ISO 11866-1:2005

Milk and milk products — Enumeration of presumptive Escherichia coli — Part 1: Most probable number technique using 4-methylumbelliferyl-beta-D-glucuronide (MUG)

ISO 11866-1|IDF 170-1:2005 specifies a combined method for the enumeration of presumptive Escherichia coli and of presumptive coliforms by means of a culture technique involving a liquid medium with MUG, and calculation of the number of presumptive Escherichia coli and/or coliforms per gram or per millilitre by the most probable number (MPN) technique after incubation at 30 °C. The method is applicable to milk, liquid milk products, dried milk, dried sweet whey, dried buttermilk, lactose, acid casein, lactic casein and rennet casein, caseinate and dried acid whey, cheese and processed cheese, butter, frozen milk products (including edible ices), and custard, desserts and cream. The method specified in ISO 11866-1|IDF 170-1:2005 is preferred for samples in which comparatively low numbers of presumptive Escherichia coli and/or other presumptive coliforms (less than 100 per gram or 10 per millilitre) are suspected.

Lait et produits laitiers — Dénombrement d'Escherichia coli présumés — Partie 1: Technique du nombre le plus probable avec utilisation de 4-méthylumbelliféryl-bêta-D-glucuronide (MUG)

L'ISO 11866-1|FIL 170-1:2005 spécifie une méthode pour le dénombrement d'Escherichia coli présumés et des coliformes présumés, au moyen de la technique de culture en milieu liquide contenant du 4-méthylumbellyféryl-bêta-d-glucuronide (MUG) et calcul du nombre d'Escherichia coli présumés et/ou des coliformes par gramme ou par millilitre, par la technique du nombre le plus probable (NPP) après incubation à 30 °C. Cette méthode est applicable au lait et aux produits laitiers liquides, au lait sec, au lactosérum sucré sec, au babeurre sec et au lactose, à la caséine acide, la caséine lactique et la caséine présure, aux caséinates et au lactosérum acide sec, au fromage et aux fromages fondus, au beurre, aux produits laitiers congelés (y compris les glaces de consommation), à la crème anglaise, aux desserts et à la crème. La méthode spécifiée dans l'ISO 11866-1|FIL 170-1:2005 est la méthode recommandée pour les échantillons supposés contenir un nombre relativement faible d'Escherichia coli présumés et/ou autres coliformes présumés (moins de 100 par gramme ou 10 par millilitre).

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 22-Nov-2005
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• ICS: 67.100.01 - Milk and milk products in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 9093 - International Standard confirmed
• Completion Date: 23-Sep-2020

Relations

• Revises: ISO 11866-2:1997 - Milk and milk products — Enumeration of presumptive Escherichia coli — Part 2: Most probable number technique using 4-methylumbelliferyl-beta-D-glucuronide (MUG)
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 11866-1
IDF
170-1
Second edition
2005-12-01

Milk and milk products — Enumeration
of presumptive Escherichia coli —
Part 1:
Most probable number technique using
4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide
(MUG)
Lait et produits laitiers — Dénombrement d'Escherichia coli
présumés —
Partie 1: Technique du nombre le plus probable avec utilisation de
4-méthylumbelliféryl-β-D-glucuronide (MUG)





Reference numbers
ISO 11866-1:2005(E)
IDF 170-1:2005(E)
©
ISO and IDF 2005

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ISO 11866-1:2005(E)
IDF 170-1:2005(E)
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and IDF national committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the
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address below.
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Published in Switzerland

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ISO 11866-1:2005(E)
IDF 170-1:2005(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 11866-1⎪IDF 170-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, in collaboration with the International Dairy Federation (IDF). It is being
published jointly by ISO and IDF.
This edition of ISO 11866-1⎪IDF 170-1 cancels and replaces ISO 11866-2:1997, of which it constitutes a
minor revision.
ISO 11866-1:1997 has been cancelled and replaced by ISO 7251:2005, Microbiology of food and animal
feeding stuffs — Horizontal method for the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli — Most
probable number technique.
ISO 11866⎪IDF 170 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products —
Enumeration of presumptive Escherichia coli:
⎯ Part 1: Most probable number technique using 4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide (MUG)
⎯ Part 2: Colony-count technique at 44 °C using membranes

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ISO 11866-1:2005(E)
IDF 170-1:2005(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in the development of
standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
the IDF National Committees casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 11866-1⎪IDF 170-1 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Group of Experts on Pathogenic contaminants (E102),
under the aegis of its chairman, Mrs R. Lodi (IT).
This edition of ISO 11866-1⎪IDF 170-1 cancels and replaces the former part 2 of IDF 170A:1999, while the
former part 1 has been replaced by ISO 7251:2005.
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ISO 11866-1:2005(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 170-1:2005(E)

Milk and milk products — Enumeration of presumptive
Escherichia coli —
Part 1:
Most probable number technique using 4-methylumbelliferyl-
β-D-glucuronide (MUG)
1 Scope
This part of ISO 11866⎪IDF 170 specifies a combined method for the enumeration of presumptive Escherichia
coli and of presumptive coliforms by means of a culture technique involving a liquid medium with MUG, and
calculation of the number of presumptive Escherichia coli and/or coliforms per gram or per millilitre by the
most probable number (MPN) technique after incubation at 30 °C.
It is a more rapid method than that described in ISO 7251 as the incubation time is reduced (omission of
several enrichment steps).
The method is applicable to
⎯ milk, liquid milk products,
⎯ dried milk, dried sweet whey, dried buttermilk, lactose,
⎯ acid casein, lactic casein and rennet casein,
⎯ caseinate and dried acid whey,
⎯ cheese and processed cheese,
⎯ butter,
⎯ frozen milk products (including edible ices), and
⎯ custard, desserts and cream.
The method specified in this part of ISO 11866⎪IDF 170 is preferred for samples in which comparatively low
numbers of presumptive Escherichia coli and/or other presumptive coliforms (less than 100 per gram or 10 per
millilitre) are suspected.
CAUTION — The applicability of this part of ISO 11866⎪IDF 170 is limited by the susceptibility of the
method to a large degree of variability. The method should, therefore, be applied and the results
interpreted in the light of the information given in Clause 12.
NOTE The methods described in ISO 4831 apply for the enumeration of coliforms for reference purposes.
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ISO 11866-1:2005(E)
IDF 170-1:2005(E)
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO 8261⎪IDF 122, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial
suspensions and decimal dilutions for microbiological examination
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
presumptive Escherichia coli
bacteria which at 30 °C cleave 4-methylumbelliferyl-β-D-glucuronide (MUG), with the production of
fluorescence, and which produce indole from tryptophan, under the conditions specified in this part of
ISO 11866⎪IDF 170
3.2
coliforms
bacteria which at 30 °C cause fermentation of lactose with the production of gas under the conditions
specified in this part of ISO 11866⎪IDF 170
4 Principle
4.1 Three tubes of double-strength liquid selective enrichment medium are inoculated with a specified
quantity of test sample if the initial product is liquid, or with a specified quantity of the initial suspension in the
case of other products.
4.2 Three tubes of single-strength liquid selective enrichment medium are inoculated with a specified
quantity of test sample if the initial product is liquid, or with a specified quantity of the initial suspension in the
case of other products.
Then, under the same conditions, the single-strength medium is inoculated with specified quantities of decimal
dilutions of the test sample or of the initial suspension.
4.3 The tubes of double- and single-strength medium are incubated at 30 °C for 24 h to 48 h.
4.4 Those tubes showing fluorescence and formation of indole are identified as being positive for
presumptive Escherichia coli.
4.5 Those tubes showing gas formation are identified as being positive for presumptive coliforms.
4.6 The MPN index is determined from the numbers of positive tubes (4.4) of selected dilutions by means of
an MPN table (Annex A) and the most probable number (MPN) of presumptive Escherichia coli per gram or
per millilitre of the original sample is calculated.
4.7 The MPN index is determined from the numbers of positive tubes (4.5) of selected dilutions by means of
an MPN table (Annex A) and the most probable number (MPN) of coliforms per gram or per millilitre of the
original sample is calculated.
2 © ISO and IDF 2005 – All rights reserved

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ISO 11866-1:2005(E)
IDF 170-1:2005(E)
5 Dilution fluid, culture media and reagents
5.1 General
For current laboratory practice, see ISO 7218 and ISO 8261⎪IDF 122.
If the prepared culture media and reagents are not used immediately, they shall, unless otherwise stated, be
stored in the dark at a temperature between 0 °C and +5 °C for no longer than 1 month, under conditions
which do not produce any change in their composition.
5.2 Dilution fluid
See ISO 8261⎪IDF 122.
5.3 Culture media
5.3.1 Modified lauryl sulfate tryptose broth (selective enrichment medium)
5.3.1.1 Composition
a) b)

Double-strength medium Single-strength medium
Tryptose 40,0 g 20,0 g
Lactose 10,0 g 5,0 g
Dipotassium hydrogen phosphate (K HPO ) 5,5 g 2,75 g
2 4
Potassium dihydrogen phosphate (KH PO ) 5,5 g 2,75 g
2 4
Sodium chloride 10,0 g 5,0 g
Sodium lauryl sulfate [CH (CH ) OSO Na] 0,2 g 0,1 g
3 2 11 3
4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide (MUG) 0,2 g 0,1 g
Tryptophan 2,0 g 1,0 g
Water 1 000 ml 1 000 ml
5.3.1.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water, by heating if necessary.
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization it is 6,8 at 25 °C.
Transfer the media in quantities of 10 ml to tubes of dimensions 16 mm × 160 mm (6.2) containing inverted
Durham tubes (6.3) in the case of single-strength medium, and to test tubes of dimensions 20 mm × 200 mm
(6.2) containing inverted Durham tubes (6.3) in the case of the double-strength medium.
Sterilize for 15 min in the autoclave (6.1) set at 121 °C.
The inverted Durham tubes shall not contain air bubbles after sterilization.
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ISO 11866-1:2005(E)
IDF 170-1:2005(E)
5.4 Indole reagent (Kovacs reagent)
5.4.1 Composition
4-Dimethylaminobenzaldehyde 5,0 g
2-Methylbutan-1-ol or pentan-1-ol 75,0 ml
Hydrochloric acid (ρ = 1,18 g/ml to 1,19 g/ml 25,0 ml
20
5.4.2 Preparation
Dissolve the 4-dimethylaminobenzaldehyde in the alcohol by heating gently to between 50 °C and 55 °C by
means of the water bath (6.5).
Cool and add the hydrochloric acid.
Protect from light and store at approximately 4 °C. The colour of the reagent shall be light yellow to light brown.
5.5 Sodium hydroxide solution, c(NaOH) ≈ 0,5 mol/l.
5.5.1 Composition
Sodium hydroxide 2 g
Water 100 ml
5.5.2 Preparation
Dissolve the sodium hydroxide in the water.
6 Apparatus and glassware
For general requirements, see ISO 7218 and ISO 8261⎪IDF 12
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 11866-1
FIL
170-1
Deuxième édition
2005-12-01

Lait et produits laitiers — Dénombrement
d'Escherichia coli présumés —
Partie 1:
Technique du nombre le plus probable
avec utilisation de 4-méthylumbelliféryl-
β-D-glucuronide (MUG)
Milk and milk products — Enumeration of presumptive Escherichia coli —
Part 1: Most probable number technique using 4-methylumbelliferyl-
β-D-glucuronide (MUG)





Numéros de référence
ISO 11866-1:2005(F)
FIL 170-1:2005(F)
©
ISO et FIL 2005

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ISO 11866-1:2005(F)
FIL 170-1:2005(F)
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surviendrait un problème d'utilisation, veuillez en informer le Secrétariat central de l'ISO à l'adresse donnée ci-dessous.


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quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
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ISO copyright office Fédération Internationale de Laiterie
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E-mail [e-mail] E-mail [e-mail]
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Publié en Suisse

ii © ISO et FIL 2005 – Tous droits réservés

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ISO 11866-1:2005(F)
FIL 170-1:2005(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 11866-1⎪FIL 170-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL). Elle est publiée
conjointement par l'ISO et la FIL.
Cette édition de l'ISO 11866-1⎪FIL 170-1 annule et remplace l'ISO 11866-2:1997, dont elle constitue une
révision mineure.
L'ISO 11866-1:1997 a été annulée et remplacée par l'ISO 7251:2005, Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour la recherche et le dénombrement d'Escherichia coli présumés — Technique du nombre le
plus probable.
L'ISO 11866⎪FIL 170 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits
laitiers — Dénombrement d'Escherichia coli présumés:
⎯ Partie 1: Technique du nombre le plus probable avec utilisation de 4-méthylumbelliféryl-β-D-glucuronide
(MUG)
⎯ Partie 2: Technique par comptage des colonies obtenues sur membranes à 44 °C
© ISO et FIL 2005 – Tous droits réservés iii

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ISO 11866-1:2005(F)
FIL 170-1:2005(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour
l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux votants de la FIL.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 11866-1⎪FIL 170-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL). Elle est publiée
conjointement par l'ISO et la FIL.
L'ensemble des travaux a été confié au groupe d'experts mixte ISO/FIL/AOAC chargé des Contaminants
pathogènes (E102), sous la conduite de sa présidente, Mme R. Lodi (IT).
Cette édition de l'ISO 11866-1⎪FIL 170-1 annule et remplace l'ancienne partie 2 de la FIL 170A:1999, dont
l'ancienne partie 1 a été remplacée par l'ISO 7251:2005.

iv © ISO et FIL 2005 – Tous droits réservés

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ISO 11866-1:2005(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 170-1:2005(F)

Lait et produits laitiers — Dénombrement d'Escherichia coli
présumés —
Partie 1:
Technique du nombre le plus probable avec utilisation de
4-méthylumbelliféryl-β-D-glucuronide (MUG)
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 11866⎪FIL 170 spécifie une méthode pour le dénombrement d'Escherichia coli
présumés et des coliformes présumés, au moyen de la technique de culture en milieu liquide contenant du
MUG et calcul du nombre d'Escherichia coli présumés et/ou des coliformes par gramme ou par millilitre, par la
technique du nombre le plus probable (NPP) après incubation à 30 °C.
Cette méthode est plus rapide que celle décrite dans l'ISO 7251 étant donné que le temps d'incubation est
réduit (omission de plusieurs étapes d'enrichissement).
Cette méthode est applicable aux
⎯ lait et produits laitiers liquides;
⎯ lait sec, lactosérum sucré sec, babeurre sec et lactose;
⎯ caséine acide, caséine lactique et caséine présure;
⎯ caséinates et lactosérum acide sec;
⎯ fromage et fromages fondus;
⎯ beurre;
⎯ produits laitiers congelés (y compris les glaces de consommation);
⎯ crème anglaise, desserts et crème.
La méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 11866⎪FIL 170 est la méthode recommandée pour les
échantillons supposés contenir un nombre relativement faible d'Escherichia coli présumés et/ou autres
coliformes présumés (moins de 100 par gramme ou 10 par millilitre).
ATTENTION — Certaines espèces pathogènes d'Escherichia coli ne se développent pas à 44 °C. Les
possibilités d'application de la présente partie de l'ISO 11866⎪FIL 170 sont limitées du fait que cette
méthode est sujette à de grandes variations. Il est recommandé d'appliquer cette méthode et
d'interpréter les résultats à la lumière des renseignements donnés à l'Article 12.
NOTE Pour référence, les méthodes décrites dans l'ISO 4831 s'appliquent pour le dénombrement des coliformes.
© ISO et FIL 2005 – Tous droits réservés 1

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ISO 11866-1:2005(F)
FIL 170-1:2005(F)
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Recommandations et règles générales pour les examens
microbiologiques
ISO 8261⎪FIL 122, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons
pour essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
Escherichia coli présumés
bactéries qui, à 30 °C, séparent le 4-méthylumbelliféryl-β-D-glucuronide (MUG) en émettant une fluorescence
et qui produisent de l'indole à partir du tryptophane, dans les conditions spécifiées dans la présente partie de
l'ISO 11866⎪FIL 170
3.2
coliformes
bactéries qui, à 30 °C fermentent le lactose avec production de gaz, lorsque l'essai est effectué selon la
méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 11866⎪FIL 170
4 Principe
4.1 Ensemencement de trois tubes de milieu sélectif liquide d'enrichissement double concentration avec
une quantité déterminée de l'échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité
déterminée de suspension mère dans le cas d'autres produits.
4.2 Ensemencement de trois tubes de milieu sélectif liquide d'enrichissement simple concentration avec
une quantité déterminée de l'échantillon pour essai si le produit à examiner est liquide, ou avec une quantité
déterminée de suspension mère dans le cas d'autres produits.
Puis, dans les mêmes conditions, ensemencement du milieu simple concentration avec des dilutions
décimales de l'échantillon pour essai ou de la suspension mère.
4.3 Incubation des tubes de milieu double ou simple concentration à 30 °C pendant 24 h à 48 h.
4.4 Identification comme étant positifs pour Escherichia coli présumés, des tubes présentant une
fluorescence et une formation d'indole.
4.5 Identification comme étant positifs pour les coliformes présumés, des tubes présentant une formation
de gaz.
4.6 Détermination du coefficient NPP d'après le nombre de tubes positifs (4.4) de dilutions choisies, au
moyen d'une table NPP (voir l'Annexe A) et calcul du nombre le plus probable (NPP) d'Escherichia coli
présumés par gramme ou par millilitre d'échantillon original.
4.7 Détermination du coefficient NPP d'après le nombre de tubes positifs (4.5) de dilutions choisies, au
moyen d'une table NPP (voir l'Annexe A) et calcul du nombre le plus probable (NPP) de coliformes par
gramme ou par millilitre d'échantillon original.
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FIL 170-1:2005(F)
5 Diluant, milieu de culture et réactifs
5.1 Généralités
Pour les pratiques courantes de laboratoires, voir l'ISO 7218 et l'ISO 8261⎪FIL 122.
Si les milieux de culture et les réactifs préparés ne sont pas utilisés extemporanément, ils doivent, sauf
indications contraires, être conservés à l'obscurité à une température située entre 0 °C et +5 °C pendant
1 mois au maximum, dans des conditions évitant toute modification de leur composition.
5.2 Diluant
Voir l'ISO 8261⎪FIL 122.
5.3 Milieux de culture
5.3.1 Bouillon à la tryptose et au lauryl sulfate (milieu sélectif d'enrichissement)
5.3.1.1 Composition
a) b)

Milieu double Milieu simple
concentration concentration
Tryptose 40,0 g 20,0 g
Lactose 10,0 g 5,0 g
Hydrogénophosphate dipotassique (K HPO) 5,5 g 2,75 g
2 4
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO) 5,5 g 2,75 g
2 4
Chlorure de sodium 10,0 g 5,0 g
Lauryl sulfate de sodium [CH (CH ) OSO Na] 0,2 g 0,1 g
3 2 11 3
4-Méthylumbelliféryl-β-D-glucuronide (MUG) 0,2 g 0,1 g
Tryptophane 2,0 g 1,0 g
Eau 1 000 ml 1 000 ml
5.3.1.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau, en chauffant si nécessaire.
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation, il soit de 6,8 à 25 °C.
Répartir les milieux, par quantités de 10 ml, dans des tubes de 16 mm × 160 mm (6.2) contenant des cloche
de Durham (6.3) dans le cas du milieu simple concentration, et dans des tubes de 20 mm × 200 mm (6.2)
contenant des cloches de Durham (6.3) dans le cas du milieu double concentration.
Stériliser à l'autoclave (6.1) réglé à 121 °C pendant 15 min.
Les cloches de Durham ne doivent pas contenir de bulles d'air après stérilisation.
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5.4 Réactif pour la recherche de l'indole (réactif de Kovacs)
5.4.1 Composition
Diméthylamino−4 benzaldéhyde 5,0 g
Méthyl−2 butanol−1 ou pentanol−1 75,0 ml
Acide chlorhydrique (ρ = 1,18 g/ml à 1,19 g/ml) 25,0 ml
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5.4.2 Préparation
Dissoudre le diméthylamino−4 benzaldéhyde dans l'alcool en chauffant doucement entre 50 °C et 55 °C au
moyen du bain d'eau (6.5).
Refroidir et ajouter l'acide chlorhydrique.
Mettre à l'abri de la lumière et conserver à environ 4 °C.
Le réactif doit être de couleur jaune clair à brun clair.
5.5 Hydroxyde de sodium, solution, c(NaOH) ≈ 0,5 mol/l
5.5.1 Composition
Hydroxyde de sodium 2 g
Eau 100 ml
5.5.2 Préparation
Dissoudre l'hydroxyde de sodium dans l'eau.
6 Appareillage et verrerie
Voir l'ISO 7218 et l'ISO 8261⎪FIL 122 pour les spécifications générales. La verre
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