ISO 846:1978
(Main)Plastics — Determination of behaviour under the action of fungi and bacteria — Evaluation by visual examination or measurement of change in mass or physical properties
Plastics — Determination of behaviour under the action of fungi and bacteria — Evaluation by visual examination or measurement of change in mass or physical properties
Plastiques — Détermination du comportement sous l'action des champignons et des bactéries — Évaluation par estimation visuelle ou par mesurage des variations de masse ou de caractéristiques physiques
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL STANDARD 846
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.ME~YHAmnHAR OPrAHH3AUHR no CTAHAAPTH3AUHbîWRGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Plastics - Determination of behaviour under the action of
L-
fungi and bacteria - Evaluation by visual examination or
of change in mass or physical properties
measurement
Plastiques - Détermination du comportemen t sous l'action des champignons et des bactéries - Évaluation
par estimation visuelle ou par mesurage des variations de masse ou de caractéristiques physiques
First edition - 1978-09-01
-
w
UDC 678.5/.8 : 620.193.81/.82 Ref. No. IS0 846-1978 (E)
-
m
I-
o>
D.criptom : plastics, physicochemical tests, pest resistance tests, bacteria, fungi, biodeterioration, visual inspection, ponderal stability,
2 test specimen conditioning.
8
Price based on 10 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
FOREWORD
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation
of national standards institutes (IS0 member bodies). The work of developing
International Standards is carried out through IS0 technical committees. Every
member body interested in a subject for which a technical committee has been set
up has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated
to the member bodies for approval before their acceptance as International
Standards by the IS0 Council.
International Standard IS0 846 was developed by Technical Committee
lSO/TC 61, Plastics, and was circulated to the member bodies in December 1976.
It has been approved by the member bodies of the following countries :
Austria
India Portugal
Belgium
Iran Spain
Brazil
Israel Sweden
Canada
Korea, Rep. of Switzerland
Chile Mexico Turkey
Czech os1 ova kia Netherlands U.S.A.
France New Zealand
Hungary Poland
The member bodies of the following countries expressed disapproval of the
document on technical grounds :
Australia
United Kingdom
This International Standard cancels and replaces IS0 Recommendation R 846-1968,
of which it constitutes a technical revision.
O Intmationd Organization for Standardization, 1978 0
Printed in Switzerland
---------------------- Page: 2 ----------------------
IS0 846-1978 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
Plastics - Determination of behaviour under the action of
fungi and bacteria - Evaluation by visual examination or
measurement of change in mass or physical properties
O INTRODUCTION IS0 604, Plastics - Determination of compressive proper-
ties.
The action of micro-organisms on plastics can be divided
into two processes which take place simultaneously in IS0 868, Plastics - Determination of indentation hardness
most cases. by means of a durometer (Shore hardness).
In the first process the action results from the ability of ISO/R 974, Plastics - Method of determining the brittleness
'./ micro-organisms to grow on the plastic material itself
temperature by impact.
(as the sole carbon source) and consequently cause changes.
NOTE - By agreement between the interested parties, properties
specified in other International Standards may be determined where
is caused by the metabolic
In the second process the action
they are judged to be more relevant to the use of the plastics.
products of the micro-organisms which have developed on
the plastic material or on surface contamination when the
plastic material has no antimicrobial effect.
This International Standard deals with the combined 3 PRINCIPLE
action of these two processes.
The test consists in exposing test specimens of plastics to
the action of fungi or bacteria for specified periods of time
and in specified conditions of temperature and humidity.
1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION
At the end of the exposure, the test specimens are evalu-
This International Standard specifies methods for deter-
ated visually, both before and after cleaning, and/or tested
mining the behaviour of plastics under the action of fungi
by weighing and/or measuring physical properties.
or bacteria, by visual examination and/or by measurement
of the change in mass and/or physical properties. These test results are compared with those obtained on
unexposed test specimens, i.e. speeimens kept
It is applicable to all plastics except materials where
complete cleaning is impracticable, for example cellular
- either under normal conditions;
materials.
- or under the same conditions as for the micro-
biological exposure except that they are sterile.
2 REFERENCES
The test for resistance to fungi can be carried out by two
methods :
IS0 75, Plastics and ebonite - Determination of tempera-
ture of deflection under load.
a) In method A, the plastic specimen is exposed to
spores of specified fungi which are supplied only with
IS0 178, Plastics - Determination of flexural properties of
an incomplete nutritive medium. The fungi can only
rigid plastics.
grow at the expense of the components of the plastics.
If there is no nutritive component or contamination,
ISO/R 179, Plastics - Determination of the Charpy impact
the spores do not grow and there is no attack. The
resistance of rigid plastics (Charpy impact flexural test).
test carried out by this method is therefore sometimes
ISOIR 180, Plastics - Determination of the lzod impact
called "test for growth".
resistance of rigid plastics (Izod impact flexural tests).
b) In method B, the plastic specimen is exposed to
IS0 291, Plastics - Standard atmospheres for conditioning
spores of specified fungi which are distributed on a
and testing.
complete nutritive medium which permits their growth.
Even if the plastic material does not supply any nutritive
IS0 527, Plastics - Determination of tensile properties. )
element, the fungi can grow over the specimen and
IS0 537, Plastics - Testing with the torsion pendulum.')
their secreted metabolic products attack the substrate.
1) At present at the stage of draft. (Revision of IS0 Recommendation
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 846-1978 (E)
On the other hand, an inhibition of the growth shows
5.1 FOR ALL TESTS
the fungistatic activity of the plastic. Consequently, the
test according to this method is sometimes called "test
5.1.1 Mercury(l1) chloride, 1 g/1 aqueous solution
for fungistatic effect".
WARNING - Mercury(l1) chloride is very toxic. Avoid
The test for resistance to bacteria consists in exposing the
inhalation or contact with the skin. It is recommended
plastic specimen to the action of bacteria on an incomplete
that the solution should not be sprayed but should be
nutritive medium.
applied by means of a syringe or safety pipette. A mouth
pipette should not be used.
4 CHOICE OF EXPOSURE METHOD AND OF
5.2 FOR TESTS WITH FUNGI
CHARACTERISTICS TO BE DETERMINED
5.2.1 Fungi for tests
4.1 Choice of exposure method
The choice of one or several methods of exposure depends
5.2.1 .I List of fungi
on the proposed use of the plastic.
Reference of typical culture
Name
collection (for guidance only)
For example, it can be stated that for the determination
of the resistance to fungi, method A is sufficient when the Aspergillus niger
conditions of use of the plastic exclude any contamination Van Tieghem ATCC 6275
of the surface by organic substances. When the conditions
Penicillium funiculosum
of use suppose heavy contamination, method B is
Thom IAM 7013, CMI 114933
recommended.
Paecilom yces vario tii
NOTE - To save time and gain a better understanding of the whole
Bainier IAM 5001, ATCC 10121
phenomenon, the two tests should be made simultaneously.
Trichoderma viride
4.2 Choice of characteristics to be determined before and
Pers. ex Fr. I AM 5061, ATCC 9645
after exposure
Chaetomium globosum
The visual examination after exposure can always be
Kunze ATCC 6205
carried out, and because of the simplicity of the method,
NOTE - If there are special technical reasons, and by agreement
this examination is usually recommended. The choice
between the interested parties, additional species may be used.
of the properties to be measured depends essentially, as
The species used shall be stated in the test report. In order to
does the choice of the exposure method, on the proposed
perform tests on plastics intended for use in electronic components
and electronic equipment in accordance with IEC Publication
use of the plastic.
68-2-10, Basic environmental testing procedures - Test J : Mould
However, this choice can also depend on the composition growth, use the above fungi, with the exception of Chaetomium
globosurn Kunze, and the following additional species : Aspergillus
of the plastic.
terreus, Thom, PQMD 82 j, Aureobasidium pullulans, (De Bary)
Arnaud, ATCC 9348, Penicillium ochro-chloron, Biourge, ATCC
For example, determination of change in mass is specially
91 12, Scopulariopsis brevicaulis, (Sacc.) Bain Va. glabra, Thom,
suitable for plastics containing biodegradable components
IAM 5146.
such as plasticizers, lubricants, stabilizers (for example
plasticized PVC).
5.2.1.2 Origin of test strains
NOTES
The test fungi used shall be well-defined strains obtained
1 In this last case, the loss in mass is often less than the actual
from official biological centres. The references of strains
loss of plasticizer, due to the fact that the biodegradable com-
must be noted and stated in the test report.
ponent is only partially degraded and that the metabolic residues
remain inside the plastic.
NOTE - The addresses of official biological centres can be obtained
from national standards associations in each country.
2 As the attack on plastics occurs on the surface, it is often useful
to determine surface properties, for example tensile stress at small
elongations, flexural modulus, etc. 5.2.1.3 Stock cultures
The test strains (5.2.1.1) can be maintained in test tubes
:
on the following medium
5 MATERIALS, REAGENTS, SOLUTIONS AND MEDIA
oatmeal : 20 9
Water used for the preparation of media and solutions as
malt extract : 10 9
well as for tests shall be distilled water or water of similar
agar :
purity with a minimum resistivity of 1 Mi2.cm. 20 9
water : 1000ml
it is
Because of pathogenic hazards of fungi and bacteria,
at 120 * I OC for 20 min in an autoclave.
Sterilize
essential that the handling of micro-organisms be carried
out by staff qualified in microbiology. In general, the The cultures can be used after incubation at 25+:2OC
normal safety regulations for microbiological laboratories and should not be stored for more than 1 month at this
are to be observed. temperature.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 846-1978 (E)
In order to maintain the stock culture in good condition, 7 TEST SPECIMENS
it is necessary to subculture each species at least every
4 weeks.
7.1 Dimensions
The dimensions of test specimens depend on the tests
5.2.2 Solutions and media for tests with fungi
to be made after exposure to the micro-organisms.
Their preparation is given in the annex. These solutions
Concerning thickness, if the behaviour of a sheet is to be
and media are :
studied, test specimens should be cut out of this sheet and
- basic mineral salts solution (A.I.1);
so have the same thickness. On the other hand, if the
behaviour of the material itself is to be studied, it is
- mineral salts wetting solution (A.I.2);
recommended that test specimens less than 0.5 mm thick
be taken.
- glucose mineral salts wetting solution (A.1.3);
Concerning other dimensions, the following recommen-
- incomplete agar medium (A.I.4);
dations apply :
- complete agar media (A.1.5).
a) for visual evaluation, use square test specimens with
sides of 30 to 40 mm and a thickness of approximately
5.3 FOR TESTS WITH BACTERIA
2 mm;
v
5.3.1 Test bacteria
b) for measuring change in mass, use 10 mm x 40 mm
test specimens (note that to facilitate the comparison,
all the test specimens corresponding to the same series
5.3.1.1 Bacterium
of tests should have the same dimensions);
Pseudomonas aeruginosa - strain NCTC 8060 or ATCC
c) for measuring changes in physical properties, use the
13888.
dimensions of test specimens that are specified in the
NOTE - Another strain may be used; if so, it shall be stated in the
International Standards concerning the determination
test report.
of these properties.
5.3.1.2 Origin of the strain
7.2 Number
The bacterium or bacteria must be well-defined strains
obtained from official biological centres (see note
For each sample and each method to be used [i.e. methodA
in 5.2.1.2).
(see 8.2), method B (see 8.3) and method B’ (see note to
8.3.611. prepare three groups of test specimens.
5.3.1.3 Stock culture
One group will be stored in the laboratory (zero control,
Cultivate the test strains on brain-heart infusion agar
group O), a second group will be exposed to micro-
(see A.2.1).
organisms (inoculated specimens, group I), and the third
group will be exposed to the same conditions of incubation
b 5.3.2 Solutions and media for tests with bacteria
as the previous ones but not inoculated (sterile incubated
control, group S).
Their preparation is given in the annex. These solutions
and media are :
a) For the visual examination, prepare at least three
test specimens per group, i.e. a minimum of nine test
- brain-heart infusion agar (A.2.1);
specimens.
- brain-heart infusion (A.2.2);
b) For each one of the other properties studied, the
number of test specimens per group is stated in the
- mineral salts agar (A.2.3);
relevant International Standard (see clause 2). In
- sterile buffered solution pH 7,O at 20°C (A.2.4).
particular, in the case of the determination of change
in mass, this number is six, so that eighteen test
,
specimens shall be prepared.
NOTE - In general, all the determinations are performed separately,
6 APPARATUS
but of course the specimens for determination of change in mass or
in mechanical properties may be used for the visual examination.
Ordinary microbiological laboratory apparatus (autoclaves,
ovens, incubators, centrifuges, stereoscopic microscope
with a magnification of about 50 X) and in particular :
7.3 Cleaning
6.1 Test containers
Dip the specimens to be tested by method A and those
The use of Petri dishes 100 to 120 mm in diameter is methods using bacteria for about 1 min in 70% (V/V)
recommended. ethanol and dry them in air. Avoid consequent contami-
3
---------------------- Page: 5 ----------------------
IS0 846-1978 (E)
8.2 Procedure with fungi by method A (Test for growth)
nation with greasy fingerprints and organic matter by
handling them with forceps.
8.2.1 Filling the test containers
NOTE - Cleaning with ethanol should not be carried out if this
solvent attacks the material to be tested; test specimens for method 6
Prepare sufficient test containers (6.1) to hold the required
and method 6' should not be cleaned with ethanol.
number of test specimens. Heat the incomplete agar
medium (A.1.4) to liquefy it and, under aseptic conditions,
7.4 Labelling and storing
pour a sufficient amount into each container to give a
depth of between 5 and 10 mm. Allow to cool to solidify.
Label the test specimens in a convenient manner, avoiding
contamination.
Store the test specimens in a closed container.
8.2.2 Arrangement of test specimens
Place as many specimens as possible flat on the solidified
7.5 Conditioning and weighing
medium, avoiding any contact of the specimens with one
Dry in a desiccator the three groups of test specimens another or with the walls of the container and ensure that
(O, I, S) to be used for determination of change in mass, equal numbers of specimens are in each container.
until the mass of each test specimen is constant to the
Randomly divide the prepared containers into two equal
nearest 0,l mg (usually 48 h). Record the mass of each
groups, one labelled I, the other S.
test specimen (m,, m2, etc.).
The groups of test specimens for the visual examination
and/or for determination of the changes in physical
8.2.3 Preparation of the inoculum spore suspension
properties do not need conditioning at this stage.
See clause A.3 of the annex for the preparation of the spore
suspension in the solution (A.l.2).
8 TEST PROCEDURES
8.1 Choice of procedure and of characteristics to be
8.2.4 Viability control of the spores
measured - General scheme of test procedures
Fill two test containers (6.1) with complete agar medium
The choice of the test procedure and of the properties (A.1.5) according to the procedure given in 8.2.1. Inoculate
to be measured chiefly depends on the conditions of use them by spraying the spore suspension (A.3.2) on the agar
of the material under test but also depends on the plastic surface.
itself (see clause 4).
Incubate at 29 f 1 "C for 3 to 4 days. In the absence of
Table 1 gives the general scheme of test procedures for the copious growth, prepare a new spore suspension from
different methods. other culture tubes and use it to repeat the whole test.
TABLE 1 - General scheme of test procedures
Tests with fungi
Tests with bacteria
Method
0'
~~ - ~ ~
Reference to nib-clause~ 8.2 8.3 Note in 8.3.6 8.4
Incomplete Complete Complete Mineral salts agar Mineral salts
Filling of containers agar medium agar medium None agar medium medium inoculated agar
(A.1.4) (A.l.5) (A.1.5) (8.4.5) (8.4.21
Group of test specimens I S I S I I S I S
Spore Spore Spore
Solution sprayed on test
Hecl2 HgC12
suspension HgCI~ suspension HgC12 suspension None
specimens (5.1 .l) (5.1.1 1
(5'1"11 (8.3.31 (5'1'1) (8.3.31
(8.2.3)
Conditions Temperature : 29 i 1 "C and relative humidity : > 90 %
Incubation
4 weeks or more
Time
I
4
---------------------- Page: 6 ----------------------
IS0 846-1978 (E)
It can be agreed between the interested parties that
8.2.5 Inoculation or disinfection of test specimens
incubation should be longer, for example 8 weeks. In this
On each test specimen (7.2) in the group I containers
case, it is necessary after each period of 4 weeks to spray
and on the agar surface, spray or pipette evenly 0.1 ml of
or pipette onto the test specimens a small quantity of
inoculum spore suspension (A.3.2).
glucose/mineral salts solution (A.1.3) in order to maintain
the growth of fungi.
On each test specimen in the group S containers and on
the agar surface, pipette the aqueous solution of mercury(l1)
NOTE - Method B'
chloride (5.1 .I 1.
A possible variant of method B is to wait until the fungi are well
established but not fruiting before placing the test specimens in the
8.2.6 incubation
containers.
For this method, follow the instructions given in 8.3.1, but in 8.3.2
Close the test containers and incubate both th
...
NORME INTERNATIONALE 846
INTERNATIONAL OROANIZATION FOR STANDARDIZATION.ME)((ILYHAPO~~AR WTAHHJAUHR Il0 CTAHLLA~HJAUHHMRGANISATION INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Plastiques - Détermination du comportement sous l’action
LIL,
des champignons et des bactéries - Évaluation par estimation
visuelle ou par mesurage des variations de masse ou de
caractéristiques physiques
Plastics - Determination of behaviour under the action of fungi and bacteria - Evaluation by visual
examination or measurement of change in mass or ph ysicaf properties
Première édition - 1978-09-01
-
U
CDU 67851.8 : 620.193.81/.82 Réf. no : IS0 846-1978 (FI
-
00
I-
Dascripteurs : matière plastique, essai physico-chimique, essai de résistance aux organismes, bactérie, champignon, biod6gradabilité. examen
Co
visuel, stabilité pondérale, préparation de spécimen d’essai.
m
U
II
Prix basé sur 10 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
AVANT-PROPOS
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I'ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partiedu comitétechnique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I'ISO, participent également aux travaux.
--
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont
soumis aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme
Normes internationales par le Conseil de I'ISO.
IS0 846 a été élaborée par le comité technique
La Norme internationale
ISO/TC 61, Plastiques, et a été soumise aux comités membres en décembre 1976.
Les comités membres des pays suivants l'ont approuvée :
Autriche
Hongrie Portugal
Belgique Inde Suède
Brésil
I ran Suisse
Canada
Israël Tchécoslovaquie
Chili
Mexique Turquie
Corée, Rép. de Nouvelle-Zélande U.S.A.
Espagne Pays-Bas
France Pologne
Les comités membres des pays suivants l'ont désapprouvée pour des raisons
techniques :
Australie
Royaume-Uni
Cette Norme internationale annule et remplace la Recommandation ISO/R 846-1 968,
dont elle constitue une révision technique.
O Orgrnimion intenution8le de normalisation. 1978 O
Imprimé en Suisse
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE IS0 846-1978 (F)
Plastiques - Détermination du comportement sous l'action
des champignons et des bactéries - Évaluation par estimation
visuelle ou par mesurage des variations de masse ou de
caractéristiques physiques
IS0 537, Plastiques - Essai au pendule de torsion.')
O INTRODUCTION
IS0 604, Matières plastiques - Détermination des carac-
L'action des micro-organismes sur les plastiques peut être
téristiques en compression.
séparée en deux processus se déroulant d'ailleurs en géné-
ral simultanément.
IS0 868, Matières plastiques - Détermination de la dureté
par pénétration au moyen d'un duromètre (dureté Shore).
Dans le premier processus, l'action provient du fait que les
micro-organismes se développent aux dépens du plastique
ISO/R 974, Matières plastiques - Méthode de détermi-
lui-même (en tant que seule source de carbone) et, par
nation de la température de fragilité au choc.
cela même, l'altèrent.
L,
NOTE - Avec l'accord des parties intéressées, on peut déterminer
le second processus, l'action provient des produits
Dans
des propriétés spécifiées dans d'autres Normes internationales
du métabolisme des micro-organismes qui se sont déve-
lorsque celles-là sont jugées plus adaptées a l'usage des plastiques
considérés.
loppés sur le plastique ou sur les salissures lorsque le plas-
tique n'a aucun effet antimicrobien.
Ce sont les actions combinées de ces deux processus que la
présente Norme internationale a pour but de mettre en
évidence.
3 PRINCIPE
L'essai consiste à exposer des éprouvettes de plastiques à
1 OBJET ET DOMAINE D'APPLICATION
l'action des champignons ou des bactéries pendant des
La présente Norme internationale spécifie une méthode de
durées fixées et dans des conditions de température et
détermination du comportement des plastiques sous I'ac-
d'humidité elles aussi fixées.
tion des champignons ou des bactéries par estimation
En fin d'exposition, les éprouvettes sont examinées visuel-
visuelle etlou par mesurage des variations de masse et/ou
lement puis nettoyées, réexaminées visuellement etlou
de caractéristiques physiques observées.
soumises à la pesée etlou à des mesurages de caractéris-
Elle est applicable à la plupart des plastiques, à I'excep-
tiques physiques.
tion, en particulier, des matériaux cellulaires, dont le
Les résultats ainsi obtenus sont comparés à ceux corres-
nettoyage complet est pratiquement impossible.
pondant à des éprouvettes non exposées, c'est-à-dire conser-
L
vées
2 RÉFÉRENCES
- soit à l'abri de toute action autre que l'ambiance
IS0 75, Matières plastiques et ébonite - Détermination
t(normale));
sous charge.
de la température de fléchissement
- soit dans les conditions mêmes de l'exposition
IS0 178, Matières plastiques - Détermination des carac-
microbienne mais sans cette dernière, donc stérilement
téristiques de flexion des matières plastiques rigides.
ou aseptiquement.
ISOIR 179, Matières plastiques - Détermination de la
L'essai de résistance aux champignons peut se faire suivant
y des matières plastiques rigides (essai
résilience Charp
deux méthodes :
Charpy de résistance à la flexion par choc).
a) Dans la méthode A, on met en présence l'éprouvette
ISOIR 180, Matières plastiques - Détermination de la
de plastique et des spores de champignons définis, en
résilience lzod des matières plastiques rigides (essais lzod
à ceux-ci qu'un milieu nutritif incomplet.
ne fournissant
de flexion par choc).
La croissance des champignons ne peut se faire qu'aux
dépens des composants du plastique. S'il n'y a pas de
IS0 291, Plastiques - Atmosphères normales de condi-
composants ou salissures nutritif(ve)s, les spores ne
tionnemen t et d'essai.
donnent pas de culture et il n'y a pas d'attaque. L'essai
IS0 527, Plastiques - Détermination des caractéristiques effectué selon cette méthode est, en conséquence, appelé
((essai de croissance)).
en traction. 1 ) parfois
1) Actuellement au stade de projet. (Révision de recommandation ISO.)
1
---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 846-1978 (F)
b) Dans la méthode B, on met en présence l'éprouvette 5 MATIÈRES, RÉACTIFS, SOLUTIONS ET MILIEUX
de plastique et des spores de champignons définis,
L'eau utilisée pour la préparation des milieux et solutions
déposés sur un milieu nutritif complet permettant leur
indiqués ci-après, ainsi que pour les essais, doit être de
croissance. Même si le plastique n'apporte aucun élé-
l'eau distillée ou de pureté similaire de résistivité minimale
ment nutritif, la croissance des champignons peut
égale à 1 MCLcm.
continuer sur l'éprouvette et les produits secrétés par
leur métabolisme attaquent le substrat.
Les champignons et bactéries risquant d'être pathogènes,
il est nécessaire que les manipulations d'organismes ense-
Par contre, une inhibition d'un développement révèle
mencés soient réalisées par un personnel qualifié en micro-
l'action fongistatique du plastique. L'essai effectué
biologie. D'une façon générale, les règles de sécurité habi-
selon cette méthode est, en conséquence, appelé parfois
tuelles des laboratoires de microbiologie doivent être
((essai d'effet fongistatiquen.
respectées.
L'essai de résistance aux bactéries consiste à soumettre
5.1 POUR TOUS LES ESSAIS
l'éprouvette de plastique à l'action des bactéries avec
milieu nutritif incomplet.
5.1.1 Chlorure de mercure(ll), solution aqueuse à 1 g/l.
AVERTISSEMENT - Le chlorure de mercure(l1) est très
toxique. Eviter toute inhalation et tout contact avec la
4 CHOIX DE LA MÉTHODE D'EXPOSITION ET
peau. II est recommandé de ne pas projeter la solution,
Y
CHOIX DES CARACTERISTIQUES A DETERMINER
mais de l'appliquer au moyen d'une seringue ou d'une
pipette de sécurité. Une pipette à aspiration buccale ne
4.1 Choix de la méthode d'exposition
doit pas être utilisée.
Le choix d'une ou plusieurs des méthodes d'exposition
5.2 POUR ESSAIS AVEC CHAMPIGNONS
dépend d'ordinaire de l'utilisation envisagée pour le plas-
tique.
5.2.1 Champignons pour essais
Par exemple, on pourra considérer que, pour la résistance
5.2.1.1 Liste des champignons
aux champignons, la méthode A suffit lorsque les condi-
Origine de la culture type
tions d'emploi du plastique excluent toute salissure de la
Nom
(à titre d'information)
surface par des substances organiques. Par contre, lorsque
ces conditions d'emploi entraînent de fortes salissures, il
Aspergillus niger
convient d'utiliser la méthode B.
Van Tieghem ATCC 6275
Penicillium funiculosum
NOTE - Pour gagner du temps et mieux comprendre l'ensemble
du phénomène, des essais selon les deux méthodes devraient être
Thom IAM 7013, CMI 114933
menés simultanément.
Paeciiom yces vario tii
Bainier IAM 5001, ATCC 10121
Trichoderma viride
4.2 Choix des caractéristiques à déterminer
Pers. ex Fr. IAM 5061, ATCC 9645
avant et après exposition
v
Chaetomium globosum
L'estimation visuelle après exposition peut toujours être
Kunze ATCC 6205
faite et, compte tenu de la simplicité de la méthode, elle
NOTE - Pour certaines raisons techniques et par accord entre les
est généralement recommandée. Quant aux caractéristiques
parties intéressées, des espèces supplémentaires peuvent être uti-
à mesurer, comme en 4.1, leur choix dépend essentiel-
lisées. Celles-ci doivent alors être mentionnées dans le procès-verbal
lement de l'utilisation envisagée pour le plastique.
d'essai. Dans le cas d'essais sur plastiques destinés aux composants
et à l'appareillage électronique selon la publication CE1 68-2-10.
Cependant, ce choix peut dépendre aussi de la composition
Essais fondamentaux climatiques et de robustesse mécanique -
du plastique.
Deuxième partie : Essais - Essai J : Moisissures, utiliser les champi-
gnons susmentionnés, à l'exception du Chaetomium globosum
Par exemple, la méthode de variation de masse convient
Kunze, et les espèces supplémentaires suivantes : Aspergillus terreus,
spécialement pour les plastiques qui contiennent des Thom, PQMD 82 j; Aureobasidium pullulans, (De Bary) Arnaud,
ATCC 9348; Penicillium ochro-chloron. Biourge, ATCC 91 12;
composés biodégradables tels que plastifiants, lubrifiants,
Scopulariopsis brevicaulis (Sacc.) Bain Va. glabra, Thom, IAM 5146.
stabilisants (par exemple PVC plastifié).
5.2.1.2 Origine des souches
NOTES
1 Dans ce dernier cas, la perte de masse est souvent inférieure à Les champignons utilisés pour les essais doivent provenir de
la perte réelle de plastifiant, ce qui est dû à ce que le composé
souches bien définies, obtenues auprès de centres biolo-
biodégradable n'est que partiellement dégradé et que des résidus
giques officiels. Les références des souches doivent être
du métabolisme restent à l'intérieur du plastique.
notées et indiquées dans le procès-verbal d'essai.
2 L'attaque des plastiques se produisant à la surface, on a souvent
intérêt à utiliser des méthodes de détermination faisant intervenir NOTE - Les adresses des centres biologiques officiels peuvent être
les propriétés de surface, par exemple la résistance à la traction obtenues par l'intermédiaire des associations nationales de norma-
à de faibles allongements, le module de flexion.
lisation de chaque pays.
---------------------- Page: 4 ----------------------
IS0 846-1978 (F)
- le milieu gélosé aux sels minéraux (A.2.3);
5.2.1.3 Entretien
- la solution tampon stérile, à pH 7,O à 20 "C (A.2.4).
Les souches d'essai (5.2.1 .l) peuvent être entretenues en
à essais sur le milieu suivant :
tubes
farine d'avoine : 20 9
6 APPAREILLAGE
extrait de malt : 10 9
agar-agar : 20 9
Appareils normaux d'un laboratoire de microbiologie
eau : 1 O00 ml
(autoclaves, fours, étuves, centrifugeuses, microscope
stéréoscopique avec un grossissement d'environ 50 X), et
Stériliser en autoclave à 120 f 1 "C durant 20 min.
notamment :
Les cultures peuvent être utilisées après incubation à
25 f 2 OC et ne doivent pas être conservées plus de 1 mois
à cette température.
6.1 Récipients d'essai
Pour maintenir en bon état les cultures d'entretien, il est
II est recommandé d'utiliser des boîtes de Pétri, de diamètre
nécessaire de préparer des subcultures toutes les 4 semaines
100 à 120 mm.
au moins, pour chacune des espèces.
5.2.2 Solution et milieux pour essais avec champignons
7 ÉPROUVETTES
L
On trouvera leur préparation dans l'annexe. Ces solutions
7.1 Dimensions
et milieux sont
Les dimensions des éprouvettes dépendent des détermi-
- la solution minérale de base (A.l.1);
nations qui doivent être effectuées après l'action des
- la solution minérale mouillante (A.1.2);
micro-organismes.
- la solution minérale glucosée mouillante (A.1.3);
En ce qui concerne l'épaisseur, si l'on veut étudier le
- le milieu gélosé incomplet (A.1.4);
comportement d'une plaque, on devrait prendre des éprou-
vettes découpées dans la plaque et donc de même épaisseur
- les milieux gélosés complets (A.l.5).
que cette plaque. Si, au contraire, on veut étudier le
comportement de la matière elle-même, il est conseillé
de prendre une épaisseur ne dépassant pas 0,5 mm.
5.3 POUR ESSAIS AVEC BACTÉRIES
Quant aux autres dimensions, il est recommandé
5.3.1 Bactéries pour essais
a) pour l'estimation visuelle, d'utiliser des éprouvettes
5.3.1.1 Bactérie
carrées, de côté 30 à 40 mm et d'épaisseur voisine de
2 mm;
Pseudomonas aeruginosa - souche NCTC 8060 ou ATCC
13888.
i-
b) pour mesurer la variation de masse, d'utiliser des
NOTE - D'autres bactéries peuvent être employées. ll faut alors le
à 40 mm (à signaler que, pour des
éprouvettes de 10
mentionner dans le procès-verbal d'essai.
raisons de facilité de la comparaison toutes les éprou-
vettes correspondant à une même série d'essais doivent
5.3.1.2 Origine de la souche
avoir les mêmes dimensions);
La (ou les) bactérie(s1 doit (doivent) provenir de souches
c) pour mesurer les variations de caractéristiques
bien définies, obtenues auprès de centres biologiques
physiques, d'utiliser des éprouvettes ayant les dimen-
officiels (voir note à 5.2.1.2).
sions prévues dans les Normes internationales concer-
nant le mesurage de ces caractéristiques.
5.3.1.3 Entretien
Cultiver les souches d'essai sur gélose aux extraits de
cerveau et de coeur (voir A.2.1).
7.2 Nombre
Pour chaque échantillon et pour chaque méthode à utiliser
5.3.2 Solutions et milieux pour essais avec bactéries
[c'est-à-dire méthode A (voir 8.2), méthode B (voir 8.3) et
On trouvera leur préparation dans l'annexe. Ces solutions
méthode B' (voir note 8.3.6)], préparer trois groupes
et milieux sont :
d'éprouvettes.
- la gélose aux extraits de cerveau et de cœur (A.2.1);
Un groupe sera conservé au laboratoire (témoin zéro,
- le bouillon aux extraits de cerveau et de cœur groupe O), un deuxième sera soumis aux expositions
microbiologiques (éprouvettes ensemencées, groupe I),
(A.2.2);
3
---------------------- Page: 5 ----------------------
IS0 846-1978 (F)
et le troisième sera soumis aux mêmes conditions d'in- 7.4 Repérage et conservation
cubation que les précédents, mais sans ensemencement
Repérer individuellement les éprouvettes par un moyen
(témoins incubés stériles, groupe S).
convenable, en évitant toute contamination.
a) Pour l'estimation visuelle, prévoir au moins trois
Conserver les éprouvettes dans un récipient fermé.
éprouvettes par groupe, un minimum de
neuf éprouvettes au total.
7.5 Conditionnement et pesée
b) Pour chaque autre propriété étudiée, le nombre
d'éprouvettes par groupe est indiqué dans la Norme Sécher les trois groupes d'éprouvettes (O, I, s) destinés
internationale Concernant Cette détermination (voir aux mesurages des variations de masse dans un dessiccateur
dans le cas de mesurage de jusqu'à masse constante, déterminée sur chaque éprouvette
chapitre 2). E-,
variation de masse, le nombre prévu d'éprouvettes 2 0,1 mg Près (en général 48 h). Soit m,, m2, etc., les
de chaque éprouvette.
est de six, c'est-à-dire qu'il faut préparer dix-huit éprou-
vettes.
Les groupes d'éprouvettes destinés à l'estimation visuelle
et/ou aux mesurages des variations de caractéristiques
NOTE - En général, toutes les déterminations sont effectuées physiques ne nécessitent pas de conditionnement à ce
séparément, mais, bien entendu, il est possible de prévoir l'examen
stade.
visuel sur les éprouvettes destinées aux déterminations de variation
de masse ou de caractéristiques physiques.
7.3 Nettoyage
8 MODE OPÉRATOIRE
Plonger les éprouvettes pour l'essai selon la méthode A et
selon celles des méthodes qui nécessitent l'emploi de
8.1 Choix du mode opératoire et des caractéristiques à
bactéries, durant 1 min environ dans de l'éthanol à 70 %
déterminer - Schéma général des modes opératoires
(V/V), puis les sécher à l'air libre. Manipuler les éprouvettes
avec des pinces pour éviter la contamination provenant des Le choix du mode opératoire et celui des caractéristiques à
déterminer dépendent surtout des modalités d'emploi de la
graisses de la peau ou d'autres matières organiques.
matière soumise à l'essai, mais aussi du plastique lui-même
(voir chapitre 4).
NOTE - Le nettoyage à l'éthanol ne doit pas être effectué si ce
solvant attaque la matière soumise à l'essai; les éprouvettes utilisées
On trouvera ci-après, dans le tableau 1, le schéma général
pour les essais selon les méthodes B et B' ne devraient pas être
nettoyées à l'éthanol. des modes opératoires des différentes méthodes.
TABLEAU 1 - Schéma &Aral der divers modes opératoiw
Essais avec champignons
I I
Méthode Essais avec bactéries
0'
RMrnnce UI paragraphe 8.2 8.3 Note à 8.3.6 8.4
Milieu géiosé Milieu gélose Milieu gélosé Milieu gélosé Milieu gélosé
incomplet complet Aucun complet minéral ensemencé minéral
Gam- des dcipimb
(A.1.4) (A.1.5) (A.1.5) (8.4.51 (8.4.21
I S I S I I s I S
Group. d'6prwvett.s
Suspension Suspension Suspension
Solution miso sur
HSCI, HgC12
de spores "'"2 de spores HgC12 de spores Aucune
éprouvettes (5.1.1 ) (5.1.1) (5.1.1 1 (5.1.1
(8.2.3) (8.3.3) (8.3.3)
,Température : 29 f 1 "C et humidité relative : > 90 %
Conditions
Incubation -
Durée 4 semaines ou plus
4
---------------------- Page: 6 ----------------------
IS0 846-1978 (F)
Si l'essai dure plus de 4 semaines, il faut utiliser une série
8.2 Mode opératoire des essais avec champignons selon
la méthode A (essai de croissance) supplémentaire d'éprouvettes.
NOTE - Si le développement des champignons est visible à l'œil nu
8.2.1 Garnissage des récipients d'essai
durant les 4 semaines d'incubation, l'essai peut être considéré
comme achevé si l'on prévoit seulement l'estimation visuelle.
Le nombre de récipients d'essai (6.1) à préparer doit être
suffisant pour y déposer les éprouvettes nécessaires. Chauf-
fer le milieu gélosé incomplet (A.l.41, afin de le liquéfier
8.3 Mode opératoire des essais avec champignons selon
et, en ambiance stérile, verser une quantité suffisante
la méthode B (essai d'effet fongistatique)
dans chaque récipient sur une épaisseur de 5 à 10 mm.
Laisser se solidifier par refroidissement.
8.3.1 Garnissage des récipients d'essai
8.2.2 Mise en place des éprouvettes Opérer comme il est indiqué en 8.2.1, mais en utilisant le
milieu gélosé complet (A.1.5).
Placer les éprouvettes à plat sur le milieu solidifié, en
en mettant le maximum, mais en évitant tout contact entre
8.3.2 Mise en place des éprouvettes
ou avec le bord du récipient, et s'assurer que le même
elles
nombre d'éprouvettes se trouve dans chaque récipient.
Opérer comme il est indiqué en 8.2.2, mais en notant que
le nettoyage des éprouvettes n'est pas nécessaire (voir note
Séparer au hasard les récipients ainsi préparés en deux
à 7.3).
ifun étant marqué I et l'autre S.
groupes égaux,
8.3.3 Préparation de la suspension de spores pour ense-
8.2.3 Préparation de la suspension de spores pour ense-
mencemen t
mencement
On trouvera cette préparation dans le chapitre A.3 de
On trouvera cette préparation dans le chapitre A.3 de
l'annexe, en réalisant la suspension finale dans la solution
l'annexe, en réalisant la suspension finale dans la solution
(A. 1.3).
A.1.2.
8.2.4 Contrôle de la viabilité des spores 8.3.4 Contrôle de la viabilité des spores
Garnir deux récipients d'essai (6.1) avec du milieu gélosé Opérer comme il est indiqué en 8.2.4.
complet (A.1.5) de la manière indiquée en 8.2.1. Les ense-
mencer en répartissant la suspension de spores (A.3.2)
8.3.5 Ensemencement ou désinfection des éprouvettes
sur la surface de la gélose.
et du milieu
Mettre en incubation a 29 Il OC durant 3 à 4 jours. S'il
Sur chacune des éprouvettes (7.2) des récipients du groupe I
n'y a pas un copieux développement, préparer une nouvelle
et sur la surface de la gélose, répandre ou déposer avec une
suspension de spores à partir d'autres cultures en tubes et
pipette de la suspension de spores (voir 8.3.3 et chapitre
l'utiliser pour refaire l'essai en totalité.
A.3 de l'annexe).
L
Sur chacune des épro
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.