SIST EN ISO 23036-2:2021
(Main)Microbiology of the food chain - Methods for the detection of Anisakidae L3 larvae in fish and fishery products - Part 2: Artificial digestion method (ISO 23036-2:2021)
Microbiology of the food chain - Methods for the detection of Anisakidae L3 larvae in fish and fishery products - Part 2: Artificial digestion method (ISO 23036-2:2021)
This part of ISO 23036 specifies a method that is applicable for the detection of Anisakidae L3 larvae commonly found in marine and anadromous fishes. The method can be applied to fresh fish and/or frozen fish, lightly processed fish products, such as marinated, salted or smoked, and it’s also suitable for visceral organs as confirmatory method for visual inspection scheme.
The artificial digestion method allows quantifying parasitic infections by estimating the number of parasites in the fish musculature and, when applied to fresh fish or lightly processed fish products (never frozen before processing), determining the viability of Anisakidae L3, which may be present.
This method doesn’t allow determining species or genotype of detected parasites, which identification is made by morphological and/or molecular methods.
Mikrobiologie der Lebensmittelkette - Verfahren zum Nachweis von Anisakidae L3-Larven in Fisch und Fischereierzeugnissen - Teil 2: Verfahren der künstlichen Verdauung (ISO 23036-2:2021)
Dieses Dokument legt ein Verfahren für den Nachweis von L3 Anisakidaelarven, die häufig in marinen und anadromen Fischen vorkommen, fest. Das Verfahren ist anwendbar bei frischem und/oder gefrorenem Fisch sowie bei leicht verarbeiteten Fischprodukten, wie etwa marinierten, gesalzenen oder geräucherten Fischprodukten. Es ist auch als bestätigendes Verfahren bei einer Sichtprüfung von inneren Organen geeignet.
Das Verfahren der künstlichen Verdauung [4],[5],[6] ist anwendbar für die Quantifizierung parasitärer Infektionen durch Schätzung der Anzahl der in der Fischmuskulatur vorhandenen Parasiten. Bei der Anwendung mit frischem Fisch oder leicht verarbeiteten Fischprodukten (die vor der Verarbeitung nie eingefroren waren) kann zudem die Lebensfähigkeit der gegebenenfalls vorhandenen L3 Anisakidaelarven bestimmt werden.
Dieses Verfahren ist jedoch nicht für die Bestimmung der Art oder des Genotyps der nachgewiesenen Parasiten anwendbar. Eine endgültige Identifizierung erfolgt mittels morphologischer und/oder molekularer Verfahren.
Microbiologie de la chaîne alimentaire - Méthodes de recherche des larves L3 d'Anisakidae dans les poissons et produits de la pêche - Partie 2: Méthode de digestion artificielle (ISO 23036-2:2021)
Le présent document spécifie une méthode de détection des larves L3 d’Anisakidae qui se trouvent fréquemment dans les poissons marins et anadromes. La méthode s’applique aux poissons frais et/ou surgelés, ainsi qu’aux produits à base de poisson légèrement transformés, c’est-à-dire marinés, salés ou fumés. Cette méthode peut également servir de méthode de confirmation dans le cadre d’une inspection visuelle des organes viscéraux.
La méthode de digestion artificielle[4][5][6] s’applique à la quantification des infestations parasitaires en estimant le nombre de parasites dans les tissus musculaires des poissons et, en cas d’utilisation sur des poissons frais ou des produits à base de poisson légèrement transformés (jamais congelés avant traitement), à la détermination de la viabilité des larves L3 d’Anisakidae, susceptibles d’être présentes.
Cette méthode ne s’applique pas à la détermination des espèces ou du génotype des parasites détectés. Des méthodes morphologiques et/ou moléculaires permettent une identification définitive.
Mikrobiologija v prehranski verigi - Metode ugotavljanja prisotnosti ličink Anisakidae L3 v ribah in ribjih proizvodih – 2. del: Metoda umetne prebave (ISO 23036-2:2021)
General Information
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SLOVENSKI STANDARD
SIST EN ISO 23036-2:2021
01-september-2021
Mikrobiologija v prehranski verigi - Metode ugotavljanja prisotnosti ličink
Anisakidae L3 v ribah in ribjih proizvodih – 2. del: Metoda umetne prebave (ISO
23036-2:2021)
Microbiology of the food chain - Methods for the detection of Anisakidae L3 larvae in fish
and fishery products - Part 2: Artificial digestion method (ISO 23036-2:2021)
Mikrobiologie der Lebensmittelkette - Verfahren zum Nachweis von Anisakidae L3-
Larven in Fisch und Fischereierzeugnissen - Teil 2: Verfahren der künstlichen Verdauung
(ISO 23036-2:2021)
Microbiologie de la chaîne alimentaire - Méthodes de recherche des larves L3
d'Anisakidae dans les poissons et produits de la pêche - Partie 2: Méthode de digestion
artificielle (ISO 23036-2:2021)
Ta slovenski standard je istoveten z: EN ISO 23036-2:2021
ICS:
07.100.30 Mikrobiologija živil Food microbiology
67.120.30 Ribe in ribji proizvodi Fish and fishery products
SIST EN ISO 23036-2:2021 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
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SIST EN ISO 23036-2:2021
EN ISO 23036-2
EUROPEAN STANDARD
NORME EUROPÉENNE
May 2021
EUROPÄISCHE NORM
ICS 07.100.30
English Version
Microbiology of the food chain - Methods for the detection
of Anisakidae L3 larvae in fish and fishery products - Part
2: Artificial digestion method (ISO 23036-2:2021)
Microbiologie de la chaîne alimentaire - Méthodes de Mikrobiologie der Lebensmittelkette - Verfahren zum
recherche des larves L3 d'Anisakidae dans les poissons Nachweis von Anisakidae L3-Larven in Fisch und
et produits de la pêche - Partie 2: Méthode de digestion Fischereierzeugnissen - Teil 2: Verfahren der
artificielle (ISO 23036-2:2021) künstlichen Verdauung (ISO 23036-2:2021)
This European Standard was approved by CEN on 24 March 2021.
CEN members are bound to comply with the CEN/CENELEC Internal Regulations which stipulate the conditions for giving this
European Standard the status of a national standard without any alteration. Up-to-date lists and bibliographical references
concerning such national standards may be obtained on application to the CEN-CENELEC Management Centre or to any CEN
member.
This European Standard exists in three official versions (English, French, German). A version in any other language made by
translation under the responsibility of a CEN member into its own language and notified to the CEN-CENELEC Management
Centre has the same status as the official versions.
CEN members are the national standards bodies of Austria, Belgium, Bulgaria, Croatia, Cyprus, Czech Republic, Denmark, Estonia,
Finland, France, Germany, Greece, Hungary, Iceland, Ireland, Italy, Latvia, Lithuania, Luxembourg, Malta, Netherlands, Norway,
Poland, Portugal, Republic of North Macedonia, Romania, Serbia, Slovakia, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland, Turkey and
United Kingdom.
EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION
COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION
EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG
CEN-CENELEC Management Centre: Rue de la Science 23, B-1040 Brussels
© 2021 CEN All rights of exploitation in any form and by any means reserved Ref. No. EN ISO 23036-2:2021 E
worldwide for CEN national Members.
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SIST EN ISO 23036-2:2021
EN ISO 23036-2:2021 (E)
Contents Page
European foreword . 3
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SIST EN ISO 23036-2:2021
EN ISO 23036-2:2021 (E)
European foreword
This document (EN ISO 23036-2:2021) has been prepared by Technical Committee ISO/TC 34 "Food
products" in collaboration with Technical Committee CEN/TC 463 “Microbiology of the food chain” the
secretariat of which is held by AFNOR.
This European Standard shall be given the status of a national standard, either by publication of an
identical text or by endorsement, at the latest by November 2021, and conflicting national standards
shall be withdrawn at the latest by November 2021.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. CEN shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
According to the CEN-CENELEC Internal Regulations, the national standards organizations of the
following countries are bound to implement this European Standard: Austria, Belgium, Bulgaria,
Croatia, Cyprus, Czech Republic, Denmark, Estonia, Finland, France, Germany, Greece, Hungary, Iceland,
Ireland, Italy, Latvia, Lithuania, Luxembourg, Malta, Netherlands, Norway, Poland, Portugal, Republic of
North Macedonia, Romania, Serbia, Slovakia, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland, Turkey and the
United Kingdom.
Endorsement notice
The text of ISO 23036-2:2021 has been approved by CEN as EN ISO 23036-2:2021 without any
modification.
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SIST EN ISO 23036-2:2021
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 23036-2
First edition
2021-04
Microbiology of the food chain —
Methods for the detection of
Anisakidae L3 larvae in fish and
fishery products —
Part 2:
Artificial digestion method
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthodes de recherche des
larves L3 d'Anisakidae dans les poissons et produits de la pêche —
Partie 2: Méthode de digestion artificielle
Reference number
ISO 23036-2:2021(E)
©
ISO 2021
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SIST EN ISO 23036-2:2021
ISO 23036-2:2021(E)
COPYRIGHT PROTECTED DOCUMENT
© ISO 2021
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
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CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2021 – All rights reserved
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SIST EN ISO 23036-2:2021
ISO 23036-2:2021(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
4.1 General . 2
4.2 Sample size . 2
4.3 Sample preparation . 2
4.4 Digestion of the sample . 2
4.5 Filtration of the digest fluid . 2
4.6 V erification of findings . 2
5 Reagents . 3
6 Equipment and consumables . 3
7 Sampling . 4
8 Procedure. 4
8.1 Preparation of the sample . 4
8.2 Preparation of the digest fluid . 4
8.3 Digestion of the sample in the glass beaker . 5
8.4 Filtration of the digest fluid . 5
8.5 Microscopic examination . 5
9 Expression of the results . 5
10 Performance characteristics of the method . 6
11 Test report . 6
12 Quality assurance . 6
Annex A (informative) Sample collection . 7
Annex B (informative) Example of a laboratory worksheet for recording data when testing
fish fillets with the artificial digestion method . 8
Bibliography . 9
© ISO 2021 – All rights reserved iii
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SIST EN ISO 23036-2:2021
ISO 23036-2:2021(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology, in collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical
Committee CEN/TC 275, Food analysis — Horizontal methods, in accordance with the Agreement on
technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
A list of all parts in the ISO 23036 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
iv © ISO 2021 – All rights reserved
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SIST EN ISO 23036-2:2021
ISO 23036-2:2021(E)
Introduction
Nematodes of the Anisakidae family have a complex life cycle involving a high number of hosts. Adult
stages of Anisakidae reside in the stomach of marine mammals, where they are embedded in the mucosa.
Unembryonated eggs produced by adult females are released with the faeces of marine mammals and
become embryonated in seawater, where first-stage larvae (L1) develop in the eggs. The larvae moult
to become free-swimming second-stage larvae (L2) and, if ingested by crustaceans, mature into third-
stage larvae (L3). This stage is infective to fish and squid, and larvae are transferred between fishes
through predation, maintaining the L3 stage. Some larvae migrate from the abdominal cavity into
muscle tissues. Humans are incidental hosts and can be infected after ingesting raw or undercooked
infected fish or cephalopods containing viable L3.
Nematodes of the family Anisakidae are the causative agents of human anisakidosis, a disease that is not
only a public health hazard affecting humans, but also represents an economic problem in fishery and
food safety (the term “anisakiasis”, designating the disease caused by members of the genus Anisakis,
is also sometimes used). Worldwide, marine and wild anadromous fishes are intermediate hosts of
Anisakidae, whereas marine mammals are the definitive hosts.
Visual inspection procedures for the detection of Anisakidae larvae in fish are employed to minimize
[1]][2]
the risk that contaminated fish will reach the consumer, thus preventing human anisakidosis.
The UV-press and the artificial digestion of the fish muscular tissue are the methods specifically
designed to detect nematode larvae in fish and to evaluate the infestation level of a batch, and have
[3]
been validated and tested in multicentre collaborative studies (see Clause 10).
© ISO 2021 – All rights reserved v
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SIST EN ISO 23036-2:2021
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SIST EN ISO 23036-2:2021
INTERNATIONAL STANDARD ISO 23036-2:2021(E)
Microbiology of the food chain — Methods for the
detection of Anisakidae L3 larvae in fish and fishery
products —
Part 2:
Artificial digestion method
1 Scope
This document specifies a method for the detection of Anisakidae L3 larvae commonly found in marine
and anadromous fishes. The method is applicable to fresh fish and/or frozen fish, as well as lightly
processed fish products, such as marinated, salted or smoked. It is also suitable for visceral organs as a
confirmatory method for a visual inspection scheme.
[4][5][6]
The artificial digestion m
...
SLOVENSKI STANDARD
SIST EN ISO 23036-2:2021
01-september-2021
Mikrobiologija v prehranski verigi - Metode ugotavljanja prisotnosti ličink
Anisakidae L3 v ribah in ribjih proizvodih – 2. del: Metoda umetne prebave (ISO
23036-2:2021)
Microbiology of the food chain - Methods for the detection of Anisakidae L3 larvae in fish
and fishery products - Part 2: Artificial digestion method (ISO 23036-2:2021)
Mikrobiologie der Lebensmittelkette - Verfahren zum Nachweis von Anisakidae L3-
Larven in Fisch und Fischereierzeugnissen - Teil 2: Verfahren der künstlichen
Verdauung (ISO 23036-2:2021)
Microbiologie de la chaîne alimentaire - Méthodes de recherche des larves L3
d'Anisakidae dans les poissons et produits de la pêche - Partie 2: Méthode de digestion
artificielle (ISO 23036-2:2021)
Ta slovenski standard je istoveten z: EN ISO 23036-2:2021
ICS:
07.100.30 Mikrobiologija živil Food microbiology
67.120.30 Ribe in ribji proizvodi Fish and fishery products
SIST EN ISO 23036-2:2021 en,fr,de
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
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SIST EN ISO 23036-2:2021
EN ISO 23036-2
EUROPÄISCHE NORM
EUROPEAN STANDARD
Mai 2021
NORME EUROPÉENNE
ICS 07.100.30
Deutsche Fassung
Mikrobiologie der Lebensmittelkette - Verfahren zum
Nachweis von Anisakidae L3-Larven in Fisch und
Fischereierzeugnissen - Teil 2: Verfahren der künstlichen
Verdauung (ISO 23036-2:2021)
Microbiology of the food chain - Methods for the Microbiologie de la chaîne alimentaire - Méthodes de
detection of Anisakidae L3 larvae in fish and fishery recherche des larves L3 d'Anisakidae dans les poissons
products - Part 2: Artificial digestion method (ISO et produits de la pêche - Partie 2: Méthode de digestion
23036-2:2021) artificielle (ISO 23036-2:2021)
Diese Europäische Norm wurde vom CEN am 24. März 2021 angenommen.
Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschäftsordnung zu erfüllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter
denen dieser Europäischen Norm ohne jede Änderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand
befindliche Listen dieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen Angaben sind beim CEN-CENELEC-Management-
Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhältlich.
Diese Europäische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Französisch). Eine Fassung in einer anderen
Sprache, die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch Übersetzung in seine Landessprache gemacht und dem
Management-Zentrum mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen.
CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dänemark, Deutschland, Estland, Finnland,
Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen,
Österreich, Polen, Portugal, der Republik Nordmazedonien, Rumänien, Schweden, der Schweiz, Serbien, der Slowakei, Slowenien,
Spanien, der Tschechischen Republik, der Türkei, Ungarn, dem Vereinigten Königreich und Zypern.
EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG
EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION
COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION
CEN-CENELEC Management-Zentrum: Rue de la Science 23, B-1040 Brüssel
© 2021 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Ref. Nr. EN ISO 23036-2:2021 D
Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN
vorbehalten.
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EN ISO 23036-2:2021
Inhalt
Seite
Europäisches Vorwort . 3
Vorwort . 4
Einleitung . 5
1 Anwendungsbereich . 6
2 Normative Verweisungen . 6
3 Begriffe . 6
4 Kurzbeschreibung . 7
4.1 Allgemeines . 7
4.2 Probenumfang . 7
4.3 Vorbereitung der Probe . 7
4.4 Verdauung der Probe . 7
4.5 Filtration der Verdauungsflüssigkeit . 7
4.6 Verifizierung der Ergebnisse . 7
5 Reagenzien . 8
6 Geräte und Verbrauchsmaterialien . 8
7 Probenahme . 9
8 Durchführung . 9
8.1 Vorbereitung der Probe . 9
8.2 Herstellung der Verdauungsflüssigkeit . 9
8.3 Verdauung der Probe im Becherglas . 10
8.4 Filtration der Verdauungsflüssigkeit . 10
8.5 Mikroskopische Untersuchung . 11
9 Angabe der Ergebnisse . 11
10 Leistungsmerkmale des Verfahrens . 11
11 Untersuchungsbericht . 11
12 Qualitätssicherung . 11
Anhang A (informativ) Probenahme . 12
Anhang B (informativ) Beispiel für ein Labor-Arbeitsblatt zur Aufzeichnung von Daten bei der
Prüfung von Fischfilets mittels künstlicher Verdauung. 13
Literaturhinweise . 14
2
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SIST EN ISO 23036-2:2021
EN ISO 23036-2:2021
Europäisches Vorwort
Dieses Dokument (EN ISO 23036-2:2021) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 „Food products“ in
Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 463 „Mikrobiologie der Lebensmittelkette“
erarbeitet, dessen Sekretariat von AFNOR gehalten wird.
Diese Europäische Norm muss den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Veröffentlichung
eines identischen Textes oder durch Anerkennung bis November 2021, und etwaige entgegenstehende
nationale Normen müssen bis November 2021 zurückgezogen werden.
Es wird auf die Möglichkeit hingewiesen, dass einige Elemente dieses Dokuments Patentrechte berühren
können. CEN ist nicht dafür verantwortlich, einige oder alle diesbezüglichen Patentrechte zu identifizieren.
Entsprechend der CEN-CENELEC-Geschäftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden
Länder gehalten, diese Europäische Norm zu übernehmen: Belgien, Bulgarien, Dänemark, Deutschland, die
Republik Nordmazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien,
Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, Österreich, Polen, Portugal, Rumänien,
Schweden, Schweiz, Serbien, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Türkei, Ungarn,
Vereinigtes Königreich und Zypern.
Anerkennungsnotiz
Der Text von ISO 23036-2:2021 wurde von CEN als EN ISO 23036-2:2021 ohne irgendeine Abänderung
genehmigt.
3
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SIST EN ISO 23036-2:2021
EN ISO 23036-2:2021
Vorwort
ISO (die Internationale Organisation für Normung) ist eine weltweite Vereinigung nationaler
Normungsinstitute (ISO-Mitgliedsorganisationen). Die Erstellung von Internationalen Normen wird
üblicherweise von Technischen Komitees von ISO durchgeführt. Jede Mitgliedsorganisation, die Interesse an
einem Thema hat, für welches ein Technisches Komitee gegründet wurde, hat das Recht, in diesem Komitee
vertreten zu sein. Internationale staatliche und nichtstaatliche Organisationen, die in engem Kontakt mit ISO
stehen, nehmen ebenfalls an der Arbeit teil. ISO arbeitet bei allen elektrotechnischen Normungsthemen eng
mit der Internationalen Elektrotechnischen Kommission (IEC) zusammen.
Die Verfahren, die bei der Entwicklung dieses Dokuments angewendet wurden und die für die weitere Pflege
vorgesehen sind, werden in den ISO/IEC-Direktiven, Teil 1 beschrieben. Es sollten insbesondere die
unterschiedlichen Annahmekriterien für die verschiedenen ISO-Dokumentenarten beachtet werden. Dieses
Dokument wurde in Übereinstimmung mit den Gestaltungsregeln der ISO/IEC-Direktiven, Teil 2 erarbeitet
(siehe www.iso.org/directives).
Es wird auf die Möglichkeit hingewiesen, dass einige Elemente dieses Dokuments Patentrechte berühren
können. ISO ist nicht dafür verantwortlich, einige oder alle diesbezüglichen Patentrechte zu identifizieren.
Details zu allen während der Entwicklung des Dokuments identifizierten Patentrechten finden sich in der
Einleitung und/oder in der ISO-Liste der erhaltenen Patenterklärungen (siehe www.iso.org/patents).
Jeder in diesem Dokument verwendete Handelsname dient nur zur Unterrichtung der Anwender und
bedeutet keine Anerkennung.
Für eine Erläuterung des freiwilligen Charakters von Normen, der Bedeutung ISO-spezifischer Begriffe und
Ausdrücke in Bezug auf Konformitätsbewertungen sowie Informationen darüber, wie ISO die Grundsätze der
Welthandelsorganisation (WTO, en: World Trade Organization) hinsichtlich technischer Handelshemmnisse
(TBT, en: Technical Barriers to Trade) berücksichtigt, siehe www.iso.org/iso/foreword.html.
Dieses Dokument wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34, Food products, Unterkomitee SC 9,
Microbiology, in Zusammenarbeit mit dem Europäischen Komitee für Normung (CEN), Technisches Komitee
N1
CEN/TC 275 , Lebensmittelanalytik – Horizontale Verfahren, in Übereinstimmung mit der Vereinbarung zur
technischen Zusammenarbeit zwischen ISO und CEN (Wiener Vereinbarung) erarbeitet.
Eine Auflistung aller Teile der Normenreihe ISO 23036 ist auf der ISO-Internetseite abrufbar.
Rückmeldungen oder Fragen zu diesem Dokument sollten an das jeweilige nationale Normungsinstitut des
Anwenders gerichtet werden. Eine vollständige Auflistung dieser Institute ist unter
www.iso.org/members.html zu finden.
N1
Nationale Fußnote: Fehler in der Referenzfassung, dieses Dokument wurde in Zusammenarbeit mit dem CEN/TC
463, Mikrobiologie der Lebensmittelkette erarbeitet.
4
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SIST EN ISO 23036-2:2021
EN ISO 23036-2:2021
Einleitung
Nematoden der Familie Anisakidae haben einen komplexen Lebenszyklus, der eine Vielzahl von Wirtstieren
umfasst. Adulte Vertreter der Anisakidae leben im Magen von Meeressäugern, wo sie sich in die Schleimhaut
einbetten. Von den adulten Weibchen produzierte, nicht embryonierte Eier werden mit den Fäkalien der
Meeressäuger ausgeschieden und im Meerwasser embryoniert, sodass sich Larven des ersten Stadiums (L1)
in den Eiern entwickeln. Die Larven häuten sich und werden zu freischwimmenden Larven des zweiten
Stadiums (L2). Werden sie von Krebstieren gefressen, entwickeln sie sich zu Larven des dritten Stadiums
(L3). In diesem Stadium sind sie infektiös für Fische und Kalmare. Durch Prädation werden die Larven von
Fisch zu Fisch übertragen, wobei sie im L3 Stadium verbleiben. Manche Larven wandern aus der Bauchhöhle
ins Muskelgewebe. Menschen sind Fehlwirte. Sie können sich durch den Verzehr von rohen oder nicht
ausreichend gegarten Fischen und Kopffüßern, die lebensfähige L3 enthalten, infizieren.
Nematoden der Familie Anisakidae sind Erreger der humanen Anisakidose, einer Krankheit, die nicht nur
eine Gefahr für die Gesundheit der Bevölkerung darstellt, sondern auch zu wirtschaft¬lichen Problemen für
Fischerei und Lebensmittelsicherheit führt (auch die Bezeichnung „Anisakiasis“ für die von Vertretern der
Gattung Anisakis hervorgerufene Krankheit ist geläufig). Weltweit fungieren marine und freilebende
anadrome Fische als Zwischenwirte der Anisakidae, dagegen sind Meeressäuger die Endwirte.
Um das Risiko, dass kontaminierte Fische beim Verbraucher ankommen, zu minimieren und damit das
Auftreten von humaner Anisakidose zu verhindern, werden Sichtprüfungsverfahren zum Nachweis von
Anisakidaelarven in Fischen eingesetzt, [1],[2].
Das UV Pressverfahren und die künstliche Verdauung von Fischmuskelgewebe sind speziell entwickelte
Verfahren, um Nematodenlarven in Fischen nachzuweisen und das Ausmaß des Befalls einer Charge zu
beurteilen. Beide Verfahren wurden in multizentrischen Ringversuchen validiert und geprüft [3] (siehe
Abschnitt 10).
5
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SIST EN ISO 23036-2:2021
EN ISO 23036-2:2021
1 Anwendungsbereich
Dieses Dokument legt ein Verfahren für den Nachweis von L3-Anisakidaelarven, die häufig in marinen und
anadromen Fischen vorkommen, fest. Das Verfahren ist anwendbar bei frischem und/oder gefrorenem Fisch
sowie bei leicht verarbeiteten Fischprodukten, wie etwa marinierten, gesalzenen oder geräucherten
Fischprodukten. Es ist auch als bestätigendes Verfahren bei einer Sichtprüfung von inneren Organen
geeignet.
Das Verfahren der künstlichen Verdauung [4],[5],[6] ist anwendbar für die Quantifizierung parasitärer
Infektionen durch Schätzung der Anzahl der in der Fischmuskulatur vorhandenen Parasiten. Bei der
Anwendung mit frischem Fisch oder leicht verarbeiteten Fischprodukten (die vor der Verarbeitung nie
eingefroren waren) kann zudem die Lebensfähigkeit der gegebenenfalls vorhandenen L3-Anisakidaelarven
bestimmt werden.
Dieses Verfahren ist jedoch nicht für die Bestimmung der Art oder des Genotyps der nachgewiesenen
Parasiten anwendbar. Eine endgültige Identifizierung erfolgt mittels morphologischer und/oder molekularer
Verfahren.
2 Normative Verweisungen
Die folgenden Dokumente werden im Text in solcher Weise in Bezug genommen, dass einige Teile davon
oder ihr gesamter Inhalt Anforderungen des vorliegenden Dokuments darstellen. Bei datierten
Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte
Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschließlich aller Änderungen).
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
3 Begriffe
Für die Anwendung dieses Dokuments gelten die folgenden Begriffe.
ISO und IEC stellen terminologische Datenbanken für die Verwendung in der Normung unter den folgenden
Adressen bereit:
— ISO Online Browsing Platform: verfügbar unter https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: verfügbar unter http://www.electropedia.org/
3.1
L3-Anisakidaelarven
zur Familie der Anisakidae, insbesondere den Gattungen Anisakis, Contracaecum und Pseudoterranova
gehörende Larven des dritten Stadiums (L3)
Anmerkung 1 zum Begriff: Aus praktischen Gründen kann auch die Gattung Hysterothylacium, die zur Familie
Raphidascarididae gehört und bereits als Anisakidae klassifiziert wird, hierunter fallen.
3.2
Verfahren der künstlichen Verdauung
Verfahren zum Nachweis von Anisakidaelarven im Muskelgewebe von Fischen durch eine enzymatische
Verdauung (mittels Pepsin/HCl-Lösung) zur Freisetzung der Larven aus dem Muskelgewebe mit
anschließender Filtration und Nachweis der Larven
...
SLOVENSKI STANDARD
oSIST prEN ISO 23036-2:2020
01-februar-2020
Mikrobiologija v prehranski verigi - Metode ugotavljanja prisotnosti Anisakidae L3
larv v ribah in ribjih proizvodih - 2. del: Umetna digestivna metoda (ISO/DIS 23036-
1:2019)
Microbiology of the food chain - Methods for the detection of Anisakidae L3 larvae in fish
and fishery products - Part 2: Artificial digestion method (ISO/DIS 23036-2:2019)
Mikrobiologie der Lebensmittelkette - Verfahren zum Nachweis von Anisakidae L3-
Larven in Fisch und Fischereierzeugnissen - Teil 2: Verfahren der künstlichen Verdauung
(ISO/DIS 23036-2:2019)
Microbiologie de la chaîne alimentaire - Méthodes de recherche des larves L3
d'Anisakidae dans les poissons et produits de la pêche - Partie 2: Méthode de digestion
artificielle (ISO/DIS 23036-2:2019)
Ta slovenski standard je istoveten z: prEN ISO 23036-2
ICS:
07.100.30 Mikrobiologija živil Food microbiology
67.120.30 Ribe in ribji proizvodi Fish and fishery products
oSIST prEN ISO 23036-2:2020 en
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
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oSIST prEN ISO 23036-2:2020
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oSIST prEN ISO 23036-2:2020
DRAFT INTERNATIONAL STANDARD
ISO/DIS 23036-2
ISO/TC 34/SC 9 Secretariat: AFNOR
Voting begins on: Voting terminates on:
2019-11-04 2020-01-27
Microbiology of the food chain — Methods for the
detection of Anisakidae L3 larvae in fish and fishery
products —
Part 2:
Artificial digestion method
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthodes de recherche des larves L3 d'Anisakidae dans les
poissons et produits de la pêche —
Partie 2: Méthode de digestion artificielle
ICS: 07.100.30
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This document is circulated as received from the committee secretariat.
FOR COMMENT AND APPROVAL. IT IS
THEREFORE SUBJECT TO CHANGE AND MAY
NOT BE REFERRED TO AS AN INTERNATIONAL
STANDARD UNTIL PUBLISHED AS SUCH.
IN ADDITION TO THEIR EVALUATION AS
ISO/CEN PARALLEL PROCESSING
BEING ACCEPTABLE FOR INDUSTRIAL,
TECHNOLOGICAL, COMMERCIAL AND
USER PURPOSES, DRAFT INTERNATIONAL
STANDARDS MAY ON OCCASION HAVE TO
BE CONSIDERED IN THE LIGHT OF THEIR
POTENTIAL TO BECOME STANDARDS TO
WHICH REFERENCE MAY BE MADE IN
Reference number
NATIONAL REGULATIONS.
ISO/DIS 23036-2:2019(E)
RECIPIENTS OF THIS DRAFT ARE INVITED
TO SUBMIT, WITH THEIR COMMENTS,
NOTIFICATION OF ANY RELEVANT PATENT
RIGHTS OF WHICH THEY ARE AWARE AND TO
©
PROVIDE SUPPORTING DOCUMENTATION. ISO 2019
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ISO/DIS 23036-2:2019(E)
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ISO/DIS 23036-2:2019(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
4.1 General . 2
4.2 Sample size . 2
4.3 Sample preparation . 2
4.4 Digestion of the sample . 2
4.5 Filtration of the digest fluid . 2
4.6 Verification of findings . 2
5 Reagents . 2
6 Equipment and consumables . 3
7 Sampling . 3
8 Procedure. 4
8.1 Preparation of the sample. . 4
8.2 Preparation of the digest fluid. . 4
8.3 Digestion of the sample in the glass beaker. . 4
8.4 Filtration of the digest fluid . 5
8.5 Microscopic examination . 5
9 Documentation . 5
10 Expression of the results. . 5
11 Performance characteristics of the method . 5
Annex A (informative) Sample collection . 7
Annex B (informative) Example of a laboratory worksheet for recording data when testing
fish fillets with artificial digestion method . 8
Bibliography . 9
© ISO 2019 – All rights reserved iii
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oSIST prEN ISO 23036-2:2020
ISO/DIS 23036-2:2019(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following
URL: www .iso .org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
A list of all parts in the ISO 23036 series can be found on the ISO website.
iv © ISO 2019 – All rights reserved
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oSIST prEN ISO 23036-2:2020
ISO/DIS 23036-2:2019(E)
Introduction
Nematodes of the Anisakidae family, have a complex life cycle involving a high number of hosts. Adult
stages of Anisakidae reside in the stomach of marine mammals, where they are embedded in the mucosa.
Unembryonated eggs produced by adult females are released with the faeces of marine mammals and
become embryonated in seawater, where first-stage larvae (L1) develop in the eggs. The larvae moult to
become free-swimming second stage larvae (L2) and if ingested by crustaceans, mature into L3 stage.
This stage is infective to fish and squid, and larvae are transferred between fishes through predation,
maintaining the L3 stage. Upon the host’s death, some larvae migrate from the abdominal cavity into
muscle tissues. Humans are incidental hosts and may be infected after ingesting raw or undercooked
infected fish or cephalopods containing viable L3.
Nematodes of the family Anisakidae, are the causative agents of human anisakidosis, a disease that not
only is a public health hazard affecting humans, but also represents an economic problem in fishery and
food safety (the term anisakiasis, designating the disease caused by members of the genus Anisakis, has
been used by some authors as well). Worldwide, marine and wild anadromous fishes are intermediate
hosts of Anisakidae, whereas marine mammals are the definitive hosts.
Visual inspection procedures for the detection of Anisakidae larvae in fish are employed to minimize
the risk that contaminated fish will reach the consumer, thus preventing human anisakidosis.
The UV-press and the artificial digestion of the fish muscular tissue are the methods specifically
designed to detect nematode larvae in fish and to evaluate the infestation level of a batch, and have
been validated and tested in multicenter collaborative studies (see clause 11).
Alternative methods can be used for analysis, provided their equivalence with the methods described
in this standard are demonstrated.
© ISO 2019 – All rights reserved v
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oSIST prEN ISO 23036-2:2020
DRAFT INTERNATIONAL STANDARD ISO/DIS 23036-2:2019(E)
Microbiology of the food chain — Methods for the
detection of Anisakidae L3 larvae in fish and fishery
products —
Part 2:
Artificial digestion method
1 Scope
This part of ISO 23036 specifies a method that is applicable for the detection of Anisakidae L3 larvae
commonly found in marine and anadromous fishes. The method can be applied to fresh fish and/or
frozen fish, as well as lightly processed fish products, such as marinated, salted or smoked. It is also
suitable for visceral organs as confirmatory method for visual inspection scheme.
The artificial digestion method allows quantifying parasitic infections by estimating the number of
parasites in the fish musculature and, when applied to fresh fish or lightly processed fish products
(never frozen before processing), determining the viability of Anisakidae L3, which may be present.
This method doesn’t allow determining species or genotype of detected parasites. Final identification is
made by morphological and/or molecular methods.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
CODEX STAN 244, 2004, Standard for salted Atlantic herring and salted sprat. CODEX STAN 244-2004.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.