ISO 8523:1991
(Main)Microbiology — General guidance for the detection of Enterobacteriaceae with pre-enrichment
Microbiology — General guidance for the detection of Enterobacteriaceae with pre-enrichment
Describes the principle, the cultur media and reagent, the apparatus and glassware, the sampling, the test procedure, the expression of results, and the contents of the test report. Applies to products intended for human consumption or feeding of animals. Annex A forms an integral part of this standard.
Microbiologie — Directives générales pour la recherche des Enterobacteriaceae avec pré-enrichissement
La présente Norme internationale donne des directives générales en vue de la recherche des Enterobacteriaceae avec pré-enrichissement pour les produits destinés à la consommation humaine ou à l'alimentation animale.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL
STANDARD
First edi tion
1991-10-01
Microbiology - General guidance for the
detection of Enterobacteriaceae with
pre-enrichment
Microbiologie - Direcfiv es g&@rales pour la recherche des
Enterobacteriace pr&enrichissement
ae avec
Reference number
ISO 8523:1991(E)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8523:1991(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnicat
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Inter-
national Standard requires approval by at least 75 % of the member
bodies casting a vote.
International Standard ISO 8523 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Sub-Committee SC 9, Microbiol-
WY*
Annex A forms an integral patt of this International Standard.
0 ISO 1991
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form
or by any means, electronie or mechanical, including photocopying and microfiim, without
Permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 8523:1991(E)
Introduction
This International Standard is intended to provide general guidance for
the microbiological examination of food products not dealt with by ex-
isting International Standards and for reference for bodies preparing
microbiological methods of test for application to foods or to animal
feeding stuffs.
Because of the Iarge variety of products within this field of application,
these guidelines may not be appropriate for some products in every
detail, and for some other products it may be necessary to use different
methods.
Nevertheless, it is hoped that in all cases every attempt will be made to
apply the provided guidelines as far as possible, and that deviations
from them will only be made if absolutely necessary for technical rea-
sons.
When this International Standard is next reviewed, account will be taken
of all information then available regarding the extent to which the
guidelines have been followed and the reasons for deviation from them
in the case of patticular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain
groups of products, International Standards and/or national Standards
may already exist that do not comply with these guidelines. In cases
where International Standards already exist for the product to be tested,
they should be followed l) . However, it is hoped that when such Standards
are reviewed they will be changed to comply with this International
Standard so that, eventually, the only remaining departures from these
guidelines will be those necessary for weil-established technical rea-
sons.
To allow for national practice, the test method given here may be car-
ried out at an incubation temperature of either 35 “C or 37 “C.
NOTE 1 The technique described in this International Standard tan be applied
for carrying out an enumeration using the most probable number (MPN) tech-
nique. For this it is only necessary to carry out the presence/absence test, de-
scribed in this International Standard, in replicate at several dilutions (as
prescribed, for example, in the product specification). For the interpretation of
the results obtained, reference should be made to the MPN tables given in
ISO 7218.
1) For meat and meat products, see ISO 5552:1979, Meat and meat products
-
Detection and enumeration of Enterobacteriaceae (Reference methods).
..*
Ill
---------------------- Page: 3 ----------------------
This page intentionally left blank
---------------------- Page: 4 ----------------------
.-
INTERNATIONAL STANDARD ISO 8523:1991 (E)
General guidance for the detection of
Microbiology -
Enterobacteriaceae with pre-enrichment
1 Scope 4 Principle
In general, the detection of Enterobacteriaceae re-
This International Standard gives general guidelines
for the detection of Enterobacteriaceae with pre- quires four successive stages (see also annex A).
enrichment in products intended for human con-
sumption or feeding of animals.
4.1 Pre-enrichment in non-selective liquid
medium
2 Normative reference Inoculation of buffered peptone water (also used as
diluent) with the test Portion, and incubation at
35 “C or 37 OC for 16 h to 20 h.
The following Standard contains provisions which,
through reference in this text, constitute provisions
The temperature shall be agreed by the Parties
of this International Standard. At the time of publi-
concerned and shall be indicated in the test report.
cation, the edition indicated was valid. All Standards
are subject to revision, and Parties to agreements
based on this International Standard are encour-
aged to investigate the possibility of applying the
4.2 Enrichment in selective liquid medium
most recent edition of the Standard indicated below.
Members of IEC and ISO maintain registers of cur-
Inoculation of enrichment broth with the culture ob-
rently valid International Standards.
tained in 4.1.
ISO 72183985, Microbiology - General guidance for
Incubation at 35 OC or 37 “C (as agreed) for 24 h.
microbiological examinations.
4.3 Plating out and identification
3 Definitions
From the cultures obtained in 4.2, inoculation of a
selective solid medium (violet red bile glucose
For the purposes of this International Standard, the
agar).
following definitions apply.
lncubation at 35 “C or 37 “C (as agreed) and exam-
ination after 24 h to check for the presence of col-
3.1 Enterobacteriaceae: Micro-organisms which
onies presumed to be Enterobacteriaceae by their
ferment glucose and show a negative oxidase re-
characteristics.
action when the test is carried out in accordance
with the method specified in this International Stan-
dard.
4.4 Confirmation
3.2 detectian of Enterobacteriaceae: Determination
of the presence or absence of Enterobacteriaceae in Subculturing of colonies of presumptive Entero-
a particular mass of product, when tests are carried bacteriaceae (4.3) on non-selective medium, and
confirmation by means of appropriate biochemical
out in accordance with the method specified in this
tests.
International Standard.
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 8523:1991 (E)
the medium for longer than 30 min. Cool the medium
5 Culture media and reagent
rapidly.
5.1 General Adjust the pH, if necessary, so that after boiling it is
7,2 at 25 “C.
For current laboratory practice, see ISO 7218.
in quantities of 10 ml, into
Dispense the medium,
sterile tubes (6.5).
5.2 Culture media
DO not sterilize the medium.
5.2.1 Buffered peptone water (non-selective pre-
The medium may be stored for up to 1 week at 0 “C
enrichment medium).
to + 5 “C.
52.1 .l Components
5.2.3 Violet red bile glucose agar.
Peptone 1090 g
5.2.3.1 Components
Sodium chloride
570 g
Disodium hydrogen Phosphate
dodecahydrate (Na,HPO,-12H,O) 970 g
Peptone 790 g
Potassium dihydrogen Phosphate
Yeast extract
3,o g
13 g
wf%po4)
Bile salts
175 g
1000 ml
Water
Glucose 1070 g
Sodium chloride
50 g
Neutral red 0903 g
5.2.1.2 Preparation
0,002 g
Crystal violet
Dissolve the components or the dehydrated com-
8 g to 18 g ’)
Agat
plete medium in the water, by heating if necessary.
1000 ml
Water
Adjust the pH, if necessary, so that after sterilization
1) According to the gel strength of the agar.
it is 7,0 at 25 “C.
Dispense the medium aseptically into flasks of suit-
able capacity (6.5) to obtain the portions necessary
5.2.3.2 Preparation
for the test.
Dissolve the components or the dehydrated com-
Sterilize for 20 min in an autoclave (6.1) set at
plete medium in the water by boiling.
121 “C.
Adjust the pH, if necessary, so that after boiling it is
52.2 Buffered brittiant green bile glucose broth
7,4 at 25 “C.
(EE broth) (enrichment medium).
Dispense the culture medium into sterile tubes or
flasks (6.5) of capacity not more than 500 ml.
5.2.2.1 Components
DO not sterilize the medium.
Peptone lO,O g
Prepare the medium just before use.
Glucose 50 g
Disodium hydrogen Phosphate (Na,HPO,) 6945 g
5.2.3.3 Preparation of agar piates
Potassium dihydrogen Phosphate
290 g
wwu Transfer immediately approximately 15 ml of the
Ox bile, dehydrated mo g culture medium, cooled to approximately 45 OC, to
Petri dishes (6.7) and allow to solidify.
0,015 g
Brilliant green
1000 ml
Water
Just before use, dry the plates, preferably with the
lids off and the agar surface downwards, in an oven
(6.3) until the agar is dry.
5.2.2.2 Reparation
If prepared in advance, the Undried plates shall not
be kept for longer than 4 h at room temperature or
Dissolve the components or the dehydrated com-
1 day at 0 ‘C to --t- 5 “C.
plete medium in the water by boiling. DO not heat
2
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 8523:1991(E)
5.2.5.2 Preparation
5.2.4 Nutrient agar.
Dissolve the components or the dehydrated com-
5.2
...
NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1991-10-01
Microbiologie - Directives générales pour la
recherche des Enterobacteriaceae avec
pré-enrichissement
Microbiology -- General guidance for fhe defecfion of
Enterobacteriaceae wifh pre-enrichmenf
Numéro de référence
ISO 8523:1991(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8523:1991 (F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 O/o au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8523 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produifs agricoles alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
L’annexe A fait partie intégrante de la présente Norme internationale.
0 iso 1991
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
imprimé en Suisse
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 8523:1991 (F)
La présente Norme internationale se propose de fournir des directives
générales pour l’examen microbiologique de produits alimentaires non
concernés par les Normes internationales existant actuellement et pour
être prises en considération par les organismes élaborant des métho-
des d’essai microbiologiques destinées à être appliquées à des produits
alimentaires ou à des aliments pour animaux.
En raison de la grande diversité des produits entrant dans ce domaine
d’application, il est possible que ces directives, dans tous leurs détails,
ne conviennent pas exactement à certains produits et que, pour certains
autres produits, il puisse être nécessaire d’employer des méthodes dif-
férentes.
Néanmoins, il est à espérer que, dans tous les cas, tous les efforts se-
ront faits pour appliquer, chaque fois qu’il sera possible, les directives
données et qu’on n’aura recours à des dérogations que si cela est ab-
solument nécessaire pour des raisons techniques.
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il sera tenu
compte de tous les renseignements disponibles à ce moment-là, à sa-
voir dans quelle mesure les directives auront été suivies et les raisons
pour lesquelles il aura été nécessaire d’y déroger dans le cas de pro-
duits particuliers.
L’harmonisation des méthodes d’essai ne peut pas être immédiate et,
pour certains groupes de produits, des Normes internationales et/ou
des normes nationales existent peut-être déjà, qui ne concordent pas
avec ces directives. Dans le cas où d’autres Normes internationales
existent déjà pour le produit à contrôler, elles devront être appliquéesl)
Cependant, il serait souhaitable que, lorsqu’elles viendront en révision,
elles soient modifiées de facon à se conformer à la présente Norme
internationale si bien que, finalement, les seules divergences restantes
seront celles vraiment nécessaires pour des raisons techniques bien
établies.
Afin de s’adapter aux usages nationaux, cette méthode donne le choix
entre la température d’incubation de 35 OC ou de 37 “C.
NOTE 1 La technique décrite dans la présente Norme internationale peut être
appliquée en vue d’un dénombrement pour la technique NPP. Pour cela, il est
nécessaire de réaliser l’essai présence-absence décrit dans la présente Norme
internationale en double à différentes dilutions, par exemple comme décrit dans
la spécification du produit. Pour l’interprétation des résultats, il convient d’utili-
ser les tables de I’ISO 7218.
1) Pour les viandes et produits à base de viande, voir ISO 5552:1979, Viandes
et produits à base de viande - Recherche et dénombrement des Entero-
bacteriaceae (Méthodes de référence).
. . .
III
---------------------- Page: 3 ----------------------
Page blanche
---------------------- Page: 4 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 8523:1991(F)
Microbiologie - Directives générales pour la recherche des
Enterobacteriaceae avec pré-enrichissement
1 Domaine d’application 4 Principe
La présente Norme internationale donne des direc- En général, la recherche des Enterobacteriaceae
tives générales en vue de la recherche des Entero-
nécessite quatre étapes successives (voir aussi an-
bacteriaceae avec pré-enrichissement pour les nexe A).
produits destinés à la consommation humaine ou à
l’alimentation animale.
4.1 Pré-enrichissement en milieu non-sélectif
liquide
2 Référence normative
Ensemencement de la prise d’essai dans l’eau
La norme suivante contient des dispositions qui, par peptonée tamponnée (servant également de di-
suite de la référence qui en est faite, constituent des luant), puis incubation à 35 “C ou 37 “C pendant
dispositions valables pour la présente Norme inter- 16 h à 20 h.
nationale. Au moment de la publication, l’édition in-
La température doit faire l’objet d’un accord entre
diquée était en vigueur. Toute norme est sujette à
les parties concernées et doit être notée dans le
révision et les parties prenantes des accords fondés
rapport d’essai.
sur la présente Norme internationale sont invitées
à rechercher la possibilité d’appliquer l’édition la
plus récente de la norme indiquée ci-après. Les
4.2 Enrichissement en milieu sélectif liquide
membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre
des Normes internationales en vigueur à un moment
À partir de la culture obtenue en 4.1, ensemen-
donné.
cement d’un bouillon d’enrichissement.
ISO 7218: 1985, Microbiologie - Directives générales
Incubation à 35 OC ou 37 OC, selon accord, pendant
pour les examens microbiologiques.
24 h.
3 Définitions
4.3 Isolement et identification
Pour les besoins de la présente Norme internatio-
À partir des cultures obtenues en 4.2, ensemen-
nale, les définitions suivantes s’appliquent.
cement d’un milieu sélectif solide (gélose à la bile,
au cristal violet et au glucose).
3.1 Enterobacferiaceae: Micro-organismes fermen-
tant le glucose et donnant une réaction oxydase
Incubation à 35 OC ou 37 OC, selon accord, puis
négative lorsque l’essai est effectué selon la mé-
examen après 24 h, pour contrôler s’il y a présence
thode prescrite dans la présente Norme internatio-
de colonies d’hterobacteriaceae présumées en
nale.
raison de leurs caractéristiques.
3.2 recherche des Enterobacteriaceae: Détermi-
4.4 Confirmation
nation de la présence ou de l’absence de ces
micro-organismes dans une quantité déterminée de
produit, lorsque les essais sont effectués selon la Repiquage des colonies d’hterobacteriaceae pré-
méthode prescrite dans la présente Norme interna- sumées (4.3) sur milieu non sélectif, et confirmation
tionale. au moyen des essais biochimiques appropriés.
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 8523:1991 (F)
5.2.2.2 Préparation
5 Milieux de culture et réactifs
Dissoudre les composants ou le milieu complet
déshydraté dans l’eau, en portant le tout à ébulli-
5.1 Généralités
tion. Ne pas chauffer le milieu plus de 30 min. Re-
froidir le milieu rapidement.
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir
I’ISO 7218.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après
ébullition il soit de 7,2 à 25 “C.
5.2 Milieux de culture Répartir le milieu de culture par quantités de 10 ml
dans des tubes stériles (6.5).
52.1 Eau peptonée tamponnée (Milieu de pré-
Ne pas stériliser le milieu.
enrichissement non sélectif).
Le milieu peut être conservé 1 semaine au maxi-
mum entre 0 “C et + 5 “C.
52.1 .l Composants
5.2.3 C%lose à la bile, au cristal violet et au
glucose.
Peptone 1090 g
Chlorure de sodium 5,o 9 5.2.3.1 Composants
Hydrogénophosphate de sodium
(Na,HPO,*12H,O) 990 g
Peptone TO g
Dihydrogénophosphate de potassium
175 g
W*%) Extrait de levure
390 g
Eau 1000 ml
Sels biliaires
195 g
Glucose
1070 g
Chlorure de sodium 590 g
5.2.1.2 Préparation
Rouge neutre
0,03 g
Cristal violet 0,002 g
Dissoudre les composants ou le milieu complet
8 g à 18 g’)
Agar-agar
déshydraté dans l’eau, en chauffant si nécessaire.
1000 ml
Eau
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après sté-
rilisation, il soit de 7,0 à 25 “C.
1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
Répartir le milieu aseptiquement dans des flacons
de capacité adéquate (6.5), de facon à avoir les
5.2.3.2 Préparation
quantités nécessaires pour l’essai. *
Dissoudre les composants ou le milieu complet
Stériliser à l’autoclave (6.1) réglé à 121 OC pendant
déshydraté dans l’eau, en portant le tout à ébulli-
20 min.
tion.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après
5.2.2 Bouillon tamponné à la bile, au vert brillant
ébullition il soit de 7,4 à 25 “C.
et au glucose (milieu EE) (milieu d’enrichissement).
Répartir le milieu de culture dans des tubes ou dans
5.2.2.1 Composants des flacons stériles (6.5) de 500 ml de capacité
maximale.
Ne pas stériliser le milieu.
Peptone lO,O g
Glucose 590 g
Préparer ce milieu extemporanément.
Hydrogénophosphate de sodium
5.2.3.3 Préparation des boîtes de géiose
6945 g
WWO4)
Dihydrogénophosphate de potassium
Transférer immédiatement environ 15 ml du milieu
270 g
wH,Po4)
de culture, refroidi à environ 45 “C dans des boÎtes
Bile de boeuf desséchée
2w g
de Petri (6.7), et laisser se solidifier.
Vert brillant 0,015 g
1000 ml Juste avant l’emploi, sécher les boîtes de gélose,
Eau
de préférence couvercle enlevé et la surface de la
2
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 8523:1991(F)
5.2.5 Gélose glucosée.
gélose tournée vers le bas, dans une étuve (6.3),
jusqu’à séchage de la surface de la gélose.
5.2.5.1 Composants
Si elles ont été préparées à l’avance, les boîtes de
gélose non séchées ne doivent pas être conservées
plus de 4 h à la température ambiante ou plus de
Tryptone JO,0 g
1 jour entre 0 “C et + 5 “C.
Extrait de levure 195 g
Gluco
...
NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1991-10-01
Microbiologie - Directives générales pour la
recherche des Enterobacteriaceae avec
pré-enrichissement
Microbiology -- General guidance for fhe defecfion of
Enterobacteriaceae wifh pre-enrichmenf
Numéro de référence
ISO 8523:1991(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 8523:1991 (F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 O/o au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 8523 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produifs agricoles alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
L’annexe A fait partie intégrante de la présente Norme internationale.
0 iso 1991
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
imprimé en Suisse
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 8523:1991 (F)
La présente Norme internationale se propose de fournir des directives
générales pour l’examen microbiologique de produits alimentaires non
concernés par les Normes internationales existant actuellement et pour
être prises en considération par les organismes élaborant des métho-
des d’essai microbiologiques destinées à être appliquées à des produits
alimentaires ou à des aliments pour animaux.
En raison de la grande diversité des produits entrant dans ce domaine
d’application, il est possible que ces directives, dans tous leurs détails,
ne conviennent pas exactement à certains produits et que, pour certains
autres produits, il puisse être nécessaire d’employer des méthodes dif-
férentes.
Néanmoins, il est à espérer que, dans tous les cas, tous les efforts se-
ront faits pour appliquer, chaque fois qu’il sera possible, les directives
données et qu’on n’aura recours à des dérogations que si cela est ab-
solument nécessaire pour des raisons techniques.
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il sera tenu
compte de tous les renseignements disponibles à ce moment-là, à sa-
voir dans quelle mesure les directives auront été suivies et les raisons
pour lesquelles il aura été nécessaire d’y déroger dans le cas de pro-
duits particuliers.
L’harmonisation des méthodes d’essai ne peut pas être immédiate et,
pour certains groupes de produits, des Normes internationales et/ou
des normes nationales existent peut-être déjà, qui ne concordent pas
avec ces directives. Dans le cas où d’autres Normes internationales
existent déjà pour le produit à contrôler, elles devront être appliquéesl)
Cependant, il serait souhaitable que, lorsqu’elles viendront en révision,
elles soient modifiées de facon à se conformer à la présente Norme
internationale si bien que, finalement, les seules divergences restantes
seront celles vraiment nécessaires pour des raisons techniques bien
établies.
Afin de s’adapter aux usages nationaux, cette méthode donne le choix
entre la température d’incubation de 35 OC ou de 37 “C.
NOTE 1 La technique décrite dans la présente Norme internationale peut être
appliquée en vue d’un dénombrement pour la technique NPP. Pour cela, il est
nécessaire de réaliser l’essai présence-absence décrit dans la présente Norme
internationale en double à différentes dilutions, par exemple comme décrit dans
la spécification du produit. Pour l’interprétation des résultats, il convient d’utili-
ser les tables de I’ISO 7218.
1) Pour les viandes et produits à base de viande, voir ISO 5552:1979, Viandes
et produits à base de viande - Recherche et dénombrement des Entero-
bacteriaceae (Méthodes de référence).
. . .
III
---------------------- Page: 3 ----------------------
Page blanche
---------------------- Page: 4 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 8523:1991(F)
Microbiologie - Directives générales pour la recherche des
Enterobacteriaceae avec pré-enrichissement
1 Domaine d’application 4 Principe
La présente Norme internationale donne des direc- En général, la recherche des Enterobacteriaceae
tives générales en vue de la recherche des Entero-
nécessite quatre étapes successives (voir aussi an-
bacteriaceae avec pré-enrichissement pour les nexe A).
produits destinés à la consommation humaine ou à
l’alimentation animale.
4.1 Pré-enrichissement en milieu non-sélectif
liquide
2 Référence normative
Ensemencement de la prise d’essai dans l’eau
La norme suivante contient des dispositions qui, par peptonée tamponnée (servant également de di-
suite de la référence qui en est faite, constituent des luant), puis incubation à 35 “C ou 37 “C pendant
dispositions valables pour la présente Norme inter- 16 h à 20 h.
nationale. Au moment de la publication, l’édition in-
La température doit faire l’objet d’un accord entre
diquée était en vigueur. Toute norme est sujette à
les parties concernées et doit être notée dans le
révision et les parties prenantes des accords fondés
rapport d’essai.
sur la présente Norme internationale sont invitées
à rechercher la possibilité d’appliquer l’édition la
plus récente de la norme indiquée ci-après. Les
4.2 Enrichissement en milieu sélectif liquide
membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre
des Normes internationales en vigueur à un moment
À partir de la culture obtenue en 4.1, ensemen-
donné.
cement d’un bouillon d’enrichissement.
ISO 7218: 1985, Microbiologie - Directives générales
Incubation à 35 OC ou 37 OC, selon accord, pendant
pour les examens microbiologiques.
24 h.
3 Définitions
4.3 Isolement et identification
Pour les besoins de la présente Norme internatio-
À partir des cultures obtenues en 4.2, ensemen-
nale, les définitions suivantes s’appliquent.
cement d’un milieu sélectif solide (gélose à la bile,
au cristal violet et au glucose).
3.1 Enterobacferiaceae: Micro-organismes fermen-
tant le glucose et donnant une réaction oxydase
Incubation à 35 OC ou 37 OC, selon accord, puis
négative lorsque l’essai est effectué selon la mé-
examen après 24 h, pour contrôler s’il y a présence
thode prescrite dans la présente Norme internatio-
de colonies d’hterobacteriaceae présumées en
nale.
raison de leurs caractéristiques.
3.2 recherche des Enterobacteriaceae: Détermi-
4.4 Confirmation
nation de la présence ou de l’absence de ces
micro-organismes dans une quantité déterminée de
produit, lorsque les essais sont effectués selon la Repiquage des colonies d’hterobacteriaceae pré-
méthode prescrite dans la présente Norme interna- sumées (4.3) sur milieu non sélectif, et confirmation
tionale. au moyen des essais biochimiques appropriés.
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 8523:1991 (F)
5.2.2.2 Préparation
5 Milieux de culture et réactifs
Dissoudre les composants ou le milieu complet
déshydraté dans l’eau, en portant le tout à ébulli-
5.1 Généralités
tion. Ne pas chauffer le milieu plus de 30 min. Re-
froidir le milieu rapidement.
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir
I’ISO 7218.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après
ébullition il soit de 7,2 à 25 “C.
5.2 Milieux de culture Répartir le milieu de culture par quantités de 10 ml
dans des tubes stériles (6.5).
52.1 Eau peptonée tamponnée (Milieu de pré-
Ne pas stériliser le milieu.
enrichissement non sélectif).
Le milieu peut être conservé 1 semaine au maxi-
mum entre 0 “C et + 5 “C.
52.1 .l Composants
5.2.3 C%lose à la bile, au cristal violet et au
glucose.
Peptone 1090 g
Chlorure de sodium 5,o 9 5.2.3.1 Composants
Hydrogénophosphate de sodium
(Na,HPO,*12H,O) 990 g
Peptone TO g
Dihydrogénophosphate de potassium
175 g
W*%) Extrait de levure
390 g
Eau 1000 ml
Sels biliaires
195 g
Glucose
1070 g
Chlorure de sodium 590 g
5.2.1.2 Préparation
Rouge neutre
0,03 g
Cristal violet 0,002 g
Dissoudre les composants ou le milieu complet
8 g à 18 g’)
Agar-agar
déshydraté dans l’eau, en chauffant si nécessaire.
1000 ml
Eau
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après sté-
rilisation, il soit de 7,0 à 25 “C.
1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
Répartir le milieu aseptiquement dans des flacons
de capacité adéquate (6.5), de facon à avoir les
5.2.3.2 Préparation
quantités nécessaires pour l’essai. *
Dissoudre les composants ou le milieu complet
Stériliser à l’autoclave (6.1) réglé à 121 OC pendant
déshydraté dans l’eau, en portant le tout à ébulli-
20 min.
tion.
Ajuster le pH, si nécessaire, de sorte qu’après
5.2.2 Bouillon tamponné à la bile, au vert brillant
ébullition il soit de 7,4 à 25 “C.
et au glucose (milieu EE) (milieu d’enrichissement).
Répartir le milieu de culture dans des tubes ou dans
5.2.2.1 Composants des flacons stériles (6.5) de 500 ml de capacité
maximale.
Ne pas stériliser le milieu.
Peptone lO,O g
Glucose 590 g
Préparer ce milieu extemporanément.
Hydrogénophosphate de sodium
5.2.3.3 Préparation des boîtes de géiose
6945 g
WWO4)
Dihydrogénophosphate de potassium
Transférer immédiatement environ 15 ml du milieu
270 g
wH,Po4)
de culture, refroidi à environ 45 “C dans des boÎtes
Bile de boeuf desséchée
2w g
de Petri (6.7), et laisser se solidifier.
Vert brillant 0,015 g
1000 ml Juste avant l’emploi, sécher les boîtes de gélose,
Eau
de préférence couvercle enlevé et la surface de la
2
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 8523:1991(F)
5.2.5 Gélose glucosée.
gélose tournée vers le bas, dans une étuve (6.3),
jusqu’à séchage de la surface de la gélose.
5.2.5.1 Composants
Si elles ont été préparées à l’avance, les boîtes de
gélose non séchées ne doivent pas être conservées
plus de 4 h à la température ambiante ou plus de
Tryptone JO,0 g
1 jour entre 0 “C et + 5 “C.
Extrait de levure 195 g
Gluco
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.