ISO 6887:1983

Microbiology — General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination

Microbiologie — Directives générales pour la préparation des dilutions en vue de l'examen microbiologique

Mikrobiologija - Splošna navodila za pripravo razredčin za mikrobiološko preiskavo

General Information

• Status: Withdrawn
• Publication Date: 31-May-1983
• Withdrawal Date: 31-May-1983
• ICS: 07.100.01 - Microbiology in general
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 9 - Microbiology
• Current Stage: 9599 - Withdrawal of International Standard
• Completion Date: 11-Feb-1999
• Ref Project: SIST ISO 6887:1997 - Microbiology -- General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination

Relations

• Revised: ISO 6887-1:1999 - Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions
• Effective Date: 15-Apr-2008

Standards Content (Sample)

International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONWE~YHAPO~HAR OPTAHbl3AUHR fl0 [e-mail] INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Microbiology - General guidance for the preparation
of dilutions for microbiological examination
Microbiologie - Directives g&&ales pour Ia prkparation des dilutions en vue de l ’examen microbiologique
First edition - 1983-06-01
Ref. No. ISO 68874983 (E)
UDC 579.67 : 57.082.52
Descriptors : agricultural products, food products, animal feeding products, microbiological analysis, specimen preparation.
Price based on 4 pages

---------------------- Page: 1 ----------------------
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bodies). The work of developing International
Standards is carried out through ISO technical committees. Every member body
interested in a subject for which a technical committee has been authorized has the
right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council.
International Standard ISO 6887 was developed by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products, and was circulated to the member bodies in November
1981.
lt has been approved by the member bodies of the following countries:
South Africa, Rep. of
Australia Iraq
Brazil Israel Sri Lanka
Canada Italy Tanzania
Chile Mexico Thailand
Czechoslovakia Netherlands United Kingdom
of New Zealand USSR
Egypt, Arab Rep.
Ethiopia Philippines Venezuela
France Poland Y ugoslavia
Germany, F. R. Portugal
India Romania
No member body expressed disapproval of the document.
0 International Organkation for Standardkation, 1983 l
Printed in Switzerland

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 68874983 (EI
INTERNATIONAL STANDARD
General guidance for the preparation
Microbiology -
of dilutions for microbiological examination
0 Introduction ISO 4832, Microbiology - General guidance for the enumer-
ation of coliforms - Colony count technique at 30 OC.
This International Standard is intended to provide general
guidance for the preparation of dilutions for microbiological
ISO 4333, Microbiology - General guidance for the enumer-
examination of products not dealt with by existing Inter-
Colony count technique at 30 OC.
ation of micro-organisms -
national Standards and for the consideration of bodies prepar-
ing reference microbiological methods of test for application to
ISO 6579, Microbiology - General guidance on methods for
food products or to animal feeding stuffs. In view of the large
the detection of Salmonella.
variety of products within this field of application, these
guidelines may not be appropriate for some products in every
detail, and for some other products it may be necessary to use
different methods. Nevertheless, it is hoped that, in all cases,
3 Definitions
every attempt will be made to apply these guidelines as far as
possible and that deviations from them will only be made if
For the purpose of this International Standard, the following
absolutely necessary for technical reasons.
definitions apply :
When this International Standard is next reviewed, account will
3.1 initial Suspension (primary dilution) : The Suspension,
be taken of all information then available concerning the extent
Solution or emulsion obtained after a weighed or measured
to which the guidelines have been followed and the reasons
quantity of the product under examination (or of a test Sample
which necessitated deviation from them in the case of par-
prepared from the product) has been mixed, if necessary using
ticular products.
a blender and observing appropriate precautions (see the note
to clause 9), with a ninefold quantity of dilution fluid (diluent,
The harmonization of test methods cannot be immediate, and,
for certain groups of products, International Standards and/or see clause 5), allowing large particles, if present, to settle.
national Standards, that do not comply with these guidelines,
may already exist . In cases where International Standards
NOTE - lt may be necessary, in certain cases, particularly for products
giving an initial 1 + 9 Suspension, which is too viscous or too thick, to
already exist for the product to be tested, they should be
add more diluent. This should be taken into account for subsequent
followed, but it is hoped that, when they are reviewed, they will
operations and/or in the expression of results.
be aligned with this International Standard so that, eventually,
the only remaining departures from these guidelines will be
those necessary for well established technical reasons.
3.2 further decimal dilutions: The suspensions or solu-
tions obtained by mixing a determined volume of the initial
Suspension (3.1) with a ninefold volume of diluent (see the note
1 Scope and field of application
to 3.1), and by repeating this Operation with every dilution thus
prepared, until a decimal dilution series, suitable for the in-
This International Standard lays down general guidelines for
oculation of culture media, is obtained.
the preparation of dilutions for aerobic microbiological exam-
inations of products intended for human or animal consump-
An International Standard or
3.3 specific Standard :
tion. (At present, the guidelines should be used in conjunction
guidance document describing the examination of a specific
with the methods described in ISO 4831, ISO 4832, ISO 4833
product (or group of products) for the detection or enumera-
and ISO 6579.)
tion of a specific micro-organism (or group of micro-organisms)
and/or describing the general characteristics of sampling
This International Standard is applicable to the products men-
and/or the preparation of test samples.
tioned, provided that the appropriate subclauses of clause 9 are
respected.
4 Principle
2 References
ISO 4831, Microbiology - General guidance for the enumer- Preparation of the initial Suspension (3.1) in such a way as to
ation of coliforms - Most probable number tecbnique obtain as uniform a distribution as possible of the micro-
at 30 OC. organisms contained in the test Portion.

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ISO 68874983 (EI
Preparation, if necessary, of decimal dilutions (3.2) in Order to If the diluent is not to be used immediately, store it in the dark
reduce the number of micro-organisms per unit volume to at a temperature between 0 and 5 OC for no longer than
allow, after incubation, Observation of their growth (in the case 1 month, in conditions which do not allow any Change in its
of tubes or bottles) or colony counting (in the case of plates). volume or composition.
The appropriate number of micro-organisms is generally :
If it is necessary to count several groups of micro-organisms
NOTE -
using different culture media, it may be necessary to distribute all the
a) for the most probable number technique using 3 tubes:
dilutions (or some of them) in quantities greater than 9,0 ml. The size
1 micro-organism in 10 ml of the highest decimal dilution;
of the test tubes, flasks and bottles should be specified accordingly.
b) for the colony count technique: 30 to 300 colonies (for
some groups, for example coliforms, 15 to 150 colonies).
6 Apparatus and glassware
NOTE - Disposable apparatus is an acceptable alternative to reusable
5 Diluent
glassware, if it has suitable specifications. Glassware should be
capable of undergoing repeated sterilization and should be chemically
inert,
5.1 Basic materials
Usual microbiological laboratory equipment and in particular
In Order to improve the reproducibility of the results, it is
recommended that, for the preparation of the diluent,
dehydrated basic components or a dehydrated complete
6.1 Apparatus for dry sterilization (oven) or wet
preparation should be used. The manufacturer ’s instructions
sterilization (autoclave) (autoclave operating either separate-
shall be rigorously followed.
ly or as part of an apparatus for preparing and distributing
medial.
Chemical products shall be of recognized analytical quality.
Apparatus that will come into contact with the diluent, the
The water used shall be water distilled from glass apparatus, or
Sample, or the dilutions, except for apparatus that is supplied
deionized water. lt shall be free from substances that might in-
sterile (plastic bags, plastic pipettes, etc.) shall be sterilized by
hibit the growth of micro-organisms under the test conditions.
one of the following methods:
This shall be periodically checked, particularly in the case of
deionized water.
a) by being kept at 170 to 175 OC for not less than 1 h in
an oven;
5.2 Composition
b) by being kept at 121 & 1 OC for not less than 20 min in
Unless there is irrefutable evidente (for example authoritative
an autoclave.
data or comparative tests) that other diluents are better suited
for the preparation of particular products, use diluent with the
6.2 Blending equipment (for non-liquid products, see
following composition 1) :
9.1.2).
peptone
1,o g
sodium chloride One of the following shall be used:
8,5 g
water 1000 ml
a) a rotary blender, operating at a rotational frequency
between
...

SLOVENSKI STANDARD
SIST ISO 6887:1997
01-oktober-1997
0LNURELRORJLMD6SORãQDQDYRGLOD]DSULSUDYRUD]UHGþLQ]DPLNURELRORãNR
SUHLVNDYR
Microbiology -- General guidance for the preparation of dilutions for microbiological
examination
Microbiologie -- Directives générales pour la préparation des dilutions en vue de
l'examen microbiologique
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 6887:1983
ICS:
07.100.30 Mikrobiologija živil Food microbiology
SIST ISO 6887:1997 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

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SIST ISO 6887:1997

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International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONWE~YHAPO~HAR OPTAHbl3AUHR fl0 [e-mail] INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Microbiology - General guidance for the preparation
of dilutions for microbiological examination
Microbiologie - Directives g&&ales pour Ia prkparation des dilutions en vue de l ’examen microbiologique
First edition - 1983-06-01
Ref. No. ISO 68874983 (E)
UDC 579.67 : 57.082.52
Descriptors : agricultural products, food products, animal feeding products, microbiological analysis, specimen preparation.
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SIST ISO 6887:1997
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national Standards bodies (ISO member bodies). The work of developing International
Standards is carried out through ISO technical committees. Every member body
interested in a subject for which a technical committee has been authorized has the
right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the ISO Council.
International Standard ISO 6887 was developed by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products, and was circulated to the member bodies in November
1981.
lt has been approved by the member bodies of the following countries:
South Africa, Rep. of
Australia Iraq
Brazil Israel Sri Lanka
Canada Italy Tanzania
Chile Mexico Thailand
Czechoslovakia Netherlands United Kingdom
of New Zealand USSR
Egypt, Arab Rep.
Ethiopia Philippines Venezuela
France Poland Y ugoslavia
Germany, F. R. Portugal
India Romania
No member body expressed disapproval of the document.
0 International Organkation for Standardkation, 1983 l
Printed in Switzerland

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ISO 68874983 (EI
INTERNATIONAL STANDARD
General guidance for the preparation
Microbiology -
of dilutions for microbiological examination
0 Introduction ISO 4832, Microbiology - General guidance for the enumer-
ation of coliforms - Colony count technique at 30 OC.
This International Standard is intended to provide general
guidance for the preparation of dilutions for microbiological
ISO 4333, Microbiology - General guidance for the enumer-
examination of products not dealt with by existing Inter-
Colony count technique at 30 OC.
ation of micro-organisms -
national Standards and for the consideration of bodies prepar-
ing reference microbiological methods of test for application to
ISO 6579, Microbiology - General guidance on methods for
food products or to animal feeding stuffs. In view of the large
the detection of Salmonella.
variety of products within this field of application, these
guidelines may not be appropriate for some products in every
detail, and for some other products it may be necessary to use
different methods. Nevertheless, it is hoped that, in all cases,
3 Definitions
every attempt will be made to apply these guidelines as far as
possible and that deviations from them will only be made if
For the purpose of this International Standard, the following
absolutely necessary for technical reasons.
definitions apply :
When this International Standard is next reviewed, account will
3.1 initial Suspension (primary dilution) : The Suspension,
be taken of all information then available concerning the extent
Solution or emulsion obtained after a weighed or measured
to which the guidelines have been followed and the reasons
quantity of the product under examination (or of a test Sample
which necessitated deviation from them in the case of par-
prepared from the product) has been mixed, if necessary using
ticular products.
a blender and observing appropriate precautions (see the note
to clause 9), with a ninefold quantity of dilution fluid (diluent,
The harmonization of test methods cannot be immediate, and,
for certain groups of products, International Standards and/or see clause 5), allowing large particles, if present, to settle.
national Standards, that do not comply with these guidelines,
may already exist . In cases where International Standards
NOTE - lt may be necessary, in certain cases, particularly for products
giving an initial 1 + 9 Suspension, which is too viscous or too thick, to
already exist for the product to be tested, they should be
add more diluent. This should be taken into account for subsequent
followed, but it is hoped that, when they are reviewed, they will
operations and/or in the expression of results.
be aligned with this International Standard so that, eventually,
the only remaining departures from these guidelines will be
those necessary for well established technical reasons.
3.2 further decimal dilutions: The suspensions or solu-
tions obtained by mixing a determined volume of the initial
Suspension (3.1) with a ninefold volume of diluent (see the note
1 Scope and field of application
to 3.1), and by repeating this Operation with every dilution thus
prepared, until a decimal dilution series, suitable for the in-
This International Standard lays down general guidelines for
oculation of culture media, is obtained.
the preparation of dilutions for aerobic microbiological exam-
inations of products intended for human or animal consump-
An International Standard or
3.3 specific Standard :
tion. (At present, the guidelines should be used in conjunction
guidance document describing the examination of a specific
with the methods described in ISO 4831, ISO 4832, ISO 4833
product (or group of products) for the detection or enumera-
and ISO 6579.)
tion of a specific micro-organism (or group of micro-organisms)
and/or describing the general characteristics of sampling
This International Standard is applicable to the products men-
and/or the preparation of test samples.
tioned, provided that the appropriate subclauses of clause 9 are
respected.
4 Principle
2 References
ISO 4831, Microbiology - General guidance for the enumer- Preparation of the initial Suspension (3.1) in such a way as to
ation of coliforms - Most probable number tecbnique obtain as uniform a distribution as possible of the micro-
at 30 OC. organisms contained in the test Portion.

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ISO 68874983 (EI
Preparation, if necessary, of decimal dilutions (3.2) in Order to If the diluent is not to be used immediately, store it in the dark
reduce the number of micro-organisms per unit volume to at a temperature between 0 and 5 OC for no longer than
allow, after incubation, Observation of their growth (in the case 1 month, in conditions which do not allow any Change in its
of tubes or bottles) or colony counting (in the case of plates). volume or composition.
The appropriate number of micro-organisms is generally :
If it is necessary to count several groups of micro-organisms
NOTE -
using different culture media, it may be necessary to distribute all the
a) for the most probable number technique using 3 tubes:
dilutions (or some of them) in quantities greater than 9,0 ml. The size
1 micro-organism in 10 ml of the highest decimal dilution;
of the test tubes, flasks and bottles should be specified accordingly.
b) for the colony count technique: 30 to 300 colonies (for
some groups, for example coliforms, 15 to 150 colonies).
6 Apparatus and glassware
NOTE - Disposable apparatus is an acceptable alternative to reusable
5 Diluent
glassware, if it has suitable specifications. Glassware should be
capable of undergoing repeated sterilization and should be chemically
inert,
5.1 Basic materials
Usual microbiological laboratory equipment and in particular
In Order to improve the reproducibility of the results, it is
recommended that, for the preparation of the diluent,
dehydrated basic components or a dehydrated complete
6.1 Apparatus for dry sterilization (oven) or wet
preparation should be used. The manufacturer ’s instructions
sterilization (autoclave) (autoclave operating either separate-
shall be rigorously followed.
ly or as part of an apparatus for preparing and distributing
medial.
Chemical products shall be of recognized analytical quality.
Apparatus that will come into contact with the diluent, the
The water used shall be water distilled from glass apparatus, or
Sample, or the dilutions, except for apparatus that is supplied
deionized water. lt shall be free from substances that might in-
sterile (plastic bags, plastic pipettes, etc.) shall be sterilized by
hibit the growth of micro-organisms under the test conditions.
one of the following methods:
This shall be periodically checked, particularly in the case of
deionized water.
a) by being kept at 170 to 175 OC for not less than 1 h in
an oven;
5.2 Composition
b) by being kept at 121 & 1 OC for not less than 20 min in
Unless there is irrefutable evidente (for example authoritative
an autoclave.
d
...

I
Norme internationale c' 6887
'\
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDlZATION*ME~YHAW&HAR OPTAHWOAUWR Il0 ~~~&APTW3ALlWin.oRGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
I
Microbiologie - Directives générales pour la préparation
m
des dilutions en vue de l'examen microbiologique
Microbiology - General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination
Premiere edition - 1983-06-01
CDU 579.67 : 57.082.52 Ref. no : IS0 6887-1983 (FI
Descripteurs : produit agricole, produit alimentaire, produit d'alimentation animale, analyse microbiologique, préparation de spécimen d'essai.
1
Prix basé sur 4 pages

---------------------- Page: 1 ----------------------
,
Avant-propos
L'ISO (organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I'ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
correspondant. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I'ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I'ISO.
La Norme internationale IS0 6887 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agrico/es aiimentaires, et a été soumise aux comités membres en novembre
1981.
Les comités membres des pays suivants l'ont approuvée:
Afrique du Sud, Rép. d' Iraq Royaume- Uni
Allemagne, R.F. Israël Sri Lanka
Australie Italie Tanzanie
Brésil Mexique Tchécoslovaquie
Canada Nouvelle-Zélande Thaïlande
Chili Pays-Bas URSS
Rép. arabe d' Philippines Venezuela
Égypte,
Éthiopie Pologne Yougoslavie
France Portugal
Inde Roumanie
Aucun comité membre ne l'a désapprouvée.
0 Organisation internationale de normalisation, 1983 O
Imprimé en Suisse

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IS0 6887-1983 (FI
NORM E I NTE R N AT1 ON ALE
Microbiologie - Directives générales pour la préparation
des dilutions en vue de l'examen microbiologique
O Introduction 2 Références
IS0 4831, Microbiologie - Directives générales pour le
La présente Norme internationale se propose de fournir des
dénombrement des coliformes - Technique du nombre le plus
directives générales pour la préparation des dilutions en vue de
probable après incubation à 30 OC.
l'examen microbiologique de produits non concernés dans les
Normes internationales existant actuellement et pour être étu-
IS0 4832, Microbiologie - Directives générales pour le
diées par les organismes élaborant des méthodes d'essai micro-
dénombrement des coliformes - Méthode par comptage des
biologiques de référence destinées à être appliquées à des pro-
à 30 OC.
colonies obtenues
duits alimentaires ou à des aliments pour animaux. En raison de
la grande diversité des produits entrant dans ce domaine
IS0 4833, Microbiologie - Directives générales pour le
d'application, il est possible que ces directives, dans tous leurs
dénombrement des micro-organismes - Méthode par comp-
détails, ne conviennent pas exactement à certains produits et
tage des colonies obtenues à 30 OC.
que, pour certains autres produits, il puisse être nécessaire
d'employer des méthodes différentes. Néanmoins, il est à espé-
I SO 6579, Microbiologie - Directives générales concernant les
rer que, dans tous les cas, tous les efforts seront faits pour
m&hodes de recherche des Salmonella.
appliquer chaque fois qu'il sera possible les directives données
et qu'on n'aura recours à des dérogations que si cela est abso-
lument nécessaire pour des raisons techniques.
3 Définitions
Dans le cadre de la présente Norme internationale, les défini-
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il
tions suivantes sont applicables :
sera tenu compte de tous les renseignements disponibles à ce
moment-là, à savoir dans quelle mesure les directives auront
été suivies et les raisons pour lesquelles il aura été nécessaire
3.1 suspension mère (première dilution) : Suspension,
d'y déroger dans le cas de produits particuliers.
solution ou émulsion obtenue après qu'une quantité pesée ou
mesurée du produit à analyser (ou de l'échantillon pour essai
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut pas être immé- préparé à partir de ce produit) a été mélangée, si nécessaire en
diate et, pour certains groupes de produits, des Normes inter-
utilisant un homogénéisateur et en observant des précautions
nationales et/ou des normes nationales existent peut-être déjà, appropriées (voir la note au chapitre 9). avec une quantité neuf
qui ne concordent pas avec ces directives. Dans le cas où des fois égale de diluant (voir chapitre 5), en laissant se déposer les
Normes internationales existent déjà pour le produit à contrô- particules grossières, s'il y en a.
ler, elles devront être appliquées, mais il serait souhaitable que,
NOTE - II peut être nécessaire dans certains cas, notamment pour les
lorsqu'elles viendront en révision, elles soient modifiées de
produits donnant une suspension mère 1 + 9 trop visqueuse ou trop
façon à se conformer à la présente Norme internationale si bien
épaisse, d'ajouter davantage de diluant. II devra en être tenu compte
que, finalement, les seules divergences restantes seront celles
dans la suite des opérations et/ou dans l'expression des résultats.
qui auront été nécessaires pour des raisons techniques bien
établies.
3.2 dilutions décimales suivantes : Suspensions ou solu-
tions obtenues en melangeant un volume déterminé de la sus-
pension mere (3.1) avec un volume neuf fois égal de diluant
1 Objet et domaine d'application
(voir la note de 3. I), et en répétant cette opération sur chaque
dilution ainsi préparée, jusqu'à obtention d'une gamme de dilu-
La présente Norme internationale donne des directives généra-
tions décimales appropriée pour l'inoculation des milieux de
les pour la préparation des dilutions en vue des examens micro-
culture.
biologiques, réalisés en aérobiose, des produits destinés à la
consommation humaine ou à l'alimentation animale. (Actuelle-
ment, ces directives devraient être utilisées conjointement avec
3.3 norme spécifique : Norme internationale ou document
les méthodes décrites dans I'ISO 4831,I'lSO 4832, I'ISO 4833 et
de directive décrivant l'analyse d'un produit déterminé (ou d'un
l'lS0 6579.)
groupe de produits) en vue de la recherche ou du dénombre-
ment d'un micro-organisme déterminé (ou d'un groupe de
La présente Norme internationale est applicable aux produits
micro-organismes) et/ou décrivant les caractéristiques généra-
mentionnés, à condition de se conformer aux paragraphes les de l'échantillonnage et/ou la préparation des échantillons
appropriés du chapitre 9. pour essai.
1

---------------------- Page: 3 ----------------------
IS0 6887-1983 (FI
4 Principe 5.4 Répartition du diluant
Préparation de la suspension mère (3.11, de façon à obtenir une Répartir le diluant (5.3) dans des tubes à essais (6.5) (pour les
dilutions décimales) ou dans des fioles (6.4) (pour la suspension
répartition aussi uniforme que possible des micro-organismes
mère; cas des produits non liquides, voir 9.1.2) de capacités
contenus dans la prise d’essai.
appropriées, en quantités telles qu’après stérilisation, chaque
(3.2) en vue
Préparation, si nécessaire, de dilutions décimales tube contienne 9,0 ml de diluant ou un multiple de 9,0 ml et
de réduire le nombre de micro-organismes par unité de volume chaque fiole contienne 90 ml de diluant ou un multiple de 90 ml
pour permettre, après incubation, d’observer leur développe- (ou autres quantités requises). Boucher les tubes ou les fioles.
ment (cas des tubes) ou d’effectuer le dénombrement des colo-
nies (cas des boîtes). Stériliser à l’autoclave à 121 I 1 OC durant 20 min.
Le nombre approprié de micro-organismes correspond, en
Si le diluant n‘est pas utilisé extemporanément, le conserver à
général, à:
l’obscurité entre O et 5 OC, pendant 1 mois au maximum, dans
des conditions évitant toute modification de son volume ou de
a) pour la technique du nombre le plus probable avec 3
sa composition.
tubes: 1 micro-organisme dans 10 ml de la dilution décimale
la plus élevée;
NOTE - Si l‘on doit dénombrer plusieurs groupes de micro-
organismes en utilisant des milieux de cultures différents, il peut être
b) pour la technique par comptage des colonies: 30 à 300
nécessaire de répartir toutes les dilutions (ou quelques-unes) en quanti-
colonies (pour certains groupes comme les coliformes, O
tés supérieures à 9,0 ml. La dimension des tubes à essais et des fioles
15 à 150 colonies). doit être prévue en conséquence.
5 Diluant 6 Appareillage et verrerie
NOTE - Le matériel à usage unique est acceptable au même titre que
5.1 Composants de base
la verrerie réutilisable, si ses spécifications sont convenables. La verre-
rie doit pouvoir résister à des stérilisations répétées et être chimique-
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est recom-
ment inerte.
mandé d’utiliser, pour la préparation du diluant, des compo-
sants de base déshydratés ou une préparation complète déshy-
Matériel courant de laboratoire de microbiologie, et notam-
dratée. Les instructions du fabricant doivent être suivies
ment:
scrupuleusement.
,
6.1 Appareils pour la stérilisation en chaleur sèche
Les produits chimiques doivent être de qualité analytique
(four) ou en chaleur humide (autoclave) (autoclave auto-
reconnue.
nome ou faisant partie d’un appareillage, pour préparer et
répartir les milieux).
L‘eau utilisée doit être de l‘eau distillée avec un appareillage
en verre, ou de l’eau déminéralisée. Elle doit être exempte de
substances susceptibles d’inhiber la croissance des micro- Le matériel destiné à entrer en contact avec le diluant, I’échan-
organismes dans les conditions de l’essai. Cela doit être con- tillon et les dilutions, sauf s‘il est livré stérile (sacs en plastique;
trôlé périodiquement, en particulier dans le cas de l’eau déminé- pipettes en plastique, etc.), doit être stérilisé par l’une des
0
ralisée. méthodes suivantes:
a) au four, en le maintenant à une température de
5.2 Composition
170 à 175 OC durant au moins 1 h;
À moins que des preuves irréfutables (par exemple données
b) à l‘autocla
...