ISO/TR 23304:2021

Food products — Guidance on how to express vitamins and their vitamers content

This document provides guidelines on: — how to express vitamin quantity, — the expression of different molecular forms in appropriate units, — and in some cases, vitamin activity, according to vitamers present or used in food products, in addition to the quantitative content determination obtained from ISO and CEN analytical standards. It provides information to be used as a basis for discussion between stakeholders and food control laboratories. It is not intended to be prescriptive or exhaustive.

Produits alimentaires — Document d'orientation sur la manière d'exprimer les teneurs en vitamines et en leurs vitamères

Le présent document fournit des lignes directrices sur: — la manière d’exprimer la quantité de vitamines, — l’expression des différentes formes moléculaires dans les unités appropriées, — et, dans certains cas, l’activité vitaminique, en fonction des vitamères présents ou utilisés dans les produits alimentaires, en plus de la détermination de la teneur quantitative obtenue à partir des normes analytiques de l’ISO et du CEN. Il fournit des informations à utiliser comme base pour les discussions entre les parties prenantes et les laboratoires de contrôle alimentaire. Il n’est pas destiné à être prescriptif ou exhaustif.

General Information

• Status: Published
• Publication Date: 17-May-2021
• ICS: 67.040 - Food products in general
• ICS: 97.020 - Home economics in general
• Technical Committee: ISO/TC 34 - Food products
• Drafting Committee: ISO/TC 34/WG 14 - Vitamins, carotenoids and other nutrients
• Current Stage: 6060 - International Standard published
• Start Date: 18-May-2021
• Due Date: 06-Apr-2021
• Completion Date: 18-May-2021

Standards Content (Sample)

TECHNICAL ISO/TR
REPORT 23304
First edition
2021-05
Food products — Guidance on how to
express vitamins and their vitamers
content
Produits alimentaires — Lignes directrices pour exprimer les teneurs
en vitamines et en leurs vitamères
Reference number
ISO/TR 23304:2021(E)
©
ISO 2021

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2021
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Guidelines per vitamins . 1
4.1 General . 1
4.2 Vitamin E . 2
4.3 Vitamin A. 5
4.4 Vitamin D . 7
4.5 Vitamin K. 8
4.6 Thiamine (vitamin B ) .10
1
4.7 Riboflavin (vitamin B ) .11
2
4.8 Niacin (vitamin B or vitamin PP) .12
3
4.9 Vitamin B .12
6
4.10 Biotin (vitamin H or vitamin B ) .13
8
4.11 Folates (vitamin B ) .14
9
4.12 Vitamin B .15
12
4.13 Pantothenic acid (vitamin B ) .16
5
4.14 Vitamin C .17
5 US FDA unit conversions .19
Bibliography .20
© ISO 2021 – All rights reserved iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Introduction
Vitamins can be naturally found in foods in different molecular forms. In more elaborated food products,
vitamins can be used for fortification by adding several molecular forms with different levels of vitamin
activity. There are regulations governing the addition of vitamins in food products. The authorized
compounds for fortification depend on the type of food. Regulation deals with, for instance baby food or
food supplements. The main problem is that the vitamin activities of the authorized compounds are not
clearly described.
At the same time, it is not mandatory to list the chemical name of the compound used for food
fortification purposes according to food labelling regulations. For example, vitamin E can be written in
the list of ingredients without knowing if it is D-alpha tocopherol or D,L-alpha tocopherol, even though
each molecular form presents different vitamin E activity.
ISO and CEN analytical standards express results in mass units related to the vitamin standard used
for quantification. As expression in specific units of vitamin activity can be linked to regional/national
regulatory requirements, analytical methods do not give guidance for this conversion. This document
proposes ways to express the vitamin content in order to facilitate harmonization between different
laboratories and also to reduce misunderstanding of the results expressed in vitamin content and in
some cases in the vitamin activity of vitamers.
© ISO 2021 – All rights reserved v

---------------------- Page: 5 ----------------------
TECHNICAL REPORT ISO/TR 23304:2021(E)
Food products — Guidance on how to express vitamins and
their vitamers content
1 Scope
This document provides guidelines on:
— how to express vitamin quantity,
— the expression of different molecular forms in appropriate units,
— and in some cases, vitamin activity, according to vitamers present or used in food products, in
addition to the quantitative content determination obtained from ISO and CEN analytical standards.
It provides information to be used as a basis for discussion between stakeholders and food control
laboratories. It is not intended to be prescriptive or exhaustive.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
vitamer
any of a number of chemical compounds of a particular vitamin, generally having a similar molecular
structure, each of which shows vitamin activity in a vitamin-deficient biological system
Note 1 to entry: See Reference [1].
4 Guidelines per vitamins
4.1 General
This document begins by addressing vitamin E, as this vitamin is considered to be the most complex
in terms of variation of possible units of measurement. Vitamin E is followed by the other fat-soluble
vitamins and water-soluble vitamins respectively.
To include the diversity of available conversion factors, regulations in different countries/regions
are evaluated, including the European Union (EU), Regulations of the United States Food and Drug
Administration (USFDA), United States of America (USA), National Standard (GB) of China, Food
[2]
Standards Australia/New Zealand (FSANZ). In addition, standards of global organizations (CODEX )
are included.
© ISO 2021 – All rights reserved 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

4.2 Vitamin E
Vitamin E is a fat-soluble vitamin. Vitamin E is mainly found in the fat of the different food products as
tocopherols and tocotrienols esters.
Food regulations of many countries authorize the fortification of different kind of food products with
molecules having a vitamin E activity. The names of the authorized molecular forms to add are generally
linked to the type of food product. Table 1 gives an example of vitamin E compounds permitted for use
for food fortification according to EU regulations, depending on the product type.
Table 1 — Example of authorized vitamin E compounds for food fortification in the EU
according to products concerned
Product type Molecular form Molecular Examples of regulations
mass
(g/mol)
D-alpha-tocopherol 430,7
DL-alpha-tocopherol 430,7
Food with a specific D-alpha-tocopheryl acetate 472,8
[3]
Regulation (EU) n° 609/2013
nutritional purpose
DL-alpha-tocopheryl acetate 472,8
D-alpha-tocopheryl polyethylene
glycol 1000 succinate
D-alpha-tocopherol 430,7
DL-alpha-tocopherol 430,7
D-alpha-tocopheryl acetate 472,8
[4]
Supplemented food Regulation (EC) n°1925/2006
DL-alpha-tocopheryl acetate 472,8
D-alpha-tocopheryl acid succi- 530,8
nate
D-alpha-tocopherol 430,7
DL-alpha-tocopherol 430,7
D-alpha-tocopheryl acetate 472,8
DL-alpha-tocopheryl acetate 472,8
[5]
Food supplements Directive n°2002/46/EC
D-alpha-tocopheryl acid succi- 530,8
nate
Mix of tocopherols and tocot-
rienols
There is no global convention on how the amount of vitamin E should be expressed for labelling
purposes. In Table 2 an overview of units of measurement for vitamin E is given according to several
national/regional regulations and a CODEX standard.
Table 2 — Definition of vitamin E for labelling purposes in several standards/regulations
US US EU CODEX China/Australia/New Zealand
(until 2019-12- (as from 2020-
31) 01-01)
a b
IU mg alpha-tocoph- mg alpha – TE mg alpha - TE mg alpha – TE
erol
a
International Unit, a measure of biological activity, different for each substance.
b
Tocopherol equivalent.
2 © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Table 2 (continued)
US US EU CODEX China/Australia/New Zealand
(until 2019-12- (as from 2020-
31) 01-01)
1 IU = 0,67 mg for 1 mg vitamin E 1 mg alpha – TE = 1 mg alpha – TE = 1 mg alpha – TE =
D-alpha tocopher- (as alpha-tocoph-
1 mg D-alpha 1 mg D-alpha 1 mg D-alpha tocopherol
ol (natural) erol) label claim
tocopherol tocopherol
= 1 mg of natural
alpha-tocopherol
(D-alpha-tocoph-
erol)
1 IU = 0,9 mg 1 mg vitamin E
for D, L -alpha (as alpha-tocoph-
tocopherol (syn- erol) label claim =
thetic) 2 mg of synthetic
alpha-tocopherol
(D,L-alpha-to-
copherol
a
International Unit, a measure of biological activity, different for each substance.
b
Tocopherol equivalent.
The vitamin E unit of measurement is generally defined as 1 mg of D-alpha-tocopherol (natural
form). There is currently no standard or official analytical method able to quantify this natural form
specifically.
There are two main analytical approaches for quantifying vitamin E:
1) Saponification of tocopheryl esters to liberate them as free tocopherols. Solvent extraction and
separation of the individual tocopherols by liquid chromatography. Quantification by fluorescence
detection.
An example is EN 12822[6], which includes a saponification and an extraction step. It enables the
separation by a normal phase HPLC, and the quantification of the free alpha, beta, gamma and
delta tocopherols using fluorescence detection. Tocotrienols are also separated but not quantified.
Tocotrienols are not taken into account for the expression of the vitamin result. The D-tocopherols
are not distinguished from the D,L-tocopherols.
2) Direct solvent extraction and separation of different esters and free tocopherols by liquid
chromatography. Quantification by fluorescence detection.
An example is ISO 20633, where the hydrophilic coating of fat micelles is hydrolysed by an
enzyme. The hydrophobic contents of the micelles are then extracted into iso-octane. The extract
is analysed by normal phase HPLC. Alpha-tocopherol and alpha-tocopheryl acetate are quantified
using fluorescence detection.
By taking into account the molecular mass and the activity ratio of the D and the D,L the following
[8]
values can be found :
— 1 mg of vitamin E = 1 mg of D-alpha-tocopherol = 1 mg alpha-TE;
— 1 mg of vitamin E = 1,35 mg of D,L-alpha-tocopherol;
— 1 mg of vitamin E = 1,1 mg of D-alpha-tocopheryl acetate;
— 1 mg of vitamin E = 1,49 mg of D,L-alpha-tocopheryl acetate;
— 1 mg of vitamin E = 1,23 mg of D-alpha-tocopheryl acid succinate.
As mentioned above, there is no specific detection at the quantification step for the D-alpha tocopherol
(natural form) and the D,L-alpha tocopherol (synthetic form) respectively. So, when a sample is analysed,
and there is no specific information about the added form (D or D,L) on the label of the product, there
© ISO 2021 – All rights reserved 3

---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

can be a misunderstanding about the true value of the vitamin E content. The difference can be a factor
of 1,35 or higher.
Regarding the nutritional aspect, there is no general agreement about the activities of the other forms
of tocopherols and tocotrienols.
When in the presence of certain amounts of beta and/or gamma and/or delta tocopherols, it is often
underlined that the relative vitamin E activities should be included in the final result. The more common
[8]
coefficients are:
— 1 mg of D-beta-tocopherol = 0,5 mg of vitamin E;
— 1 mg of D-gamma-tocopherol = 0,1 mg of vitamin E;
— 1 mg of D-delta-tocopherol = 0,03 mg of vitamin E.
Tocotrienols are sometimes also taken into account by certain guidelines, such as the FAO/INFOODS
[9]
guideline as in the following example:
Vitamin E (mg/100 g) = alpha-tocopherol (mg/100 g) + 0,4 beta-tocopherol (mg/100 g) + 0,1 gamma-
tocopherol (mg/100 g) + 0,01 delta-tocopherol (mg/100 g) + 0,3 alpha-tocotrienol (mg/100 g) +
0,05 beta-tocotrienol (mg/100 g) + 0,01 gamma-tocotrienol (mg/100 g)
Despite this fact, in most of the cases, only the alpha-tocopherol is considered.
th
At the session of the Codex Committee on Nutrition and Foods for Special Dietary Uses (40 Session,
th th
5 - 9 December 2016, Hamburg, Germany), it was proposed to take only the alpha-tocopherol into
[10]
account for labelling purposes . In this case, the expression of vitamin E is very simple:
vitamin E = 1 mg of alpha-D-tocopherol = 1 mg RRR-alpha-tocopherol.
Taking into account most of these parameters, the vitamin E content can be calculated as follows:
a) If only D-alpha tocopherol (natural) is present in the product, the vitamin E content (expressed in
D-alpha tocopherol equivalent) can be calculated as vitamin E (mg/100 g) = alpha-D-tocopherol
or in some cases, e.g. for vegetable oils:
vitamin E (mg/100 g) = alpha-tocopherol + 0,5 beta-tocopherol + 0,1 gamma-tocopherol +
0,03 delta-tocopherol.
b) If D,L alpha tocopherol (synthetic) is present in the product, the alpha-tocopherol result is divided
by 1,35 and the vitamin E content (expressed in D-alpha tocopherol equivalent) can be calculated
as vitamin E (mg/100 g) = 0,74 alpha-tocopherol (mg/100 g)
or in some cases:
vitamin E (mg/100 g) = 0,74 alpha-tocopherol (mg/100 g) + 0,5 beta-tocopherol (mg/100 g) +
0,1 gamma-tocopherol (mg/100 g) + 0,03 delta-tocopherol (mg/100 g).
c) If the vitamin E molecular form is not known, it is recommended that the two former possibilities
be studied. Follow-up action with the producer of the product can be necessary before a conclusion
can be drawn.
d) Some methods do not involve a saponification step, like in ISO 20633. In these cases, the calculation
is adapted as follows:
vitamin E (mg/100 g) = D-alpha tocopherol (mg/100 g) + 0,909 D-alpha tocopherol acetate
(mg/100 g).
4 © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

In addition, it is important to consider that apart from adding vitamin E for food fortification purposes,
it is common practice and permitted to add tocopherols as food additives (antioxidants) to food
products, including:
— E 306: rich tocopherols extracts;
— E 307: alpha tocopherol;
— E 308: gamma tocopherol;
— E 309: delta tocopherol.
At the analysis step, this can lead to a difference between the vitamin E quantified value and the
vitamin E labelled value because no test is capable of identifying the part of vitamin E added for
nutritional purposes from the part added for antioxidation. In any case, the labelled vitamin E value
should not include the tocopherol forms added as antioxidants.
4.3 Vitamin A
Vitamin A is a fat-soluble vitamin. Vitamin A is mainly found in the fat of the different food products as
retinol esters.
The food regulations of many countries authorize the fortification of different kinds of food products
with molecules having a vitamin A activity. The names of the authorized molecular forms to add in
are generally linked to the type of food product. Table 3 gives an example of vitamin A compounds
permitted for use for food fortification according to EU regulations, depending on the product type.
Table 3 — Example of authorized vitamin A compounds for food fortification in the EU
according to products concerned
Product type Molecular form Molecular Examples of regulations
mass
(g/mol)
Retinol 286,5
Retinyl acetate 328,5
Food with a specific nutri-
Regulation (EU) n° 609/2013
tional purpose
Retinyl palmitate 524,9
Beta carotene 536,9
Retinol 286,5
Retinyl acetate 328,5
Supplemented food Regulation (EC) n° 1925/2006
Retinyl palmitate 524,9
Beta carotene 536,9
Retinol 286,5
Retinyl acetate 328,5
Food supplements Directive n°2002/46/EC
Retinyl palmitate 524,9
Beta carotene 536,9
There is no global convention on how the amount of vitamin A should be expressed for labelling
purposes. In Table 4 an overview of units of measurement for vitamin A is given according to several
national/regional regulations and a CODEX standard.
© ISO 2021 – All rights reserved 5

---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Table 4 — Definition of vitamin A for labelling purposes in several standards/regulations
US US EU CODEX China/Australia/New
(until 2019-12-31) (as from 2020-01- Zealand
01)
a
IU µg RAE µg RE µg RE µg RE
1 IU = 0,3 µg retinol 1 µg RAE = 1 µg retinol 1 µg RE = 1 µg retinol 1 µg RE = 1 µg retinol 1 µg RE = 1 µg retinol
1 µg retinol = 3,33 IU 1 µg retinol = 3,33 IU
1 IU = 0,6 µg of be- 1 µg RAE = 2 µg supple- 6 µg beta-carotene = Carotenoids excluded Carotenoids excluded
ta-carotene mental beta-carotene 1 µg RE
1 µg RAE = 12 µg
beta-carotene
1 µg RAE = 24 µg
alpha-carotene
1 µg RAE = 24 µg
beta-cryptoxanthin
a
Retinol activity equivalent.
b
Retinol equivalent.
In general, the unit of measurement for vitamin A is µg RE and defined as 1 µg of retinol. The natural
form is the trans retinol.
There are two main analytical approaches for quantifying vitamin A:
1) Saponification of retinol esters to liberate them as free retinol. Solvent extraction and separation of
the cis and trans retinol by liquid chromatography. Quantification by UV or fluorescence detection.
[11]
An example is EN 12823-1 , which includes a saponification step and enables the separation and
[12]
the quantification of all E-retinol (trans-retinol) and 13-Z-retinol (13-cis-retinol). EN 12823-2
enables the quantification of beta-carotene.
2) Direct solvent extraction and separation of different esters of retinol and retinol by liquid
chromatography. Quantification by UV or fluorimetric detection.
An example is ISO 20633, where the hydrophilic coating of fat micelles is hydrolysed by an enzyme.
The hydrophobic contents of the micelles are then extracted into iso-octane. The extract is analysed
by normal phase HPLC. Vitamin A palmitate (cis and trans) and vitamin A acetate (cis and trans)
are quantified using UV detection.
By taking into account the molecular mass, the following values for retinyl esters can be found:
— 1 µg of all trans retinyl acetate = 0,872 µg RE (vitamin A);
— 1 µg of all trans retinyl palmitate = 0,546 µg RE (vitamin A).
In some regulations, beta-carotene can be included as vitamin A. In that case the beta-carotene content
value should be transformed in RE. The correction factor is in most of the cases: 1 µg of retinol = 6 µg of
beta-carotene.
In the literature, different factors for alpha-carotene and/or some other carotenoids can be taken into
[13]
account like in the Souci-Fachmann-Kraut food composition and nutrition tables :
vitamin A = retinol + 1/6 beta-carotene + 1/12 (other vitamin A active carotenoids).
Other vitamin A active carotenoids include alpha-carotene, gamma-carotene, cryptoxanthin and
mutatochrome.
These carotenoids are usually not taken into account because of their low activity in comparison to
beta-carotene and because of the need for additional assays.
6 © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

To take into account most of these parameters, the vitamin A content can be calculated as:
vitamin A (µg/100 g) = retinol (µg/100 g) [all E-retinol (trans-retinol) + 13-Z-retinol (13-cis-retinol)]
or in some cases, depending on the regulation:
vitamin A (µg/100 g) = retinol (µg/100 g) + 0,167 beta-carotene (µg/100 g).
Some methods do not involve a saponification step, like in ISO 20633. In these cases, the calculation is
adapted as follows:
vitamin A as retinol (µg/100 g) = 0,55 x retinyl palmitate (µg/100g) + 0,87 x retinyl acetate
(µg/100 g).
4.4 Vitamin D
Vitamin D is a fat-soluble vitamin. Vitamin D is found in the fat of many food products. Vitamin D is
2
found in vegetables and vitamin D is found in food from animal origin (for example meat, fish and
3
milk).
Food regulations of many countries authorize the fortification of different kinds of food products with
molecules having a vitamin D activity. The names of the authorized molecular forms to add in are
generally linked to the type of food product. Table 5 gives an example of vitamin D forms permitted for
use for food fortification according to EU regulations, depending on the product type.
Table 5 — Example of authorized vitamin D compounds for food fortification in the EU
according to products concerned
Product type Molecular form Molecular Examples of regulations
mass
(g/mol)
Vitamin D 396,7
Food with a specific nutritional
2
Regulation (EU) n° 609/2013
purpose
Vitamin D 384,6
3
Vitamin D 396,7 Regulation (EC) n° 1925/2006
2
Supplemented food
Vitamin D 384,6
3
Vitamin D 396,7 Directive n°2002/46/EC
2
Food supplements
Vitamin D 384,6
3
There are several vitamers of vitamin D. The two major forms are vitamin D (ergocalciferol) and
2
vitamin D (cholecalciferol). Vitamin D without a subscript refers to either vitamin D or vitamin D or
3 2 3
both and is known as calciferol. There is global agreement about the units and the conversion factors
to be used. In Table 6 an overview of units of measurement for vitamin D is given according to several
national/regional regulations and a CODEX standard.
Table 6 — Definition of vitamin D for labelling purposes in several standards/regulations
US US EU CODEX China / Australia/
(until 2019-12- (as from 2020- New Zealand
31) 01-01)
IU µg µg µg µg
1 IU = 0,025 µg 1 µg = 40 IU 1 µg vitamin D or 1 µg vitamin D 1 µg vitamin D
2 3 2
ergocalciferol 1 µg vitamin D (or or 1 µg vitamin D
3 3
or 1 µg vitamin D + vita- (or 1 µg vitamin
2
cholecalciferol min D ) D +vitamin D )
3 2 3
vitamin D vitamin D vitamin D and/or vitamin D vitamin D and/or
2 2 2 3 2
and/or and/or vitamin D vitamin D
3 3
vitamin D vitamin D
3 3
© ISO 2021 – All rights reserved 7

---------------------- Page: 12 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

In general, the unit of measurement for vitamin D is µg cholecalciferol or ergocalciferol.
It is considered that for vitamin D, 1 µg of ergocalciferol (vitamin D ) is equivalent to 1 µg cholecalciferol
2
(vitamin D ) because both have the same vitamin D activity.
3
According to former US regulation, the International Unit (IU) of vitamin D is equal to 0,025 µg of
vitamin D or vitamin D3. The IU can be still be found on labels.
2
There are two main analytical approaches for quantifying vitamin D:
1) Saponification of the matrix to liberate vitamin D and vitamin D as free forms. Solvent extraction.
2 3
A first HPLC step to purify and collect the vitamin D and vitamin D fraction. Then separation of
2 3
the vitamin D and vitamin D by liquid chromatography. Quantification by UV detection.
2 3
[14]
An example is EN 12821 , which includes a saponification step. A first HPLC step enables the
purification and collection of vitamins D and D . Then vitamin D and vitamin D are separated
2 3 2 3
by a second chromatography. Both are quantified by UV detection. The drawback of this method
is that vitamin D and vitamin D cannot be quantified simultaneously because one is used as an
2 3
internal standard to quantify the other.
2) Saponification of the matrix to liberate vitamin D and vitamin D as free forms. Derivatization of
2 3
the vitamin D to a higher molecular mass. Then separation by HPLC and quantification by mass
spectrometry. The advantage of this principle is that vitamin D and vitamin D can be quantified
2 3
simultaneously.
An example is ISO 20636 where samples are saponified and vitamin D is extracted by isooctane.
Vitamin D is derivatized and then quantified by mass spectrometry after a chromatographic step.
Stable isotopes of vitamin D and vitamin D are used as internal standards.
2 3
To conclude, the vitamin D content can be calculated as:
vitamin D (µg/100 g) = ergocalciferol (µg/100 g) + cholecalciferol (µg/100 g).
4.5 Vitamin K
Vitamin K is a fat-soluble vitamin. Vitamin K can be found as vitamin K in vegetables (spinach, lettuce,
1
broccoli, Brussels sprouts) and as vitam
...

ISO/TC 34/SC
Date:  2021-05-31
ISO/TR 23304:2021(F)
2021-05
ISO/TC 34/SC /GT 14
Secrétariat:  NEN

Produits alimentaires — Document d’orientation sur la manière d'exprimer les
teneurs en vitamines et en leurs vitamères
Food products — Guidance on how to express vitamins and their vitamers content

Type du document: Rapport technique
Sous-type du document:
Stade du document: (60) Publication
Langue du document: F

---------------------- Page: 1 ----------------------
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
Droits de reproduction
Type du document: Rapport technique
Sous-type du document:
Stade du document: (60) Publication
Langue du document: F

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
© ISO 2021
Tous droits réservés. Sauf indication contraireprescription différente ou nécessité dans le contexte
de sa mise en œuvre, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la
photocopie, l’affichageou la diffusion sur l’internetl'internet ou sur un Intranetintranet, sans
autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuventUne autorisation peut être
adresséesdemandée à l’ISOl'ISO à l’adressel'adresse ci-après ou au comité membre de l’ISOl'ISO
dans le pays du demandeur.
ISO copyright officeCopyright Office
Ch. de Blandonnet 8 • CPCase postale 401
• CH-1214 Vernier, Geneva, SwitzerlandGenève
Tel.Tél.: + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org

Publié en Suisse.
iv © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
Sommaire Page
Avant-propos . vi
Introduction. vii
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Lignes directrices par vitamines . 2
4.1 Généralités . 2
4.2 Vitamine E . 2
4.3 Vitamine A . 6
4.4 Vitamine D . 8
4.5 Vitamine K . 10
4.6 Thiamine (vitamine B ) . 12
1
4.7 Riboflavine (vitamine B ). 13
2
4.8 Niacine (vitamine B ou vitamine PP) . 14
3
4.9 Vitamine B . 15
6
4.10 Biotine (vitamine H ou vitamine B ) . 17
8
4.11 Folates (vitamine B ) . 18
9
4.12 Vitamine B . 19
12
4.13 Acide pantothénique (vitamine B ) . 20
5
4.14 Vitamine C . 23
5 Conversions des unités de l’US FDA . 24
Bibliographie . 26

© ISO 2021 – Tous droits réservés v

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en
général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit
de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales
et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la
normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant : www.iso.org/iso/fr/avant-
propos.htmlwww.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
vi © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
Introduction
Les vitamines sont naturellement présentes dans les aliments sous différentes formes moléculaires. Dans
les produits alimentaires plus élaborés, des vitamines peuvent être utilisées pour enrichir les aliments
en ajoutant plusieurs formes moléculaires ayant des niveaux d’activité vitaminique différents. Des
réglementations régissent l’adjonction de vitamines dans les produits alimentaires. Les composés
autorisés pour l’enrichissement alimentaire dépendent du type d’aliment. La réglementation porte par
exemple sur les aliments pour bébés ou les compléments alimentaires. Le principal problème rencontré
est le fait que les activités vitaminiques des composés autorisés ne sont pas clairement décrites.
Dans le même temps, il n’est pas obligatoire d’indiquer le nom chimique du composé utilisé pour
l’enrichissement des aliments conformément aux réglementations sur l’étiquetage des aliments. Par
exemple, la vitamine E peut figurer dans la liste des ingrédients sans préciser s’il s’agit de D-alpha-
tocophérol ou de D,L-alpha-tocophérol, bien que chaque forme moléculaire présente une activité
vitaminique E différente.
Les normes analytiques de l’ISO et du CEN expriment les résultats en unités de masse liées à l’étalon de
vitamine utilisé pour la quantification. Comme l’expression de l’activité vitaminique dans des unités
spécifiques peut dépendre d’exigences réglementaires régionales/nationales, les méthodes analytiques
ne fournissement pas de recommandations sur cette conversion. Le présent document propose plusieurs
manières d’exprimer la teneur en vitamines afin de faciliter l’harmonisation entre différents laboratoires
et également pour réduire le risque d’interprétation erronée des résultats exprimés en teneur en
vitamines et dans certains cas en activité vitaminique des vitamères.
© ISO 2021 – Tous droits réservés vii

---------------------- Page: 6 ----------------------
RAPPORT TECHNIQUE ISO/TR 23304:2021(F)

Produits alimentaires — Document d’orientation sur la manière
d'exprimer les teneurs en vitamines et en leurs vitamères
1 Domaine d’application
Le présent document fournit des lignes directrices sur :
— la manière d’exprimer la quantité de vitamines,
— l’expression des différentes formes moléculaires dans les unités appropriées,
— et, dans certains cas, l’activité vitaminique, en fonction des vitamères présents ou utilisés dans les
produits alimentaires, en plus de la détermination de la teneur quantitative obtenue à partir des
normes analytiques de l’ISO et du CEN.
Il fournit des informations à utiliser comme base pour les discussions entre les parties prenantes et les
laboratoires de contrôle alimentaire. Il n’est pas destiné à être prescriptif ou exhaustif.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes :
— ISO Online browsing platform : disponible à l’adresse https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia : disponible à l’adresse
http://www.electropedia.org/https://www.electropedia.org/
3.1
vitamère
l’un des nombreux composés chimiques d’une vitamine particulière, ayant généralement une structure
moléculaire similaire, chacun présentant une activité vitaminique dans un système biologique caractérisé
par une carence en vitamine
Note 1 à l’article :: Voir la Référence [1].
© ISO 2021 – Tous droits réservés 1

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
4 Lignes directrices par vitamines
4.1 Généralités
Le présent document s’intéresse tout d’abord à la vitamine E, car cette vitamine est considérée comme la
plus complexe en termes de variation des unités de mesure possibles. La vitamine E est suivie des autres
vitamines liposolubles, puis des vitamines hydrosolubles.
Afin de tenir compte de la diversité des facteurs de conversion disponibles, les réglementations en
vigueur dans différents pays/différentes régions sont évaluées, notamment celles de l’Union européenne
(UE), de l’organisme américain de surveillance des aliments et des médicaments (United States Food and
Drug Administration (US FDA), de l’organisme de normalisation chinois (normes GB) et de l’agence des
normes alimentaires d’Australie et de Nouvelle-Zélande (Food Standards Australia/New Zealand,
[2]
FSANZ). Les normes des organisations mondiales (CODEX ) sont également incluses.
4.2 Vitamine E
La vitamine E est une vitamine liposoluble. La vitamine E est principalement présente dans la matière
grasse des différents produits alimentaires sous forme d’esters de tocophérols et de tocotriénols.
Les réglementations alimentaires de nombreux pays autorisent l’enrichissement de différents types de
produits alimentaires avec des molécules présentant une activité vitaminique E. Les formes moléculaires
qu’il est autorisé d’ajouter sont généralement liées au type de produit alimentaire. Le Tableau 1 fournit
un exemple de composés de la vitamine E dont l’utilisation est admise pour l’enrichissement des aliments
selon les réglementations de l’UE, en fonction du type de produit.
Tableau 1 — Exemple de composés de la vitamine E autorisés dans l’UE pour l’enrichissement
des aliments, en fonction des produits concernés
Type de produit Forme moléculaire Masse Exemples de réglementations


molaire
(g/mol)
D-alpha-tocophérol 430,7
DL-alpha-tocophérol 430,7
Acétate de D-alpha-tocophéryle 472,8
Aliment avec un
[3]
objectif nutritionnel Règlement (UE) n° 609/2013
Acétate de DL-alpha- 472,8
particulier
tocophéryle
Succinate de D-alpha-
tocophéryle polyéthylène glycol
1000
D-alpha-tocophérol 430,7
DL-alpha-tocophérol 430,7
Acétate de D-alpha-tocophéryle 472,8
[4]
Aliment enrichi Règlement (CE) n° 1925/2006
Acétate de DL-alpha- 472,8
tocophéryle
Succinate acide de D-alpha- 530,8
tocophéryle
2 © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
Type de produit Forme moléculaire Masse Exemples de réglementations

molaire
(g/mol)
D-alpha-tocophérol 430,7
DL-alpha-tocophérol 430,7
Acétate de D-alpha-tocophéryle 472,8
Acétate de DL-alpha- 472,8
Compléments
[5]
Directive n° 2002/46/CE
tocophéryle
alimentaires
Succinate acide de D-alpha- 530,8
tocophéryle
Mélange de tocophérols et de
tocotriénols
Il n’existe aucune convention globale sur la manière dont il convient d’exprimer la quantité de vitamine E
à des fins d’étiquetage. Le Tableau 2 présente un aperçu des unités de mesure de la vitamine E en fonction
de plusieurs réglementations nationales/régionales et d’une norme CODEX.
Tableau 2 — Définition de la vitamine E à des fins d’étiquetage dans plusieurs
normes/réglementations
États-Unis États-Unis (depuis le UE CODEX Chine/Australie/
(jusqu’au 01-01-2020)
Nouvelle-Zélande
31-12-2019)
a b
UI mg d’alpha- mg d’alpha-ET mg d’alpha-ET mg d’alpha-ET
tocophérol
1 UI = = 0,67 mg 1 mg de vitamine E 1 mg d’alpha-ET 1 mg d’alpha-ET 1 mg d’alpha-ET = = 1 mg
de D-alpha- (sous forme d’alpha- = = 1 mg de D- = = 1 mg de D- de D-alpha-tocophérol
tocophérol tocophérol) déclaré alpha-tocophérol alpha-tocophérol
(naturel) sur l’étiquette
= = 1 mg d’alpha-
tocophérol naturel
(D-alpha-tocophérol)
1 UI = = 0,9 mg 1 mg de vitamine E
de D,L-alpha- (sous forme d’alpha-
tocophérol tocophérol) déclaré
(synthétique) sur l’étiquette
= = 2 mg d’alpha-
tocophérol
synthétique (D,L-
alpha-tocophérol)
a
Unité Internationale, une mesure de l’activité biologique différente pour chaque substance.
b
Équivalent tocophérol.
L’unité de mesure de la vitamine E est généralement définie comme 1 mg de D-alpha-tocophérol (forme
naturelle). Il n’existe actuellement aucune norme ou aucune méthode analytique officielle permettant de
quantifier spécifiquement cette forme naturelle.

© ISO 2021 – Tous droits réservés 3

---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
Il existe deux approches analytiques principales pour quantifier la vitamine E :
1) Saponification des esters de tocophéryle pour les libérer sous forme de tocophérols libres. Extraction
par solvant et séparation des tocophérols individuels par chromatographie en phase liquide.
Quantification par détection fluorimétrique.
[6]
Un exemple est l’EN 12822 . Elle comprend une étape de saponification et une étape d’extraction
Cela permet la séparation, par CLHP en phase normale, et la quantification, par détection
fluorimétrique, des alpha-, bêta-, gamma- et delta-tocophérols sous forme libre. Les tocotriénols sont
également séparés, mais ils ne sont pas quantifiés. Les tocotriénols ne sont pas pris en compte pour
l’expression du résultat concernant les vitamines. Aucune distinction n’est faite entre les D-
tocophérols et les D,L-tocophérols.
2) Extraction directe par solvant et séparation des différents esters de tocophérols ainsi que des
tocophérols sous forme libre par chromatographie en phase liquide. Quantification par détection
fluorimétrique.
Un exemple est l’ISO 20633. Le revêtement hydrophile des micelles de graisse est hydrolysé par une
enzyme. Le contenu hydrophobe des micelles est alors extrait dans de l’iso-octane. L’extrait est
analysé par CLHP en phase normale. L’alpha-tocophérol et l’acétate d’alpha-tocophéryle sont
quantifiés par détection fluorimétrique.
En tenant compte de la masse molaire et du rapport des activités des formes D et D,L, les valeurs suivantes
[8] ]
peuvent être obtenues : :
— 1 mg de vitamine E = = 1 mg de D-alpha-tocophérol = = 1 mg d’alpha-ET ;
— 1 mg de vitamine E = = 1,35 mg de D,L-alpha-tocophérol ;
— 1 mg de vitamine E = = 1,1 mg d’acétate de D-alpha-tocophéryle ;
— 1 mg de vitamine E = = 1,49 mg d’acétate de D,L-alpha-tocophéryle ;
— 1 mg de vitamine E = = 1,23 mg de succinate acide de D-alpha-tocophéryle.
Comme indiqué plus haut, à l’étape de quantification il n’y a aucune détection spécifique du D-alpha-
tocophérol (forme naturelle) et du D,L-alpha-tocophérol (forme synthétique), respectivement. Par
conséquent, lorsqu’un échantillon est analysé et qu’aucune information spécifique sur la forme ajoutée
(D ou D,L) n’est mentionnée sur l’étiquette du produit, il peut y avoir un risque d’interprétation erronée
de la valeur réelle de la teneur en vitamine E. La différence peut représenter un facteur de 1,35 ou plus.
En ce qui concerne l’aspect nutritionnel, il n’y a aucun accord général sur les activités des autres formes
de tocophérols et de tocotriénols.
En présence de certaines quantités de bêta- et/ou gamma- et/ou delta-tocophérols, il est souvent
recommandé d’inclure les activités vitaminiques E dans le résultat final. Les coefficients les plus
[8]
courants sont :
— 1 mg de D-bêta-tocophérol = = 0,5 mg de vitamine E ;
— 1 mg de D-gamma-tocophérol = = 0,1 mg de vitamine E ;
— 1 mg de D-delta-tocophérol = = 0,03 mg de vitamine E.
4 © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
Les tocotriénols sont également parfois pris en compte dans certaines lignes directrices, telles que celles
[9]
de FAO/INFOODS , comme dans l’exemple suivant :
Vitamine E (mg/100 g) = = alpha-tocophérol (mg/100 g) + 0,4 bêta-tocophérol (mg/100 g) +
0,1 gamma-tocophérol (mg/100 g) + 0,01 delta-tocophérol (mg/100 g) + 0,3 alpha-tocotriénol
(mg/100 g) + 0,05 bêta-tocotriénol (mg/100 g) + 0,01 gamma-tocotriénol (mg/100 g)).
En dépit de cela, dans la plupart des cas seul l’alpha-tocophérol est pris en compte.
ème
Lors de la session du Comité du Codex sur la nutrition et les aliments diététiques ou de régime (40
session, du 5 au 9 décembre 2016, Hambourg, Allemagne), il a été proposé de ne prendre en compte que
[10]
l’alpha-tocophérol pour l’étiquetage . Dans ce cas, l’expression de la vitamine E est très simple :
vitamine E = = 1 mg d’alpha-D-tocophérol = = 1 mg de RRR-alpha-tocophérol.
En tenant compte de la plupart de ces paramètres, la teneur en vitamine E peut être calculée comme suit :
a) Si seul du D-alpha-tocophérol (naturel) est présent dans le produit, la teneur en vitamine E
(exprimée en équivalent D-alpha-tocophérol) peut être calculée par : vitamine E (mg/100 g)
= = alpha-D-tocophérol
ou, dans certains cas, par exemple pour les huiles végétales :
vitamine E (mg/100 g) = = alpha-tocophérol + 0,5 bêta-tocophérol + 0,1 gamma-tocophérol +
0,03 delta-tocophérol.
b) Si du D,L-alpha-tocophérol (synthétique) est présent dans le produit, le résultat de l’alpha-tocophérol
est divisé par 1,35 et la teneur en vitamine E (exprimée en équivalent D-alpha-tocophérol) peut être
calculée par : vitamine E (mg/100 g) = = 0,74 alpha-tocophérol (mg/100 g)
ou, dans certains cas :
vitamine E (mg/100 g) = = 0,74 alpha-tocophérol (mg/100 g) + 0,5 bêta-tocophérol (mg/100 g) +
0,1 gamma-tocophérol (mg/100 g) + 0,03 delta-tocophérol (mg/100 g).
c) Si la forme moléculaire de la vitamine E n’est pas connue, il est recommandé d’étudier les deux
possibilités précédentes. Une action de suivi auprès du producteur peut être nécessaire avant d’en
tirer une conclusion.
d) Certaines méthodes, comme celle de l’ISO 20633, n’impliquent pas d’étape de saponification. Dans de
tels cas, le calcul est adapté comme suit :
vitamine E (mg/100 g) = = D-alpha-tocophérol (mg/100 g) + 0,909 acétate de D-alpha-tocophéryle
(mg/100 g).
Il est en outre important de souligner que les tocophérols sont non seulement utilisés pour ajouter de la
vitamine E à des fins d’enrichissement des aliments, mais qu’il est courant et autorisé de les ajouter
comme additifs alimentaires (antioxydants) dans les produits alimentaires, notamment :
— E 306 : extraits riches en tocophérols ;
— E 307 : alpha-tocophérol ;
© ISO 2021 – Tous droits réservés 5

---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
— E 308 : gamma-tocophérol ;
— E 309 : delta-tocophérol.
Lors de l’étape d’analyse, cela peut conduire à une différence entre la valeur quantifiée pour la vitamine E
et la valeur figurant sur l’étiquette, car aucun essai n’est en mesure d’identifier la partie de la vitamine E
qui a été ajoutée à des fins nutritionnelles de la partie qui a été ajoutée comme antioxydant. Dans tous les
cas, il convient que la valeur de la vitamine E figurant sur l’étiquette n’inclue pas les formes de tocophérol
ajoutées comme antioxydants.
4.3 Vitamine A
La vitamine A est une vitamine liposoluble. La vitamine A est principalement présente dans la matière
grasse des différents produits alimentaires sous forme d’esters de rétinol.
Les réglementations alimentaires de nombreux pays autorisent l’enrichissement de différents types de
produits alimentaires avec des molécules présentant une activité vitaminique A. Les formes moléculaires
qu’il est autorisé d’ajouter sont généralement liées au type de produit alimentaire. Le Tableau 3 fournit
un exemple de composés de la vitamine A dont l’utilisation est admise pour l’enrichissement des aliments
selon les réglementations de l’UE, en fonction du type de produit.
Tableau 3 — Exemple de composés de la vitamine A autorisés dans l’UE pour l’enrichissement
des aliments, en fonction des produits concernés
Type de produit Forme moléculaire Masse Exemples de réglementations

molaire
(g/mol)
Rétinol 286,5
Aliment avec un
Acétate de rétinyle 328,5
objectif nutritionnel Règlement (UE) n° 609/2013
Palmitate de rétinyle 524,9
particulier
Bêta-carotène 536,9
Rétinol 286,5
Acétate de rétinyle 328,5
Aliment enrichi Règlement (CE) n° 1925/2006
Palmitate de rétinyle 524,9
Bêta-carotène 536,9
Rétinol 286,5
Acétate de rétinyle 328,5
Compléments
Directive n° 2002/46/CE
alimentaires
Palmitate de rétinyle 524,9
Bêta-carotène 536,9
Il n’existe aucune convention globale sur la manière dont il convient d’exprimer la quantité de vitamine A
à des fins d’étiquetage. Le Tableau 4 présente un aperçu des unités de mesure de la vitamine A en fonction
de plusieurs réglementations nationales/régionales et d’une norme CODEX.

6 © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 12 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
Tableau 4 — Définition de la vitamine A à des fins d’étiquetage dans plusieurs
normes/réglementations
États-Unis États-Unis (depuis UE CODEX Chine/Australie/Nouvelle-
(jusqu’au le 01-01-2020) Zélande
31-12-2019)
a
UI µg d’EAR µg d’ER µg d’ER µg d’ER
1 UI = = 0,3 µg de 1 µg d’EAR = = 1 µg 1 µg d’ER 1 µg d’ER = = 1 µg 1 µg d’ER = = 1 µg de rétinol
rétinol de rétinol = = 1 µg de de rétinol
1 µg de rétinol = = 3,33 UI
rétinol
1 µg de rétinol
= = 3,33 UI
1 UI = = 0,6 µg de 1 µg d’EAR = = 2 µg 6 µg de bêta- Caroténoïdes Caroténoïdes exclus
bêta-carotène de bêta-carotène en carotène exclus
complément = = 1 µg d’ER
 1 µg d’EAR
= = 12 µg de bêta-
carotène
 1 µg d’EAR
= = 24 µg d’alpha-
carotène
 1 µg d’EAR
= = 24 µg
de bêta-
cryptoxanthine
a
Équivalent d’activité en rétinol.
b
Équivalent rétinol.
En général, l’unité de mesure de la vitamine A est le µg d’ER et elle est définie comme 1 µg de rétinol. La
forme naturelle est le trans-rétinol.
Il existe deux approches analytiques principales pour quantifier la vitamine A :
1) Saponification des esters de rétinol pour les libérer sous forme de rétinol libre. Extraction par solvant
et séparation du cis- et du trans-rétinol par chromatographie en phase liquide. Quantification par
détection UV ou par détection fluorimétrique.
[11]
Un exemple est l’EN 12823-1 . Elle comprend une étape de saponification et permet la séparation
et la quantification du tout-E-rétinol (trans-rétinol) et du 13-Z-rétinol (13-cis-rétinol). L’EN 12823-
[12]
2 permet la quantification du bêta-carotène.
2) Extraction directe par solvant et séparation des différents esters de rétinol et du rétinol par
chromatographie en phase liquide. Quantification par détection UV ou par détection fluorimétrique.
Un exemple est l’ISO 20633. Le revêtement hydrophile des micelles de graisse est hydrolysé par une
enzyme. Le contenu hydrophobe des micelles est alors extrait dans de l’iso-octane. L’extrait est
analysé par CLHP en phase normale. Le palmitate (cis et trans) de vitamine A et l’acétate (cis et trans)
de vitamine A sont quantifiés par détection UV.
En tenant compte de la masse molaire, les valeurs suivantes peuvent être obtenues pour les esters de
rétinyle :
© ISO 2021 – Tous droits réservés 7

---------------------- Page: 13 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
— 1 µg d’acétate de rétinyle tout-trans = = 0,872 µg d’ER (vitamine A) ;);
— 1 µg de palmitate de rétinyle tout-trans = = 0,546 µg d’ER (vitamine A).
Dans certaines réglementations, le bêta-carotène peut être inclus comme vitamine A. Dans ce cas, il
convient que la valeur de la teneur en bêta-carotène soit transformée en ER. Le facteur de correction est
dans la plupart des cas : 1 µg de rétinol = = 6 µg de bêta-carotène.
Dans la littérature, différents facteurs pour l’alpha-carotène et/ou certains autres caroténoïdes peuvent
être pris en compte, comme dans les tables de composition des aliments et de nutrition de Souci-
[13] ]
Fachmann-Kraut : :
vitamine A = = rétinol + 1/6 bêta-carotène + 1/12 (autres caroténoïdes actifs de la vitamine A).
L’alpha-carotène, le gamma-carotène, la cryptoxanthine et le mutatochrome sont d’autres caroténoïdes
actifs de la vitamine A.
Ces caroténoïdes ne sont généralement pas pris en compte en raison de leur faible activité comparée à
celle du bêta-carotène et aussi du fait que cela nécessite des dosages supplémentaires.
En tenant compte de la plupart de ces paramètres, la teneur en vitamine A peut être calculée comme suit :
vitamine A (µg/100 g) = = rétinol (µg/100 g) [tout-E-rétinol (trans-rétinol) + 13-Z-rétinol (13-cis-
retinol)]
ou, dans certains cas, en fonction de la réglementation :
vitamine A (µg/100 g) = = rétinol (µg/100 g) + 0,167 bêta-carotène (µg/100 g).
Certaines méthodes, comme celle de l’ISO 20633, n’impliquent pas d’étape de saponification. Dans de tels
cas, le calcul est adapté comme suit :
vitamine A sous forme de rétinol (µg/100 g) = = 0,55 x × palmitate de rétinyle (µg/100 g) + 0,87
x × acétate de rétinyle (µg/100 g).
4.4 Vitamine D
La vitamine D est une vitamine liposoluble. La vitamine D est présente dans la matière grasse de
nombreux produits alimentaires. La vitamine D est présente dans les légumes et la vitamine D dans les
2 3
aliments d’origine animale (par exemple viande, poisson et lait).
Les réglementations alimentaires de nombreux pays autorisent l’enrichissement de différents types de
produits alimentaires avec des molécules présentant une activité vitaminique D. Les formes moléculaires
qu’il est autorisé d’ajouter sont généralement liées au type de produit alimentaire. Le Tableau 5 fournit
un exemple de formes de la vitamine D dont l’utilisation est admise pour l’enrichissement des aliments
selon les réglementations de l’UE, en fonction du type de produit.

8 © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 14 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)
Tableau 5 — Exemple de composés de la vitamine D autorisés dans l’UE pour l’enrichissement
des aliments, en fonction des produits concernés
Type de produit Forme Masse Exemples de réglementations

moléculaire molaire
(g/mol)
Vitamine D 396,7
2
Aliment avec un objectif
Règleme
...

RAPPORT ISO/TR
TECHNIQUE 23304
Première édition
2021-05
Produits alimentaires — Document
d'orientation sur la manière
d'exprimer les teneurs en vitamines et
en leurs vitamères
Food products — Guidance on how to express vitamins and their
vitamers content
Numéro de référence
ISO/TR 23304:2021(F)
©
ISO 2021

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2021
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: [phone]
E-mail: [e-mail]
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Lignes directrices par vitamines . 1
4.1 Généralités . 1
4.2 Vitamine E . 2
4.3 Vitamine A . 5
4.4 Vitamine D . 7
4.5 Vitamine K . 8
4.6 Thiamine (vitamine B ) .10
1
4.7 Riboflavine (vitamine B ) .11
2
4.8 Niacine (vitamine B ou vitamine PP) .12
3
4.9 Vitamine B .13
6
4.10 Biotine (vitamine H ou vitamine B ) .14
8
4.11 Folates (vitamine B ) .15
9
4.12 Vitamine B .16
12
4.13 Acide pantothénique (vitamine B ) .17
5
4.14 Vitamine C .18
5 Conversions des unités de l’US FDA .19
Bibliographie .21
© ISO 2021 – Tous droits réservés iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

Introduction
Les vitamines sont naturellement présentes dans les aliments sous différentes formes moléculaires.
Dans les produits alimentaires plus élaborés, des vitamines peuvent être utilisées pour enrichir les
aliments en ajoutant plusieurs formes moléculaires ayant des niveaux d’activité vitaminique différents.
Des réglementations régissent l’adjonction de vitamines dans les produits alimentaires. Les composés
autorisés pour l’enrichissement alimentaire dépendent du type d’aliment. La réglementation porte par
exemple sur les aliments pour bébés ou les compléments alimentaires. Le principal problème rencontré
est le fait que les activités vitaminiques des composés autorisés ne sont pas clairement décrites.
Dans le même temps, il n’est pas obligatoire d’indiquer le nom chimique du composé utilisé pour
l’enrichissement des aliments conformément aux réglementations sur l’étiquetage des aliments. Par
exemple, la vitamine E peut figurer dans la liste des ingrédients sans préciser s’il s’agit de D-alpha-
tocophérol ou de D,L-alpha-tocophérol, bien que chaque forme moléculaire présente une activité
vitaminique E différente.
Les normes analytiques de l’ISO et du CEN expriment les résultats en unités de masse liées à l’étalon de
vitamine utilisé pour la quantification. Comme l’expression de l’activité vitaminique dans des unités
spécifiques peut dépendre d’exigences réglementaires régionales/nationales, les méthodes analytiques
ne fournissement pas de recommandations sur cette conversion. Le présent document propose
plusieurs manières d’exprimer la teneur en vitamines afin de faciliter l’harmonisation entre différents
laboratoires et également pour réduire le risque d’interprétation erronée des résultats exprimés en
teneur en vitamines et dans certains cas en activité vitaminique des vitamères.
© ISO 2021 – Tous droits réservés v

---------------------- Page: 5 ----------------------
RAPPORT TECHNIQUE ISO/TR 23304:2021(F)
Produits alimentaires — Document d'orientation sur la
manière d'exprimer les teneurs en vitamines et en leurs
vitamères
1 Domaine d’application
Le présent document fournit des lignes directrices sur:
— la manière d’exprimer la quantité de vitamines,
— l’expression des différentes formes moléculaires dans les unités appropriées,
— et, dans certains cas, l’activité vitaminique, en fonction des vitamères présents ou utilisés dans les
produits alimentaires, en plus de la détermination de la teneur quantitative obtenue à partir des
normes analytiques de l’ISO et du CEN.
Il fournit des informations à utiliser comme base pour les discussions entre les parties prenantes et les
laboratoires de contrôle alimentaire. Il n’est pas destiné à être prescriptif ou exhaustif.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
vitamère
l’un des nombreux composés chimiques d’une vitamine particulière, ayant généralement une structure
moléculaire similaire, chacun présentant une activité vitaminique dans un système biologique
caractérisé par une carence en vitamine
Note 1 à l'article: Voir la Référence [1].
4 Lignes directrices par vitamines
4.1 Généralités
Le présent document s’intéresse tout d’abord à la vitamine E, car cette vitamine est considérée comme
la plus complexe en termes de variation des unités de mesure possibles. La vitamine E est suivie des
autres vitamines liposolubles, puis des vitamines hydrosolubles.
Afin de tenir compte de la diversité des facteurs de conversion disponibles, les réglementations en
vigueur dans différents pays/différentes régions sont évaluées, notamment celles de l’Union européenne
(UE), de l’organisme américain de surveillance des aliments et des médicaments (United States Food
© ISO 2021 – Tous droits réservés 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

and Drug Administration (US FDA), de l’organisme de normalisation chinois (normes GB) et de l’agence
des normes alimentaires d’Australie et de Nouvelle-Zélande (Food Standards Australia/New Zealand,
[2]
FSANZ). Les normes des organisations mondiales (CODEX ) sont également incluses.
4.2 Vitamine E
La vitamine E est une vitamine liposoluble. La vitamine E est principalement présente dans la matière
grasse des différents produits alimentaires sous forme d’esters de tocophérols et de tocotriénols.
Les réglementations alimentaires de nombreux pays autorisent l’enrichissement de différents types
de produits alimentaires avec des molécules présentant une activité vitaminique E. Les formes
moléculaires qu’il est autorisé d’ajouter sont généralement liées au type de produit alimentaire.
Le Tableau 1 fournit un exemple de composés de la vitamine E dont l’utilisation est admise pour
l’enrichissement des aliments selon les réglementations de l’UE, en fonction du type de produit.
Tableau 1 — Exemple de composés de la vitamine E autorisés dans l’UE pour l’enrichissement
des aliments, en fonction des produits concernés
Type de produit Forme moléculaire Masse Exemples de réglementations
molaire
(g/mol)
D-alpha-tocophérol 430,7
DL-alpha-tocophérol 430,7
Aliment avec un
Acétate de D-alpha-tocophéryle 472,8
[3]
objectif nutritionnel Règlement (UE) n° 609/2013
Acétate de DL-alpha-tocophéryle 472,8
particulier
Succinate de D-alpha-tocophéryle
polyéthylène glycol 1000
D-alpha-tocophérol 430,7
DL-alpha-tocophérol 430,7
Acétate de D-alpha-tocophéryle 472,8
[4]
Aliment enrichi Règlement (CE) n° 1925/2006
Acétate de DL-alpha-tocophéryle 472,8
Succinate acide de D-alpha-toco- 530,8
phéryle
D-alpha-tocophérol 430,7
DL-alpha-tocophérol 430,7
Acétate de D-alpha-tocophéryle 472,8
Compléments alimen-
Acétate de DL-alpha-tocophéryle 472,8
[5]
Directive n° 2002/46/CE
taires
Succinate acide de D-alpha-toco- 530,8
phéryle
Mélange de tocophérols et de
tocotriénols
Il n’existe aucune convention globale sur la manière dont il convient d’exprimer la quantité de vitamine E
à des fins d’étiquetage. Le Tableau 2 présente un aperçu des unités de mesure de la vitamine E en
fonction de plusieurs réglementations nationales/régionales et d’une norme CODEX.
2 © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

Tableau 2 — Définition de la vitamine E à des fins d’étiquetage dans plusieurs normes/
réglementations
États-Unis États-Unis (depuis le UE CODEX Chine/Australie/
(jusqu’au 01-01-2020)
Nouvelle-Zélande
31-12-2019)
a b
UI mg d’alpha-tocophérol mg d’alpha-ET mg d’alpha-ET mg d’alpha-ET
1 UI = 0,67 mg de 1 mg de vitamine E 1 mg d’alpha- 1 mg d’alpha- 1 mg d’alpha-ET = 1 mg de
D-alpha-tocophé- (sous forme d’alpha- ET = 1 mg de D-al- ET = 1 mg de D-al- D-alpha-tocophérol
rol (naturel) tocophérol) déclaré pha-tocophérol pha-tocophérol
sur l’étiquette = 1 mg
d’alpha-tocophérol
naturel (D-alpha-toco-
phérol)
1 UI = 0,9 mg de 1 mg de vitamine E
D,L-alpha-toco- (sous forme d’alpha-
phérol (synthé- tocophérol) déclaré
tique) sur l’étiquette = 2 mg
d’alpha-tocophérol
synthétique (D,L-al-
pha-tocophérol)
a
Unité Internationale, une mesure de l’activité biologique différente pour chaque substance.
b
Équivalent tocophérol.
L’unité de mesure de la vitamine E est généralement définie comme 1 mg de D-alpha-tocophérol (forme
naturelle). Il n’existe actuellement aucune norme ou aucune méthode analytique officielle permettant
de quantifier spécifiquement cette forme naturelle.
Il existe deux approches analytiques principales pour quantifier la vitamine E:
1) Saponification des esters de tocophéryle pour les libérer sous forme de tocophérols libres.
Extraction par solvant et séparation des tocophérols individuels par chromatographie en phase
liquide. Quantification par détection fluorimétrique.
[6]
Un exemple est l’EN 12822 . Elle comprend une étape de saponification et une étape d’extraction
Cela permet la séparation, par CLHP en phase normale, et la quantification, par détection
fluorimétrique, des alpha-, bêta-, gamma- et delta-tocophérols sous forme libre. Les tocotriénols
sont également séparés, mais ils ne sont pas quantifiés. Les tocotriénols ne sont pas pris en compte
pour l’expression du résultat concernant les vitamines. Aucune distinction n’est faite entre les
D-tocophérols et les D,L-tocophérols.
2) Extraction directe par solvant et séparation des différents esters de tocophérols ainsi que des
tocophérols sous forme libre par chromatographie en phase liquide. Quantification par détection
fluorimétrique.
Un exemple est l’ISO 20633. Le revêtement hydrophile des micelles de graisse est hydrolysé par
une enzyme. Le contenu hydrophobe des micelles est alors extrait dans de l’iso-octane. L’extrait
est analysé par CLHP en phase normale. L’alpha-tocophérol et l’acétate d’alpha-tocophéryle sont
quantifiés par détection fluorimétrique.
En tenant compte de la masse molaire et du rapport des activités des formes D et D,L, les valeurs
[8]
suivantes peuvent être obtenues :
— 1 mg de vitamine E = 1 mg de D-alpha-tocophérol = 1 mg d’alpha-ET;
— 1 mg de vitamine E = 1,35 mg de D,L-alpha-tocophérol;
— 1 mg de vitamine E = 1,1 mg d’acétate de D-alpha-tocophéryle;
— 1 mg de vitamine E = 1,49 mg d’acétate de D,L-alpha-tocophéryle;
© ISO 2021 – Tous droits réservés 3

---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

— 1 mg de vitamine E = 1,23 mg de succinate acide de D-alpha-tocophéryle.
Comme indiqué plus haut, à l’étape de quantification il n’y a aucune détection spécifique du D-alpha-
tocophérol (forme naturelle) et du D,L-alpha-tocophérol (forme synthétique), respectivement. Par
conséquent, lorsqu’un échantillon est analysé et qu’aucune information spécifique sur la forme ajoutée
(D ou D,L) n’est mentionnée sur l’étiquette du produit, il peut y avoir un risque d’interprétation erronée
de la valeur réelle de la teneur en vitamine E. La différence peut représenter un facteur de 1,35 ou plus.
En ce qui concerne l’aspect nutritionnel, il n’y a aucun accord général sur les activités des autres formes
de tocophérols et de tocotriénols.
En présence de certaines quantités de bêta- et/ou gamma- et/ou delta-tocophérols, il est souvent
recommandé d’inclure les activités vitaminiques E dans le résultat final. Les coefficients les plus
[8]
courants sont:
— 1 mg de D-bêta-tocophérol = 0,5 mg de vitamine E;
— 1 mg de D-gamma-tocophérol = 0,1 mg de vitamine E;
— 1 mg de D-delta-tocophérol = 0,03 mg de vitamine E.
Les tocotriénols sont également parfois pris en compte dans certaines lignes directrices, telles que
[9]
celles de FAO/INFOODS , comme dans l’exemple suivant:
Vitamine E (mg/100 g) = alpha-tocophérol (mg/100 g) + 0,4 bêta-tocophérol (mg/100 g) + 0,1 gamma-
tocophérol (mg/100 g) + 0,01 delta-tocophérol (mg/100 g) + 0,3 alpha-tocotriénol (mg/100 g) +
0,05 bêta-tocotriénol (mg/100 g) + 0,01 gamma-tocotriénol (mg/100 g).
En dépit de cela, dans la plupart des cas seul l’alpha-tocophérol est pris en compte.
ème
Lors de la session du Comité du Codex sur la nutrition et les aliments diététiques ou de régime (40
session, du 5 au 9 décembre 2016, Hambourg, Allemagne), il a été proposé de ne prendre en compte que
[10]
l’alpha-tocophérol pour l’étiquetage . Dans ce cas, l’expression de la vitamine E est très simple:
vitamine E = 1 mg d’alpha-D-tocophérol = 1 mg de RRR-alpha-tocophérol.
En tenant compte de la plupart de ces paramètres, la teneur en vitamine E peut être calculée comme
suit:
a) Si seul du D-alpha-tocophérol (naturel) est présent dans le produit, la teneur en vitamine E
(exprimée en équivalent D-alpha-tocophérol) peut être calculée par: vitamine E (mg/100 g) = alpha-
D-tocophérol
ou, dans certains cas, par exemple pour les huiles végétales:
vitamine E (mg/100 g) = alpha-tocophérol + 0,5 bêta-tocophérol + 0,1 gamma-tocophérol +
0,03 delta-tocophérol.
b) Si du D,L-alpha-tocophérol (synthétique) est présent dans le produit, le résultat de l’alpha-tocophérol
est divisé par 1,35 et la teneur en vitamine E (exprimée en équivalent D-alpha-tocophérol) peut
être calculée par: vitamine E (mg/100 g) = 0,74 alpha-tocophérol (mg/100 g)
ou, dans certains cas:
vitamine E (mg/100 g) = 0,74 alpha-tocophérol (mg/100 g) + 0,5 bêta-tocophérol (mg/100 g) +
0,1 gamma-tocophérol (mg/100 g) + 0,03 delta-tocophérol (mg/100 g).
c) Si la forme moléculaire de la vitamine E n’est pas connue, il est recommandé d’étudier les deux
possibilités précédentes. Une action de suivi auprès du producteur peut être nécessaire avant d’en
tirer une conclusion.
4 © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

d) Certaines méthodes, comme celle de l’ISO 20633, n’impliquent pas d’étape de saponification. Dans
de tels cas, le calcul est adapté comme suit:
vitamine E (mg/100 g) = D-alpha-tocophérol (mg/100 g) + 0,909 acétate de D-alpha-tocophéryle
(mg/100 g).
Il est en outre important de souligner que les tocophérols sont non seulement utilisés pour ajouter de
la vitamine E à des fins d’enrichissement des aliments, mais qu’il est courant et autorisé de les ajouter
comme additifs alimentaires (antioxydants) dans les produits alimentaires, notamment:
— E 306: extraits riches en tocophérols;
— E 307: alpha-tocophérol;
— E 308: gamma-tocophérol;
— E 309: delta-tocophérol.
Lors de l’étape d’analyse, cela peut conduire à une différence entre la valeur quantifiée pour la
vitamine E et la valeur figurant sur l’étiquette, car aucun essai n’est en mesure d’identifier la partie de la
vitamine E qui a été ajoutée à des fins nutritionnelles de la partie qui a été ajoutée comme antioxydant.
Dans tous les cas, il convient que la valeur de la vitamine E figurant sur l’étiquette n’inclue pas les
formes de tocophérol ajoutées comme antioxydants.
4.3 Vitamine A
La vitamine A est une vitamine liposoluble. La vitamine A est principalement présente dans la matière
grasse des différents produits alimentaires sous forme d’esters de rétinol.
Les réglementations alimentaires de nombreux pays autorisent l’enrichissement de différents types
de produits alimentaires avec des molécules présentant une activité vitaminique A. Les formes
moléculaires qu’il est autorisé d’ajouter sont généralement liées au type de produit alimentaire.
Le Tableau 3 fournit un exemple de composés de la vitamine A dont l’utilisation est admise pour
l’enrichissement des aliments selon les réglementations de l’UE, en fonction du type de produit.
Tableau 3 — Exemple de composés de la vitamine A autorisés dans l’UE pour l’enrichissement
des aliments, en fonction des produits concernés
Type de produit Forme moléculaire Masse Exemples de réglementations
molaire
(g/mol)
Rétinol 286,5
Acétate de rétinyle 328,5
Aliment avec un objectif
Règlement (UE) n° 609/2013
nutritionnel particulier
Palmitate de rétinyle 524,9
Bêta-carotène 536,9
Rétinol 286,5
Acétate de rétinyle 328,5
Aliment enrichi Règlement (CE) n° 1925/2006
Palmitate de rétinyle 524,9
Bêta-carotène 536,9
Rétinol 286,5
Acétate de rétinyle 328,5
Compléments alimentaires Directive n° 2002/46/CE
Palmitate de rétinyle 524,9
Bêta-carotène 536,9
Il n’existe aucune convention globale sur la manière dont il convient d’exprimer la quantité de vitamine A
à des fins d’étiquetage. Le Tableau 4 présente un aperçu des unités de mesure de la vitamine A en
fonction de plusieurs réglementations nationales/régionales et d’une norme CODEX.
© ISO 2021 – Tous droits réservés 5

---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

Tableau 4 — Définition de la vitamine A à des fins d’étiquetage dans plusieurs normes/
réglementations
États-Unis États-Unis (depuis UE CODEX Chine/Australie/Nouvelle-
(jusqu’au le 01-01-2020) Zélande
31-12-2019)
a
UI µg d’EAR µg d’ER µg d’ER µg d’ER
1 UI = 0,3 µg de 1 µg d’EAR = 1 µg de 1 µg d’ER = 1 µg de 1 µg d’ER = 1 µg de 1 µg d’ER = 1 µg de rétinol
rétinol rétinol rétinol rétinol
1 µg de rétinol = 3,33 UI
1 µg de réti -
nol = 3,33 UI
1 UI = 0,6 µg de 1 µg d’EAR = 2 µg de 6 µg de bêta- Caroténoïdes exclus Caroténoïdes exclus
bêta-carotène bêta-carotène en com- carotène = 1 µg
plément d’ER
1 µg d’EAR = 12 µg de
bêta-carotène
1 µg d’EAR = 24 µg
d’alpha-carotène
1 µg d’EAR = 24 µg
de bêta-
cryptoxanthine
a
Équivalent d’activité en rétinol.
b
Équivalent rétinol.
En général, l’unité de mesure de la vitamine A est le µg d’ER et elle est définie comme 1 µg de rétinol. La
forme naturelle est le trans-rétinol.
Il existe deux approches analytiques principales pour quantifier la vitamine A:
1) Saponification des esters de rétinol pour les libérer sous forme de rétinol libre. Extraction
par solvant et séparation du cis- et du trans-rétinol par chromatographie en phase liquide.
Quantification par détection UV ou par détection fluorimétrique.
[11]
Un exemple est l’EN 12823-1 . Elle comprend une étape de saponification et permet la séparation
et la quantification du tout-E-rétinol (trans-rétinol) et du 13-Z-rétinol (13-cis-rétinol). L’EN 12823-
[12]
2 permet la quantification du bêta-carotène.
2) Extraction directe par solvant et séparation des différents esters de rétinol et du rétinol par
chromatographie en phase liquide. Quantification par détection UV ou par détection fluorimétrique.
Un exemple est l’ISO 20633. Le revêtement hydrophile des micelles de graisse est hydrolysé par
une enzyme. Le contenu hydrophobe des micelles est alors extrait dans de l’iso-octane. L’extrait
est analysé par CLHP en phase normale. Le palmitate (cis et trans) de vitamine A et l’acétate (cis et
trans) de vitamine A sont quantifiés par détection UV.
En tenant compte de la masse molaire, les valeurs suivantes peuvent être obtenues pour les esters de
rétinyle:
— 1 µg d’acétate de rétinyle tout-trans = 0,872 µg d’ER (vitamine A);
— 1 µg de palmitate de rétinyle tout-trans = 0,546 µg d’ER (vitamine A).
Dans certaines réglementations, le bêta-carotène peut être inclus comme vitamine A. Dans ce cas, il
convient que la valeur de la teneur en bêta-carotène soit transformée en ER. Le facteur de correction
est dans la plupart des cas: 1 µg de rétinol = 6 µg de bêta-carotène.
Dans la littérature, différents facteurs pour l’alpha-carotène et/ou certains autres caroténoïdes
peuvent être pris en compte, comme dans les tables de composition des aliments et de nutrition de
[13]
Souci-Fachmann-Kraut :
6 © ISO 2021 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(F)

vitamine A = rétinol + 1/6 bêta-carotène + 1/12 (autres caroténoïdes actifs de la vitamine A).
L’alpha-carotène, le gamma-carotène, la cryptoxanthine et le mutatochrome sont d’autres caroténoïdes
actifs de la vitamine A.
Ces caroténoïdes ne sont généralement pas pris en compte en raison de leur faible activité comparée à
celle du bêta-carotène et aussi du fait que cela nécessite des dosages supplémentaires.
En tenant compte de la plupart de ces paramètres, la teneur en vitamine A peut être calculée comme
suit:
vitamine A (µg/100 g) = rétinol (µg/100 g) [tout-E-rétinol (trans-rétinol) + 13-Z-rétinol (13-cis-retinol)]
ou, dans certains cas, en fonction de la réglementation:
vitamine A (µg/100 g) = rétinol (µg/100 g) + 0,167 bêta-carotène (µg/100 g).
Certaines méthodes, comme celle de l’ISO 20633, n’impliquent pas d’étape de saponification. Dans de
tels cas, le calcul est adapté comme suit:
vitamine A sous forme de rétinol (µg/100 g) = 0,55 × palmitate de rétinyle (µg/100 g) + 0,87 × acétate
de rétinyle (µg/100 g).
4.4 Vitamine D
La vitamine D est une vitamine liposoluble. La vitamine D est présente dans la matière grasse de
nombreux produits alimentaires. La vitamine D est présente dans les légumes et la vitamine D dans
2 3
les aliments d’origine animale (par exemple viande, poisson et lait).
Les réglementations alimentaires de nombreux pays autorisent l’enrichissement de différents types de
produits alimentaires avec des molécules présentant une activité vitaminique D. Les formes moléculaires
qu’il est autorisé d’ajouter sont généralement liées au type de produit alimentaire. Le Tableau 5 fournit
un exemple de formes de la vitamine D dont l’utilisation est admise pour l’enrichissement des aliments
selon les réglementations de l’UE, en fonction du type de produit.
Tableau 5 — Exemple de composés de la vitamine D autorisés dans l’UE pour l’enrichissement
des aliments, en fonction des produits concernés
Type de produit Forme moléculaire Masse Exemples de réglementations
molaire
(g/mol)
Vitamine D 396,7
Aliment avec un objectif nutri- 2
Règlement (UE) n° 609/2013
tionnel particulier
Vitamine D 384,6
3
Vitamine D 396,7 Règlement (CE) n° 1925/2006
2
Aliment enrichi
Vitamine D 384,6
3
Vitamine D 396,7 Directive n° 2002/46/CE
2
Compléments alimentaires
Vitamine D 384,6
3
Il existe plusieurs vitamères de la vitamine D. Les deux formes principales sont la vitamine D
2
(ergocalciférol) et la vitamine D (cholécalciférol). La vitamine D sans indice fait référence à
...

TECHNICAL ISO/TR
REPORT 23304
First edition
Food products — Guidance on how to
express vitamins and their vitamers
content
Produits alimentaires — Lignes directrices pour exprimer les teneurs
en vitamines et en leurs vitamères
PROOF/ÉPREUVE
Reference number
ISO/TR 23304:2021(E)
©
ISO 2021

---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2021
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: [phone]
Email: [e-mail]
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii PROOF/ÉPREUVE © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Guidelines per vitamins . 1
4.1 General . 1
4.2 Vitamin E . 2
4.3 Vitamin A. 5
4.4 Vitamin D . 7
4.5 Vitamin K. 8
4.6 Thiamine (vitamin B ) . 9
1
4.7 Riboflavin (vitamin B ) .10
2
4.8 Niacin (vitamin B or vitamin PP) .11
3
4.9 Vitamin B .
6 12
4.10 Biotin (vitamin H or vitamin B ) .13
8
4.11 Folates (vitamin B ) .14
9
4.12 Vitamin B .
12 15
4.13 Pantothenic acid (vitamin B ) .16
5
4.14 Vitamin C .17
5 US FDA unit conversions .19
Bibliography .20
© ISO 2021 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE iii

---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv PROOF/ÉPREUVE © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Introduction
Vitamins can be naturally found in foods in different molecular forms. In more elaborated food products,
vitamins can be used for fortification by adding several molecular forms with different levels of vitamin
activity. There are regulations governing the addition of vitamins in food products. The authorized
compounds for fortification depend on the type of food. Regulation deals with, for instance baby food or
food supplements. The main problem is that the vitamin activities of the authorized compounds are not
clearly described.
At the same time, it is not mandatory to list the chemical name of the compound used for food
fortification purposes according to food labelling regulations. For example, vitamin E can be written in
the list of ingredients without knowing if it is D-alpha tocopherol or D,L-alpha tocopherol, even though
each molecular form presents different vitamin E activity.
ISO and CEN analytical standards express results in mass units related to the vitamin standard used
for quantification. As expression in specific units of vitamin activity can be linked to regional/national
regulatory requirements, analytical methods do not give guidance for this conversion. This document
proposes ways to express the vitamin content in order to facilitate harmonization between different
laboratories and also to reduce misunderstanding of the results expressed in vitamin content and in
some cases in the vitamin activity of vitamers.
© ISO 2021 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE v

---------------------- Page: 5 ----------------------
TECHNICAL REPORT ISO/TR 23304:2021(E)
Food products — Guidance on how to express vitamins and
their vitamers content
1 Scope
This document provides guidelines on:
— how to express vitamin quantity,
— the expression of different molecular forms in appropriate units,
— and in some cases, vitamin activity, according to vitamers present or used in food products, in
addition to the quantitative content determination obtained from ISO and CEN analytical standards.
It provides information to be used as a basis for discussion between stakeholders and food control
laboratories. It is not intended to be prescriptive or exhaustive.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
3.1
vitamer
any of a number of chemical compounds of a particular vitamin, generally having a similar molecular
structure, each of which shows vitamin activity in a vitamin-deficient biological system
Note 1 to entry: See Reference [1].
4 Guidelines per vitamins
4.1 General
This document begins by addressing vitamin E, as this vitamin is considered to be the most complex
in terms of variation of possible units of measurement. Vitamin E is followed by the other fat-soluble
vitamins and water-soluble vitamins respectively.
To include the diversity of available conversion factors, regulations in different countries/regions
are evaluated, including the European Union (EU), Regulations of the United States Food and Drug
Administration (USFDA), United States of America (USA), National Standard (GB) of China, Food
[2]
Standards Australia/New Zealand (FSANZ). In addition, standards of global organizations (CODEX )
are included.
© ISO 2021 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE 1

---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

4.2 Vitamin E
Vitamin E is a fat-soluble vitamin. Vitamin E is mainly found in the fat of the different food products as
tocopherols and tocotrienols esters.
Food regulations of many countries authorize the fortification of different kind of food products with
molecules having a vitamin E activity. The names of the authorized molecular forms to add are generally
linked to the type of food product. Table 1 gives an example of vitamin E compounds permitted for use
for food fortification according to EU regulations, depending on the product type.
Table 1 — Example of authorized vitamin E compounds for food fortification in the EU
according to products concerned
Product type Molecular form Molecular Examples of regulations
mass (g/mol)
D-alpha-tocopherol 430,7
DL-alpha-tocopherol 430,7
Food with a specific D-alpha-tocopheryl acetate 472,8
[3]
Regulation (EU) n° 609/2013
nutritional purpose
DL-alpha-tocopheryl acetate 472,8
D-alpha-tocopheryl polyethylene
glycol 1000 succinate
D-alpha-tocopherol 430,7
DL-alpha-tocopherol 430,7
[4]
Supplemented food D-alpha-tocopheryl acetate 472,8 Regulation (EC) n°1925/2006
DL-alpha-tocopheryl acetate 472,8
D-alpha-tocopheryl acid succinate 530,8
D-alpha-tocopherol 430,7
DL-alpha-tocopherol 430,7
D-alpha-tocopheryl acetate 472,8
[5]
Food supplements Directive n°2002/46/EC
DL-alpha-tocopheryl acetate 472,8
D-alpha-tocopheryl acid succinate 530,8
Mix of tocopherols and tocot-
rienols
There is no global convention on how the amount of vitamin E should be expressed for labelling
purposes. In Table 2 an overview of units of measurement for vitamin E is given according to several
national/regional regulations and a CODEX standard.
Table 2 — Definition of vitamin E for labelling purposes in several standards/regulations
US US EU CODEX China/Australia/New Zealand
(until 2019-12- (as from 2020-
31) 01-01)
a b
IU mg alpha-tocoph- mg alpha – TE mg alpha - TE mg alpha – TE
erol
1 IU = 0,67 mg for 1 mg vitamin E 1 mg alpha – TE = 1 mg alpha – TE = 1 mg alpha – TE =
D-alpha tocopher- (as alpha-tocoph-
1 mg D-alpha 1 mg D-alpha 1 mg D-alpha tocopherol
ol (natural) erol) label claim
tocopherol tocopherol
= 1 mg of natural
alpha-tocopherol
(D-alpha-tocoph-
erol)
a
International Unit, a measure of biological activity, different for each substance.
b
Tocopherol equivalent.
2 PROOF/ÉPREUVE © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Table 2 (continued)
US US EU CODEX China/Australia/New Zealand
(until 2019-12- (as from 2020-
31) 01-01)
1 IU = 0,9 mg for 1 mg vitamin E
D, L -alpha tocoph- (as alpha-tocoph-
erol (synthetic) erol) label claim =
2 mg of synthetic
alpha-tocopherol
(D,L-alpha-to-
copherol
a
International Unit, a measure of biological activity, different for each substance.
b
Tocopherol equivalent.
The vitamin E unit of measurement is generally defined as 1 mg of D-alpha-tocopherol (natural
form). There is currently no standard or official analytical method able to quantify this natural form
specifically.
There are two main analytical approaches for quantifying vitamin E:
1) Saponification of tocopheryl esters to liberate them as free tocopherols. Solvent extraction and
separation of the individual tocopherols by liquid chromatography. Quantification by fluorescence
detection.
[6]
An example is EN 12822 , which includes a saponification and an extraction step. It enables the
separation by a normal phase HPLC, and the quantification of the free alpha, beta, gamma and
delta tocopherols using fluorescence detection. Tocotrienols are also separated but not quantified.
Tocotrienols are not taken into account for the expression of the vitamin result. The D-tocopherols
are not distinguished from the D,L-tocopherols.
2) Direct solvent extraction and separation of different esters and free tocopherols by liquid
chromatography. Quantification by fluorescence detection.
An example is ISO 20633, where the hydrophilic coating of fat micelles is hydrolyzed by an enzyme. The
hydrophobic contents of the micelles are then extracted into iso-octane. The extract is analyzed
by normal phase HPLC. Alpha-tocopherol and alpha-tocopheryl acetate are quantified using
fluorescence detection.
By taking into account the molecular mass and the activity ratio of the D and the D,L the following
[8]
values can be found :
— 1 mg of vitamin E = 1 mg of D-alpha-tocopherol = 1 mg alpha-TE;
— 1 mg of vitamin E = 1,35 mg of D,L-alpha-tocopherol;
— 1 mg of vitamin E = 1,1 mg of D-alpha-tocopheryl acetate;
— 1 mg of vitamin E = 1,49 mg of D,L-alpha-tocopheryl acetate;
— 1 mg of vitamin E = 1,23 mg of D-alpha-tocopheryl acid succinate.
As mentioned above, there is no specific detection at the quantification step for the D-alpha tocopherol
(natural form) and the D,L-alpha tocopherol (synthetic form) respectively. So, when a sample is analyzed,
and there is no specific information about the added form (D or D,L) on the label of the product, there
can be a misunderstanding about the true value of the vitamin E content. The difference can be a factor
of 1,35 or higher.
Regarding the nutritional aspect, there is no general agreement about the activities of the other forms
of tocopherols and tocotrienols.
© ISO 2021 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE 3

---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

When in the presence of certain amounts of beta and/or gamma and/or delta tocopherols, it is often
underlined that the relative vitamin E activities should be included in the final result. The more common
[8]
coefficients are:
— 1 mg of D-beta-tocopherol = 0,5 mg of vitamin E;
— 1 mg of D-gamma-tocopherol = 0,1 mg of vitamin E;
— 1 mg of D-delta-tocopherol = 0,03 mg of vitamin E.
Tocotrienols are sometimes also taken into account by certain guidelines, such as the FAO/INFOODS
[9]
guideline as in the following example:
Vitamin E (mg/100 g) = alpha-tocopherol (mg/100 g) + 0,4 beta-tocopherol (mg/100 g) + 0,1 gamma-
tocopherol (mg/100 g) + 0,01 delta-tocopherol (mg/100 g) + 0,3 alpha-tocotrienol (mg/100 g) +
0,05 beta-tocotrienol (mg/100 g) + 0,01 gamma-tocotrienol (mg/100 g)
Despite this fact, in most of the cases, only the alpha-tocopherol is considered.
th
At the session of the Codex Committee on Nutrition and Foods for Special Dietary Uses (40 Session,
th th
5 - 9 December 2016, Hamburg, Germany), it was proposed to take only the alpha-tocopherol into
[10]
account for labelling purposes . In this case, the expression of vitamin E is very simple:
vitamin E = 1 mg of alpha-D-tocopherol = 1 mg RRR-alpha-tocopherol.
Taking into account most of these parameters, the vitamin E content can be calculated as follows:
a) If only D-alpha tocopherol (natural) is present in the product, the vitamin E content (expressed in
D-alpha tocopherol equivalent) can be calculated as vitamin E (mg/100 g) = alpha-D-tocopherol
or in some cases, e.g. for vegetable oils:
vitamin E (mg/100 g) = alpha-tocopherol + 0,5 beta-tocopherol + 0,1 gamma-tocopherol +
0,03 delta-tocopherol.
b) If D,L alpha tocopherol (synthetic) is present in the product, the alpha-tocopherol result is divided
by 1,35 and the vitamin E content (expressed in D-alpha tocopherol equivalent) can be calculated
as vitamin E (mg/100 g) = 0,74 alpha-tocopherol (mg/100 g)
or in some cases:
vitamin E (mg/100 g) = 0,74 alpha-tocopherol (mg/100 g) + 0,5 beta-tocopherol (mg/100 g) +
0,1 gamma-tocopherol (mg/100 g) + 0,03 delta-tocopherol (mg/100 g).
c) If the vitamin E molecular form is not known, it is recommended that the two former possibilities
be studied. Follow-up action with the producer of the product can be necessary before a conclusion
can be drawn.
d) Some methods do not involve a saponification step, like in ISO 20633. In these cases, the calculation
is adapted as follows:
vitamin E (mg/100 g) = D-alpha tocopherol (mg/100 g) + 0,909 D-alpha tocopherol acetate
(mg/100 g).
In addition, it is important to consider that apart from adding vitamin E for food fortification purposes,
it is common practice and permitted to add tocopherols as food additives (antioxidants) to food
products, including:
— E 306: rich tocopherols extracts;
— E 307: alpha tocopherol;
4 PROOF/ÉPREUVE © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

— E 308: gamma tocopherol;
— E 309: delta tocopherol.
At the analysis step, this can lead to a difference between the vitamin E quantified value and the
vitamin E labelled value because no test is capable of identifying the part of vitamin E added for
nutritional purposes from the part added for antioxidation. In any case, the labelled vitamin E value
should not include the tocopherol forms added as antioxidants.
4.3 Vitamin A
Vitamin A is a fat-soluble vitamin. Vitamin A is mainly found in the fat of the different food products as
retinol esters.
The food regulations of many countries authorize the fortification of different kinds of food products
with molecules having a vitamin A activity. The names of the authorized molecular forms to add in
are generally linked to the type of food product. Table 3 gives an example of vitamin A compounds
permitted for use for food fortification according to EU regulations, depending on the product type.
Table 3 — Example of authorized vitamin A compounds for food fortification in the EU
according to products concerned
Product type Molecular form Molecular Examples of regulations
mass (g/mol)
Retinol 286,5
Retinyl acetate 328,5
Food with a specific nutri-
Regulation (EU) n° 609/2013
tional purpose
Retinyl palmitate 524,9
Beta carotene 536,9
Retinol 286,5
Retinyl acetate 328,5
Supplemented food Regulation (EC) n° 1925/2006
Retinyl palmitate 524,9
Beta carotene 536,9
Retinol 286,5
Retinyl acetate 328,5
Food supplements Directive n°2002/46/EC
Retinyl palmitate 524,9
Beta carotene 536,9
There is no global convention on how the amount of vitamin A should be expressed for labelling
purposes. In Table 4 an overview of units of measurement for vitamin A is given according to several
national/regional regulations and a CODEX standard.
Table 4 — Definition of vitamin A for labelling purposes in several standards/regulations
US US EU CODEX China/Australia/New
(until 2019-12-31) (as from 2020-01- Zealand
01)
a
IU µg RAE µg RE µg RE µg RE
1 IU = 0,3 µg retinol 1 µg RAE = 1 µg retinol 1 µg RE = 1 µg retinol 1 µg RE = 1 µg retinol 1 µg RE = 1 µg retinol
1 µg retinol = 3,33 IU 1 µg retinol = 3,33 IU
1 IU = 0,6 µg of be- 1 µg RAE = 2 µg supple- 6 µg beta-carotene Carotenoids excluded Carotenoids excluded
ta-carotene mental beta-carotene = 1 µg RE
a
Retinol activity equivalent.
b
Retinol equivalent.
© ISO 2021 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE 5

---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Table 4 (continued)
US US EU CODEX China/Australia/New
(until 2019-12-31) (as from 2020-01- Zealand
01)
1 µg RAE = 12 µg be-
ta-carotene
1 µg RAE = 24 µg al-
pha-carotene
1 µg RAE = 24 µg be-
ta-cryptoxanthin
a
Retinol activity equivalent.
b
Retinol equivalent.
In general, the unit of measurement for vitamin A is µg RE and defined as 1 µg of retinol. The natural
form is the trans retinol.
There are two main analytical approaches for quantifying vitamin A:
1) Saponification of retinol esters to liberate them as free retinol. Solvent extraction and separation of
the cis and trans retinol by liquid chromatography. Quantification by UV or fluorescence detection.
[11]
An example is EN 12823-1 , which includes a saponification step and enables the separation and
[12]
the quantification of all E-retinol (trans-retinol) and 13-Z-retinol (13-cis-retinol). EN 12823-2
enables the quantification of beta-carotene.
2) Direct solvent extraction and separation of different esters of retinol and retinol by liquid
chromatography. Quantification by UV or fluorimetric detection.
An example is ISO 20633, where the hydrophilic coating of fat micelles is hydrolyzed by an enzyme. The
hydrophobic contents of the micelles are then extracted into iso-octane. The extract is analyzed by
normal phase HPLC. Vitamin A palmitate (cis and trans) and vitamin A acetate (cis and trans) are
quantified using UV detection.
By taking into account the molecular mass, the following values for retinyl esters can be found:
— 1 µg of all trans retinyl acetate = 0,872 µg RE (vitamin A);
— 1 µg of all trans retinyl palmitate = 0,546 µg RE (vitamin A).
In some regulations, beta-carotene can be included as vitamin A. In that case the beta-carotene content
value should be transformed in RE. The correction factor is in most of the cases: 1 µg of retinol = 6 µg of
beta-carotene.
In the literature, different factors for alpha-carotene and/or some other carotenoids can be taken into
[13]
account like in the Souci-Fachmann-Kraut food composition and nutrition tables :
vitamin A = retinol + 1/6 beta-carotene + 1/12 (other vitamin A active carotenoids).
Other vitamin A active carotenoids include alpha-carotene, gamma-carotene, cryptoxanthin and
mutatochrome.
These carotenoids are usually not taken into account because of their low activity in comparison to
beta-carotene and because of the need for additional assays.
To take into account most of these parameters, the vitamin A content can be calculated as:
vitamin A (µg/100 g) = retinol (µg/100 g) [all E-retinol (trans-retinol) + 13-Z-retinol (13-cis-retinol)]
or in some cases, depending on the regulation:
vitamin A (µg/100 g) = retinol (µg/100 g) + 0,167 beta-carotene (µg/100 g).
6 PROOF/ÉPREUVE © ISO 2021 – All rights reserved

---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

Some methods do not involve a saponification step, like in ISO 20633. In these cases, the calculation is
adapted as follows:
vitamin A as retinol (µg/100 g) = 0,55 x retinyl palmitate (µg/100g) + 0,87 x retinyl acetate
(µg/100 g).
4.4 Vitamin D
Vitamin D is a fat-soluble vitamin. Vitamin D is found in the fat of many food products. Vitamin D is
2
found in vegetables and vitamin D is found in food from animal origin (for example meat, fish and milk).
3
Food regulations of many countries authorize the fortification of different kinds of food products with
molecules having a vitamin D activity. The names of the authorized molecular forms to add in are
generally linked to the type of food product. Table 5 gives an example of vitamin D forms permitted for
use for food fortification according to EU regulations, depending on the product type.
Table 5 — Example of authorized vitamin D compounds for food fortification in the EU
according to products concerned
Product type Molecular form Molecular Examples of regulations
mass (g/mol)
Vitamin D 396,7
Food with a specific nutritional
2
Regulation (EU) n° 609/2013
purpose
Vitamin D 384,6
3
Vitamin D 396,7 Regulation (EC) n° 1925/2006
2
Supplemented food
Vitamin D 384,6
3
Vitamin D 396,7 Directive n°2002/46/EC
2
Food supplements
Vitamin D 384,6
3
There are several vitamers of vitamin D. The two major forms are vitamin D (ergocalciferol) and
2
vitamin D (cholecalciferol). Vitamin D without a subscript refers to either vitamin D or vitamin D or
3 2 3
both and is known as calciferol. There is global agreement about the units and the conversion factors
to be used. In Table 6 an overview of units of measurement for vitamin D is given according to several
national/regional regulations and a CODEX standard.
Table 6 — Definition of vitamin D for labelling purposes in several standards/regulations
US US EU CODEX China / Australia/
(until 2019-12- (as from 2020- New Zealand
31) 01-01)
IU µg µg µg µg
1 IU = 0,025 µg 1 µg = 40 IU 1 µg vitamin D or 1 µg vitamin D 1 µg vitamin D
2 3 2
ergocalciferol 1 µg vitamin D (or or 1 µg vitamin D
3 3
or 1 µg vitamin D + vita- (or 1 µg vitamin
2
cholecalciferol min D ) D +vitamin D )
3 2 3
vitamin D vitamin D vitamin D and/or vitamin D vitamin D and/or
2 2 2 3 2
and/or and/or vitamin D vitamin D
3 3
vitamin D vitamin D
3 3
In general, the unit of measurement for vitamin D is µg cholecalciferol or ergocalciferol.
It is considered that for vitamin D, 1 µg of ergocalciferol (vitamin D ) is equivalent to 1 µg cholecalciferol
2
(vitamin D ) because both have the same vitamin D activity.
3
According to former US regulation, the International Unit (IU) of vitamin D is equal to 0,025 µg of
vitamin D or vitamin D3. The IU can be still be found on labels.
2
© ISO 2021 – All rights reserved PROOF/ÉPREUVE 7

---------------------- Page: 12 ----------------------
ISO/TR 23304:2021(E)

There are two main analytical approaches for quantifying vitamin D:
1) Saponification of the matrix to liberate vitamin D and vitamin D as free forms. Solvent extraction.
2 3
A first HPLC step to purify and collect the vitamin D and vitamin D fraction. Then separation of
2 3
the vitamin D and vitamin D by liquid chromatography. Quantification by UV detection.
2 3
[14]
An example is EN 12821 , which includes a saponification step. A first HPLC step enables the
purification and collection of vitamins D and D . Then vitamin D and vitamin D are separated
2 3 2 3
by a second chromatography. Both are quantified by UV detection. The drawback of this method
is that vitamin D and vitamin D cannot be quantified simultaneously because one is used as an
2 3
internal standard to quantify the other.
2) Saponification of the matrix to liberate vitamin D and vitamin D as free forms. Derivatization of
2 3
the vitamin D to a higher molecular mass. Then separation by HPLC and quantification by mass
spectrometry. The advantage of this principle is that vitamin D and vitamin D can be quantified
2 3
simultaneously.
An example is ISO 20636 where samples are saponified and vitamin D is extracted by isooctane.
Vitamin D is derivatized and then quantified by mass spectrometry after a chromatographic step.
Stable isotopes of vitamin D and vitamin D are used as internal sta
...