ISO 8784-3:2022
(Main)Pulp, paper and board — Microbiological examination — Part 3: Enumeration of yeast and mould based on disintegration
Pulp, paper and board — Microbiological examination — Part 3: Enumeration of yeast and mould based on disintegration
This document specifies a method for determining the total number of colony-forming units of yeast and mould in dry market pulp, paper and paperboard after disintegration. The enumeration relates to specific media.
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbiologique — Partie 3: Dénombrement des levures et des moisissures basé sur la désintégration
Le présent document spécifie une méthode de détermination du nombre total d’unités formant colonie de levures et de moisissures dans de la pâte commerciale sèche, le papier et le carton, après désintégration. Le dénombrement se rapporte à un milieu spécifique.
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 8784-3
First edition
2022-04
Pulp, paper and board —
Microbiological examination —
Part 3:
Enumeration of yeast and mould
based on disintegration
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbiologique —
Partie 3: Dénombrement des levures et des moisissures basé sur la
désintégration
Reference number
ISO 8784-3:2022(E)
© ISO 2022
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ISO 8784-3:2022(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
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All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on
the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below
or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii
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ISO 8784-3:2022(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Culture media and diluents .2
5.1 General . 2
5.2 Water . 2
5.3 Culture media for total yeast and mould count . 2
5.4 Diluents . 2
5.5 Non-ionic surfactant . 3
6 Apparatus and equipment . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of the test material. 4
8.1 General . 4
8.2 Weighing . 4
8.3 Disintegration . 5
9 Determination of yeast and mould count . 5
9.1 General . 5
9.2 Plating for yeast and mould count . 5
9.3 Incubation . 5
10 Enumeration of the colonies .6
11 Calculation and report . 6
11.1 Calculation . 6
11.2 Interpretation . 7
11.3 Report . 7
12 Test report . 7
Bibliography . 9
iii
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ISO 8784-3:2022(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 6, Paper, board and pulps, Subcommittee
SC 2, Test methods and quality specifications for paper and board.
A list of all parts in the ISO 8784 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 8784-3:2022(E)
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 3:
Enumeration of yeast and mould based on disintegration
1 Scope
This document specifies a method for determining the total number of colony-forming units of yeast
and mould in dry market pulp, paper and paperboard after disintegration. The enumeration relates to
specific media.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 186, Paper and board — Sampling to determine average quality
ISO 638-1, Paper, board, pulps and cellulosic nanomaterials - Determination of dry matter content by oven-
drying method - Part 1: Materials in solid form
ISO 7213, Pulps — Sampling for testing
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
yeast
mesophilic aerobic microorganism which, at 25 °C using mycological agar medium under the conditions
described in this document, develops matte or shiny round colonies on the surface of the medium,
usually having a regular outline and a more or less convex surface
Note 1 to entry: Yeasts within, rather than on, a medium develop round, lenticular, colonies.
3.2
mould
mesophilic aerobic filamentous microorganism which, on the surface of mycological agar medium
under the conditions described in this document, usually develops flat or fluffy spreading propagules/
germs or colonies often with coloured fruiting or sporing structures
Note 1 to entry: Moulds within, rather than on, a medium can develop round, lenticular, colonies.
3.3
yeast and mould count
number of colony-forming units (CFU) of yeast (3.1) and mould (3.2) formed after incubation in a
standard culture medium, under the test conditions specified in this document
1
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ISO 8784-3:2022(E)
4 Principle
This pour plate method involves enumeration of colonies in a standard culture medium. A fibre
suspension, prepared from paper, paperboard, or pulp samples, is plated in agar.
The plates are incubated at 25 °C ± 1 °C for 5 d. The total numbers of yeast and mould are enumerated
by counting the colonies formed in the agar. The results are expressed as the number of CFU per gram
of sample.
5 Culture media and diluents
5.1 General
All substrates and diluents shall be appropriately sterilized. When preparing the culture medium, make
sure that the ingredients are completely dissolved by mixing while heating prior to dispensing into
suitable containers for sterilization. See ISO 11133 for quality assurance and guidelines on preparation
and production of culture media.
5.2 Water
When water is mentioned in a formula, use distilled water or purified water, see ISO 11133.
5.3 Culture media for total yeast and mould count
Culture medium shall be prepared as follows, or from commercially available dehydrated culture media
according to the manufacturer’s instructions. Ready-to-use medium may be used when its composition
is comparable to that given in this document. To test the performance of the medium, see ISO 11133.
Sabouraud dextrose chloramphenicol agar medium (SDCA) composition per litre:
— dextrose 40,0 g
— peptic digest of animal tissue 5,0 g
— pancreatic digest of casein 5,0 g
— chloramphenicol 0,050 g
— agar 15,0 g
— water 1 000 ml
Dissolve the components (including the chloramphenicol) or the dehydrated complete medium in the
water by heating. Dispense the medium into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for
15 min. After sterilization the pH shall be equivalent to 5,6 ± 0,2 when measured at room temperature.
5.4 Diluents
Ringer’s solution ¼ strength
Composition per litre:
— Sodium chloride (NaCl) 2,250 g;
— Potassium chloride (KCl) 0,105 g;
— Calcium chloride (CaCl ) 6 H O 0,120 g;
2 2
— Sodium hydrogen carbonate (NaHCO ) 0,050 g;
3
2
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ISO 8784-3:2022(E)
— Water 1 000 ml.
NOTE 1 Ringer’s solution is preferred, although other isotonic solutions can be used. See ISO 6887-1.
NOTE 2 Ringer’s tablets are commercially available.
5.5 Non-ionic surfactant
Poly (oxyethylene)-sorbitan monooleate (Tween 80).
To facilitate the release of cells from the fibres, it is recommended to add 20 µl of Tween 80 per litre to
the Ringer’s solution prior to sterilization by autoclaving.
6 Apparatus and equipment
6.1 General
Disposable apparatus is an acceptable alternative to re-usable glassware and plastic if it has suitable
specifications.
All laboratory equipment and parts of the equipment in direct contact with the sample and the diluents
or the culture m
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 8784-3
Première édition
2022-04
Pâtes, papiers et cartons — Analyse
microbiologique —
Partie 3:
Dénombrement des levures et des
moisissures basé sur la désintégration
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 3: Enumeration of yeast and mould based on disintegration
Numéro de référence
ISO 8784-3:2022(F)
© ISO 2022
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ISO 8784-3:2022(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2022
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
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ISO 8784-3:2022(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 2
5 Milieux de culture et diluants .2
5.1 Généralités . 2
5.2 Eau . 2
5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de levures et de moisissures . 2
5.4 Diluants . 3
5.5 Surfactant non ionique . 3
6 Appareillage et matériel .3
7 Échantillonnage .4
8 Préparation du matériau pour essai .4
8.1 Généralités . 4
8.2 Pesée . 5
8.3 Désintégration . 5
9 Détermination du nombre de levures et de moisissures . 5
9.1 Généralités . 5
9.2 Ensemencement relatif au nombre de levures et de moisissures . 5
9.3 Incubation . 6
10 Dénombrement des colonies .6
11 Calcul et expression des résultats .7
11.1 Calcul . 7
11.2 Interprétation . 8
11.3 Rapport. 8
12 Rapport d’essai . 8
Bibliographie . 9
iii
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ISO 8784-3:2022(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété. Les détails concernant les références aux droits
de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l'élaboration du document
sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par l'ISO (voir
www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l'intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www.iso.org/iso/avant-propos.html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 6, Papiers, cartons et pâtes, sous-
comité SC 2, Méthodes d'essais et spécifications de qualité des papiers et cartons.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 8784 peut être consultée sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/members.html.
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NORME INTERNATIONALE ISO 8784-3:2022(F)
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbiologique —
Partie 3:
Dénombrement des levures et des moisissures basé sur la
désintégration
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination du nombre total d’unités formant
colonie de levures et de moisissures dans de la pâte commerciale sèche, le papier et le carton, après
désintégration. Le dénombrement se rapporte à un milieu spécifique.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s'applique (y compris les
éventuels amendements)
ISO 186, Papier et carton — Échantillonnage pour déterminer la qualité moyenne
ISO 638-1, Papiers, cartons, pâtes et nanomatériaux cellulosiques — Détermination de la teneur en matières
sèches par séchage à l’étuve — Partie 1: Matériaux sous forme solide
ISO 7213, Pâtes — Échantillonnage pour essais
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
L'ISO et l'IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l'adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l'adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
levure
micro-organisme aérobie, mésophile qui, à 25 °C et en utilisant un milieu gélosé mycologique dans
les conditions décrites dans le présent document, se développe à la surface du milieu en formant des
colonies rondes, mates ou brillantes, présentant le plus souvent un contour régulier et une surface plus
ou moins convexe
Note 1 à l'article: Des levures se développant en profondeur, plutôt qu'à la surface, d'un milieu forment des
colonies rondes et lenticulaires.
1
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ISO 8784-3:2022(F)
3.2
moisissure
micro-organisme aérobie, mésophile filamenteux qui, à la surface d'un milieu gélosé mycologique et
dans les conditions décrites dans le présent document, développe habituellement des propagules/
germes plats ou duveteux ou des colonies présentant souvent des fructifications colorées et des formes
de sporulation
Note 1 à l'article: Des moisissures se développant en profondeur, plutôt qu'à la surface, d'un milieu peuvent
former des colonies rondes et lenticulaires.
3.3
dénombrement des levures et des moisissures
nombre d’unités formant colonie (UFC) de levures (3.1) et de moisissures (3.2), formées après incubation
dans un milieu de culture type, dans les conditions d’essai spécifiées dans le présent document
4 Principe
La présente méthode d’ensemencement en profondeur implique un dénombrement des colonies dans un
milieu de culture type. Une suspension fibreuse préparée à partir d’échantillons de papier, de carton ou
de pâte est ensemencée dans une gélose.
Les boîtes sont incubées à (25 ± 1) °C pendant 5 j. Le nombre total de levures et de moisissures est
obtenu par dénombrement des colonies formées dans la gélose. Les résultats sont exprimés en nombre
d’UFC par gramme d’échantillon.
5 Milieux de culture et diluants
5.1 Généralités
Tous les substrats et diluants doivent être convenablement stérilisés. Lors de la préparation du milieu
de culture, s’assurer que les ingrédients sont entièrement dissous en les mélangeant pendant qu’ils
chauffent avant de les répartir dans des récipients appropriés pour la stérilisation. Voir l’ISO 11133
relative à l’assurance qualité et aux lignes directrices pour la préparation et la production de milieux de
culture.
5.2 Eau
Lorsque de l’eau est mentionnée dans une formule, utiliser de l’eau distillée ou purifiée; voir l’ISO 11133.
5.3 Milieux de culture relatifs au nombre total de levures et de moisissures
Les milieux de culture doivent être préparés de la manière suivante ou selon les instructions du
fabricant à partir de milieux de culture déshydratés disponibles dans le commerce. Des milieux prêts
à l’emploi peuvent être utilisés lorsque leur composition est comparable à celle donnée dans le présent
document. Pour les essais de performance des milieux, voir l’ISO 11133.
Composition par litre du milieu gélosé Sabouraud au dextrose et chloramphénicol (SDCA):
— dextrose 40,0 g
— hydrolysat pepsique de tissus animaux 5,0 g
— hydrolysat pancréatique de caséine 5,0 g
— chloramphénicol 0,050 g
— gélose 15,0 g
— eau 1 000 ml.
2
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ISO 8784-3:2022(F)
Dissoudre les composants (y compris le chloramphénicol) ou le milieu complet déshydraté dans
l’eau en chauffant. Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C
pendant 15 min. Après stérilisation, le pH doit être de 5,6 ± 0,2, la mesure étant effectuée à température
ambiante.
5.4 Diluants
Solution de Ringer titrée à ¼
Composition par litre:
— chlorure de sodium (NaCl) 2,250 g;
— chlorure de potassium (KCl) 0,105 g;
— chlorure de calcium (CaCl ) 6 H O 0,120 g;
2 2
— hydrogénocarbonate de sodium (NaHCO ) 0,050 g;
3
— eau 1 000 ml.
NOTE 1 Il est préférable d’utiliser la solution de Ringer bien que d’autres solutions isotoniques puissent être
utilisées. Voir l’ISO 6887-1.
NOTE 2 Des pastilles Ringer sont disponibles dans le commerce.
5.5 Surfactant non ionique
Monooléate de polyoxyéthylène sorbitane (Tween 80).
Pour faciliter la libération des cellules par les fibres, il est recommandé d’ajouter 20 μl de Tween 80
par litre à la solution de Ringer, avant la stérilisation par autoclave.
6 Appareillage et matériel
6.1 Généralités
Il est admis de remplacer la verrerie réutilisable et le plastique par un appareillage jetable si celui-ci a
des spécifications appropriées.
Tout le matériel de laboratoire et les parties du matériel en contact direct avec l’échantillon et les
diluants ou le milieu de culture doivent être stérilisés.
NOTE Pour des conseils sur le matériel de microbiologie courant, voir l’ISO 7218.
Matériel courant de laboratoire de microbiologie et en particulier ce qui suit.
6.2 Appareillage pour stérilisation par chaleur sèche (four) et par chaleur humide (autoclave)
Voir l’ISO 7218.
6.3 Poste de sécurité biologique, classe II.
6.4 Matériel d’emballage approprié, par exemple feuille d’aluminium (non revêtue et inerte),
enveloppes prêtes à l’emploi de di
...
FINAL
INTERNATIONAL ISO/FDIS
DRAFT
STANDARD 8784-3
ISO/TC 6/SC 2
Pulp, paper and board —
Secretariat: SIS
Microbiological examination —
Voting begins on:
2021-12-20
Part 3:
Voting terminates on:
Enumeration of yeast and mould
2022-02-14
based on disintegration
Pâtes, papiers et cartons — Analyse microbiologique —
Partie 3: Dénombrement des levures et des moisissures basé sur la
désintégration
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED TO
SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS, NOTIFICATION
OF ANY RELEVANT PATENT RIGHTS OF WHICH
THEY ARE AWARE AND TO PROVIDE SUPPOR TING
DOCUMENTATION.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
Reference number
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL, TECHNO-
ISO/FDIS 8784-3:2021(E)
LOGICAL, COMMERCIAL AND USER PURPOSES,
DRAFT INTERNATIONAL STANDARDS MAY ON
OCCASION HAVE TO BE CONSIDERED IN THE
LIGHT OF THEIR POTENTIAL TO BECOME STAN-
DARDS TO WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
NATIONAL REGULATIONS. © ISO 2021
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/FDIS 8784-3:2021(E)
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ISO/FDIS 8784-3:2021(E)
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Culture media and diluents .2
5.1 General . 2
5.2 Water . 2
5.3 Culture media for total yeast and mould count . 2
5.4 Diluents . 2
5.5 Non-ionic surfactant . 3
6 Apparatus and equipment . 3
7 Sampling . 4
8 Preparation of the test material. 4
8.1 General . 4
8.2 Weighing . 4
8.3 Disintegration . 5
9 Determination of yeast and mould count . 5
9.1 General . 5
9.2 Plating for yeast and mould count . 5
9.3 Incubation . 5
10 Enumeration of the colonies .6
11 Calculation and report . 6
11.1 Calculation . 6
11.2 Interpretation . 7
11.3 Report . 7
12 Test report . 7
Bibliography . 9
iii
© ISO 2021 – All rights reserved
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ISO/FDIS 8784-3:2021(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
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ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 6, Paper, board and pulps, Subcommittee
SC 2, Test methods and quality specifications for paper and board.
A list of all parts in the ISO 8784 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
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FINAL DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/FDIS 8784-3:2021(E)
Pulp, paper and board — Microbiological examination —
Part 3:
Enumeration of yeast and mould based on disintegration
1 Scope
This document specifies a method for determining the total number of colony-forming units of yeast
and mould in dry market pulp, paper and paperboard after disintegration. The enumeration relates to
specific media.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 186, Paper and board — Sampling to determine average quality
ISO 638-1, Paper, board, pulps and cellulosic nanomaterials - Determination of dry matter content by oven-
drying method - Part 1: Materials in solid form
ISO 7213, Pulps — Sampling for testing
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
yeast
mesophilic aerobic microorganism which, at 25 °C using mycological agar medium under the conditions
described in this document, develops matte or shiny round colonies on the surface of the medium,
usually having a regular outline and a more or less convex surface
Note 1 to entry: Yeasts within, rather than on, a medium develop round, lenticular, colonies.
3.2
mould
mesophilic aerobic filamentous microorganism which, on the surface of mycological agar medium
under the conditions described in this document, usually develops flat or fluffy spreading propagules/
germs or colonies often with coloured fruiting or sporing structures
Note 1 to entry: Moulds within, rather than on, a medium can develop round, lenticular, colonies.
3.3
yeast and mould count
number of colony-forming units (CFU) of yeast (3.1) and mould (3.1) formed after incubation in a
standard culture medium, under the test conditions specified in this document
1
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ISO/FDIS 8784-3:2021(E)
4 Principle
This pour plate method involves enumeration of colonies in a standard culture medium. A fibre
suspension, prepared from paper, paperboard, or pulp samples, is plated in agar.
The plates are incubated at 25 °C ± 1 °C for 5 days. The total numbers of yeast and mould are enumerated
by counting the colonies formed in the agar. The results are expressed as the number of CFU per gram
of sample.
5 Culture media and diluents
5.1 General
All substrates and diluents shall be appropriately sterilized. When preparing the culture medium, make
sure that the ingredients are completely dissolved by mixing while heating prior to dispensing into
suitable containers for sterilization. See ISO 11133 for quality assurance and guidelines on preparation
and production of culture media.
5.2 Water
When water is mentioned in a formula, use distilled water or purified water, see ISO 11133.
5.3 Culture media for total yeast and mould count
Culture medium shall be prepared as follows, or from commercially available dehydrated culture media
according to the manufacturer’s instructions. Ready-to-use medium may be used when its composition
is comparable to that given in this part of ISO 8784. To test the performance of the medium, see
ISO 11133.
Sabouraud dextrose chloramphenicol agar medium (SDCA) composition per litre:
— dextrose 40,0 g
— peptic digest of animal tissue 5,0 g
— pancreatic digest of casein 5,0 g
— chloramphenicol 0,050 g
— agar 15,0 g
— water 1 000 ml
Dissolve the components (including the chloramphenicol) or the dehydrated complete medium in the
water by heating. Dispense the medium into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for
15 min. After sterilization the pH shall be equivalent to 5,6 ± 0,2 when measured at room temperature.
5.4 Diluents
Ringer’s solution ¼ strength
Composition per litre:
— Sodium chloride (NaCl) 2,250 g;
— Potassium chloride (KCl) 0,105 g;
— Calcium chloride (CaCl ) 6 H O 0,120 g;
2 2
— Sodium hydrogen carbonate (NaHCO ) 0,050 g;
3
2
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— Water 1 000 ml.
NOTE 1 Ringer’s solution is preferred, although other isotonic solutions can be used. See ISO 6887-1.
NOTE 2 Ringer’s tablets are commercially available.
5.5 Non-ionic surfactant
Poly (oxyethylene)-sorbitan monooleate (Tween 80).
To facilitate the release of cells from the fibres, it is recommended to add 20 µl of Tween 80 per litre to
the Ringer’s solution prior to sterilization
...
Questions, Comments and Discussion
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