie de l’ISO 8784.

[3]
Pour les essais de performance des milieux, voir l’ISO/TS 11133-2 .
Composition par litre de la gélose pour dénombrement :
Tryptone 5,0 g
Extrait de levure 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Gélose 15,0 g
Eau 1000 ml
pH final 7,0 ± 0,2

En l’absence de gélose pour dénombrement, la gélose à l’extrait de glucose tryptone (TGE) peut être utilisée

(voir A.3). L’utilisation de TGE comme autre milieu de culture est admis s’il donne des résultats comparables

au milieu de culture type. Le milieu de culture utilisé doit être consigné dans le rapport d’essai (voir 12).

5.4 Diluants

Il est préférable d’utiliser la solution de Ringer (voir A.1) bien que d’autres solutions isotoniques puissent être

utilisées. Des pastilles Ringer sont disponibles dans le commerce.
2 © ISO 2011 – Tous droits réservés
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ISO/DIS 8784-1

Pour faciliter la libération des cellules par les fibres, il est recommandé d’ajouter 20 µl de Tween 80 (voir A.2)

par litre à la solution de Ringer, avant la stérilisation par autoclave.

Le diluant utilisé et l’ajout éventuel de Tween 80 doivent être consignés dans le rapport d’essai (voir 12).

6 Appareillage et matériel
6.1 Généralités

Tout le matériel de laboratoire et les parties du matériel en contact direct avec l’échantillon et le diluant ou le

milieu de culture doivent être stérilisés.
6.2 Liste de matériel

6.2.1 Utiliser du matériel de laboratoire ordinaire pour microbiologie, et le matériel suivant.

6.2.2 Matériel d’emballage approprié, par exemple feuille d’aluminium (non revêtue et inerte), enveloppes

prêtes à l’emploi de dimensions différentes ou sacs plastiques auto-fermants ; tous disponibles dans le

commerce.

6.2.3 Désintégrateur, mélangeur électrique à grande vitesse doté d’un récipient en métal (de préférence

en acier inoxydable) ou en verre pouvant être stérilisé.
NOTE Un autre système d’homogénéisation d’efficacité équ
...

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