ISO 7251:1984
(Main)Microbiology — General guidance for enumeration of presumptive Escherichia coli — Most probable number technique
Microbiology — General guidance for enumeration of presumptive Escherichia coli — Most probable number technique
Microbiologie — Directives générales pour le dénombrement d'Escherichia coli présumés — Technique du nombre le plus probable
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Relations
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International Standard 7251
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*MEmYHAPOAHAfl OPrAHHBA!#IR no CTAHAAPTM3AUMMWRGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Microbiology - General guidance for enumeration of
e
presumptive Escherichia Coli - Most probable number
technique
Microbiologie - Directives générales pour le dénombrement d'bcherichia Coli présumés - Technique du nombre le plus
probable
First edition - 1984-11-15
- UDC 579.672 : 579.842.11 Ref. No. IS0 7251-1984 (E)
s
8
g Descriptors : microbiological analysis, food products, animal feeding products, bacteria count methods.
O
E Price based on 9 pages
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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical cornmittees. Each member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
ISO, also take part in the work.
mental and non-governmental, in liaison with
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 7251 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34,
Agricultural food products.
@ International Organization for Standardization, 1984 O
Printed in Switzerland
I
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INTERNATIONAL STANDARD IS0 7251-1984 (E)
Microbiology - General guidance for enumeration of
presumptive Escherichia col. - Most probable number
technique
O Introduction A limitation of the applicability of this International Standard is
imposed by the susceptibility of the method to a large degree of
This International Standard is intended to provide general variability. The method should, therefore, be applied and the
results interpreted in the light of the information given in 10.4.
guidance for the examination of products not dealt with by ex-
isting International Standards and for the consideration of
*
bodies preparing microbiological methods of test for appli-
cation to foods or to animal feeding stuffs. Because of the large 2 Reference
variety of products within this field of application, these
IS0 6887, Microbiology - General guidance for the prepara-
guidelines may not be appropriate for some products in every
detail, and, for some other products, it may be necessary to use tion of dilutions for microbiological examination.
different methods. Nevertheless, it is hoped that, in all cases,
every attempt will be made to apply the guidelines provided as
far as possible and that deviations from them will only be made 3 Definition
if absolutely necessary for technical reasons.
For the purpose of this International Standard, the following
definition applies :
When this International Standard is next reviewed, account will
be taken of all information then available regarding the extent
presumptive Escherichia Coli : Bacteria which, at 45 OC,
to which the guidelines have been followed and the reasons for
cause fermentation of lactose with the production of gas, and
deviations from them in the case of particular products.
OC, produce indole from tryptophan, when the
which, at 45
test is carried out in accordance with the method specified in
The harmonization of test methods cannot be immediate, and,
this International Standard.
for certain groups of products, International Standards and/or
national standards may already exist that do not comply with
these guidelines. In cases where International Standards
4 Principle
already exist for the product to be tested, they should be
followed, but it is hoped that when such standards are re-
I)
viewed they will be changed to comply with this International
4.1 Inoculation of double strength liquid enrichment medium
Standard so that, eventually, the only remaining departures
L5.3.1 a)12) in three tubes with a specified quantity of the test
from these guidelines will be those necessary for well estab-
sample if the product to be examined is liquid, or with a
lished technical reasons.
specified quantity of the initial suspension in the case of o\her
products.
1 Scope and field of application
4.2 Inoculation of single strength liquid enrichment medium
L5.3.1 b112) in three tubes with a specified quantity of test sam-
This International Standard gives general guidance for the
ple if the product to be examined is liquid, or with a specified
enumeration of presumptive Escherichia Coli in products in-
quantity of the initial suspension in the case of other products.
\
tended for human consumption or feeding of animals, by
means of the liquid-medium culture technique and calculation
Then, under the same conditions, inoculation of single strength
of the most probable number (MPNI after incubation at 35 OC
medium with decimal dilutions of the test sample or of the in-
or 37 OC1) then 45 OC.
itial suspension.
1 I The temperature should be agreed between the parties concerned and recorded in the test report.
2) If necessary, another liquid enrichment medium may be used prior to inoculation of the selective medium.
1
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IS0 7251-1984 (E)
4.3 Incubation of the tubes of double and single strength 5.2 Diluent
medium at 35 OC or 37 OC11 for 24 to 48 h. Examination of the
tubes for gas formation. See IS0 6887, clause 5.
5.3 Culture media
4.4 Inoculation, from the tubes of double and single strength
medium which have given rise to gas formation, of a new series
of tubes containing a liquid selective medium.
5.3.1 Lauryl sulfate tryptose broth (selective enrichment
medium )
4.5 Incubation at 45 OC for 24 to 48 h and examination of this
Composition
new series of tubes for gas formation.
ai b)
4.6 Inoculation, from the tubes of selective medium which
double strength single strength
have given rise to gas formation, of a new series of tubes con-
medium medium
taining tryptone water.
tryptose 4og 20 g
4.7 Incubation at 45 OC for 24 to 48 h and examination of this
lactose 10 9 5g
new series of tubes for indole production.
potassium
hydrogen-
ort hophosphate
4.8 Determination of the most probable number of presump-
tive Escherichia Coli by means of an MPN table, according to (K2HPO4) 5,5 9 2,75 g
the number of incubated tubes which gave rise to gas forma-
potassium
tion in the selective medium and in which indole was produced
dihydrogen-
in the tryptone water.
orthophosphate
( KH2PO4) 5.5 g 23 g
sodium chloride 10 g 5g
5 Diluent, culture media and reagent
sodium lauryl
sulfate
02 g 0,1 g
5.1 Basic materials
water 1 O00 ml 1 O00 ml
In order to improve the reproducibility of the results, it is
recommended that, for the preparation of the culture media, Preparation
dehydrated basic components or complete dehydrated media
be used. The manufacturer's instructions shall be rigorously Dissolve the components, or complete dehydrated medium,
followed. in the water by boiling.
The chemical products used shall be of recognized analytical If necessary, adjust the pH so that after sterilization it is 6,8
quality. at 25 OC.
The water used shall be distilled or deionized water, free from Dispense the media in quantities of 10 ml into tubes of
substances that might inhibit the growth of micro-organisms dimensions 16 mm x 160 mm (6.4) containing Durham
under the test conditions. tubes (6.5) in the case of single strength medium, and into
test tubes of dimensions 20 mm x 200 mm (6.4) containing
Measurement of pH shall be made using a pH meter, adjusted Durham tubes (6.5) in the case of the double strength
to a temperature of 25 OC. medium.
If the diluent, culture media and reagent are not used im- Sterilize in an autoclave at 121 f 1 OC for 15 f 1 min.
mediately, they shall, unless otherwise stated, be stored in the
dark at approximately 4 OC for no longer than 1 month, in con- The Durham tubes shall not contain air bubbles after
ditions which do not allow any change in their composition.
sterilization.
1) The temperature should be agreed between the parties concerned and recorded in the test report.
2
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IS0 7251-1984 (E)
Preparation
5.3.2 EC Broth (second selective medium)
Dissolve the 4-dimethylaminobenzaldehyde in the alcohol
Composition
by heating gently by means of a water-bath maintained at
approximately 50 to 55 OC.
tryptose or trypticase 20 9
lactose 5g
Cool and add the acid.
bile salts No. 31) 139
Protect from light and store at approximately 4 OC.
potassium hydrogenorthophosphate
(K2HPOS 4g
The reagent shall be light yellow to light brown.
potassium dihydrogenorthophosphate
(KH2PO4)
6 Apparatus and glassware
sodium chloride
water
NOTE - Disposable apparatus is an acceptable alternative to reusable
glassware if it has suitable specifications.
Preparation
Usual microbiological laboratory equipment and in particular :
Dissolve the components, or complete dehydrated medium,
in the water by boiling.
6.1 Apparatus for dry sterilization (oven) or wet
If necessary, adjust the pH so that after sterilization it is 6,8
sterilization (autoclave)
at 25 OC.
Apparatus that will come into contact with the diluent, the
Dispense the medium in quantities of 10 ml into tubes of
culture media, the sample or dilutions, except for apparatus
dimensions 16 mm x 160 mm (6.4) containing Durham
that is supplied sterile (particularly plastics apparatus), shall be
tubes (6.5).
sterilized by one of the following methods:
Sterilize in an autoclave at 121 f 1 OC for 15 f 1 min.
by being kept at 170 to 175 OC for not less than 1 h in an
a)
The Durham tubes shall not contain air bubbles after oven;
sterilization.
by being kept at 121 f 1 OC for not less than 20 min in
b)
an autoclave.
5.3.3 Tryptone water
6.2 Incubator, capable of being maintained at 35 f 1 OC or
Composition
37 if 1 OC, depending on the temperature adopted.2)
tryptone 10,o g
6.3 Water-bath, capable of being maintained at 45 f 0,5 OC
sodium chloride 5,O g
(to allow the inoculated tubes to be kept at this temperature).
water 1000ml
6.4 Test-tubes, of dimensions approximately 16 mm x
Preparation
160 mm and 20 mm x 200 mm, or flasks or bottles of
Dissolve the components in the water by boiling.
suitable capacity,
If necessary, adjust the pH so that after sterilization it is 7,3
6.5 Durham tubes, of size suitable for use in the tubes (6.4).
at 25 OC.
Dispense the medium in quantities of 5 to 10 ml into tubes
6.6 Total delivery pipettes, of nominal capacities 1 ml and
of dimensions 16 mm x 160 mm (6.4).
10 ml.
Sterilize the medium at 121 f 1 OC for 15 I: 1 min.
6.7 pH meter, accurate to 0,1 pH unit at 25 OC.
5.4 lndole reagent (Kovacs reagent)
7 Sampling
Composition
Carry out sampling in conformity with the specific standard ap-
4-dimethylaminobenzaldehyde 5,O g
propriate to the product concerned. If a specific standard is not
75.0 ml
2-methyl butanol or pentanol
available, it is recommended that agreement be reached on this
hydrochloricacid 1,18 to 1,19g/ml) 25,O ml subject by the parties concerned.
1) See ICMSF Microorganisms in Foods I, 2nd edition, 32 p. 280, University of Toronto Press, Canada.
2) The temperature should be agreed between the parties concerned and recorded in the test report.
3
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IS0 7251-1984 (E)
9.2.5 Inoculation of tryptone water
8 Preparation of the test sample
9.2.4 and showing gas formation,
From each tube incubated in
See the specific standard appropriate to the product. con-
inoculate, by means of a loop, the tryptone water (5.3.31,
cerned. If a specific standard is not available, it is recommen-
previously heated to 45 OC.
ded that agreement be reached on this subject by the parties
concerned.
9.2.6 Incubation
9 Procedure
Incubate the tubes inoculated in 9.2.5 in the water-bath (6.31,
maintained at 45 f 0,5 OC, for 48 h.
9.1 Test portion, initial suspension and dilutions
9.2.7 Test for indole production
See IS0 6887 and the specific standard appropriate to the
product concerned.
Add 0,5 ml of the indole reagent (5.4) to the tubes containing
the inoculated tryptone water, mix well and examine after
Prepare a sufficient number of dilutions in order to ensure that
1 min.
all the tubes for the final dilution will give a negative result.
A red colour in the alcoholic phase indicates the presence of
indole (positive tubes).
9.2 MPN technique
9.2.8 Interpretation
9.2.1 Inoculation of the selective enrichment medium
For each dilution, count
...
I
Norme internationale @ 7251
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDlZATlON*MEXpYHAPOJlHAR OPrAHH3AUHR no CTAHnAPTH3AUHM*ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Microbiologie - Directives générales pour le
0
dénombrement d'Fscherichia coli présumés - Technique
du nombre le plus probable
I
Microbiology - General guidance for enumeration of presumptive Escherichia coli - Most probable number technique
,
I
I Première édition - 1984-11-15
CDU 579.572 : 579.842.11 Réf. no : IS0 7251-1984 (FI
G -
8
Descripteurs : analyse microbiologique, produit alimentaire, produit d'alimentation animale, comptage des bactéries.
f!
is
i2
O
E
Prix basé sur 9 pages
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Avant-propos
L‘ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L‘élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I‘ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de 1’1S0 qui requièrent l‘approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale IS0 7251 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
O Organisation internationale de normalisation, 1984 O
Imprimé en Suisse
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IS0 7251-1984 (F)
NORM E INTER NAT1 O NA LE
Microbiologie - Directives générales pour le
dénombrement d'€scherichia cob présumés - Technique
du nombre le plus probable
O Introduction Des limites sont imposées aux possibilités d'application de la
présente Norme internationale, du fait que cette méthode est
sujette à de grandes variations. II est recommandé d'appliquer
La présente Norme internationale se propose de fournir des
directives générales pour l'examen de produits non concernés cette méthode et d'interpréter les résultats à la lumière des ren-
par les Normes internationales existant actuellement, et pour être seignement donnés en 10.4.
prises en considération par les organismes élaborant des métho-
des d'essais microbiologiques destinées à être appliquées à des
produits alimentaires ou à des aliments pour animaux. En raison
2 Référence
de la grande diversité des produits entrant dans ce domaine
d'application, il est possible que ces directives, dans tous leurs
IS0 6887, Microbiologie - Directives générales pour la prépa-
détails, ne conviennent pas exactement à certains produits et
ration des dilutions en vue de l'examen microbiologique.
que, pour certains autres produits, il puisse être nécessaire
d'employer des méthodes différentes. Néanmoins, il est à espé-
rer que, dans tous les cas, tous les efforts seront faits pour appli-
3 Définition
quer, chaque fois qu'il sera possible, les directives données, et
qu'on n'aura recours à des dérogations que si cela est absolu-
Dans le cadre de la présente Norme internationale, la définition
ment nécessaire pour des raisons techniques.
suivante est applicable :
Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il
Escherichia Coli présumés : Bactéries qui, à 45 OC, fermentent
sera tenu compte de tous les renseignements disponibles à ce
le lactose avec production de gaz et qui, à 45 OC, produisent de
moment-là, à savoir dans quelle mesure les directives auront
à partir du tryptophane, lorsque l'essai est effectué
I'indole
été suivies et les raisons pour lesquelles il aura été nécessaire
selon la méthode spécifiée dans la présente Norme interna-
d'y déroger dans le cas de produits particuliers.
tionale.
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut pas être immé-
diate et, pour certains groupes de produits, des Normes inter-
4 Principe
0 nationales et/ou des normes nationales existent peut-être déjà,
qui ne concordent pas avec ces directives. Dans le cas où des
Normes internationales existent déjà pour le produit à contrô-
4.1 Ensemencement de trois tubes de milieu liquide d'enri-
ler, elles devront être appliquées, mais il serait souhaitable que,
chissement double concentration [voir 5.3.1 all*) avec une
lorsqu'elles viendront en révision, elles soient modifiées de
quantité déterminée de l'échantillon pour essai si le produit à
façon à se conformer à la présente Norme internationale, si bien
examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de sus-
que finalement les seules divergences restantes seront celles
pension mère dans le cas d'autres produits.
nécessaires pour des raisons techniques bien établies.
4.2 Ensemencement de trois tubes de milieu liquide d'enri-
1 Objet et domaine d'application chissement simple concentration [voir 5.3.1 b)12) avec une
quantité déterminée de l'échantillon pour essai si le produit à
La présente Norme internationale donne des directives généra- examiner est liquide, ou avec une quantité déterminée de sus-
les pour le dénombrement d'Escherichia Coli présumés dans les
pension mère dans le cas d'autres produits.
produits destinés à la consommation humaine ou à I'alimenta-
tion animale, au moyen de la technique de culture en milieu Puis dans les mêmes conditions, ensemencement du milieu
liquide avec calcul du nombre le plus probable (NPP) après
simple concentration avec les dilutions décimales de I'échantil-
à 35 OC ou 37 OC1) puis 45 OC.
incubation ion pour essai ou de la suspension mère.
La température devra être fixée par les parties concernées et précisée dans le procès-verbal d'essai.
1)
2) Si nécessaire, un autre milieu liquide d'enrichissement peut être utilisé avant l'ensemencement du milieu sélectif.
1
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IS0 7251-1984
Incubation des tubes de milieu double et simple concen- 5.3 Milieux de culture
4.3
tration à 35 OC ou 37 OC1) durant 24 à 48 h. Examen des tubes
pour la formation de gaz.
5.3.1 Bouillon à la tryptose et au lauryl sulfate
(milieu d'enrichissement sélectif)
4.4 Ensemencement, à partir des tubes de milieu double et
Composition
simple concentration ayant donné lieu à un dégagement
a) b)
gazeux, d'une nouvelle série de tubes contenant un milieu
Milieu Milieu
sélectif liquide.
double simple
concentration concentration
Incubation à 45 OC durant 24 à 48 h et examen de cette
4.5
tryptose
4og 20 g
nouvelle série de tubes pour la formation de gaz.
lactose
10 9 5g
h ydrogéno-
4.6 Ensemencement, à partir des tubes contenant le milieu
orthophosphate de
sélectif ayant donné lieu à un dégagement gazeux, d'une nou-
potassium (K2HP04i 5,5 9
velle série de tubes contenant de l'eau tryptonée.
di hydrogéno
orthophosphate de
4.7 Incubation à 45 OC durant 24 à 48 h et examen de cette
potassium (KH2P04) 5,5 9
nouvelle série de tubes pour la production d'indole.
chlorure de sodium 10 9
4.8 Détermination du nombre le plus probable d'lcscherichia
lauryl sulfate de sodium 02 g
Coli présumés au moyen de la table NPP, d'après le nombre de
eau 1 O00 ml
tubes incubés pour lesquels il y a eu formation de gaz dans le
milieu sélectif, et production d'indole dans l'eau tryptonée.
Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté
dans l'eau, en portant à ébullition.
5 Diluant, milieux de culture et réactif
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation, il
soit de 6,8 à 25 OC.
5.1 Composants de base
Répartir les milieux, par quantités de 10 ml dans des tubes
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est recom-
de 16 mm x 160 mm (6.4) contenant des cloches de
mandé d'utiliser, pour la préparation des milieux de culture, des
Durham (6.5) dans le cas du milieu simple concentration, et
composants de base déshydratés ou des milieux complets
dans des tubes de 20 mm x 200 mm (6.4) contenant des
déshydratés. Les instructions du fabricant doivent être suivies
cloches de Durham (6.5) dans le cas du milieu double
scrupuleusement.
concentration.
Stériliser à l'autoclave à 121 f 1 OC durant 15 f 1 min.
Les produits chimiques utilisés doivent être de qualité analyti-
que reconnue.
Les cloches de Durham ne doivent pas contenir de bulles
d'air après stérilisation.
L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou déminéralisée,
exempte de substances susceptibles d'inhiber la croissance des
5.3.2 Bouillon EC (deuxième milieu sélectif)
micro-organismes dans les conditions de l'essai.
Composition
à la tem-
La mesure du pH doit être effecutée au pH-mètre réglé
tryptose ou trypticase
pérature de 25 OC.
lactose
Si le diluant, les milieux de culture et le réactif ne sont pas utili-
sels biliaires no 32)
sés extemporanément, ils doivent, sauf spécifications contrai-
res, être conservés à l'obscurité à environ 4 OC pendant l mois
hydrogéno-orthophosphate de potassium
4g
au maximum, dans des conditions évitant toute modification de
(KZHP04)
leur composition.
dihydrogéno-orthophosphate de potassium
(KH2POd)
5.2 Diluant
chlorure de sodium
Voir IS0 6887. chapitre 5. eau
1) La température devra être fixée par les parties concernées et précisée dans le procès-verbal d'essai.
2) Voir ICMSF Microorganisms in Foods I, 2nd edition, 32. p. 280 - University of Toronto Press, Canada.
2
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IS0 7251-1984 (FI
Préparation 6 Appareillage et verrerie
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté
NOTE - Le matériel à usage unique est acceptable au même titre que
ses spécifications sont appropriées.
dans l’eau, en portant à ébullition. la verrerie réutilisable, si
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu’après stérilisation, il
Matériel courant de laboratoire de microbiologie, et notam-
soit de 6,8 à 25 OC.
ment:
Répartir le milieu, par quantités de 10 ml dans des tubes de
16 mm x 160 mm (6.4) contenant des cloches de Durham
6.1 Appareils pour la stérilisation en chaleur
(6.5).
seche (four) ou en chaleur humide (autoclave)
Stériliser à l’autoclave à 121 f 1 OC durant 15 f 1 min.
Le matériel destiné à entrer en contact avec le diluant, les
Les cloches de Durham ne doivent pas contenir de bulles
milieux de culture, l‘échantillon et les dilutions, sauf s‘il est livré
d’air après stérilisation.
stérile (particulièrement le matériel en plastique), doit être stéri-
lisé par l‘une des méthodes suivantes:
5.3.3 Eau tryptonée
a) au four, en le maintenant à une température de 170 à
Composition
175 OC durant au moins 1 h;
a tryptone b) à l‘autoclave, en le maintenant à une température de
121 f 1 OC durant au moins 20 min.
chlorure de sodium
eau
Étuve, réglable à 35 f 1 OC ou à 37 f 1 OC selon la tem-
6.2
pérature retenue. 1)
Préparation
Dissoudre les composants dans l‘eau, en portant à ébulli- 6.3 Bain d‘eau, réglable à 45 rl: 0,5 OC (permettant de main-
tenir les tubes ensemencés à cette température).
tion.
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu‘après stérilisation, il
soit de 7,3 à 25 OC. 6.4 Tubes à essais, de 16 mm x 160 mm et 20 mm x
200 mm environ, ou fioles de capacité appropriée.
Répartir le milieu, par quantités de 5 à 10 mi, dans des tubes
de 16 mm x 160 mm (6.4).
6.5 Cloches de Durham, de dimensions appropriées en vue
de leur utilisation dans les tubes (6.4).
Stériliser le milieu à 121 k 1 OC durant 15 f 1 min.
5.4 Réactif pour la recherche de 4’indole
6.6 Pipettes à écoulement total, de 1 ml et 10 ml de capa-
cité nominale.
(réactif de Kovacs)
Composition
pH-mètre, précis à f 0,l unité de pH à 25 OC.
6.7
1)
diméthylamino-4 benzaldéhyde
méthyl-2 butanol ou pentanol 75,O ml
7 Échantillonnage
25,O ml
acidechlorhydrique (em 1,18à 1,19g/ml)
Effectuer l’échantillonnage conformément à la norme spécifi-
Préparation
que du produit concerné. S’il n’y a pas de norme spécifique dis-
ponible, il est recommandé que les parties concernées se met-
Dissoudre le diméthylamino-4 benzaldéhyde dans l’alcool en
tent d’accord à ce sujet.
chauffant doucement au moyen d’un bain d‘eau réglable à
environ 50 à 55 OC.
8 Préparation de l’échantillon pour essai
Refroidir et ajouter l’acide.
Mettre à l’abri de la lumière et conserver à 4 OC. Voir la norme spécifique du produit concerné. S’il n’y a pas de
norme spécifique disponible, il est recommandé que les parties
Le réactif doit être de couleur jaune clair à brun clair. concernées se mettent d‘accord à ce sujet.
La température devra être fixée par les parties concernées et précisée dans le procès-verbal d‘essai.
1)
3
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IS0 7251-1984 (FI
9 Mode opératoire 9.2.6 Incubation
Incuber les tubes ensemencés en 9.2.5 dans le bain d'eau (6.3)
9.1 Prise d'essai, suspension mère et dilutions
réglé à 45 f 0,5 OC durant 48 h.
Voir IS0 6887 et la norme spécifique du produit concerné.
9.2.7 Essai pour la production dindole
Préparer un nombre de dilutions suffisant afin d'être sûr que
tous les tubes de la dernière dilution soient négatifs.
Ajouter 0,5
...
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