Plastics — Evaluation of the action of microorganisms

This document specifies methods for determining the deterioration of plastics due to the action of fungi and bacteria and soil microorganisms. The aim is not to determine the biodegradability of plastics or the deterioration of natural fibre composites. The type and extent of deterioration can be determined by a) visual examination and/or b) changes in mass and/or c) changes in other physical properties. The tests are applicable to all plastics that have an even surface and that can thus be easily cleaned. The exceptions are porous materials, such as plastic foams. This document uses the same test fungi as IEC 60068-2-10. The IEC method, which uses so-called "assembled specimens", calls for inoculation of the specimens with a spore suspension, incubation of the inoculated specimens and assessment of the fungal growth as well as any physical attack on the specimens. The volume of testing and the test strains used depend on the application envisaged for the plastic.

Plastiques — Évaluation de l'action des micro-organismes

Le présent document spécifie des méthodes pour la détermination de la détérioration des plastiques lorsqu'ils sont exposés à l'action des champignons et des bactéries, et à celle des micro-organismes vivant dans le sol. Il n'a pas pour but de déterminer la biodégradabilité des plastiques ou la détérioration des composites en fibres naturelles. Le type et l'ampleur de la détérioration engendrée peuvent être déterminés: a) par un examen visuel; et/ou b) à partir des variations de masse; et/ou c) à partir des variations d'autres propriétés physiques. Les essais sont applicables à tous les plastiques ayant une surface plane et qui peuvent, de ce fait, être aisément nettoyés, exception faite des matériaux poreux, tels que les mousses en plastique. Le présent document utilise les mêmes champignons pour essai que l'IEC 60068‑2‑10. La méthode IEC, qui utilise ce qu'on appelle des «spécimens assemblés», nécessite l'inoculation des éprouvettes avec une suspension de spores, l'incubation des éprouvettes ensemencées et l'évaluation de la croissance fongique ainsi que de l'attaque physique des éprouvettes. Le volume des essais et les souches d'essai à utiliser dépendront de l'application prévue pour le plastique.

General Information

Status
Published
Publication Date
27-Feb-2019
Current Stage
6060 - International Standard published
Start Date
28-Feb-2019
Completion Date
28-Feb-2019
Ref Project

RELATIONS

Buy Standard

Standard
ISO 846:2019 - Plastics -- Evaluation of the action of microorganisms
English language
26 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview
Standard
ISO 846:2019 - Plastiques -- Évaluation de l'action des micro-organismes
French language
27 pages
sale 15% off
Preview
sale 15% off
Preview

Standards Content (sample)

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 846
Third edition
2019-03
Plastics — Evaluation of the action of
microorganisms
Plastiques — Évaluation de l'action des micro-organismes
Reference number
ISO 846:2019(E)
ISO 2019
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 846:2019(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2019

All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may

be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting

on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address

below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 846:2019(E)
Contents Page

Foreword ..........................................................................................................................................................................................................................................v

Introduction ..............................................................................................................................................................................................................................vii

1 Scope ................................................................................................................................................................................................................................. 1

2 Normative references ...................................................................................................................................................................................... 1

3 Terms and definitions ..................................................................................................................................................................................... 1

4 Principle ........................................................................................................................................................................................................................ 2

4.1 General ........................................................................................................................................................................................................... 2

4.2 Resistance to fungi ............................................................................................................................................................................... 2

4.2.1 Method A: Fungal-growth test ............................................................................................................................. 2

4.2.2 Method B: Determination of fungistatic effects .................................................................................... 2

4.3 Method C: Resistance to bacteria ............................................................................................................................................ 3

4.4 Method D: Resistance to microbially active soil (soil-burial test) .............................................................. 3

4.5 Choice of properties for assessment of biodeterioration ................................................................................... 3

5 Apparatus and materials.............................................................................................................................................................................. 3

5.1 For all tests ................................................................................................................................................................................................. 3

5.2 For tests with fungi ......... ..................................................................................................................................................................... 4

5.3 For tests with bacteria ...................................................................................................................................................................... 6

5.4 For soil-burial tests ............................................................................................................................................................................. 6

6 Test specimens........................................................................................................................................................................................................ 7

6.1 Shape and dimensions ...................................................................................................................................................................... 7

6.2 Specimen test series and numbers in each test series.......................................................................................... 7

6.2.1 Specimen test series ..................................................................................................................................................... 7

6.2.2 Numbers in each test series ................................................................................................................................... 8

7 Preparation of specimens ........................................................................................................................................................................... 8

7.1 Cleaning ......................................................................................................................................................................................................... 8

7.2 Labelling and storage ........................................................................................................................................................................ 8

7.3 Conditioning and weighing .......................................................................................................................................................... 8

8 Procedures .................................................................................................................................................................................................................. 9

8.1 Test temperature ................................................................................................................................................................................... 9

8.2 Test methods ............................................................................................................................................................................................. 9

8.2.1 General...................................................................................................................................................................................... 9

8.2.2 Fungal-growth test (method A) .......................................................................................................................... 9

8.2.3 Determination of fungistatic effect (method B) .................................................................................11

8.2.4 Procedure with bacteria (method C) ...........................................................................................................12

8.2.5 Soil-burial test (method D) ..................................................................................................................................13

9 Assessment ..............................................................................................................................................................................................................14

9.1 Assessment of fungal growth on the specimens by visual examination (methods A,

B and D) ......................................................................................................................................................................................................14

9.2 Evaluation of the test specimens for the determination of changes in mass and/or

in other physical properties .....................................................................................................................................................15

9.2.1 Cleaning ................................................................................................................................................................................15

9.2.2 Change in mass ...............................................................................................................................................................15

9.2.3 Determination of changes in other physical properties .............................................................16

10 Expression of results .....................................................................................................................................................................................16

10.1 General ........................................................................................................................................................................................................16

10.2 Visual assessment .............................................................................................................................................................................16

10.3 Change in mass ....................................................................................................................................................................................16

10.4 Changes in other physical properties ...............................................................................................................................16

11 Accuracy of the measurements ..........................................................................................................................................................17

© ISO 2019 – All rights reserved iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 846:2019(E)

12 Test report ................................................................................................................................................................................................................17

Annex A (normative) Determination of the water content and water holding capacity of a soil .......19

Annex B (normative) Negative control for Test A .................................................................................................................................21

Annex C (normative) Grid for evaluation of fungal surface growth (Test A) ...........................................................22

Annex D (informative) Information on test fungi .................................................................................................................................24

Bibliography .............................................................................................................................................................................................................................26

iv © ISO 2019 – All rights reserved
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 846:2019(E)
Foreword

ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards

bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out

through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical

committee has been established has the right to be represented on that committee. International

organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.

ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of

electrotechnical standardization.

The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are

described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the

different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the

editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).

Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of

patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of

any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or

on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).

Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not

constitute an endorsement.

For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and

expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the

World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following

URL: www .iso .org/iso/foreword .html.

This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 61, Plastics, Subcommittee SC 6, Ageing,

chemical and environmental resistance.

This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 846:1997), which has been technically

revised. The main changes compared to the previous edition are as follows.

— The size of the test specimens has been defined as (50 mm ± 1 mm) × (50 mm ± 1 mm). A fixed size

allows the determination of any edge effects associated with the area 5 mm from the outer edge (see

new Annex C). In this way, the evaluation of growth on the test specimens is harmonized.

— New Annexes B and C have been added and the old annexes have been renumbered.
— The former Annex C has been updated and renumbered as Annex D.
— Test A only:

Stainless steel coupons acting as negative control specimens have been introduced to provide a

reference for where fungal growth occurs in the Petri dish, even though no nutrients have been

added to the test design.

The test design does not use an agar-medium any more to provide the source of moisture to allow

95 % ± 5 % relative humidity to be achieved. Instead the test specimens are stored in closed

containers that include a water reservoir to provide a relative humidity 95 % ± 5 % around the test

specimens during incubation;

A grid has been introduced for use during the evaluation of the area of growth observed on the

surface of the test specimens. The use of the grid provides and objective mechanisms for assessing

growth and is explained in the new Annex C.
— Test B has been deleted.

— Positive control specimens (test specimens that allow fungal growth) have been introduced to allow

the determination of basic fungistatic effects of samples that contain biocides.
© ISO 2019 – All rights reserved v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 846:2019(E)

— The fungal inoculum has been revised to be consistent with other referenced test standards and

changes to the names of fungal strains have been incorporated.

— The media used in the test have been revised based on the experience of various laboratories.

— A staining method has been proposed to aim assessment.

Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A

complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
vi © ISO 2019 – All rights reserved
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 846:2019(E)
Introduction

Under certain climatic and environmental conditions, microorganisms can settle on and colonize the

surface of plastics or plastics products. Their presence and/or their metabolic products might not

only damage the plastic itself, but can also affect the serviceability of building materials and systems

containing plastic parts.

The tests and test conditions specified in this document are empirical and cover most but not all

potential applications.

For specific applications and for long-term tests, procedures which reflect performance under actual

conditions are agreed upon.

The actions of microorganisms on plastics are influenced by two different processes.

a) Direct action: the deterioration of plastics which serve as a nutritive substance for the growth of

the microorganisms.

b) Indirect action: the influence of metabolic products of the microorganisms, e.g. discolouration or

further deterioration.
This document deals with both processes as well as their combined action.

Changes to the method are based on discussions among laboratories that have performed the test for

at least 5 years. On an international level, discussions have taken place within the Plastic Group of the

International Biodeterioration Research Group (IBRG) between scientists with extensive experience

with this document as well as the testing of the interaction between microorganisms and plastics.

© ISO 2019 – All rights reserved vii
---------------------- Page: 7 ----------------------
INTERNATIONAL STANDARD ISO 846:2019(E)
Plastics — Evaluation of the action of microorganisms

WARNING — Handling and manipulation of microorganisms which are potentially hazardous

requires a high degree of technical competence. Only personnel trained in microbiological

techniques should carry out such tests. Codes of practice for disinfection, sterilization and

personal hygiene shall be strictly observed. It is recommended that workers consult IEC 60068-

2-10 and ISO 7218.
1 Scope

This document specifies methods for determining the deterioration of plastics due to the action of fungi

and bacteria and soil microorganisms. The aim is not to determine the biodegradability of plastics or

the deterioration of natural fibre composites.
The type and extent of deterioration can be determined by
a) visual examination and/or
b) changes in mass and/or
c) changes in other physical properties.

The tests are applicable to all plastics that have an even surface and that can thus be easily cleaned. The

exceptions are porous materials, such as plastic foams.

This document uses the same test fungi as IEC 60068-2-10. The IEC method, which uses so-called

“assembled specimens”, calls for inoculation of the specimens with a spore suspension, incubation of

the inoculated specimens and assessment of the fungal growth as well as any physical attack on the

specimens.

The volume of testing and the test strains used depend on the application envisaged for the plastic.

2 Normative references

The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content

constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For

undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.

ISO 13934-1:2013, Textiles — Tensile properties of fabrics — Part 1: Determination of maximum force and

elongation at maximum force using the strip method
EN 10088-1, Stainless steels — Part 1: List of stainless steels

EN 10088-2, Stainless steels — Part 2: Technical delivery conditions for sheet/plate and strip corrosion

resisting steels for general purposes

EN 13697:2015, Chemical disinfectants and antiseptics — Quantitative non-porous surface test for the

evaluation of bactericidal and/or fungicidal activity of chemical disinfectants used in food, industrial, domestic

and institutional areas — Test method and requirements without mechanical action (phase 2, step 2)

IEC 60068-2-10, Environmental testing — Part 2-10: Tests — Test J and guidance: Mould growth

3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
© ISO 2019 – All rights reserved 1
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 846:2019(E)

ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:

— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
biodeterioration

undesired change in the properties, such as colour, strength, mass, of a material due to the action of a

microorganism
3.2
fungistatic effect

antimycotic effect of an antimicrobial treatment which prevents a given material from being overgrown

by fungi under moist conditions
4 Principle
4.1 General

The test involves exposing test specimens of plastic to the action of selected test strains of fungi and

bacteria (or, in the case of the soil-burial test, to microbially active soil) for specified or agreed periods

of time under specified conditions of temperature and humidity.

At the end of the exposure, the test specimens are assessed before and/or after cleaning by visual

examination and/or any change in mass or other physical properties is determined.

The results obtained with the specimens exposed to microorganisms (test series I) are compared with

those obtained from retained reference specimens (test series 0) or sterile specimens (test series S)

kept under the same conditions.

In the case of testing fungistatic properties, a visual assessment is made between test specimens free of

biocides and with those containing biocides to demonstrate the effect of a biocide in a qualitative manner.

Short descriptions of the test methods used to determine the resistance of plastics to fungi (method A)

or the fungistatic effects (method B), resistance to bacteria (method C) and resistance to soil

microorganisms (method D) are given in 4.2 to 4.4.
4.2 Resistance to fungi
4.2.1 Method A: Fungal-growth test

Test specimens are exposed to a mixed suspension of fungal spores in the presence of a humidity ≥95 %

relative humidity. After the limited nutrients from the spore itself are depleted through formation of

a germination tube, the fungi can only grow at the expense of the material of the test specimens. If

the specimens contain no nutritive component, the fungi cannot develop mycelia and there will be no

deterioration of the plastic.

Method A is suitable for the assessment of the inherent resistance of plastics to fungal attack in the

absence of other organic matter.
4.2.2 Method B: Determination of fungistatic effects

Test specimens are exposed to a mixed suspension of fungus spores in the presence of a complete

nutrient medium, i.e. with a carbon source. Even if the plastic does not contain any nutritive elements,

the fungi can grow over the specimens and their metabolic products can attack the material by

metabolizing the nutrient-agar medium.
2 © ISO 2019 – All rights reserved
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 846:2019(E)

Any inhibition of growth either on the plastic or in the nutrient-agar medium (zone of inhibition) shows

fungistatic activity of the plastic or the presence of a fungicidal treatment.

In order to show a basic qualitative effect of a biocide in a plastic material, specimens free from biocide

shall be included in the test. Only if these biocide-free specimens show more growth than the specimens

containing biocides can a qualitative indication of fungistatic or fungicidal efficacy be determined.

4.3 Method C: Resistance to bacteria

The action of bacteria on test specimens is assessed using an incomplete medium without a carbon

source . If there is no growth in the agar surrounding the specimen, then the specimen does not contain

any nutritive components.

If a material to be tested claims added functionality, such as a product with hygienic effects, the plastic

material should be tested according to ISO 22196 which provides guidance for measuring the basic

antibacterial performance of non-porous (plastic) materials that have been treated with a biocide with

the intention of introducing antibacterial/hygienic properties into that material.

4.4 Method D: Resistance to microbially active soil (soil-burial test)

Test specimens are completely buried in natural soil with a known water-holding capacity and a

specified moisture content (see Annex A).

The soil-burial test has been included in this document because many plastics are used in permanent

contact with soil and exposed to high humidities.
4.5 Choice of properties for assessment of biodeterioration

The choice of the properties to be determined depends on the aim of the test. A visual assessment of

biological attack shall always be made as the first stage in assessing the resistance of the plastic.

It is recommended that determinations be made of those properties which clearly indicate surface

changes, such as surface gloss, flexural properties, impact resistance and hardness.

5 Apparatus and materials
5.1 For all tests

5.1.1 Incubators, capable of controlling the temperature to ±1 °C at 29 °C at a relative humidity

of ≥ 95 %.

5.1.2 Oven, capable of controlling the temperature at 45 °C ± 1 °C for drying test specimens and at

between 103 °C and 105 °C for determining the water-holding capacity of soil.

5.1.3 Climatic chamber, capable of maintaining standard temperature and humidity conditions (23 °C

and 50 % R.H.) for the conditioning of test and control specimens.

5.1.4 Autoclave, capable of maintaining a temperature and pressure of 120 °C and 2 bar, respectively,

for sterilizing glass containers or glass Petri dishes and soil.
5.1.5 Analytical balance, accurate to 0,1 mg.
5.1.6 Laboratory centrifuge.
1) Agar-agar used in media needs to be very low in carbon.
© ISO 2019 – All rights reserved 3
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 846:2019(E)
5.1.7 Stereoscopic microscope, magnification × 50.

5.1.8 Glass or plastic disposable Petri dishes with vented lids, of suitable size for exposing test

specimens.

5.1.9 Glass containers with lid, with a volume of at least 1 l (height approximately. 16 cm; diameter

approximately 11 cm), with sufficient space to allow a reservoir of water to be set-up below the Petri dishes.

5.1.10 Distilled or deionized water.

The water used for the preparation of all solutions and nutritive media and for all determinations shall

be distilled or deionized and have a conductivity of < 1 µS/cm.

5.1.11 Microbicidal solution, is Ethanol-water mixture, in the proportions, by mass, of 70:30.

5.1.12 Stainless steel coupons (method A).

These shall be 1.4301 (in accordance with EN 10088-1) stainless steel discs (about 2 cm in diameter)

with Grade 2 B (in accordance with the requirements of EN 10088-2) finish on both sides. The surface

shall be as flat as possible and the stainless steel should have a gauge of 1,2 mm or 1,5 mm.

NOTE Suitable stainless steel discs can usually be purchased from local engineering companies.

5.1.13 Buchner funnel, with a sintered filter.

5.1.14 Grid (5 mm × 5 mm), inscribed on clear carrier (e.g. glass or plastic) to be used to evaluate the

colonisation of the surface of test specimens by fungi.
5.1.15 o-phenylphenol solution.

Dissolve 1 g of o-phenylphenol in 50 ml of 90 % ethanol, make up to 1 000 ml with water and adjust the

pH to 3,5 by adding lactic acid drop by drop.
5.2 For tests with fungi
5.2.1 Test fungi

The test fungi shall be obtained from national culture collections. The strains to be used are listed in

Table 1, and shall be stated in the test report. Alternative culture collections and strain numbers of the

same fungal strains are listed in Annex C.

Table 1 — Fungal strains to be used when testing plastics without electronic application

Name Strain
Aspergillus niger ATCC 6275
Penicillium pinophilum ATCC 36839
Paecilomyces variotii ATCC 18502
Trichoderma virens ATCC 9645
Chaetomium globosum ATCC 6205

If there are technical reasons, and by agreement between the interested parties, other species may be

used. In this case, too, the strains used shall be stated in the test report.
4 © ISO 2019 – All rights reserved
---------------------- Page: 11 ----------------------
ISO 846:2019(E)

When performing tests on plastics intended for use in electronic components and electronic equipment,

using the method specified in IEC 60068-2-10 use Aspergillus niger, Penicillium pinophilum, Paecilomyces

variotii and Trichoderma virens from Table 1 and the three strains given in Table 2.

Table 2 — Fungal strains to be used when testing electronics
Name Strain
Aspergillus niger ATCC 6275
Penicillium pinophilum ATCC 36839
Paecilomyces variotii ATCC 18502
Trichoderma virens ATCC 9645
Chaetomium globosum ATCC 6205
Aspergillus terreus ATCC 10690
Hormoconis resinae DSM 1203
Scopulariopsis brevicaulis ATCC 36840
5.2.2 Stock strains

Culture the test fungi (5.2.1) in tubes on agar slants or in Petri dishes containing malt-extract agar of

the following composition:
Malt extract 30 g
Agar 20 g
Water 1 000 ml

Sterilize at 120 °C ± 1 °C for 20 min in an autoclave in an atmosphere saturated with water vapour.

After incubation at 29 °C ± 1 °C, well sporulating cultures may then be used. They shall not be stored for

more than 4 weeks at this temperature.

Because of the possibility of genetic and physiological changes in the test fungi during culturing on

artificial media, the intervals between sub-culturing shall be reduced to a minimum by suitable

measures (e.g. lyophilization of cultures, storage at +4 °C or in liquid nitrogen or on cryo-beads at

−70 °C).
5.2.3 Solutions and nutritive media

5.2.3.1 Stock mineral-salt solution, of the following composition (use only chemicals of analytical

grade or equivalent purity):
NaNO 2,0 g
KH PO 0,7 g
2 4
K HPO 0,3 g
2 4
KCI 0,5 g
MgSO ⋅ 7H O 0,5 g
4 2
FeSO ⋅ 7H O 0,01 g
4 2
H O 1
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 846
Troisième édition
2019-03
Plastiques — Évaluation de l'action
des micro-organismes
Plastics — Evaluation of the action of microorganisms
Numéro de référence
ISO 846:2019(F)
ISO 2019
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 846:2019(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2019

Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette

publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,

y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut

être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.

ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 2 ----------------------
ISO 846:2019(F)
Sommaire Page

Avant-propos ................................................................................................................................................................................................................................v

Introduction ..............................................................................................................................................................................................................................vii

1 Domaine d’application ................................................................................................................................................................................... 1

2 Références normatives ................................................................................................................................................................................... 1

3 Termes et définitions ....................................................................................................................................................................................... 2

4 Principe .......................................................................................................................................................................................................................... 2

4.1 Généralités .................................................................................................................................................................................................. 2

4.2 Résistance aux champignons ...................................................................................................................................................... 2

4.2.1 Méthode A: Essai de croissance fongique ................................................................................................... 2

4.2.2 Méthode B: Détermination des effets fongistatiques ....................................................................... 3

4.3 Méthode C: Résistance aux bactéries ................................................................................................................................... 3

4.4 Méthode D: Résistance à un sol microbiologiquement actif (essai par

enfouissement dans le sol) ........................................................................................................................................................... 3

4.5 Choix des propriétés pour l’évaluation de la biodétérioration ..................................................................... 3

5 Appareillage et matériaux .......................................................................................................................................................................... 3

5.1 Pour tous les essais ............................................................................................................................................................................. 3

5.2 Pour les essais avec champignons .......................................................................................................................................... 4

5.2.1 Champignons pour essai ........................................................................................................................................... 4

5.2.2 Souches mères ................................................................................................................................................................... 5

5.2.3 Solutions et milieux nutritifs ................................................................................................................................. 6

5.3 Pour les essais avec bactéries..................................................................................................................................................... 6

5.4 Pour les essais par enfouissement dans le sol ............................................................................................................. 7

6 Éprouvettes ................................................................................................................................................................................................................ 7

6.1 Forme et dimensions ......................................................................................................................................................................... 7

6.2 Séries d’essais d’éprouvettes et nombre dans chaque série d’essais ....................................................... 8

6.2.1 Séries d’essais d’éprouvettes................................................................................................................................. 8

6.2.2 Nombre dans chaque série d’essais .................. ............................................................................................... 8

7 Préparation des éprouvettes ................................................................................................................................................................... 9

7.1 Nettoyage ..................................................................................................................................................................................................... 9

7.2 Étiquetage et stockage ...................................................................................................................................................................... 9

7.3 Conditionnement et pesée ............................................................................................................................................................ 9

8 Modes opératoires .............................................................................................................................................................................................. 9

8.1 Température d’essai ........................................................................................................................................................................... 9

8.2 Méthodes d’essai ................................................................................................................................................................................... 9

8.2.1 Généralités ............................................................................................................................................................................ 9

8.2.2 Essai de croissance des champignons (méthode A) .......................................................................10

8.2.3 Détermination de l’effet fongistatique (méthode B) ......................................................................12

8.2.4 Mode opératoire avec bactéries (méthode C) ......................................................................................13

8.2.5 Essai par enfouissement dans le sol (méthode D) ...........................................................................14

9 Évaluation .................................................................................................................................................................................................................15

9.1 Évaluation par examen visuel de la croissance fongique sur les éprouvettes

(méthodes A, В et D) .......................................................................................................................................................................15

9.2 Évaluation des éprouvettes en vue de la détermination des variations de masse et/

ou d’autres propriétés physiques ........................................................................................................................................16

9.2.1 Nettoyage.............................................................................................................................................................................16

9.2.2 Variation de masse ......................................................................................................................................................17

9.2.3 Détermination des variations d’autres propriétés physiques ...............................................17

10 Expression des résultats............................................................................................................................................................................17

10.1 Évaluation visuelle ............................................................................................................................................................................17

10.2 Variation de masse ............................................................................................................................................................................17

© ISO 2019 – Tous droits réservés iii
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 846:2019(F)

10.3 Variations d’autres propriétés physiques .....................................................................................................................18

11 Exactitude des mesurages .......................................................................................................................................................................18

12 Rapport d’essai ....................................................................................................................................................................................................18

Annexe A (normative) Détermination de la teneur en eau et de la capacité de rétention

d’eau d’un sol.........................................................................................................................................................................................................20

Annexe B (normative) Témoin négatif pour l’essai A .......................................................................................................................22

Annexe C (normative) Quadrillage pour l’évaluation de la croissance fongique en surface

(essai A) ......................................................................................................................................................................................................................23

Annexe D (informative) Informations relatives aux champignons pour essai ......................................................25

Bibliographie ...........................................................................................................................................................................................................................27

iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 846:2019(F)
Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes

nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est

en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude

a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,

gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.

L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui

concerne la normalisation électrotechnique.

Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont

décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents

critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été

rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www

.iso .org/directives).

L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de

droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable

de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant

les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de

l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de

brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).

Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données

pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un

engagement.

Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions

spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion

de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles

techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos .html.

Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 61, Plastiques, sous-comité SC 6,

Vieillissement et résistance aux agents chimiques et environnants.

Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 846:1997), qui a fait l’objet d’une

révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:

— La taille des éprouvettes a été définie comme étant égale à (50 mm ± 1 mm) × (50 mm ± 1 mm).

Une taille fixe permet de déterminer les effets de bord associés à la zone de 5 mm à partir du

bord extérieur (voir la nouvelle Annexe C). De cette manière, l’évaluation de la croissance sur les

éprouvettes est harmonisée.

— De nouvelles Annexes B et C ont été ajoutées et les anciennes annexes ont été renumérotées.

— L’ancienne Annexe C a été mise à jour et est devenue l’Annexe D.
— Essai A uniquement:

Des coupons en acier inoxydable servant d’éprouvettes témoins négatives ont été introduits. Leur

but est de fournir une référence pour les cas où il se produit une croissance fongique dans la boîte

de Petri bien qu’aucun nutriment n’ait été ajouté lors de l’essai.

L’essai n’utilise plus de milieu gélosé pour fournir une source d’humidité permettant d’obtenir une

humidité relative de 95 % ± 5 %. À la place, les éprouvettes sont conservées dans des récipients

fermés qui comportent un réservoir d’eau pour assurer une humidité relative de 95 % ± 5 % autour

des éprouvettes lors de l’incubation.
© ISO 2019 – Tous droits réservés v
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 846:2019(F)

Un quadrillage, utilisé lors de l’évaluation de la zone de croissance observée à la surface des

éprouvettes, a été introduit. L’utilisation de ce quadrillage fournit des mécanismes objectifs pour

évaluer la croissance et est expliquée dans une nouvelle Annexe C.
— L’essai B a été supprimé.

— Des éprouvettes témoins positives (éprouvettes permettant la croissance fongique) ont été

introduites pour permettre la détermination des effets fongistatiques de base des échantillons

contenant des biocides.

— L’inoculum fongique a été révisé pour être en cohérence avec d’autres normes d’essai référencées et

certains noms de souches fongiques ont été modifiés.

— Les milieux utilisés lors de l’essai ont été révisés en fonction de l’expérience acquise par divers

laboratoires.
— Une méthode de coloration a été proposée pour faciliter l’évaluation.

Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent

document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes

se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
vi © ISO 2019 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 6 ----------------------
ISO 846:2019(F)
Introduction

Dans certaines conditions climatiques et environnementales, les micro-organismes peuvent se fixer sur

la surface des plastiques ou des produits en matériaux plastiques et la coloniser. Non seulement leur

présence et/ou les produits de leur métabolisme peuvent endommager le plastique lui-même, mais il

arrive qu’ils altèrent également l’aptitude à l’emploi des matériaux de construction et des systèmes qui

comprennent des parties en matériaux plastiques.

Les essais et les conditions d’essai spécifiés dans le présent document sont empiriques et couvrent la

plupart des applications possibles, mais pas toutes.

Pour certaines applications spécifiques et pour les essais de longue durée, il convient de se mettre

d’accord sur des modes opératoires qui reflètent les performances dans les conditions réelles.

L’action des micro-organismes sur les plastiques est influencée par deux types de processus:

a) action directe: détérioration du plastique qui sert de substance nutritive pour la croissance des

micro-organismes;

b) action indirecte: influence des produits du métabolisme des micro-organismes, par exemple

décoloration ou aggravation de la détérioration.
Le présent document traite de ces deux processus et de leur action combinée.

Les changements apportés à la méthode font suite aux discussions entre les laboratoires qui réalisent

l’essai depuis au moins 5 ans. Sur le plan international, des discussions ont eu lieu au sein du Groupe

d’étude des plastiques de l’International Biodeterioration Research Group (IBRG), entre des scientifiques

ayant une grande expérience à la fois de l’ISO 846 et des essais d’interaction entre les micro-organismes

et les plastiques.
© ISO 2019 – Tous droits réservés vii
---------------------- Page: 7 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 846:2019(F)
Plastiques — Évaluation de l'action des micro-organismes

AVERTISSEMENT — La manutention et la manipulation de micro-organismes potentiellement

dangereux requièrent un niveau élevé de compétences techniques. Il convient que ces essais ne

soient effectués que par un personnel spécialement formé aux techniques microbiologiques.

Les codes de bonnes pratiques de désinfection, de stérilisation et d’hygiène doivent être

rigoureusement respectés. Il est recommandé aux opérateurs de consulter l’IEC 60068-2-10 et

l’ISO 7218.
1 Domaine d’application

Le présent document spécifie des méthodes pour la détermination de la détérioration des plastiques

lorsqu’ils sont exposés à l’action des champignons et des bactéries, et à celle des micro-organismes

vivant dans le sol. Il n’a pas pour but de déterminer la biodégradabilité des plastiques ou la détérioration

des composites en fibres naturelles.
Le type et l’ampleur de la détérioration engendrée peuvent être déterminés:
a) par un examen visuel; et/ou
b) à partir des variations de masse; et/ou
c) à partir des variations d’autres propriétés physiques.

Les essais sont applicables à tous les plastiques ayant une surface plane et qui peuvent, de ce fait, être

aisément nettoyés, exception faite des matériaux poreux, tels que les mousses en plastique.

Le présent document utilise les mêmes champignons pour essai que l’IEC 60068-2-10. La méthode IEC,

qui utilise ce qu’on appelle des «spécimens assemblés», nécessite l’inoculation des éprouvettes avec

une suspension de spores, l’incubation des éprouvettes ensemencées et l’évaluation de la croissance

fongique ainsi que de l’attaque physique des éprouvettes.

Le volume des essais et les souches d’essai à utiliser dépendront de l’application prévue pour le plastique.

2 Références normatives

Les documents suivants cités dans le texte constituent, pour tout ou partie de leur contenu, des

exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les

références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels

amendements).

ISO 13934-1:2013, Textiles — Propriétés des étoffes en traction — Partie 1: Détermination de la force

maximale et de l'allongement à la force maximale par la méthode sur bande

ISO 22196, Mesurage de l'action antibactérienne sur les surfaces en plastique et autres surfaces non

poreuses
EN 10088-1, Aciers inoxydables — Partie 1: Liste des aciers inoxydables

EN 10088-2, Aciers inoxydables — Partie 2: Conditions techniques de livraison des tôles et bandes en acier

de résistance à la corrosion pour usage général

EN 13697:2015, Antiseptiques et désinfectants chimiques — Essai quantitatif de surface non-poreuse pour

l’évaluation de l’activité bactéricide et/ou fongicide des désinfectants chimiques utilisés dans le domaine

de l’agro-alimentaire, dans l’industrie, dans les domaines domestiques et en collectivité — Méthode d’essai

sans action mécanique et prescriptions (phase 2/étape 2)
© ISO 2019 – Tous droits réservés 1
---------------------- Page: 8 ----------------------
ISO 846:2019(F)

IEC 60068-2-10, Essais d’environnement — Partie 2-10: Essais — Essai J et guide: Moisissures

3 Termes et définitions

Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en

normalisation, consultables aux adresses suivantes:

— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp

— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/
3.1
biodétérioration

variation indésirable des propriétés d’un matériau, telles que la couleur, la résistance ou la masse,

provoquée par l’action d’un micro-organisme
3.2
effet fongistatique

effet antimycotique d’un traitement antimicrobien qui empêche un matériau donné de se recouvrir de

champignons dans des conditions d’humidité
4 Principe
4.1 Généralités

L’essai consiste à exposer des éprouvettes de plastique à l’action de souches déterminées de

champignons et de bactéries (ou, dans le cadre de l’essai par enfouissement dans le sol, à l’action d’un

sol microbiologiquement actif) pendant des durées spécifiées ou ayant fait l’objet d’un accord entre les

parties intéressées, et dans des conditions déterminées de température et d’humidité.

À la fin de l’exposition, les éprouvettes font l’objet d’une évaluation avant et/ou après nettoyage, par

examen visuel et/ou en déterminant les variations de masse ou d’autres propriétés physiques.

Les résultats obtenus avec les éprouvettes exposées aux micro-organismes (série d’essais I) sont

comparés à ceux obtenus avec des éprouvettes de référence (série d’essais 0) ou avec des éprouvettes

stériles (série d’essais S) conservées dans des conditions identiques.

Dans le cas de l’essai des propriétés fongistatiques, une évaluation visuelle est effectuée entre les

éprouvettes exemptes de biocides et celles qui en contiennent afin de démontrer l’effet d’un biocide de

manière qualitative.

Une description succincte des méthodes d’essai utilisées pour déterminer la résistance des plastiques

aux champignons (méthode A) ou les effets fongistatiques (méthode В), la résistance aux bactéries

(méthode C) et la résistance aux micro-organismes contenus dans le sol (méthode D) est donnée dans

les paragraphes 4.2 à 4.4.
4.2 Résistance aux champignons
4.2.1 Méthode A: Essai de croissance fongique

Les éprouvettes sont exposées à une suspension de plusieurs spores de champignons en présence

d’une humidité relative ≥ 95 %. Une fois que la quantité limitée de nutriments des spores elles-mêmes

est épuisée par la formation d’un tube de germination, les champignons ne peuvent croître qu’au

détriment du matériau des éprouvettes. Si les éprouvettes ne contiennent aucune substance nutritive,

les champignons ne peuvent développer le mycélium et il n’y a pas de détérioration du plastique.

2 © ISO 2019 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 846:2019(F)

La méthode A est appropriée pour l’évaluation de la résistance inhérente des plastiques à toute attaque

fongique en l’absence de toute autre matière organique.
4.2.2 Méthode B: Détermination des effets fongistatiques

Les éprouvettes sont exposées à une suspension de plusieurs spores de champignons en présence d’un

milieu nutritif complet, c’est-à-dire avec une source de carbone. Même si le plastique ne contient aucune

substance nutritive, les champignons peuvent se développer sur les éprouvettes et les produits de leur

métabolisme peuvent attaquer le matériau en métabolisant le milieu nutritif gélosé.

Toute inhibition de la croissance sur le plastique ou dans le milieu nutritif gélosé (zone d’inhibition) met

en évidence l’activité fongistatique du plastique ou la présence d’un traitement fongicide.

Pour démontrer un effet qualitatif de base d’un biocide dans un matériau plastique, des éprouvettes

exemptes de biocide doivent être incluses dans l’essai. Si ces éprouvettes exemptes de biocide ont une

croissance supérieure à celle des éprouvettes contenant des biocides, une indication qualitative de

l’efficacité fongistatique ou fongicide peut être déterminée.
4.3 Méthode C: Résistance aux bactéries

L’évaluation de l’action des bactéries sur les éprouvettes s’effectue en utilisant un milieu incomplet

(sans source de carbone . Si l’on ne constate aucune croissance dans l’agar-agar autour de l’éprouvette,

cette dernière ne contient pas de substances nutritives.

Si une fonctionnalité supplémentaire est déclarée pour le matériau soumis à l’essai, par exemple un

produit présentant des effets hygiéniques, il convient que le matériau plastique soit soumis à l’essai

conformément à l’ISO 22196, qui fournit un guide pour mesurer les performances antibactériennes de

base de matériaux (plastiques) non poreux ayant été traités avec un biocide dans le but d’introduire des

propriétés antibactériennes/hygiéniques dans ce matériau.

4.4 Méthode D: Résistance à un sol microbiologiquement actif (essai par enfouissement

dans le sol)

Les éprouvettes sont complètement enfouies dans un sol naturel caractérisé par une capacité de

rétention d’eau connue et par une teneur en eau spécifiée (voir l’Annexe A).

L’essai par enfouissement dans le sol a été inclus dans le présent document, car un grand nombre de

plastiques sont utilisés en contact permanent avec le sol et exposés à des niveaux élevés d’humidité.

4.5 Choix des propriétés pour l’évaluation de la biodétérioration

Le choix des propriétés à déterminer dépend du but de l’essai. Toujours procéder à une évaluation

visuelle de l’attaque biologique; celle-ci tiendra lieu de première étape dans l’évaluation de la résistance

du plastique.

Il est recommandé de déterminer les propriétés qui indiquent de manière nette les variations de l’état

de surface, telles que le brillant de surface, les propriétés en flexion, la résistance au choc et la dureté.

5 Appareillage et matériaux
5.1 Pour tous les essais

5.1.1 Incubateurs, permettant de réguler la température à 29 °C, à ± 1 °C près, avec une humidité

relative ≥ 95 %.

1) Il est nécessaire que l’agar-agar utilisé dans les milieux ait une très faible teneur en carbone.

© ISO 2019 – Tous droits réservés 3
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 846:2019(F)

5.1.2 Étuve, permettant de réguler la température à 45 °C ± 1 °C pour sécher les éprouvettes et entre

103 °C et 105 °C pour déterminer la capacité de rétention d’eau du sol.

5.1.3 Enceinte climatique, permettant de maintenir les conditions normales de température et

d’humidité (23 °C et 50 % HR), pour conditionner les éprouvettes et les témoins.

5.1.4 Autoclave, permettant de maintenir une température de 120 °C et une pression de 2 bar, pour

stériliser les récipients en verre ou les boîtes de Petri et le sol.
5.1.5 Balance analytique, avec une résolution de 0,1 mg.
5.1.6 Centrifugeuse de laboratoire.
5.1.7 Microscope stéréoscopique, permettant d’obtenir un grossissement de × 50.

5.1.8 Boîtes de Petri jetables, en verre ou en plastique, avec des couvercles ventilés, de

dimensions appropriées pour exposer les éprouvettes.

5.1.9 Récipients en verre avec couvercle, d’une capacité d’environ 1 l (environ 16 cm de hauteur

et 11 cm de diamètre), avec un espace suffisant pour permettre de monter un réservoir d’eau sous les

boîtes de Petri.
5.1.10 Eau distillée ou déionisée.

L’eau utilisée pour préparer les solutions et les milieux nutritifs et celle utilisée pour les déterminations

doit être de l’eau distillée ou déionisée et avoir une conductivité < 1 µS/cm.

5.1.11 Solution microbicide, mélange éthanol-eau, en proportions en masse de 70:30.

5.1.12 Coupons en acier inoxydable (méthode A).

Il doit s’agir de disques en acier inoxydable 1.4301 (EN 10088-1) (d’environ 2 cm de diamètre), de nuance

2 B (conformément aux exigences de l’EN 10088-2), avec une finition sur les deux faces. La surface doit

être aussi plane que possib
...

Questions, Comments and Discussion

Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.