ISO 8553:2026

• Abstract:

  This document specifies the enumeration of microorganisms by the plate-loop technique at 30 °C. This document is applicable to raw milk and is only applicable to samples that contain microorganisms up to a level of 3 × 105 cfu/ml.

• Status: Published
• Publication Date: 12-Nov-2026
• ICS: 07.100.30 - Food microbiology
• Technical Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/SC 5 - Milk and milk products
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 13-Nov-2026
• Completion Date: 13-Nov-2026

• Revises: ISO 8553:2004 - Milk — Enumeration of microorganisms — Plate-loop technique at 30 degrees C
• Effective Date: 09-Dec-2023

ISO 8553 | IDF 131 is a jointly published ISO and IDF standard for enumerating microorganisms in raw milk using the plate-loop technique at 30 °C. It specifies how to take a measured loopful of sample, plate it in milk plate count agar (MPCA), incubate the plates, and report the result as colony-forming units per millilitre. The method is meant for laboratories that need a standardized count for raw milk and want comparable results between sites.

What does ISO 8553 | IDF 131 specify?

ISO 8553 | IDF 131 specifies a method for counting microorganisms in raw milk by the plate-loop technique at 30 °C. It is limited to raw milk and to the microorganism level stated in the document, so it is aimed at samples where this direct count method remains suitable.

The document is organized around the full laboratory sequence:

• Clause 1 scope
• Clause 2 normative references
• Clause 3 terms and definitions
• Clause 4 principle
• Clauses 5 to 12 covering media, equipment, sampling, preparation, procedure, result expression, test report, and quality assurance
• Annex A with a flow diagram of the procedure
• Annex B with culture media, reagents, and performance testing requirements

Annex	What it covers
Annex A	Flow diagram of the main steps of the plate-loop method
Annex B	Culture media and reagents, including MPCA and its performance testing

What are the key requirements of ISO 8553 | IDF 131?

ISO 8553 | IDF 131 is built around a direct count of a measured sample volume rather than decimal dilution. The practical result is a simple workflow for raw milk laboratories: take a calibrated loopful, mix it with MPCA, incubate, count colonies, and calculate the count per millilitre.

Principle and counting approach

Clause 4 says the sample is picked up with a calibrated loop, washed into an empty Petri dish with diluent from a continuous pipette, mixed with molten culture medium, and poured as a plate. The plates are incubated aerobically at 30 °C for 72 h. In practice, the user must control loop handling carefully, because removal speed affects the delivered volume.

Equipment and calibration

Clause 6 requires a calibrated loop inoculation assembly, incubator, sterilization equipment, Petri dishes, and colony-counting equipment. The loop is calibrated to hold 0,001 ml, so its condition matters directly to the result. The standard also asks for regular verification of the loop by comparing duplicate counts against the colony-count technique on 25 samples.

Sampling and test portion preparation

Clauses 7 and 8 separate sampling from the method itself. The laboratory should receive a representative sample and prepare the test sample according to the relevant milk sampling and dilution rules. This matters because poor transport, storage, or dilution can change the microbial count before the method even starts.

Procedure controls

Clause 9 requires aseptic technique throughout. The method includes a sterile instrument control, a rinsing control, and an agar control, so the laboratory can check whether the loop, diluent path, or medium is introducing contamination. It also requires the plated medium to be poured within 15 min of discharging the loop.

Counting and result expression

Clause 9.5 says to count plates with fewer than 300 colonies if possible, include pinpoint colonies, and treat spreading or connected colonies as single colonies. Clause 10 then says to report the result as microorganisms in cfu per ml and to multiply the plate count by 1 000 to obtain the plate-loop count (PLC). In practice, the laboratory needs a consistent counting rule, especially for lightly overgrown plates.

Quality assurance and media testing

Clause 12 and Annex B link the method to routine quality control. The laboratory should use positive controls, negative controls, blanks, and performance testing of MPCA. That keeps the medium and the procedure aligned with the method's expected performance.

What terms does ISO 8553 | IDF 131 define?

The document defines microorganisms as bacteria, yeasts, and moulds that can form colonies in or on MPCA under the specified test conditions.

APC means aerobic plate count. The introduction explains that it indicates the level of microorganisms that grow aerobically at mesophilic temperatures, but it is not the whole microbial population.

cfu means colony-forming units. The result is expressed in cfu per millilitre, so the count is tied to visible colonies rather than direct cell number.

PLC means plate-loop count. This is the calculated result obtained from the plate count after multiplying by 1 000.

MPCA means milk plate count agar. This is the culture medium used to form the poured plates and recover the colonies.

WDCM means World Data Centre for Microorganisms. Annex B uses WDCM reference numbers for the control strains in performance testing.

Who uses ISO 8553 | IDF 131?

ISO 8553 | IDF 131 is used by dairy microbiology laboratories, milk processors, and food control laboratories that need to enumerate microorganisms in raw milk. It is relevant for quality control, product monitoring, and routine analytical work where a standardized count method is required.

What changed in ISO 8553 | IDF 131 from the previous edition?

ISO 8553 | IDF 131 is the second edition and cancels and replaces ISO 8553 | IDF 131:2004. The foreword states these main changes:

• updated normative references
• procedure aligned with ISO 4833-1
• result expression aligned with ISO 7218
• Annex A flow diagram added
• performance testing of MPCA introduced
• bibliography updated

Which standards are used with ISO 8553 | IDF 131?

ISO 8553 | IDF 131 relies on these related standards:

• ISO 6887-1 - general rules for preparing the initial suspension and decimal dilutions
• ISO 6887-5 - specific rules for milk and milk products
• ISO 7218 - general microbiological laboratory requirements, calculations, and result expression
• ISO 11133 - preparation, storage, and performance testing of culture media and reagents
• ISO 707 | IDF 50 - recommended sampling guidance for milk and milk products
• ISO 4833 series - used for loop calibration checks and comparison with the colony-count technique

What does the ISO 8553 | IDF 131 document contain?

ISO 8553 | IDF 131 contains the step-by-step laboratory method, from preparing the loop inoculation equipment to incubating and counting the plates. It also includes the rules for colony selection, handling spreaders, and expressing results as PLC per ml.

Annex A gives a flow diagram of the method, which is useful for training and day-to-day bench work. Annex B gives the composition, preparation, storage, and performance testing of MPCA, plus the disinfecting solution and diluent guidance.

The document also includes a test report section and a quality assurance section. These help laboratories document the run properly and keep media, equipment, and controls suitable for the method.

International
Standard
ISO 8553
IDF 131
Second edition
Milk — Enumeration of
2026-11
microorganisms — Plate-loop
technique at 30 °C
Lait — Dénombrement des micro-organismes — Méthode de
l'anse calibrée en boîtes de Petri à 30 °C
Reference numbers
IDF 131:2026(en) © ISO and IDF 2026

IDF 131:2026(en)
© ISO and IDF 2026
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office International Dairy Federation
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8 Silver Building • Bd Auguste Reyers 70/B
CH-1214 Vernier, Geneva B-1030 Brussels
Phone: [phone] Phone: [phone]
Fax: [phone]
Email: [e-mail] Email: [e-mail]
Website: www.iso.org Website: www.fil-idf.org
Published in Switzerland
ii
IDF 131:2026(en)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Culture media and reagents . 2
6 Equipment and consumables . 2
7 Sampling . 3
8 Preparation of test sample . 4
9 Procedure . 4
9.1 General .4
9.2 Preparation of the test portion .4
9.3 Preparation of loop inoculation equipment .4
9.4 Inoculation and incubation.4
9.5 Counting of colonies .5
10 Expression of results . 5
10.1 Method of calculation .5
10.2 Precision . . .5
10.2.1 General .5
10.2.2 Repeatability .6
11 Test report . 6
12 Quality assurance . 6
Annex A (informative) Flow diagram of the main steps of the procedure . 7
Annex B (normative) Culture media and reagents . 8
Bibliography .10

iii
IDF 131:2026(en)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee
has been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk
and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and IDF.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 8553 | IDF 131:2004), which has been
technically revised.
The main changes are as follows:
— the normative references have been updated;
— the description of the procedure has been adapted to that specified by ISO 4833-1;
— the expression of results has been changed to be in accordance with ISO 7218;
— a flow diagram of the main steps of the procedure has been included in Annex A;
— the performance testing of the culture medium, milk plate count agar (MPCA), has been introduced;
— the Bibliography has been updated.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.

iv
IDF 131:2026(en)
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit private sector organization representing the
interests of various stakeholders in dairying at the global level. IDF members are organized in National
Committees, which are national associations composed of representatives of dairy-related national interest
groups including dairy farmers, dairy processing industry, dairy suppliers, academics and governments/
food control authorities.
ISO and IDF collaborate closely on all matters of standardization relating to methods of analysis and
sampling for milk and milk products. Since 2001, ISO and IDF jointly publish their International Standards
using the logos and reference numbers of both organizations.
IDF draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). IDF takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent
rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, IDF had not received notice of (a)
patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that
this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
This document was prepared by the IDF Standing Committee on Methods for Dairy Microbiology and ISO
Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being
published jointly by ISO and IDF.
The work was carried out by the IDF/ISO Action Team (H24) of the Standing Committee on Methods for Dairy
Microbiology under the aegis of its project leader Barbara Gerten (DE).

v
IDF 131:2026(en)
Introduction
The aerobic plate count (APC) is intended to indicate the level of microorganism in a product.
It is not a measure of the entire population of microorganisms, as is falsely suggested by other frequently
used terms such as “total plate count” and “total viable count”. APC is a generic test for microorganisms that
grow aerobically at mesophilic temperatures (approximately 20 °C to 45 °C). The APC does not differentiate
between different types of microorganisms and includes bacteria as well as yeasts and moulds.
Reference [5] gives an overview of the methods for the direct and indirect assessment of the bacterial content
of milk. Results of evaluations of the plate loop technique for determining viable bacterial counts in milk are
given in References [6] and [7]. For a comparison of plate loop and agar plate methods for bacteriological
examination of manufacturing grade raw milk, see Reference [8].
The main technical changes listed in the Foreword, introduced in this document compared to ISO 8553 |
IDF 131:2004, are considered as minor (see ISO 17468).
These technical changes have a minor impact on the performance characteristics of the method.

vi
International Standard
IDF 131:2026(en)
Milk — Enumeration of microorganisms — Plate-loop
technique at 30 °C
1 Scope
This document specifies the enumeration of microorganisms by the plate-loop technique at 30 °C.
This document is applicable to raw milk and is only applicable to samples that contain microorganisms up to
a level of 3 × 10 cfu/ml.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content constitutes
requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references,
the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 6887-1, Microbiology of the food chain — Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension
and decimal dilutions
ISO 6887-5, Microbiology of the food chain — Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination — Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products
ISO 7218, Microbiology of the food chain — General requirements and guidance for microbiological examinations
ISO 11133, Microbiology of the food chain, animal feed and water — Preparation, production, storage and
performance testing of culture media and reagents
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
microorganisms
bacteria, yeasts and moulds, usually capable of forming colonies in/on milk plate count agar (MPCA) when a
specified test is conducted
Note 1 to entry: Specified tests are given in Clause 9.
4 Principle
A specified quantity of the liquid test sample is picked up by a calibrated inoculating loop. It uses
volumetrically calibrated loops for transferring samples instead of decimal dilutions. The calibrated loop is
attached to a continuous volume pipette for dispensing and rinsing the sample into an empty Petri dish. It is
mixed well with a specified molten culture medium to form a poured plate.

IDF 131:2026(en)
When the number of colony-forming units (cfu) is expected to be at or near the limit of determination, the
use of duplicate plates is preferable. If duplicate plates are used, the minimum for the sum of colonies on
both plates should be 10 colonies. In this case, the level of contamination is expected to be higher than 5 cfu/
ml for the liquid samples.
Other plates are prepared under the same conditions.
The plates are incubated under aerobic conditions at 30 °C for 72 h.
The number of microorganisms (plate loop count; PLC) per millilitre of test sample is calculated from the
number of colonies obtained on the plates containing fewer than 300 colonies.
A flow diagram of the main steps of the procedure is given in Annex A.
5 Culture media and reagents
Follow good laboratory practices in accordance with ISO 7218. The composition of the culture media and
reagents and their preparation are specified in Annex B. For performance testing of the culture media,
follow the procedures in accordance with Annex B and ISO 11133.
6 Equipment and consumables
Disposable equipment is an acceptable alternative to reusable items if these have the suitable specifications.
The usual microbiological laboratory equipment (see ISO 7218) and, in particular, the following shall be
used.
6.1 Loop inoculation equipment.
6.1.1 Components
The total equipment assembly can be purchased as a unit but can also be made up from the components
listed in 6.1.1.1 to 6.1.1.3. Automatic equipment may also be used.
6.1.1.1 Platinum inoculating loop, calibrated to hold 0,001 ml, soldered to a Luer-lock hypodermic
needle. Make a 30° bend about 3 mm to 4 mm from the loop, with the loop opening towards the hub.
Alternatively, use a loop, calibrated to hold 0,001 ml, made of platinum, platinum-rhodium or platinum-
iridium wire of diameter 0,4 mm to 0,5 mm, attached to a wire of length 60 mm to 70 mm. Make a 30° bend
about 3 mm to 4 mm from the loop. Kink the opposite end of the wire in several places. Insert the kinked end
of the wire in a Luer-lock hypodermic needle, 13-gauge, tip sawn or clipped off 24 mm to 26 mm from the
point where the barrel enters the hub, to a point where the bend is about 12 mm to 14 mm from the end of
the barrel. The wire is fixed in the Luer-locked hypodermic needle by its kinks.
NOTE Illustrations showing the 0,001 ml inoculation loop and wire shank are provided in References [8] and [9].
References [9] and [10] include also photographic illustrations of the transfer and measurement instrument assembled
and ready for use as well as its usage during inoculation.
Regularly check the calibrati
...

Norme
internationale
ISO 8553
FIL 131
Deuxième édition
Lait — Dénombrement des micro-
2026-11
organismes — Méthode de l'anse
calibrée en boîtes de Petri à 30 °C
Milk — Enumeration of microorganisms — Plate-loop technique
at 30 °C
Numéros de référence
FIL 131:2026(fr) © ISO et FIL 2026

FIL 131:2026(fr)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO et FIL 2026
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8 Silver Building • Bd Auguste Reyers 70/B
CH-1214 Vernier, Genève B-1030 Brussels
Tél.: [phone] Tél.: + 32 2 325 67 40
Fax: + 32 2 325 67 41
E-mail: [e-mail] E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org Web: www.fil-idf.org
Publié en Suisse
© ISO et FIL 2026 – Tous droits réservés
ii
FIL 131:2026(fr)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 2
5 Milieux de culture et réactifs . 2
6 Équipement et consommables . 2
6.1 Matériel d’ensemencement .2
6.1.1 Composants .2
6.1.2 Assemblage et stérilisation du matériel d’ensemencement .3
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire . 4
9.1 Généralités .4
9.2 Préparation de la prise d’essai.4
9.3 Préparation du matériel d’ensemencement à l’anse calibrée .4
9.4 Ensemencement et incubation . .4
9.5 Comptage des colonies.5
10 Expression des résultats . 6
10.1 Méthode de calcul .6
10.2 Fidélité .6
10.2.1 Généralités .6
10.2.2 Répétabilité .6
11 Rapport d’essai . 6
12 Assurance qualité . 7
Annexe A (informative) Logigramme des principales étapes du mode opératoire . 8
Annexe B (normative) Milieux de culture et réactifs . 9
Bibliographie .12

© ISO et FIL 2026 – Tous droits réservés
iii
FIL 131:2026(fr)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération Internationale du Lait (FIL). Il est publié conjointement par l’ISO
et la FIL.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 8553 | IDF 131:2004), qui a fait l’objet
d’une révision technique.
Les principales modifications sont les suivantes:
— les références normatives ont été mises à jour;
— la description du mode opératoire a été adaptée à celle spécifiée par l’ISO 4833-1;
— l’expression des résultats a été modifiée pour être conforme à l’ISO 7218;
— un logigramme des principales étapes du mode opératoire est présenté à l’Annexe A;
— les essais de performance du milieu de culture, la gélose au lait pour dénombrement sur boîte (MPCA),
ont été introduits;
— la bibliographie a été mise à jour.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.

© ISO et FIL 2026 – Tous droits réservés
iv
FIL 131:2026(fr)
La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente les
intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont organisés
en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de groupes d’intérêt
nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des acteurs de l’industrie
de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des universitaires et des
représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.
L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes
d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient
conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux
organisations.
La FIL attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. La FIL ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, la FIL n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie
de tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Le présent document a été élaboré par le Comité permanent de la FIL chargé des méthodes de microbiologie
laitière de la Fédération internationale du lait (FIL) et le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Il est publié conjointement par l’ISO et la FIL.
L’ensemble des travaux a été confié à l’Équipe d’action FIL/ISO (H24) du Comité permanent chargé des
méthodes de microbiologie laitière, sous la conduite de son chef de projet, Barbara Gerten (DE).

© ISO et FIL 2026 – Tous droits réservés
v
FIL 131:2026(fr)
Introduction
Le dénombrement de la flore aérobie sur gélose (APC) est destiné à indiquer le niveau de micro-organismes
dans un produit.
Il ne s’agit pas d’une mesure de l’ensemble de la population de micro-organismes, comme le suggèrent à
tort d’autres termes fréquemment utilisés tels que “dénombrement total sur gélose” et “dénombrement
total viable”. L’APC est un essai générique pour les micro-organismes qui se développent en aérobie à des
températures mésophiles (environ 20 °C à 45 °C). L’APC ne fait pas de distinction entre les différents types
de micro-organismes. et inclut les bactéries ainsi que les levures et les moisissures.
La Référence [5] donne un aperçu des méthodes d’évaluation directe et indirecte de la teneur en bactéries
du lait. Les résultats des évaluations de la méthode de l’anse calibrée en boîtes de Petri pour déterminer

le dénombrement des bactéries viables dans le lait sont donnés dans les Références [6] et [7]. Pour une
comparaison de la méthode de l’anse calibrée en boîtes de Petri et de la méthode sur boîtes de gélose pour
l’examen bactériologique du lait cru de qualité industrielle, voir la Référence [8].
Les principales modifications techniques énumérées dans l’Avant-propos et introduites dans le présent
document par rapport à l’ISO 8553 | IDF 131:2004 sont considérées comme des modifications mineures
(voir l’ISO 17468).
Ces modifications techniques ont un impact mineur sur les caractéristiques de performance de la méthode.

© ISO et FIL 2026 – Tous droits réservés
vi
Norme internationale
FIL 131:2026(fr)
Lait — Dénombrement des micro-organismes — Méthode de
l'anse calibrée en boîtes de Petri à 30 °C
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie le dénombrement des micro-organismes par la méthode de l’anse calibrée en
boîtes de Petri à 30 °C.
Le présent document s’applique au lait cru et ne s’applique qu’aux échantillons contenant des micro-
organismes jusqu’à un niveau de 3 × 10 ufc/ml.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour
les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 6887-1, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de la
suspension mère et des dilutions décimales
ISO 6887-5, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique — Partie 5: Règles spécifiques pour la préparation du
lait et des produits laitiers
ISO 7218, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Exigences générales et recommandations pour les examens
microbiologiques
ISO 11133, Microbiologie de la chaîne alimentaire, des aliments pour animaux et de l’eau — Préparation,
production, stockage et essais de performance des milieux de culture et des réactifs
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation,
consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
micro-organismes
bactéries, levures et moisissures, généralement capables de former des colonies dans/sur la gélose au lait
pour dénombrement sur boîte (MPCA) lorsqu’un essai spécifié est effectué
Note 1 à l'article: Les essais spécifiés sont présentés à l’Article 9.

© ISO et FIL 2026 – Tous droits réservés
FIL 131:2026(fr)
4 Principe
Une quantité spécifiée de l’échantillon liquide pour essai est prélevée par une anse d’ensemencement calibrée.
Des anses calibrées volumétriquement sont utilisées pour transférer les échantillons au lieu de dilutions
décimales. L’anse calibrée est fixée à une pipette à volume continu pour déposer et rincer l’échantillon dans
une boîte de Petri vide. Celui-ci est bien mélangé à un milieu de culture fondu spécifié, constituant ainsi une
boîte de gélose ensemencée en profondeur.
Lorsqu’il est attendu que le nombre d’unités formant colonie (ufc) soit au niveau ou proche de la limite de
détermination, il est préférable de réaliser des boîtes en double exemplaire. En cas de réalisation de boîtes
en double exemplaire, il convient que la somme des colonies dans les deux boîtes soit au minimum égale à 10.
Dans ce cas, il est attendu que le niveau de contamination soit supérieur à 5 ufc/ml pour les échantillons
liquides.
Les autres boîtes sont préparées dans les mêmes conditions.
Les boîtes sont incubées en conditions aérobies à 30 °C pendant 72 h.
Le nombre de micro-organismes (dénombrement par la méthode de l’anse calibrée en boîtes de Petri, PLC)
par millilitre d’échantillon pour essai est calculé à partir du nombre de colonies obtenues sur les boîtes
contenant moins de 300 colonies.
Un logigramme des principales étapes du mode opératoire est présenté à l’Annexe A.
5 Milieux de culture et réactifs
Suivre les bonnes pratiques de laboratoire conformément à l’ISO 7218. La composition des milieux de culture
et des réactifs et leur préparation sont spécifiées à l’Annexe B. Pour les essais de performance des milieux de
culture, suivre les modes opératoires conformément à l’Annexe B et à l’ISO 11133.
6 Équipement et consommables
Le matériel à usage unique est acceptable au même titre que les éléments réutilisables, à condition que ses
spécifications soient convenables. Le matériel courant de laboratoire de microbiologie (voir l’ISO 7218) et,
en particulier, ce qui suit doit être utilisé.
6.1 Matériel d’ensemencement
6.1.1 Composants
Cet assemblage d’équipements peut être acheté tel quel, mais il est également possible de le constituer à
partir des composants listés de 6.1.1.1 à 6.1.1.3. Un équipement automatique peut être également utilisé.
6.1.1.1 Anse calibrée en fil de platine, étalonnée pour prélever 0,001 ml, soudée à une aiguille de
seringue Luer-lock. Couder le fil à 30° à environ 3 mm ou 4 mm de l’anse, l’anse s’ouvrant en direction du
raccord.
À défaut, utiliser une anse, étalonnée à 0,001 ml, en fil de platine, de platine rhodié ou de platine iridié, d’un
diamètre compris entre 0,4 mm et 0,5 mm, fixée à un fil d’une longueur de 60 mm à 70 mm. Couder le fil à 30°
à environ 3 mm ou 4 mm de l’anse. Vriller l’extrémité opposée du fil à plusieurs endroits. Insérer l’extrémité
vrillée dans une seringue Luer-lock de calibre 13, dont la pointe a été coupée ou sectionnée à environ 24 mm
à 26 mm du point où le corps de la seringue pénètre dans le raccord, jusqu’à ce que la courbure se trouve à
environ 12 mm à 14 mm de l’extrémité du corps. Le fil est fixé dans l’aiguille hypodermique Luer-lock par sa
partie vrillée.
NOTE Des illustrations montrant l’anse d’ensemencement de 0,001 ml et la tige du fil sont fournies dans les
Références [8] et [9]. Les Références [9] et [10] comprennent également des illustrations photographiques de
l’instrument de transfert et de mesure assemblé et prêt à l’emploi ainsi que son utilisation pendant l’ensemencement.

© ISO et FIL 2026 – Tous droits réservés
FIL 131:
...