SIST ISO 10872:2011

Water quality - Determination of the toxic effect of sediment and soil samples on growth, fertility and reproduction of Caenorhabditis elegans (Nematoda)

ISO 10872:2010 specifies a method for determining the toxicity of environmental samples on growth, fertility and reproduction of Caenorhabditis elegans. The method applies to contaminated whole fresh-water sediment (maximum salinity, 5 ‰), soil and waste, as well as to pore water, elutriates and aqueous extracts that were obtained from contaminated sediment, soil and waste.

Qualité de l'eau - Détermination de l'effet toxique d'échantillons de sédiment et de sol sur la croissance, la fertilité et la reproduction de Caenorhabditis elegans (nématodes)

L'ISO 10872:2010 spécifie une méthode de détermination de la toxicité d'échantillons environnementaux sur la croissance, la fertilité et la reproduction de Caenorhabditis elegans. La méthode s'applique aux sédiments d'eau douce (salinité maximale de 5 ‰), sols et déchets contaminés, ainsi qu'à l'eau interstitielle, aux élutriats et aux extraits aqueux obtenus à partir de sédiments, sols et déchets contaminés.

Kakovost vode - Določevanje učinkov strupenosti vzorcev usedlin in tal na rast, plodnost in razmnoževanje Caenorhabditis elegans (Nematoda)

Ta mednarodni standard opredeljuje metodo določevanja strupenosti okoljskih vzorcev rasti, plodnosti in razmoževanja Caenorhabditis elegans. Ta metoda velja za kontaminiran celoten slatkovodni sediment (največja slanost 5 %), tla in odpadke ter tudi za vodo v razpokah, elutriate in vodne ekstrakte, ki so bili pridobljeni iz kontaminiranega sedimenta, tal in odpadkov.

General Information

• Status: Withdrawn
• Public Enquiry End Date: 19-May-2011
• Publication Date: 15-May-2011
• Withdrawal Date: 06-Sep-2021
• ICS: 13.060.70 - Examination of biological properties of water
• Technical Committee: KAV - Water quality
• Current Stage: 9900 - Withdrawal (Adopted Project)
• Start Date: 07-Sep-2021
• Due Date: 30-Sep-2021
• Completion Date: 07-Sep-2021
• Ref Project: ISO 10872:2010 - Water quality — Determination of the toxic effect of sediment and soil samples on growth, fertility and reproduction of Caenorhabditis elegans (Nematoda)

Relations

• Replaced By: SIST EN ISO 10872:2021 - Water and soil quality - Determination of the toxic effect of sediment and soil samples on growth, fertility and reproduction of Caenorhabditis elegans (Nematoda) (ISO 10872:2020)
• Effective Date: 01-Oct-2021

Standards Content (Sample)

SLOVENSKI STANDARD
01-junij-2011
.DNRYRVWYRGH'RORþHYDQMHXþLQNRYVWUXSHQRVWLY]RUFHYXVHGOLQLQWDOQDUDVW
SORGQRVWLQUD]PQRåHYDQMH&DHQRUKDEGLWLVHOHJDQV1HPDWRGD
Water quality - Determination of the toxic effect of sediment and soil samples on growth,
fertility and reproduction of Caenorhabditis elegans (Nematoda)
Qualité de l'eau - Détermination de l'effet toxique d'échantillons de sédiment et de sol sur
la croissance, la fertilité et la reproduction de Caenorhabditis elegans (nématodes)
Ta slovenski standard je istoveten z: ISO 10872:2010
ICS:
13.060.70 Preiskava bioloških lastnosti Examination of biological
vode properties of water
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10872
First edition
2010-06-15
Water quality — Determination of the
toxic effect of sediment and soil samples
on growth, fertility and reproduction of
Caenorhabditis elegans (Nematoda)
Qualité de l'eau — Détermination de l'effet toxique d'échantillons de
sédiment et de sol sur la croissance, la fertilité et la reproduction de
Caenorhabditis elegans (Nematodes)

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ISO 2010
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©  ISO 2010
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ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail [e-mail]
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2010 – All rights reserved

Contents Page
Foreword .iv
Introduction.v
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .1
4 Principle.3
5 Reagents.3
6 Apparatus.5
7 Reference substance .6
8 Organisms.7
8.1 Test organism .7
8.2 Food organism.7
9 Stock- and pre-cultures .7
9.1 Stock cultures.7
9.2 Pre-culture.7
10 Procedure.8
10.1 Preparation of food medium.8
10.2 Preparation of test material and controls .8
10.3 Test .9
10.4 Nematode separation.9
10.5 Measurements and calculations .9
10.6 Timetable of the test.11
11 Validity criteria.12
12 Expression of results.12
13 Test report.13
Annex A (informative) Figures of adult worms C. elegans .14
Annex B (informative) Precision data .15
Bibliography.17

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 10872 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5, Biological
methods.
iv © ISO 2010 – All rights reserved

Introduction
[1][2]
Nematodes are the most abundant and species-rich group of metazoans in sediments and soils and play
[3][4]
an important role in benthic and soil food webs . Nematodes are endobenthic organisms that are found at
various trophic levels due to the evolution of different feeding types (bacterivorous, algal feeder, omnivorous,
predators).
The test organism Caenorhabditis elegans (Maupas, N2 var. Bristol) is a bacterivorous nematode that is found
[5][6]
primarily in terrestrial soils but it also occurs in aquatic sediments of polysaprobial fresh-water systems .
[7]
C. elegans is a well-studied organism and very easy to cultivate .
[8][9][10]
The test is designed for measurement of the response to dissolved and particle-bound substances .
It applies to the testing of sediments, soils, waste, pore water, elutriates and aqueous extracts.

INTERNATIONAL STANDARD ISO 10872:2010(E)

Water quality — Determination of the toxic effect of sediment
and soil samples on growth, fertility and reproduction of
Caenorhabditis elegans (Nematoda)
WARNING — Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory
practice. This International Standard does not purport to address all of the safety problems, if any,
associated with its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health
practices and to ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted according to this International Standard
be carried out by suitably trained staff.
1 Scope
This International Standard specifies a method for determining the toxicity of environmental samples on
growth, fertility and reproduction of Caenorhabditis elegans. The method applies to contaminated whole
fresh-water sediment (maximum salinity 5 ‰), soil and waste, as well as to pore water, elutriates and aqueous
extracts that were obtained from contaminated sediment, soil and waste.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 5667-16, Water quality — Sampling — Part 16: Guidance on biotesting of samples
ISO 7027, Water quality — Determination of turbidity
ISO 10390, Soil quality — Determination of pH
ISO 10523, Water quality — Determination of pH
ISO 11465, Soil quality — Determination of dry matter and water content on a mass basis — Gravimetric
method
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
agar plate
Petri dish filled with NGM agar (5.8)
3.2
aqueous control
water that serves as negative control for tests in aqueous samples
3.3
artificial control sediment
defined artificial sediment (5.12)
3.4
bacterial stock culture
stock culture of food bacteria
3.5
blank replicate
additional replicate that contains no test organism, but is treated in the same way as the other replicates of a
sample
3.6
control
treatment that serves as negative control to which the effect in the respective test material is compared (3.2,
3.3, 3.7)
3.7
control soil
defined standard soil (5.13)
3.8
dauer larva
developmental stage adopted by C. elegans to endure periods of lack of food
NOTE Dauer larvae continue normal development if food is supplied.
3.9
exposed test organisms
individuals of C. elegans that are introduced at the beginning of the test
3.10
food medium
defined aqueous bacterial suspension (10.1)
3.11
J stage
first of four juvenile stages (J to J ) in the development of C. elegans
1 4
3.12
overnight culture
defined culture of Escherichia coli in LB-medium (9.1.2)
3.13
starved plate
agar plate with dauer larvae
3.14
test material
discrete portion of a contaminated environmental sample (10.2) or solution of the reference substance
(Clause 7)
2 © ISO 2010 – All rights reserved

4 Principle
Juvenile organisms of the species C. elegans are exposed to the environmental sample over a period of 96 h.
In the controls, the exposed test organisms are able to complete a whole life cycle within this period. A toxic
effect of an environmental sample occurs if the inhibition of growth, fertility or reproduction of C. elegans in
comparison to a control (aqueous control, control sediment or soil) exceeds a certain threshold value. Toxicity
can by quantified by the intensity of the effect as percentage inhibition.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade.
5.1 Water, distilled or deionized water or water of equivalent purity, conductivity u 10 µS/cm.
5.2 LB-medium.
Dissolve
⎯ 0,5 g of casein peptone;
⎯ 0,25 g of yeast extract;
⎯ 0,5 g of sodium chloride (NaCl);
in 50 ml water in a 250 ml flask and autoclave for 20 min at 121 °C.
5.3 Cholesterol stock solution.
Dissolve 500 mg of powdered cholesterol in 100 ml of absolute ethanol (> 99 % purity) by stirring and gentle
heating (< 50 °C). Replace ethanol lost through evaporation with ethanol.
5.4 Calcium chloride stock solution, 1 mol/l CaCl .
Dissolve 147 g of CaCl ·2H O in 1 000 ml water and autoclave for 20 min at 121 °C.
2 2
5.5 Magnesium sulfate stock solution, 1 mol/l MgSO .
Dissolve 247 g of MgSO ·7H O in 1 000 ml water and autoclave for 20 min at 121 °C.
...

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10872
First edition
2010-06-15
Water quality — Determination of the
toxic effect of sediment and soil samples
on growth, fertility and reproduction of
Caenorhabditis elegans (Nematoda)
Qualité de l'eau — Détermination de l'effet toxique d'échantillons de
sédiment et de sol sur la croissance, la fertilité et la reproduction de
Caenorhabditis elegans (Nematodes)

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©
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Web www.iso.org
Published in Switzerland
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Contents Page
Foreword .iv
Introduction.v
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .1
4 Principle.3
5 Reagents.3
6 Apparatus.5
7 Reference substance .6
8 Organisms.7
8.1 Test organism .7
8.2 Food organism.7
9 Stock- and pre-cultures .7
9.1 Stock cultures.7
9.2 Pre-culture.7
10 Procedure.8
10.1 Preparation of food medium.8
10.2 Preparation of test material and controls .8
10.3 Test .9
10.4 Nematode separation.9
10.5 Measurements and calculations .9
10.6 Timetable of the test.11
11 Validity criteria.12
12 Expression of results.12
13 Test report.13
Annex A (informative) Figures of adult worms C. elegans .14
Annex B (informative) Precision data .15
Bibliography.17

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
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ISO 10872 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5, Biological
methods.
iv © ISO 2010 – All rights reserved

Introduction
[1][2]
Nematodes are the most abundant and species-rich group of metazoans in sediments and soils and play
[3][4]
an important role in benthic and soil food webs . Nematodes are endobenthic organisms that are found at
various trophic levels due to the evolution of different feeding types (bacterivorous, algal feeder, omnivorous,
predators).
The test organism Caenorhabditis elegans (Maupas, N2 var. Bristol) is a bacterivorous nematode that is found
[5][6]
primarily in terrestrial soils but it also occurs in aquatic sediments of polysaprobial fresh-water systems .
[7]
C. elegans is a well-studied organism and very easy to cultivate .
[8][9][10]
The test is designed for measurement of the response to dissolved and particle-bound substances .
It applies to the testing of sediments, soils, waste, pore water, elutriates and aqueous extracts.

INTERNATIONAL STANDARD ISO 10872:2010(E)

Water quality — Determination of the toxic effect of sediment
and soil samples on growth, fertility and reproduction of
Caenorhabditis elegans (Nematoda)
WARNING — Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory
practice. This International Standard does not purport to address all of the safety problems, if any,
associated with its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health
practices and to ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted according to this International Standard
be carried out by suitably trained staff.
1 Scope
This International Standard specifies a method for determining the toxicity of environmental samples on
growth, fertility and reproduction of Caenorhabditis elegans. The method applies to contaminated whole
fresh-water sediment (maximum salinity 5 ‰), soil and waste, as well as to pore water, elutriates and aqueous
extracts that were obtained from contaminated sediment, soil and waste.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 5667-16, Water quality — Sampling — Part 16: Guidance on biotesting of samples
ISO 7027, Water quality — Determination of turbidity
ISO 10390, Soil quality — Determination of pH
ISO 10523, Water quality — Determination of pH
ISO 11465, Soil quality — Determination of dry matter and water content on a mass basis — Gravimetric
method
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
agar plate
Petri dish filled with NGM agar (5.8)
3.2
aqueous control
water that serves as negative control for tests in aqueous samples
3.3
artificial control sediment
defined artificial sediment (5.12)
3.4
bacterial stock culture
stock culture of food bacteria
3.5
blank replicate
additional replicate that contains no test organism, but is treated in the same way as the other replicates of a
sample
3.6
control
treatment that serves as negative control to which the effect in the respective test material is compared (3.2,
3.3, 3.7)
3.7
control soil
defined standard soil (5.13)
3.8
dauer larva
developmental stage adopted by C. elegans to endure periods of lack of food
NOTE Dauer larvae continue normal development if food is supplied.
3.9
exposed test organisms
individuals of C. elegans that are introduced at the beginning of the test
3.10
food medium
defined aqueous bacterial suspension (10.1)
3.11
J stage
first of four juvenile stages (J to J ) in the development of C. elegans
1 4
3.12
overnight culture
defined culture of Escherichia coli in LB-medium (9.1.2)
3.13
starved plate
agar plate with dauer larvae
3.14
test material
discrete portion of a contaminated environmental sample (10.2) or solution of the reference substance
(Clause 7)
2 © ISO 2010 – All rights reserved

4 Principle
Juvenile organisms of the species C. elegans are exposed to the environmental sample over a period of 96 h.
In the controls, the exposed test organisms are able to complete a whole life cycle within this period. A toxic
effect of an environmental sample occurs if the inhibition of growth, fertility or reproduction of C. elegans in
comparison to a control (aqueous control, control sediment or soil) exceeds a certain threshold value. Toxicity
can by quantified by the intensity of the effect as percentage inhibition.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade.
5.1 Water, distilled or deionized water or water of equivalent purity, conductivity u 10 µS/cm.
5.2 LB-medium.
Dissolve
⎯ 0,5 g of casein peptone;
⎯ 0,25 g of yeast extract;
⎯ 0,5 g of sodium chloride (NaCl);
in 50 ml water in a 250 ml flask and autoclave for 20 min at 121 °C.
5.3 Cholesterol stock solution.
Dissolve 500 mg of powdered cholesterol in 100 ml of absolute ethanol (> 99 % purity) by stirring and gentle
heating (< 50 °C). Replace ethanol lost through evaporation with ethanol.
5.4 Calcium chloride stock solution, 1 mol/l CaCl .
Dissolve 147 g of CaCl ·2H O in 1 000 ml water and autoclave for 20 min at 121 °C.
2 2
5.5 Magnesium sulfate stock solution, 1 mol/l MgSO .
Dissolve 247 g of MgSO ·7H O in 1 000 ml water and autoclave for 20 min at 121 °C.
4 2
5.6 Potassium hydroxide, KOH, pellets.
5.7 Potassium phosphate buffer, 1 mol/l KH PO .
2 4
Dissolve 136 g of KH PO in 1 000 ml of water, adjust with KOH (5.6) to pH 6,0 ± 0,2, and autoclave for
2 4
20 min at 121 °C.
5.8 Nematode growth-medium agar (NGM agar).
Dissolve
⎯ 2,5 g of casein peptone;
⎯ 17 g of bacteriological agar;
⎯ 3 g of NaCl;
in 900 ml water in a 1 000 ml flask and autoclave for 20 min at 121 °C. After cooling down to 55 °C, add the
following sterile solutions:
⎯ 1 ml of cholesterol stock solution (5.3);
⎯ 1 ml of calcium chloride stock solution (5.4);
⎯ 1 ml of magnesium sulfate stock solution (5.5);
⎯ 25 ml of potassium phosphate buffer (5.7);
and fill up to 1 000 ml with sterile water.
Transfer portions of NGM agar (about 20 ml to 25 ml) to sterile Petri dishes.
5.9 M9-medium.
Dissolve
⎯ 6 g of Na HPO ;
2 4
⎯ 3 g of KH PO ;
2 4
⎯ 5 g of NaCl;
⎯ 0,25 g of MgSO ·7H O;
4 2
in 1 000 ml of water in a 1 000 ml flask.
5.10 Bengal Rose stock solution.
Add approximately 300 mg of Bengal Rose to 1 000 ml of water and stir thoroughly.
5.11
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 10872
Première édition
2010-06-15
Qualité de l'eau — Détermination de
l'effet toxique d'échantillons de sédiment
et de sol sur la croissance, la fertilité et la
reproduction de Caenorhabditis elegans
(nématodes)
Water quality — Determination of the toxic effect of sediment and soil
samples on growth, fertility and reproduction of Caenorhabditis elegans
(Nematoda)
Numéro de référence
©
ISO 2010
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Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2010 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction.v
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Termes et définitions .1
4 Principe.3
5 Réactifs.3
6 Appareillage .6
7 Substance de référence.7
8 Organismes.7
8.1 Organisme d'essai.7
8.2 Source nutritive .7
9 Cultures mères et pré-cultures .7
9.1 Cultures mères .7
9.2 Pré-culture.8
10 Mode opératoire.8
10.1 Préparation du milieu nutritif .8
10.2 Préparation du matériau d'essai et des témoins.9
10.3 Essai .9
10.4 Séparation des nématodes.10
10.5 Mesurages et calculs .10
10.6 Planification de l'essai .12
11 Critères de validité .13
12 Expression des résultats.13
13 Rapport d'essai.14
Annexe A (informative) Illustrations des vers adultes C. elegans.15
Annexe B (informative) Données relatives à la fidélité .16
Bibliographie.18

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 10872 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau, sous-comité SC 5,
Méthodes biologiques.
iv © ISO 2010 – Tous droits réservés

Introduction
Les nématodes constituent le groupe de métazoaires le plus abondant et le plus riche en espèces dans les
[1][2]
sédiments et les sols et jouent un rôle important dans les réseaux trophiques benthiques et les réseaux
[3][4]
trophiques du sol . Les nématodes sont des organismes endobenthiques que l'on trouve à différents
niveaux trophiques en raison de l'évolution des différents types d'alimentation (bactérivores, alguivores,
omnivores, prédateurs).
L'organisme d'essai Caenorhabditis elegans (Maupas, N2 var. Bristol) est un nématode bactérivore que l'on
trouve principalement dans les sols terrestres mais également parfois dans les sédiments aquatiques des
[5][6]
systèmes d'eau douce polysaprobes . C. elegans est un organisme largement étudié et très facile à
[7]
cultiver .
[8][9][10]
L'essai est conçu pour mesurer la réponse à des substances dissoutes et liées à des particules .
Il s'applique aux sédiments, aux sols, aux déchets, à l'eau interstitielle, aux élutriats et aux extraits aqueux.

NORME INTERNATIONALE ISO 10872:2010(F)

Qualité de l'eau — Détermination de l'effet toxique
d'échantillons de sédiment et de sol sur la croissance,
la fertilité et la reproduction de Caenorhabditis elegans
(nématodes)
AVERTISSEMENT — Il convient que l'utilisateur de la présente Norme internationale connaisse bien
les pratiques courantes de laboratoire. La présente Norme internationale n'a pas pour but de traiter
tous les problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l'utilisateur
d'établir des pratiques appropriées en matière d'hygiène et de sécurité, et de s'assurer de la
conformité à la réglementation nationale en vigueur.
IMPORTANT — Il est absolument essentiel que les essais réalisés conformément à la présente Norme
internationale soient exécutés par du personnel ayant reçu une formation adéquate.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination de la toxicité d'échantillons
environnementaux sur la croissance, la fertilité et la reproduction de Caenorhabditis elegans. La méthode
s'applique aux sédiments d'eau douce (salinité maximale de 5 ‰), sols et déchets contaminés, ainsi qu'à l'eau
interstitielle, aux élutriats et aux extraits aqueux obtenus à partir de sédiments, sols et déchets contaminés.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence (y compris les éventuels amendements) s'applique.
ISO 5667-16, Qualité de l'eau — Échantillonnage — Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques
des échantillons
ISO 7027, Qualité de l'eau — Détermination de la turbidité
ISO 10390, Qualité du sol — Détermination du pH
ISO 10523, Qualité de l'eau — Détermination du pH
ISO 11465, Qualité du sol — Détermination de la teneur pondérale en matière sèche et en eau — Méthode
gravimétrique
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
boîte de gélose
boîte de Petri remplie de gélose NGM (5.8)
3.2
témoin aqueux
eau servant de témoin négatif pour les essais sur des échantillons aqueux
3.3
sédiment témoin artificiel
sédiment artificiel défini (5.12)
3.4
culture mère bactérienne
culture mère de bactéries nutritives
3.5
réplicat à blanc
réplicat supplémentaire ne contenant pas d'organisme d'essai mais traité de la même façon que les autres
réplicats d'un échantillon
3.6
témoin
traitement servant de témoin négatif auquel est comparé l'effet sur le matériau d'essai correspondant (3.2, 3.3,
3.7)
3.7
sol témoin
sol standard défini (5.13)
3.8
«larve dauer»
stade larvaire quiescent
stade de développement adopté par C. elegans pour supporter des périodes de pénurie alimentaire
NOTE Les «larves dauer» poursuivent leur développement normal en cas d'apport de nourriture.
3.9
organismes d'essai exposés
individus de C. elegans introduits au début de l'essai
3.10
milieu nutritif
suspension bactérienne aqueuse définie (10.1)
3.11
stade J
premier des quatre stades juvéniles (J à J ) au cours du développement de C. elegans
1 4
3.12
culture nocturne
culture définie d'Escherichia coli dans du milieu LB (9.1.2)
3.13
boîte sans nourriture
boîte de gélose avec des «larves dauer»
3.14
matériau d'essai
portion discrète d'un échantillon environnemental contaminé (10.2) ou solution de la substance de référence
(Article 7)
2 © ISO 2010 – Tous droits réservés

4 Principe
Les organismes juvéniles de l'espèce C. elegans sont exposés à l'échantillon environnemental pendant une
période de 96 h. Dans les témoins, les organismes d'essai exposés peuvent accomplir un cycle de vie
complet au cours de cette période. Un effet toxique de l'échantillon environnemental est observé si l'inhibition
de la croissance, de la fertilité ou de la reproduction de C. elegans comparée au témoin (témoin aqueux,
sédiment ou sol témoin) dépasse une certaine valeur seuil. La toxicité peut être quantifiée par l'intensité de
l'effet en pourcentage d'inhibition.
5 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1 Eau, distillée ou déionisée ou eau d'une pureté équivalente, conductivité u 10 µS/cm.
5.2 Milieu LB.
Dissoudre
⎯ 0,5 g de peptone de caséine,
⎯ 0,25 g d'extrait de levure,
⎯ 0,5 g de chlorure de sodium (NaCl),
dans 50 ml d'eau dans une fiole de 250 ml et autoclaver pendant 20 min à 121 °C.
5.3 Solution mère de cholestérol.
Dissoudre 500 mg de cholestérol en poudre dans 100 ml d'éthanol absolu (pureté > 99 %) en agitant et en
chauffant légèrement (< 50 °C). Remplacer l'éthanol perdu par évaporation.
5.4 Solution mère de chlorure de calcium, 1 mol/l CaCl .
Dissoudre 147 g de CaCl , 2 H O dans 1 000 ml d'eau et autoclaver pendant 20 min à 121 °C.
2 2
5.5 Solution mère de sulfate de magnésium, 1 mol/l MgSO .
Dissoudre 247 g de MgSO , 7 H O dans 1 000 ml d'eau et autoclaver pendant 20 min à 121 °C.
4 2
5.6 Hydroxyde de potassium, KOH, pastilles.
5.7 Solution tampon de phosphate de potassium, 1 mol/l KH PO .
2 4
Dissoudre 136 g de K
...