SIST EN 14526:2017
(Main)Foodstuffs - Determination of saxitoxin-group toxins in shellfish - HPLC method using pre-column derivatization with peroxide or periodate oxidation
Foodstuffs - Determination of saxitoxin-group toxins in shellfish - HPLC method using pre-column derivatization with peroxide or periodate oxidation
This document specifies a method for the quantitative determination of saxitoxin (STX), decarbamoyl saxitoxin (dcSTX), neosaxitoxin (NEO), decarbamoyl neosaxitoxin (dcNEO), gonyautoxin 1 and 4 (GTX1,4; sum of isomers), gonyautoxin 2 and 3 (GTX2,3; sum of isomers), gonyautoxin 5 (GTX5 also called B1), gonyautoxin 6 (GTX6 also called B2), decarbamoyl gonyautoxin 2 and 3 (dcGTX2,3; sum of isomers), N-sulfocarbamoyl-gonyautoxin 1 and 2 (C1,2; sum of isomers) and (depending on the availability of certified reference materials (CRMs)) N-sulfocarbamoyl-gonyautoxin 3 and 4 (C3,4; sum of isomers) in (raw) mussels, oysters, scallops and clams. Laboratory experience has shown, that it is also be applicable in other shellfish [10], [13] and cooked shellfish products. The method described was validated in a collaborative study [1], [2] and published as AOAC Official Method [3]. This method was also verified in a EURL-performance test aiming the total toxicity of the samples [4]. Toxins which were not available in the first collaborative study [1], [2] as dcGTX2,3 and dcNEO were validated in two additional studies [5], [6]. The lowest validated levels [1], [2], [6], are given in µg toxin (free base) per kg shellfish meat and also as µmol/kg shellfish meat and are listed in Table 1.
A quantitative determination of GTX6 (B2) was not included in the first study but several laboratories detected this toxin directly after the ion exchange clean-up and reported a mass concentration of 30 µg/kg or higher in certain samples. For that reason, the present method is applicable to quantify GTX6 (B2) directly, depending on the availability of the standard material. Currently it is possible to determine GTX6 after a hydrolysis as NEO. The indirect quantification of GTX6 was validated in two additional studies [5], [6].
A quantitative determination of C3,4 was included in the first study. The present method is applicable to quantify C3,4 directly, depending on the availability of the standard material. The same hydrolysis protocol used for GTX6 can be applied to Fraction 1 of the SPE-COOH if C3,4 is present, to quantify this toxin as GTX1,4 [8].
Lebensmittel - Bestimmung von Toxinen der Saxitoxingruppe in Schalentieren - HPLC-Verfahren mit Vorsäulenderivatisierung und Peroxid- oder Periodatoxidation
Diese Europäische Norm legt ein Verfahren [1] für die quantitative Bestimmung von Saxitoxin (STX), Decarbamoyl-Saxitoxin (dcSTX), Neosaxitoxin (NEO), Decarbamoyl-Neosaxitoxin (dcNEO), Gonyautoxin 1 und 4 (GTX1,4; Summe der Isomere), Gonyautoxin 2 und 3 (GTX2,3; Summe der Isomere), Gonyautoxin 5 (GTX5, auch als B1 bezeichnet), Gonyautoxin 6 (GTX6, auch als B2 bezeichnet), Decarbamoyl-Gonyautoxin 2 und 3 (dcGTX2,3; Summe der Isomere), N-Sulfocarbamoyl-Gonyautoxin 1 und 2 (C1,2; Summe der Isomere) und (je nach Verfügbarkeit eines zertifizierten Referenzmaterials (CRMs)) N-Sulfocarbamoyl-Gonyautoxin 3 und 4 (C3,4; Summe der Isomere) in (rohen) Miesmuscheln, Austern, Jakobsmuscheln und Venusmuscheln fest. Laborerfahrungen haben gezeigt, dass das Verfahren auch auf andere Schalentiere [2], [3] und gekochte Schalentiererzeugnisse anwendbar ist. Das beschriebene Verfahren wurde in einem Ringversuch [4], [5] validiert und auch in einer EURL-Leistungsprüfung verifiziert, die auf die Gesamttoxizität der Proben ausgerichtet war [6]. Toxine, die nicht im ersten Ringversuch [4], [5] verfügbar waren, wie z. B. dcGTX2,3 und dcNEO, wurden in zwei weiteren Ringversuchen [7], [8] validiert. Die niedrigsten validierten Werte [4], [5], [8] sind in µg Toxin (freie Base) je kg Schalentierfleisch und auch in µmol/kg Schalentierfleisch angegeben und in Tabelle 1 aufgeführt.
GTX6 (B2) wurde im ersten Ringversuch nicht quantitativ bestimmt, jedoch wiesen mehrere Laboratorien dieses Toxin direkt nach der Reinigung mit Festphasenextraktion an einem Ionenaustauscher (SPE-COOH) nach. Diese Laboratorien gaben eine Massenkonzentration von 30 µg/kg oder höher in einigen Proben an. Aus diesem Grund ist das vorliegende Verfahren, abhängig von der Verfügbarkeit einer Vergleichssubstanz, für die direkte Quantifizierung von GTX6 (B2) anwendbar. Derzeit ist es möglich, GTX6 nach einer Hydrolyse der Fraktion 2 der SPE-COOH-Reinigung als NEO wie in 6.4 beschrieben zu bestimmen. Die indirekte Quantifizierung von GTX6 wurde in zwei zusätzlichen Ringversuchen [7], [8] validiert.
C3,4 wurde im ersten Ringversuch quantitativ bestimmt. Das vorliegende Verfahren ist, abhängig von der Verfügbarkeit einer Vergleichssubstanz, für die direkte Quantifizierung von C3,4 anwendbar. Wenn keine Vergleichssubstanz verfügbar ist, kann C3,4 nur als GTX1,4 quantifiziert werden, wenn die gleiche
Hydrolysevorschrift wie für GTX6 (6.4) auf die Fraktion 1 der SPE COOH-Reinigung angewendet wird, siehe [10].
Produits alimentaires - Dosage de la teneur en toxines du groupe de la saxitoxine dans les coquillages - Méthode par CLHP avec dérivation pré-colonne et par oxydation au peroxyde ou au periodate
La présente Norme européenne spécifie une méthode [1] de détermination de la teneur en saxitoxine (STX), décarbamoyle saxitoxine (dcSTX), néosaxitoxine (NEO), décarbamoyle néosaxitoxine (dcNEO), gonyautoxines 1 et 4 (GTX1,4 ; somme des isomères), gonyautoxines 2 et 3 (GTX2,3 ; somme des isomères), gonyautoxine 5 (GTX5, également appelée B1), gonyautoxine 6 (GTX6, également appelée B2), décarbamoyle gonyautoxines 2 et 3 (dcGTX2,3 ; somme des isomères), N-sulfocarbamoyle gonyautoxines 1 et 2 (C1,2 ; somme des isomères) et, sous réserve de la disponibilité de matériaux de référence certifiés, N-sulfocarbamoyle gonyautoxines 3 et 4 (C3,4 ; somme des isomères) dans les moules, les huîtres, les coquilles Saint-Jacques et les palourdes (crues). L’expérience en laboratoire a montré que cette méthode peut également être appliquée à d’autres coquillages [2], [3] et produits cuits à base de coquillages. La méthode décrite a été validée dans le cadre d’une étude interlaboratoires [4], [5] et a également été vérifiée lors d’un essai de performance EURL portant sur la toxicité globale des échantillons [6]. Les toxines non disponibles à l’occasion de la première étude interlaboratoires [4], [5], par exemple dcGTX2,3 et dcNEO, ont été validées lors de deux nouvelles études interlaboratoires [7], [8]. Les plus bas taux validés [4], [5], [8], sont exprimés en µg de toxine (en tant que base libre) par kg de chair de coquillage, et en µmol/kg de chair du coquillage. Ils sont indiqués dans le Tableau 1.
La détermination de la teneur en GTX6 (B2) n’était pas incluse dans la première étude interlaboratoires, mais plusieurs laboratoires ont détecté directement cette toxine après l’extraction en phase solide avec purification par échange d’ions (SPE-COOH). Ils ont indiqué une concentration massique de 30 µg/kg ou plus dans certains échantillons. En conséquence, la présente méthode peut être employée pour doser directement GTX6 (B2), à condition de disposer de l’étalon. Il est actuellement possible de déterminer la teneur en GTX6 après hydrolyse de la fraction 2 de la purification SPE-COOH, décrite au 6.4 en tant que NEO. La quantification indirecte de GTX6 a été validée dans le cadre de deux études interlaboratoires supplémentaires [7], [8].
La première étude interlaboratoires incluait une détermination de la teneur en C3,4. La présente méthode peut être employée pour quantifier directement C3,4, à condition de disposer de l’étalon. Si aucun étalon n’est disponible, les N-sulfocarbamoyle gonyautoxines C3,4 peuvent être quantifiées seulement en tant que GTX1,4 si le même protocole d’hydrolyse que celui utilisé pour GTX6 (6.4) est appliqué à la fraction 1 de la purification SPE-COOH (voir [10]).
Živila - Določevanje toksinov iz skupine saksitoksina v školjkah - Metoda HPLC z uporabo predkolonske derivatizacije s peroksidno ali perjodatno oksidacijo
Ta dokument določa metodo za kvantitativno določevanje saksitoksina (STX), dekarbamoil saksitoksina (dcSTX), neosaksitoksina (NEO), dekarbamoil neosaksitoksina (dcNEO), goniautoksina 1 in 4 (GTX1,4; vsota izomerov), goniautoksina 2 in 3 (GTX2,3; vsota izomerov), goniautoksina 5 (GTX5, imenovan tudi B1), goniautoksina 6 (GTX6, imenovan tudi B2), dekarbamoil goniautoksina 2 in 3 (dcGTX2,3; vsota izomerov), N-sulfokarbamoil-goniautoksina 1 in 2 (C1,2; vsota izomerov) in (odvisno od razpoložljivosti overjenih referenčnih materialov (CRM-ji)) N-sulfokarbamoil-goniautoksina 3 in 4 (C3,4; vsota izomerov) v (surovih) klapavicah, ostrigah, pokrivačah in školjkah. Izkušnje v laboratoriju kažejo, da se lahko ta standard uporablja tudi za druge proizvode iz školjk [10], [13] in kuhane proizvode iz školjk. Opisana metoda je bila potrjena v medlaboratorijski študiji [1], [2] in objavljena kot uradna metoda AOAC [3]. Ta metoda je bila preverjena tudi s preskusom učinkovitosti EURL za skupno toksičnost vzorcev [4]. Toksini, ki niso bili na voljo pri prvi medlaboratorijski študiji [1], [2], kot so dcGTX2,3 in dcNEO, so bili potrjeni v dveh dodatnih študijah [5], [6]. Najnižje potrjene vrednosti [1], [2], [6] so podane v μg toksina (prosta baza) na kg mesa školjk in tudi kot μmol/kg mesa školjk ter so navedene v preglednici 1.
Kvantitativno določevanje GTX6 (B2) ni bilo vključeno v prvi študiji, vendar pa je več laboratorijev odkrilo ta toksin neposredno po čiščenju z ionsko izmenjavo, pri čemer je masna koncentracija v nekaterih vzorcih znašala 30 μg/kg ali več. Zaradi tega se ta metoda uporablja za neposredno kvantifikacijo GTX6 (B2), odvisno od razpoložljivosti standardnega materiala. Trenutno je mogoče določiti GTX6 po hidrolizi kot NEO. Posredna kvantifikacija GTX6 je bila potrjena v dveh dodatnih študijah [5], [6].
Kvantitativno določevanje C3,4 je bilo vključeno v prvi študiji. Ta metoda se uporablja za neposredno kvantifikacijo C3,4, odvisno od razpoložljivosti standardnega materiala. Enak protokol za hidrolizo, ki se uporablja za GTX6, se lahko uporabi za kvantifikacijo tega toksina kot GTX1,4 [8] pri deležu 1 SPE-COOH, če je prisoten C3,4.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
SLOVENSKI STANDARD
SIST EN 14526:2017
01-marec-2017
1DGRPHãþD
SIST EN 14526:2005
äLYLOD'RORþHYDQMHWRNVLQRYL]VNXSLQHVDNVLWRNVLQDYãNROMNDK0HWRGD+3/&]
XSRUDERSUHGNRORQVNHGHULYDWL]DFLMHVSHURNVLGQRDOLSHUMRGDWQRRNVLGDFLMR
Foodstuffs - Determination of saxitoxin-group toxins in shellfish - HPLC method using pre
-column derivatization with peroxide or periodate oxidation
Lebensmittel - Bestimmung von Toxinen der Saxitoxingruppe in Schalentieren - HPLC-
Verfahren mit Vorsäulenderivatisierung und Peroxid- oder Periodatoxidation
Produits alimentaires - Dosage de la teneur en toxines du groupe de la saxitoxine dans
les coquillages - Méthode par CLHP avec dérivation pré-colonne et par oxydation au
peroxyde ou au periodate
Ta slovenski standard je istoveten z: EN 14526:2017
ICS:
67.050 Splošne preskusne in General methods of tests and
analizne metode za živilske analysis for food products
proizvode
67.120.30 Ribe in ribji proizvodi Fish and fishery products
SIST EN 14526:2017 en,fr,de
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
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SIST EN 14526:2017
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SIST EN 14526:2017
EN 14526
EUROPEAN STANDARD
NORME EUROPÉENNE
January 2017
EUROPÄISCHE NORM
ICS 67.120.30 Supersedes EN 14526:2004
English Version
Foodstuffs - Determination of saxitoxin-group toxins in
shellfish - HPLC method using pre-column derivatization
with peroxide or periodate oxidation
Produits alimentaires - Détermination de la teneur en Lebensmittel - Bestimmung von Toxinen der
toxines du groupe de la saxitoxine dans les coquillages Saxitoxingruppe in Schalentieren - HPLC-Verfahren mit
- Méthode par CLHP avec dérivation pré-colonne et par Vorsäulenderivatisierung und Peroxid- oder
oxydation au peroxyde ou au periodate Periodatoxidation
This European Standard was approved by CEN on 7 November 2016.
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SIST EN 14526:2017
EN 14526:2017 (E)
Contents Page
European foreword . 3
Introduction . 4
1 Scope . 5
2 Normative references . 6
3 Principle . 6
4 Reagents . 9
5 Apparatus . 12
6 Procedure. 14
7 HPLC determination .
...
Questions, Comments and Discussion
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